胚胎工程学
胚胎工程知识点总结
胚胎工程知识点总结《胚胎工程知识点总结：有趣的创造之旅》嘿，朋友们！今天咱来聊聊胚胎工程这个听起来有点高大上，但实际上超级有趣的知识领域。
首先啊，胚胎工程就像是一个神奇的魔法世界。
想象一下，我们能在小小的胚胎上施展各种“魔法”，让生命以一种特殊的方式展开，多酷啊！从受精卵开始，这可是一切的起点呢，就像一颗小小的种子，蕴含着无限的可能。
接着呢，胚胎开始分裂、分化，就像是在搭积木一样，一点一点地把各个部分建起来。
这里面就涉及到好多有趣的过程啦，比如细胞的分化，细胞们就像是一群有个性的小伙伴，各自找自己喜欢的“工作”去干，慢慢就形成了各种组织和器官。
然后就是胚胎的培养啦。
这就好像是在给小胚胎打造一个温馨舒适的家，让它能茁壮成长。
科学家们得像细心的家长一样，给它提供合适的环境和营养，不然它可不乐意好好长呢。
还有胚胎移植，这就像是给胚胎找一个新的家。
把培养好的胚胎小心翼翼地放到合适的地方，希望它能生根发芽。
这个过程有时候让人感觉像是在玩一个小心翼翼的游戏，稍有不慎可能就“游戏失败”咯。
说到这里，不得不提一下胚胎干细胞啦。
这可是个宝贝呢，就像有无数种可能性的魔法卡片。
它能变成各种各样的细胞，简直就是个万能选手。
在这个神奇的胚胎工程世界里，我们就像是一群好奇的探险家，不断地探索和发现新的奥秘。
每一个知识点都像是一个小宝藏，等着我们去挖掘。
不过，可别小看了这些知识点哦，它们可不是随便玩玩就能掌握的。
有时候看着那些复杂的图和概念，感觉脑袋都要炸啦！但当你一点点地理解、消化，最后搞懂的时候，那种成就感简直爆棚！总之呢，胚胎工程虽然有点复杂，但真的超级有趣。
它让我们看到了生命的神奇和无限可能，也让我们对未来充满了期待。
所以啊，大家一起加油，好好去探索这个充满惊喜的胚胎工程世界吧！希望我的这些总结能让大家在学习胚胎工程的时候多一点乐趣，少一点迷茫，哈哈！。
胚胎工程高三知识点笔记
胚胎工程高三知识点笔记一、胚胎工程的定义胚胎工程是一门科学研究领域，通过利用生物技术手段对胚胎进行诱导、培养和调控，以实现特定目的或改善人类生活质量的一系列技术和方法的总称。
二、胚胎工程的应用领域1. 生殖医学：胚胎工程技术可以帮助不孕不育患者实现生育愿望，如体外受精、试管婴儿等。
2. 基因治疗：通过对胚胎基因的修饰，可以预防或治疗一些遗传性疾病。
3. 细胞治疗：胚胎工程可以生产出用于替代受损组织或器官的干细胞，帮助患者恢复功能。
4. 药物筛选：利用胚胎工程技术可以研究新药对胚胎发育的影响，以避免对人体造成不良副作用。
三、胚胎工程的技术方法1. 体外受精：将精子和卵子在体外培养皿中结合，使受精卵形成。
2. 克隆技术：利用细胞核移植将成年个体的细胞核引入无性生殖的卵细胞中，重新形成胚胎。
3. 基因编辑技术：通过CRISPR-Cas9等工具，对胚胎基因进行精确修饰或删除，以实现基因疾病的防治。
4. 干细胞技术：从胚胎的早期细胞中提取干细胞，培养和分化成特定类型的细胞，用于治疗组织损伤和疾病。
四、胚胎工程的伦理和道德问题1. 考虑到人类胚胎的生命起源，胚胎工程涉及到对生命的处理和利用，需要权衡生命的尊严和科学研究的需求。
2. 人类胚胎在早期发育时具有潜在的能力和特殊的道德地位，因此胚胎的获取和使用必须在严格的伦理框架下进行。
3. 大规模的胚胎工程可能引发滥用和合理使用的问题，需要制定相关法律和伦理准则，保障科学研究的道德性和合法性。
五、胚胎工程的发展前景1. 目前，胚胎工程已经在人类生殖医学和基因治疗领域取得了重要突破，但仍面临伦理和道德问题的挑战。
2. 随着技术的不断进步，胚胎工程有望为人类提供更多关于生命起源和发展的科学知识。
