Lu 淋巴细胞体外增殖功能检测
淋巴细胞增殖试验名词解释
淋巴细胞增殖试验名词解释
淋巴细胞增殖试验（Lymphocyte Proliferation Assay，LPA）是一种常用的实验技术，用于评估淋巴细胞的功能性活性和增殖能力。
该试验通过检测淋巴细胞在刺激物作用下的细胞增殖情况，可以帮助科学家们了解免疫系统的应答能力。
在淋巴细胞增殖试验中，科学家们通常从血液样本或其他组织中分离出淋巴细胞，然后将其与刺激物（如抗原、药物或其他生物活性物质）一起培养。
刺激物的作用可以模拟真实免疫应答的情况，引发淋巴细胞的增殖反应。
这种反应通常伴随着细胞的分裂和增殖，可以通过测量细胞数量、增殖指标或标记物的产生来评估。
淋巴细胞增殖试验可以帮助科学家们识别特定刺激物对免疫系统的影响。
例如，在药物研发领域，科学家们可以使用该试验来评估新药物对免疫细胞的影响，了解其对免疫应答的调节作用。
在免疫疾病的研究中，淋巴细胞增殖试验可以帮助科学家们评估免疫系统异常或失调的程度，从而指导临床治疗。
此外，淋巴细胞增殖试验还可以用于研究免疫细胞的功能性特征。
通过测量细胞增殖和分裂指标，科学家们可以评估不同刺激物对细胞的激活程度、增殖速率以及细胞亚群的响应差异。
总之，淋巴细胞增殖试验是一种重要的实验技术，广泛应用于免疫学研究和临床实践中。
它通过测量淋巴细胞的增殖反应，可以评估免疫细胞的活性和功能特征，
为疾病诊断和治疗提供重要的参考。
体外刺激淋巴细胞增殖作用检测
体外刺激淋巴细胞增殖试验1 样品配制精确称取样品于灭过菌的eppendorf管中，用无菌的PBS配制成浓度5mg/mL 的样品液。
充分溶解然后以15000g离心30min，无菌条件下将上清转移至新的无菌eppendorf管中，将样品稀释成所需浓度待用。
2 小鼠淋巴细胞的制备选取8-10周龄，体重22±1g的Balb c或C57BL/6小鼠颈椎脱臼处死，取脾脏，用PBS冲洗3~4次。
将脾脏磨碎后过100目筛，过筛后的混悬液以400g/min 离心6min。
吸去上清液，沉淀中按每只小鼠1.5mL的量加入氯化铵红细胞裂解液，反复冲打，静置10min后，加PBS至50mL，然后以400g/min离心6min，吸去上清液，加PBS缓冲液冲洗并离心2遍后，吸去上清，加入RPMI1640培养基（含双抗及10％胎牛血清）混匀，用细胞计数仪计数并稀释成2×106个/mL细胞液备用。
3 细胞培养将2×106个/mL淋巴细胞悬浮液加至96孔板中，每孔加180μL，同时加入20μL样品液，以20μL PBS和20μL 60μg/mL的PHA溶液分别作阴、阳性对照。
于37℃、含5%的CO条件下培养3d，加入相应试剂测定24 淋巴细胞增殖率的测定4.1 Alamarblue试剂测定法在上述细胞培养的96孔板中，每孔分别加入20μL Alamar Blue试剂，再培养，加Alamar Blue试剂前及变色后分别用ELISA自动读板仪测定570nm和600nm处的吸光度，然后根据Alamar Blue试剂的公式计算各种样品对淋巴细胞增殖率。
计算公式为：增殖率(%)=[117216×Aλ570(sample)-80586×Aλ600(sample)]/[117216×Aλ570(control)-80586×Aλ600(control)]×100%4.2 MTT法测定4.2.1 MTT 溶液的配制方法称取MTT 0.5g溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）中，用0.22μm滤膜过滤分装，－20℃避光保存。
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告细胞增殖实验是研究肿瘤细胞增殖和药物筛选的重要手段。
目前常见的肿瘤细胞增殖实验包括MTT法、SRB法、CCK-8法和细胞计数法。
本综述将介绍常用的MTT法和SRB法。
一、MTT法MTT法是一种常用的检测细胞增殖和细胞存活率的方法。
其原理是MTT剂通过被细胞还原，形成紫色沉淀，而细胞活性越强，则代谢产物越多，MTT的还原能力也越强，所以其颜色越深。
MTT法的步骤如下：1. 细胞接种：将待检测的细胞分离并接种到96孔板中，对照组和实验组各重复3次，每孔加入100 μl的细胞悬液。
2. 细胞培养：将孔板置于37℃、5% CO2培养箱中，培养24h，待细胞贴附后进入下一步。