3. 胚胎工程的应用领域将会更加广泛，为医学和生命科学的发展带来更多的机遇和挑战。
六、结语胚胎工程作为一门新兴的领域，具有巨大的潜力和挑战。
在推动科学发展的同时，必须坚守道德原则和伦理底线，确保人类利用胚胎的行为符合社会伦理和法律的规范。
级北师大选修胚胎工程的理论基础课件
人类胚胎基因编辑的伦理问题
基因编辑技术的风险性
基因编辑技术尚不成熟，存在许多未知风险。在人类胚胎 中使用该技术可能带来不可预测的后果，对个体和整个人 类基因库产生深远影响。
基因选择和优化的伦理问题
通过基因编辑技术对人类胚胎进行基因选择和优化，可能 导致人类生命的不公平分配，引发公平性和道德性的伦理 问题。
机遇
胚胎工程技术对于人类健康、动 物改良和生物多样性保护等领域 具有巨大的应用潜力，有望为人 类带来更多福祉。
胚胎工程与人类健康
辅助生殖技术
胚胎工程技术可用于治疗不孕不育等 生殖障碍，提高生育成功率。
疾病预防与治疗
胚胎工程可应用于基因编辑和干细胞 治疗等领域，为遗传性疾病和某些重 大疾病的预防和治疗提供新的手段。
胚胎工程的主要目的是提高繁殖效率、改良动物品种、生产转
03
基因动物等。
胚胎工程发展历程
01
02
03
04
1978年
第一例体外受精（IVF）婴儿 诞生，标志着人类胚胎工程的
诞生。
1981年
胚胎冷冻技术成功应用于牛和 猪。
1983年
胚胎移植技术应用于转基因动 物生产。
1990年代
基因打靶和基因敲除技术应用 于动物模型研究。
胚胎干细胞的体外培养和定向诱导分化是研究胚 胎发育和疾病治疗的重要手段。
03
胚胎工程技术
体外受精技术
总结词
体外受精技术是一种辅助生殖技术，通过人工方法将卵子和精子在体外受精， 并在实验室条件下培养早期胚胎，然后将其移植到母体子宫中进行发育。
详细描述
体外受精技术是胚胎工程中的一项重要技术，它解决了许多不孕不育问题。该 技术包括控制性超排卵、采卵、精液处理、受精、胚胎培养和移植等步骤。通 过体外受精技术，许多不孕夫妇得以实现生育梦想。
胚胎工程课件
动物克隆技术应用实例分析
畜牧业
通过克隆技术，可以大量生产优 良种畜，提高畜牧业的生产效率 和经济效益。例如，利用克隆技 术生产高产奶牛、优质肉牛等。
濒危动物保护
克隆技术可以为濒危动物的保护提 供新的途径。例如，通过克隆技术 繁殖濒危动物，增加其种群数量， 提高保护成功率。
医学领域
动物克隆技术在医学领域也有广泛 的应用前景。例如，利用克隆动物 生产人类疾病模型，用于药物筛选 和疾病治疗研究。
意义
胚胎工程在畜牧业中可以提高优良种畜的繁殖效率，加快家畜品种改良；在医学领域，胚胎工程可以用于研究人 类生殖和发育过程，以及治疗不孕不育等疾病；在农业领域，胚胎工程可以用于培育转基因动物生产药用蛋白等。
胚胎工程与其他学科关系
与生殖生物学关系
生殖生物学是胚胎工程的理论基础，为胚胎工程提供生殖细 胞培养、受精、胚胎发育等方面的理论指导。
体外受精-胚胎移植（IVF-ET）
从女性卵巢内取出卵子，在体外与精子发生受精并培养3~5日，再将发育到卵裂期或囊胚期 阶段的胚胎移植到宫腔内，使其着床发育成胎儿的全过程。
卵胞浆内单精子注射（ICSI）
在显微操作系统下将单一精子直接注射入卵子内使其受精。
伦理道德问题探讨
1 2
代孕母亲问题 代孕母亲是否符合伦理道德，是否应该被允许或 禁止。
动物克隆技术原理和方法
动物克隆技术原理
通过体细胞核移植技术，将含有遗传 物质的体细胞核移植到去核的卵母细 胞中，经过细胞培养和发育，最终获 得与体细胞基因型完全相同的个体。
动物克隆技术方法
主要包括体细胞核移植、胚胎培养和 移植等步骤。其中，体细胞核移植是 关键步骤，需要选择适宜的供体细胞 和受体细胞，并采用显微操作技术进 行精细操作。
胚胎工程知识点总结
胚胎工程知识点总结1. 胚胎工程的定义胚胎工程是一门研究利用胚胎发育原理和组织工程技术，以制备组织或器官替代品的学科。
其目的是通过控制和引导胚胎发育，培育出特定的组织或器官，并且可以将其应用于临床医学、药物研发、组织修复等领域。
2. 胚胎工程的历史胚胎工程的起源可以追溯到20世纪60年代，当时科学家首次探索了如何利用胚胎干细胞培育组织或器官。
随着细胞生物学和生物技术的不断发展，胚胎工程领域也得到了迅速的发展，涉及范围日益扩大，技术不断创新。
3. 胚胎工程的原理胚胎工程的原理主要是利用胚胎发育的生物学原理，通过控制细胞生长、分化和组织形成，培育出特定的组织或器官。
同时，还可以利用干细胞技术和组织工程技术，将适当的细胞种植到支架或载体上，促使其形成具有特定功能的组织或器官。
4. 胚胎工程的技术胚胎工程涉及到多种技术，包括干细胞技术、基因编辑技术、组织工程技术等。
其中，干细胞技术是胚胎工程中最重要的技术之一，通过培育胚胎干细胞或诱导多能干细胞为特定组织或器官提供了重要的细胞基础。
同时，基因编辑技术可以改变细胞的遗传信息，使其形成特定的组织或器官。
而组织工程技术则是将细胞种植到支架或载体上，促使其形成具有特定功能的组织或器官。
5. 胚胎工程的应用胚胎工程的应用范围非常广泛，主要包括以下几个方面：（1）临床医学：胚胎工程可以制备替代性器官，如心脏、肾脏、肝脏等，用于替代患者受损的器官，达到器官移植的目的。
（2）药物研发：通过培育特定的细胞或组织，可以用于新药的研发和临床试验，提供了更可靠的药效评价和毒性测试模型。
（3）组织修复：胚胎工程可以制备出一系列特定的组织或器官，用于治疗创伤、疾病和先天畸形等，促进组织的修复和再生。
总的来说，胚胎工程是一个涉及多学科的交叉学科，拥有广阔的应用前景，对未来的医学和生物技术发展具有重要意义。
希望未来可以有更多的科学家投入到这一领域，为人类健康和生命质量的改善做出更大的贡献。
《胚胎工程实验技术》 讲义
《胚胎工程实验技术》讲义一、胚胎工程的概念与发展胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。
它是在胚胎学基础上发展起来的一门新兴学科，主要包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割、胚胎冷冻保存、胚胎性别鉴定等技术。
胚胎工程的发展可以追溯到上世纪初。
随着显微镜技术的不断进步，人们对生殖细胞和胚胎的结构与功能有了更深入的了解。
20 世纪 50 年代，科学家成功实现了家兔的胚胎移植，标志着胚胎工程技术开始走向实用化。
此后，各种胚胎工程技术不断涌现和完善，为畜牧业、医学等领域带来了巨大的变革。
二、体外受精技术（一）基本原理体外受精是指将哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。
其基本原理是模拟体内受精的环境，使精子和卵子在适宜的条件下结合形成受精卵。
（二）操作步骤1、卵母细胞的采集卵母细胞的采集方法主要有两种：一种是从卵巢中直接采集未成熟的卵母细胞，然后在体外培养成熟；另一种是通过超数排卵技术，使雌性动物排出更多的卵子，再从输卵管中采集成熟的卵母细胞。
2、精子的采集与获能精子的采集通常通过人工采精的方法获得。
采集后的精子需要在体外进行获能处理，使其具备受精能力。
获能的方法有化学诱导法和培养法等。
3、受精将成熟的卵母细胞和获能的精子在体外共同培养，使精子穿过卵母细胞的透明带和卵膜，完成受精过程。
（三）应用体外受精技术在畜牧业和人类辅助生殖领域都有广泛的应用。