3. 加入MTT：将MTT溶液加入孔板中，加入的量为100 μl/孔，最终浓度为0.5mg/ml。
4. 离心：孔板离心5min，去除上清，加入150 μl的DMSO，进行溶解。
5. 检测：将各孔450 nm波长下吸光度值读取，数据处理和结果分析。
MTT法适用于多种肿瘤细胞，操作简便，可用于初筛药物的活性。
然而，MTT法也存在局限性，如MTT还原能力受到某些实验条件影响，如细胞密度、孵育时间、细胞凋亡等，需要注意标准化操作。
二、SRB法SRB法是酸性快速比色法的缩写，它通过酸性溶液中蛋白质的沉淀和染色，反映了细胞的增殖情况。
该方法操作简单，速度快，结果信度较高。
步骤如下：3. 加入SRB：将SRB溶液加入各孔中，保持10 min。
4. 洗涤：将各孔反复洗涤至清晰。
6. 检测：将各孔570 nm波长下吸光度值读取，数据处理和结果分析。
SRB法比较适用于肿瘤细胞形态大而扁平的情况。
此外，SRB法还能够评价细胞的耐药性，并可用于筛选化合物对细胞增殖的抑制率，是一种较为全面的细胞增殖试验方法。
三、结论以上两种实验方法在检测肿瘤细胞增殖及药物筛选中具有重要的应用价值。
在操作上，需要严格地控制实验条件，确保数据的准确性和可靠性。
细胞增殖活力检测的原理
细胞增殖活力检测的原理细胞增殖活力检测是一种常用的方法，用于评估细胞的生长和繁殖能力。
这种检测方法可以通过定量测量细胞数量、代谢活性或DNA合成来评估细胞增殖的程度。
细胞增殖活力检测的原理涉及多种方法和技术，以下将介绍其中几种常用的原理。
1. 细胞数量测定：这是最常见的一种细胞增殖活力检测方法。
通常使用荧光显微镜或细胞计数仪来直接计数细胞数量。
具体步骤包括将培养皿中的细胞进行洗涤和染色，然后使用显微镜或细胞计数仪进行计数。
这种方法不仅简单方便，而且能够定量评估细胞增殖情况。
2. ATP检测：ATP是细胞内重要的能量分子，以细胞数量为基础，通过检测ATP的含量来评估细胞增殖活力。
这种方法利用荧光或化学反应测定ATP的含量，进而推测细胞增殖状况。
由于ATP的含量与细胞的代谢活性密切相关，因此可以通过ATP 的测量来评估细胞增殖活力。
3. MTT法：MTT（3-(4,5-二甲基-2-噻唑唑基)-2,5-二苯基-2H-三唑-酮）是一种常用的细胞增殖活性染色剂，主要基于细胞色素P450的还原作用。
MTT可以通过还原为可溶性产物能反映细胞增殖活性。
具体操作步骤是将MTT加入含有试验组和对照组的培养皿中，经过一段时间后，MTT会转化为紫色的晶体形式，然后通过溶解晶体来定量测定MTT的相对含量，进而评估细胞的增殖活力。
4. 荧光素酶法：荧光素酶（Luciferase）是一种广泛应用于生物发光检测的方法。
当细胞中含有Luciferase酶的基因时，可以通过加入荧光素底物来检测荧光素酶的活性。
这种方法能够定量评估细胞的代谢活性，进而评估细胞增殖活力。
5. DNA合成测定：DNA是细胞的遗传物质，细胞增殖的过程中DNA会合成。
通过测定DNA合成的程度，可以评估细胞的增殖活力。
常用的DNA合成测定方法包括放射性同位素标记法和二硫苯酚法。
放射性同位素标记法通过标记细胞的DNA，然后测量标记DNA的数量来评估细胞增殖活性。
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告5篇
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告5篇篇1一、引言肿瘤细胞增殖实验是研究肿瘤发生、发展及其相关机制的重要手段。
随着科技的进步，体外检测肿瘤细胞增殖的方法逐渐成为研究热点。
本文将对体外检测肿瘤细胞增殖的实验方法、应用及优缺点进行综述，为相关研究者提供参考。
二、实验方法1. 细胞培养细胞培养是体外检测肿瘤细胞增殖的基础。
研究者需根据实验需求选择合适的细胞系，并掌握细胞培养的基本技术，如细胞的复苏、传代、冻存等。
2. 实验试剂与仪器在进行肿瘤细胞增殖实验时，需要使用一系列的试剂和仪器，如细胞计数试剂、酶标仪、显微镜等。
这些试剂和仪器的选择对实验结果的准确性至关重要。
三、实验技术1. MTT法MTT法是一种常用的检测细胞增殖的方法，其原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原MTT，生成蓝色结晶物并沉积在细胞中，从而反映细胞的增殖情况。
该方法具有操作简便、快速、准确等优点，在肿瘤细胞增殖实验中得到了广泛应用。