在畜牧业中，可以快速扩繁优良家畜品种；在人类辅助生殖领域，为不孕不育夫妇带来了生育的希望。
三、胚胎移植技术（一）基本原理胚胎移植是指将雌性动物体内的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
（二）操作步骤1、供体和受体的选择供体应选择具有优良遗传性状和生产性能的个体，受体则要求具有良好的繁殖性能和健康状况。
2、同期发情处理对供体和受体进行同期发情处理，使它们的生殖生理状态同步化，为胚胎移植创造适宜的条件。
第五讲胚胎工程ppt课件
实验动物的胚胎工程
• 胚胎工程(embryo biotechnology)是利用人工方法影 响、改变动物胚胎品质发育和进程的一种生物技术。
基本内容
• 超数排卵、胚胎培养、胚胎保存、胚胎移 植、胚胎分割、性别鉴定、胚胎嵌合、细 胞核移植、体外受精、基因导入以及胚胎 干细胞
超数排卵
• 超数排卵是一种不正常的排卵，经外源激 素处理的雌性动物，改变其性周期，使之 按照预定时间超常量的排卵。
• 核移植技术在研究两个原核的作用，核质关系和加速繁殖优良实验动 物方面，将起着巨大的作用。
体外受精(in vitro fertilization, IVF)
• 体外受精技术是指通过人工操作使精子和 卵子在体外环境中完成受精过程的技术， 主要用于培育试管动物。体外受精技术为 遗传播种提供了新的选择，因为与体内受 精相比对正常精子的需求很少，从而提高 了具有性特征的精子利用率的可能性。
• 核移植是实现哺乳动物无性繁殖的重要手段，能产生遗传特性一致的 动物群，是培育超纯系实验动物的新途径和有效方法。
• 胚胎细胞核移植技术要比胚胎分割技术进了一步，它是用显微手术的 方法分离未着床的早期胚胎细胞，将其单个细胞导入去除染色体的未 受精的成熟的卵母细胞，经过电融合，让该卵母细胞质和导入的胚胎 细胞核融合、分裂、发育成胚胎。把该胚胎移植给受体，让其妊娠产 仔。目前知道的胚胎细胞核移植克隆的动物有小鼠、兔、山羊、绵羊、 猪、牛和猴子等。
胚胎工程课件
胚胎工程课件一、教学内容本节课的教学内容选自生物学教材第八章“生物技术”的第二节“胚胎工程”。
具体内容包括：胚胎工程的定义、发展历程、技术原理及其在农业、医学等领域的应用。
二、教学目标1. 让学生了解胚胎工程的定义和发展历程，掌握其技术原理。
2. 培养学生对胚胎工程在农业、医学等领域应用的认识，提高其科学素养。
3. 培养学生通过实例分析，提出问题、解决问题的能力。
三、教学难点与重点1. 难点：胚胎工程的操作技术和应用领域。
2. 重点：胚胎工程技术原理及其在农业、医学等领域的应用。
四、教具与学具准备1. 教具：多媒体课件、黑板、粉笔。
2. 学具：教材、笔记本、彩笔。
五、教学过程1. 导入：通过展示胚胎工程在农业、医学等领域的应用实例，引发学生对胚胎工程的兴趣。
2. 讲解：介绍胚胎工程的定义、发展历程、技术原理，引导学生了解其基本概念。
3. 案例分析：分析胚胎工程在农业、医学等领域的应用实例，让学生了解其具体操作过程。
4. 互动环节：组织学生分组讨论，让学生提出问题，共同探讨胚胎工程技术的应用前景。
六、板书设计胚胎工程的定义、发展历程、技术原理及其在农业、医学等领域的应用。
七、作业设计1. 题目：请结合本节课所学内容，举例说明胚胎工程在农业、医学等领域的应用。
2. 答案：略。
八、课后反思及拓展延伸2. 拓展延伸：鼓励学生查阅相关资料，深入了解胚胎工程在其他领域的应用，如生物制药、基因治疗等，提高学生的自主学习能力。
重点和难点解析一、教学内容重点和难点解析：本节课的教学内容选自生物学教材第八章“生物技术”的第二节“胚胎工程”。
具体内容包括：胚胎工程的定义、发展历程、技术原理及其在农业、医学等领域的应用。
这些内容是学生理解胚胎工程的基础，需要重点关注。
二、教学目标重点和难点解析：本节课的教学目标有三个，其中第一个目标是让学生了解胚胎工程的定义和发展历程，掌握其技术原理。
这是本节课的重点内容，需要通过讲解和案例分析等方式，帮助学生理解和掌握。
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第一章胚胎移植胚胎移植：又名借腹怀胎，受精卵移植，它是指将良种母畜的早期胚胎取出，移植到同种和生殖状态相同的母畜体内，使之继续发育成新个体的过程.供体：提供胚胎的母畜受体: 接受胚胎的母畜1.胚胎移植的意义:①充分利用母畜的繁殖力②加速引进优良品种的繁殖，家畜改良进程和新品的培育③增加肉用畜种的双胎率④降低费用，减少疾病传播⑤克服母畜不孕症⑥胚胎工程的技术基础.2.胚胎移植的生理学基础:A.母畜发情后生殖器官的孕向发育B.早期胚胎的游离状态C.胚胎移植不存在免疫问题D.遗传本质不变.3.胚胎移植的基本原则:A.移植前后所处环境的同步性B.胚胎发育的期限和质量.4．胚胎移植的条件:A.可靠的胚胎来源B.良好的技术条件C.足量的生理状态，良好的受体D.静洁的实验室和简便实用的操作设备.5．胚胎移植的技术程序:A.供体母畜和受体母畜的选择与饲养管理 B.供体母畜的超级排卵处理 C.供体的配种或人工受精D.受体母畜的同期发情处理E.胚胎的采集F.胚胎的检查与鉴定G.胚胎的保存H.胚胎的移植J.供受体的术后观察.6羊胚胎移植的关键技术：A．供体羊要求：纯种，繁殖正常，2-3产，中等膘情B。
受体羊要求：繁殖正常的2-3产本地母羊，中等膘情C．供体超排数和配种：放CID尺栓当天为0天，在第13天开始注射FSH，每次间隔12h，三天注射6次，减量注射。
最后一针FSH后，撤CID尺栓，并注射0.8-1.0mlPG。
撤栓后第二天开始发情，第一次配种后注射与FSH相当剂量的LH，以后每8h配种一次，直到手术D．受体同期发情供体放CID尺后，可以间隔9天两次PG，在第二次PG后24h后进入发情旺盛期，正好与供体同步，FSH减量注射:1.5 1.0 0.E．冲胚时间：子宫冲胚法在配种后3-5天冲胚，输卵管冲胚在60-70h冲胚F．手术前准备：供体羊与受体羊要事先按照发情先后分组，同期的放在同一组，用不同颜色的喷漆标号，手术后24h禁食，手术部位刮毛清洗。
手术间升温到25°C以上，并彻底消毒，准备好保定架、药品、器械等。
G．手术：供体羊用麻药，受体不用麻不用麻药。
供体与受体在手术中要严格杜绝出血，以防粘连（黄体）H．术后管理：供体手术后第一个情期（绵羊17天，山羊21天）要配种，受体羊精心管理，在第3个情期试情后没有返情者认定妊妊娠。
8．影响胚胎移植效果的因素：A．胚胎因素：胚胎质量、胚龄、鲜、胚与冻胚、胚的分割；B．受体因素：受体动物的选择，营养及管理、受供体的周期化程度、供体中的黄体发育9．胚胎移植存在的问题主要是移植成功的总体效率低，成本高第二章体外受精一．体外受精（in vitro fertilization，IVF）是指通过人为操作使精子和卵子在体外环境中完成受精过程的胚胎工程技术。
在生物学领域中，将IVF的胚胎移植后所获得的后代称为试管动物。
二．体外受精的意义：（1）可望得到大量质优、价廉的体外生产胚胎，充分挖掘母畜的繁殖潜力；（2）观察配子发育、成熟受精及胚胎发育等一系列现象，为探索配子发育调控机理等受精生物学积累资料；（3）可评定家畜精子的质量，了解精子受精的潜力，防治不孕症（利用睾丸中球形精子细胞作带下或胞质内受精）和母畜的输卵管阻塞等。