2. BrdU法BrdU法是通过检测细胞内BrdU的掺入量来反映细胞的增殖活性。
该方法需要预先在培养基中加入BrdU，然后通过特异性抗体检测BrdU的掺入量。
BrdU法具有较高的灵敏度和特异性，能够更准确地反映细胞的增殖情况。
3. 流式细胞术流式细胞术是一种能够同时检测单个细胞多个参数的技术，可以用于分析细胞的周期、凋亡、增殖等情况。
在肿瘤细胞增殖实验中，流式细胞术可以用于检测细胞的DNA含量、BrdU掺入量等指标，从而更全面地了解细胞的增殖情况。
四、应用及优缺点1. 药物筛选与评价体外检测肿瘤细胞增殖实验可以用于药物的筛选与评价。
通过检测药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用，可以评估药物的抗肿瘤活性，为药物的进一步研究和开发提供依据。
2. 肿瘤病理学研究体外检测肿瘤细胞增殖实验还可以用于肿瘤病理学研究。
通过分析肿瘤细胞的增殖特性，可以了解肿瘤的发生、发展及其相关机制，为肿瘤的诊断和治疗提供理论依据。
3. 个体化治疗与预后判断体外检测肿瘤细胞增殖实验在个体化治疗和预后判断中也具有重要价值。
小鼠淋巴细胞增殖测定步骤
小鼠淋巴细胞增殖测定步骤
小鼠淋巴细胞增殖测定是用来评估免疫功能和细胞毒性的常用方法。
以下是一般的小鼠淋巴细胞增殖测定的步骤：
1. 准备小鼠：选择合适的小鼠品系和年龄，并确保小鼠健康。
2. 分离淋巴细胞：采集小鼠淋巴组织（例如脾脏或淋巴结）并进行细胞分离。
常用的方法包括机械破碎和离心分离。
3. 细胞计数与稀释：用血细胞计数器或显微镜计数细胞数目，并进行适当的稀释以获得合适的细胞密度。
4. 细胞悬液制备：将分离的淋巴细胞与培养基混合，使细胞悬浮于培养基中。
5. 细胞培养：将细胞悬液移至培养皿中，并在37°C、5% CO2
的条件下培养一段时间。
一般培养24-72小时。
6. 刺激因子处理：在培养皿中添加适当的刺激因子（如细胞激动剂或抗原），以刺激细胞增殖。
7. 溶菌酶处理：在培养结束后，加入溶菌酶等溶解剂，使未被细胞内的放射性同位素取代的DNA释放到培养基中。
8. 获得DNA：收集并离心细胞上清液，将其中的DNA沉淀。
9. 放射性测定：使用放射性技术，如液体闪烁计数器，测量
DNA中的放射性同位素含量。
10. 统计分析：根据放射性同位素的计数，计算细胞增殖水平，并进行统计分析。
这些步骤可以根据具体实验目的和方法的需求进行适当的调整和修改。
淋巴细胞增殖实验报告
淋巴细胞增殖实验报告一、实验目的本实验旨在通过体外培养淋巴细胞，观察不同刺激条件下淋巴细胞增殖的情况，探讨淋巴细胞增殖与免疫应答的关系，为进一步研究免疫调节机制提供实验依据。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种小鼠，体重20-25g，雌雄不限。
2. 试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、淋巴细胞分离液、植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、ELISA试剂盒等。
3. 仪器：超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、酶标仪、流式细胞仪等。
三、实验方法1. 淋巴细胞分离：取小鼠颈椎脱臼处死，无菌操作下取出脾脏，加入胰蛋白酶消化，离心洗涤，再用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞。
2. 淋巴细胞培养：将分离得到的淋巴细胞用RPMI-1640培养基重悬，调整细胞密度为1×10^6个/mL，加入PHA或ConA作为刺激剂，分别设置无刺激组、PHA刺激组、ConA刺激组等。
3. 细胞增殖观察：将培养的淋巴细胞置于CO2培养箱中培养，分别在24h、48h、72h、96h和120h取样，用倒置显微镜观察细胞形态变化，并计算细胞数量。
4. ELISA检测：取培养上清液，按照ELISA试剂盒说明书检测细胞因子（如IL-2、IFN-γ等）含量。
5. 流式细胞术检测：取培养的淋巴细胞，用荧光标记的抗体检测T细胞亚群（如CD4+、CD8+等）和细胞周期分布。
四、实验结果1. 细胞形态观察：随着培养时间的延长，淋巴细胞在PHA或ConA刺激下逐渐转变为淋巴母细胞，细胞体积增大，核仁明显，细胞浆内出现空泡。