（4）将体外受精技术与其它生物技术（如转基因技术、细胞核移植技术、基因敲除和基因修饰技术等生物高新技术）相结合，必将使优良种畜的扩繁进程呈现出崭新的发展面貌。
三．体外受精的技术程序（一）卵母细胞体外成熟：1、牛羊卵母细胞的采集：屠宰场采集牛羊卵巢，灭菌生理盐水清洗后，迅速放入含有青链霉素的无菌生理盐水中，保温瓶温度为23-28℃，6h之内运回实验室。
卵巢运回实验室后，无菌生理盐水冲洗三次，转入无菌操作室，剪去卵巢表面的结缔组织、脂肪、卵巢系膜和附着的输卵管，再用无菌生理盐水清洗三次，浸泡在38℃生理盐水中备用。
牛羊卵母细胞的采集分别采用抽吸法和切割法，采集卵巢表面2-8mm卵泡的卵泡液，卵泡液注入PBS液的检胚皿中，恒温静置一段时间，体视镜镜检COCs。
2、卵母细胞的级别A级：由5层以上致密卵丘细胞包被的卵母细胞；B级：由2-4层卵丘细胞基本包被的卵母细胞；C级：卵丘细胞松散或不完全包被的卵母细胞；D级：仅有少量卵丘细胞存在或裸露的卵母细胞；E级：卵丘细胞已经完全扩展呈蜘蛛网状，卵母细胞胞质不均一，处于退化状态的卵母细胞。
不同级别的卵母细胞体外成熟率、受精率差异很大，现在一般选用A、B类卵母细胞做体外培养3、卵母细胞体外成熟培养条件：培养温度：38.5℃；培养湿度：95%-100%；气体环境：5% CO2的空气；培养时间：23-24h ；培养方法：微滴培养法与U型皿培养法。
4、卵母细胞体外成熟培养液：基础成熟液（OM）：以Hepes或NaHCO3缓冲的TCM-199为液；常用添加成分：卵泡液、血清、激素（FSH，LH，17 -E2）、生长因子（TGF- 1，EGF ）和颗粒细胞等；添加以上成分可以改善体外培养条件，显著提高卵母细胞成熟率，保证较高受精率和囊胚率。
5、卵母细胞体外成熟的特征：A．卵母细胞的核成熟以第一极体排出为标志；B．卵母细胞的胞质成熟以卵丘细胞高度扩展为标志；C．透明带上的精子受体（ZPl、ZP2、ZP3）发生重排，透明带结构变软。
（二）、成熟卵母细胞体外受精：1、精液解冻：细管冷冻精液从液氮罐中储精桶中拿出后，在37℃水浴迅速解冻，在最短的时间突破冰晶期，然后采集少许精液镜检精子活力。
精子洗涤液置于离心管中，预先在CO2培养箱中平衡过2h以上。
活力良好的解冻精液注入平衡好的洗涤液离心管底部，在CO2培养箱内倾斜45 静置上浮30-60min。
静置后，离心管底部活力强的精子上游至上层液中，称为精子上浮。
吸取离心管上层富含高活力精子的洗涤液2mL，注入另一无菌离心管，再加入2mL洗涤液，于离心机1500rpm 离心7-8min，弃掉上清液，吸取离心管底部高浓度精子洗涤液备用。
2、精子洗涤与上浮：活力良好的解冻精液注入在CO2培养箱中平衡过2h以上的BO液离心管底部，在CO2培养箱内倾斜45 静置上浮30-60min。
离心管底部活力强的精子上游至上层BO液中，吸取离心管上层含有精子的BO液2mL，注入另一无菌离心管，再加入2mL BO液，1500rpm离心7-8min，弃掉上清液，吸取离心管底部高浓度精子洗涤液备用。
3、精子获能：经上浮筛选的精子移入新的受精液BO液，置于CO2培养箱孵育15min，使其获能。
卵母细胞预处理：挑选A、B级卵母细胞移入平衡过的PBS液和BO液各清洗3次，洗涤好的成熟卵母细胞连同BO液用吸管转移到一次性塑料平皿中，50 l微滴培养，每滴含10个左右卵母细胞，做好微滴后上盖石蜡油。
用细嘴吸管吸取经获能处理的精液，注入卵母细胞微滴中进行体外受精。
目前一般体外受精时间为18－24h。