2. 细胞增殖：在PHA或ConA刺激下，淋巴细胞数量显著增加，且呈时间依赖性。
3. 细胞因子检测：ELISA结果显示，在PHA或ConA刺激下，培养上清液中IL-2、IFN-γ等细胞因子含量显著升高。
4. 流式细胞术检测：流式细胞术结果显示，在PHA或ConA刺激下，T细胞亚群CD4+和CD8+的比例发生改变，且细胞周期分布发生变化。
淋巴细胞增殖抑制标准
淋巴细胞增殖抑制检测标准操作规程
签名/日期
1 目的
建立淋巴细胞增殖抑制检测标准操作规程，确保检验操作标准化、规范化。
2 适用范围
适用于淋巴细胞的检查
3 术语或定义
3.1 淋巴细胞（lymphocyte）：是白细胞的一种，是体积最小的白细胞。
其由淋巴器官产生，主要存在于
淋巴管中循环的淋巴液中，是机体免疫应答功能的重要细胞成分。
3.2 CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）：是一种基于WST-8而广泛应用于细胞活性和细胞毒性检测的
快速、高灵敏度试剂盒。
3.3 酶标仪：即酶联免疫检测仪。
是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。
可简单地分为半自
动和全自动两大类，其核心是一个比色计,即用比色法来进行分析。
4 责任
4.1 负责淋巴细胞的检验、结果的复核、记录的填写。
4.2 合性和记录的审核。
5 环境健康安全
N/A
6 程序
7 附件
《淋巴细胞增殖抑制检测记录》8 参考或引用文件[1]
1．中华人民共和国药典20202版第三部
2. 中检院方法
3. Qiu P C, Lu Y Y, Zhang S, et al. Reduction of SCUBE3 by a new marine-derived asterosaponin leads to arrest of glioma cells in G1/S[J]. Oncogenesis, 2020, 9(8): 71.
9 文件版本修改历史。
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DNA合成检测法
DNA复制完成、 蛋白合成， 为有丝分裂 作准备
RNA转录、蛋 白合成为DNA 复制做准备
DNA合成期 增殖期的细胞需要大量核苷酸
DNA合成检测法
利用在细胞培养过程中掺入放射性（如 3H-Tdr 掺入法）或
非放射性的核苷类似物（如 Brdu 掺入实验），直接检测 DNA合成水平变化
刺激淋巴细胞增殖
Day 3:
CCk8检测细胞增殖
将细胞浓度分别调节为 2x106 /mL和4x106 /mL，加入96 孔板，每孔90μL，加入25μg/mL或50μ g/mL ConA溶液10 μL ，细胞培养箱（37℃，5%CO2)中孵育72h。培养期间可 观察细胞增殖情况。
美洲商陆 激活人和小鼠T和B细胞 G-菌 测定小鼠B细胞 检测人B细胞
葡萄球菌蛋白A（SPA）G+菌
高浓度时，经丝裂原受体与B细胞结合，多克隆诱导B细胞 增殖和分化； 低浓度时， BCR特异性识别TI-1抗原的B细胞能竞争结合到 足够抗原量被激活； 感染初期（在TD-Ag免疫应答启动前）快速产生特异性抗体
的BrdU水平
LPS 2D 3D 12.05
0.65 Medium
5.77
BrdU 7AAD Flow cytometric analysis of DNA content (propidium iodide) and DNA synthesis (BrdU) after two or three days of stimulation
细胞染色法
利用荧光染色可穿透细胞膜的特性染色细胞，当细胞分裂
时，荧光标记物被平均分配到两个子代细胞中，其荧光强 度是亲代细胞的一半，如CFSE染色细胞
C3He anti-u 10
细胞代谢活性检测法
通过活细胞线粒体脱氢酶具有转化四氮唑盐等物质的能力
进而反映细胞活力的方法，如 MTT 法检测细胞内线粒体活 性实验
普通蛋白质抗原
比较超抗原和普通抗原与MHC及TCR的作用模式
通过与MHC-II类分子的抗原结合槽以外的非多态区（APC)和TCRVCDR3外侧区域(T 细胞）结合，激活2%-20% 的T克隆。
T细胞超抗原（super antigen, SAg）