4、 IVM 卵母细胞体外受精：a. 去除卵丘的卵母细胞IVF b. 成熟卵母细胞 IVF c.荧光下的体外受精 d 成熟卵母细胞体外受精扫描电镜照片e IVF后卵母细胞正在排出第二极体 f IVF后卵母细胞排出第二极体5、受精卵鉴定（三）成熟卵母细胞孤雌激活：1.成熟卵母细胞可以被精子激活，也可以在其它因素刺激下被激活，恢复减数分裂，排出第二极体，实现卵裂，卵母细胞非受精激活称孤雌激活。
2.引起孤雌激活的因素：A.物理激活包括：机械刺激、温度刺激、电场刺激。
B.生化激活包括： Ca2+载体、离子霉素（Ionomycin）、 6-DMAP、放线菌酮（CHX）、酶、二价阳离子、乙醇、1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）等。
这些刺激因素主要通过引起胞质内Ca2+浓度升高和MPF失活而导致卵母细胞激活.四、卵母细胞体外成熟的影响因素：（一）卵母细胞的来源 1. 动物种类和性机能所处的阶段 2 动物年龄3. 卵巢运输的时间（二）卵母细胞的质量 1.卵母细胞的类型 2卵泡的直径和卵丘细胞（三）培养的条件 1 温度和时间：一般为37~39℃，牛羊24~26h，猪42~48h 2气相:a .5%CO2 95%空气和饱和温度b．5%CO2 5%O290%N2和饱和温度 3 卵母细胞体外成熟培养的基础配养基（四）其他添加成分 1 激素类：FSH LH 雌激素绒毛膜促进激素 2 多肽生长因子 3 血清 4 卵泡液 5 颗粒/卵丘细胞五、体外受精存在的问题和发展前景（一）1 牛：利用体外生产，可为核移植技术提供具体卵裂球和受体卵母细胞； 2 绵羊：卵裂率为50%~70%,桑葚胚及囊胚发育率为30%~40%；3 山羊：1985年获得第一只试管山羊，但1994年才真正获得体外成熟培养卵母细胞，卵裂率为80.4%，桑葚胚的发育率为49%；4 猪：主要问题是多精子受精，高达60%~100%，卵黄膜阻止精子力差，可通过加入猪的卵泡液或寡糖肽来阻止；总之，有的已走向或开始走向商业化，但总体效率仍很低，表现在总体囊胚发育率低，细胞数少以及体外受精所得后代少。
（二）体外受精的发展前景：卵母细胞体外成熟，体外受精和胚胎体外培养是胚胎移植、性别鉴定、细胞核移植和转基因等繁殖生物高技术的基础。
第三章早期胚胎培养二、早期胚胎体外培养系统的种类及构成（一）体外培养系统的种类：1.简单化学特定培养：输卵管合成液（SOF）、TCM199、和CR1aa。
2.共培养体系：将胚胎与其它体细胞一起培养，体细胞所产生的物质供胚胎发育之需。
3.含有肽类生长因子的培养系统：主要有胰岛素样生长因子（IGFs）、表皮生长因子（EGF）、集落刺激因子-1（CSF-1）、白血病抑制因子（LIF）和转化生长因子-α（TGF-α）（二）体外培养系统的构成：1．能量底物：小鼠、仓鼠、绵羊、牛和人的早期胚胎在致密化前主要以丙酮酸、乳酸和氨基酸为能量底物，而致密化后的胚胎则对葡萄糖的摄入和利用增加。
2．氨基酸：必须氨基酸能增进后期胚胎内细胞团细胞的分裂和附植胎儿的发育能力。
非必须氨基酸和谷氨酰胺能促进胚胎向囊胚阶段发育，囊胚的形成及其孵化能力，增加滋养层细胞的数量。
3．蛋白质：胚胎培养液中常的蛋白质物质主要是血清，其组成成分复杂，包括生长因子、激素、维生素、矿物质和细胞因子等。
4．生长因子和细胞因子； 5．抗氧化物质：牛磺酸和谷酰胺都可被胚胎利用为抗氧化剂和渗透压调节剂，后者还可被小鼠和猪的体外胚胎作能量基质用胚胎体外培养体系的组成成分还有离子、维生素、激素等。
三、胚胎发育阻滞的防止措施：（一）动物输卵管培养法：1.兔输卵管：兔的一侧输卵管可以放置5～20枚胚胎，胚胎的回收率可达70%。
羊胚胎在兔输卵管的最适储存时间为3d，超过5d妊娠率下降，超过7d难于妊娠。
牛胚胎在兔输卵管中的存放时间通常为3～7d。