作用特点： 强激活T细胞作用（低浓度（1-10ng/ml）、多克隆（2%20% ））；不需常规的细胞内抗原提呈；不受MHC限制 普通蛋白质抗原可激活总T细胞库1/104——1/106 效应： 大量细胞因子，病理生理过程的发生发展 （similar to septic shock）
3H-Tdr掺入法：敏感但有放射性污染
BrdU掺入法： BrdU是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S
期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶
G0/G1 G2/M S
DNA含量 2倍体 4倍体 DNA复制完成 两者之间
S期细胞DNA合成检测法
3H-Tdr掺入法
同位素检测，敏感但有放射性污染 BrdU掺入法 BrdU是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物替代胸腺嘧啶，通 过ELISA和流式细胞术检测竞争掺入单链DNA核苷酸序列
常见的T细胞超抗原
外源性 细菌毒素性产物：金黄色葡萄球菌肠毒素AE（SEA SEE）、A族链球菌M蛋白、致热外毒素、关节支原体丝裂 原MAM 内源性 小鼠乳腺肿瘤病毒蛋白MMTV 次要淋巴细胞刺激抗原（mls）
常用有丝分裂原-激活某一类淋巴细胞的全部克隆
丝裂原名称 刀豆蛋白A（ConA） 植物血凝素（PHA） 美洲商陆丝裂原 （PWM） 脂多糖（LPS） 来源 刀豆 云豆 特征 活化人和小鼠T细胞 活化人和小鼠T细胞
淋巴细胞ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ殖
静止淋巴细胞受一定物质刺激后向淋巴母细胞转化， 细胞内蛋白质和核酸合成，细胞代谢旺盛，伴有数量和 形态学改变，如细胞变大、胞浆增多并形成空泡、核仁
明显、染色质疏松
淋巴细胞增殖实验就是根据上述细胞的改变，设计的 相应检测方法，又称为淋巴细胞转化实验（lymphocyte transformation test, LTT）
淋巴细胞增殖实验
淋巴细胞转化率的高低可直接反应机体T或B细胞的免疫水 平，常作为检测免疫细胞功能的指标之一 评价动物免疫细胞免疫应答能力的简便可靠的方法之一
淋巴细胞增殖功能测定
细胞计数法
DNA合成检测法
细胞代谢活性检测法 细胞染色法
台盼蓝拒染实验
脾细胞计数为例 10倍稀释脾细胞悬液 取脾细胞悬液 20 uL+PBS 80 uL，混匀（5X稀释） 5X脾细胞悬液 20 uL+ 0.4%-0.04% 台盼蓝溶液 20 uL 计数板计数脾细胞
Hemacytometer
每0.1mm3体积平均细胞数=四
个小方格中细胞总数÷ 4
每毫升细胞总数=每0.1mm3体 积平均细胞数×104 一个小鼠脾脏单个核细胞数=每 毫升细胞总数x 稀释倍数x 细胞
Corner square
悬液体积
生存率(%)=(1个小方格中活细 胞总数÷ 1个小方格中细胞总 数) ×100
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模 的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试 验等。
ConA刺激T细胞增殖
淋巴细胞在体内外接受ConA刺激后，静止淋巴细胞向 母细胞转化。这种转化的细胞DNA合成增加，细胞体积增 大，胞质增多以及出现有丝分裂等形态变化。
刺激后
Day 0:
CCK8（Cell Counting Kit-8）检测细胞增殖
CCK-8试剂中含有2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐（WST–8），它在电子耦合剂1-甲 氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细 胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物 （Formazan）。 生成的甲臜量与活细胞的数量成正比。OD450可 间接反映活细胞数量。
医学免疫学实验
实验六 淋巴细胞功能检测
—T淋巴细胞增殖活化
体内外激活T/B细胞增殖的物质
一些物质能够特异性或非特异性地诱导淋巴细胞发生活化，
导致细胞因子的分泌、细胞因子受体的表达并最终使活化 的淋巴细胞发生增殖和分化
体内外激活T/B细胞增殖的物质
非特异性免疫刺激剂
如超抗原、丝裂原、抗体类如抗CD3抗体、促细胞生长因子 如IL-2 特异性抗原