Smads蛋白在日本血吸虫性肝纤维化小鼠体内的表达
红景天甙对肝纤维化大鼠Samds基因表达的影响
研究原著 文章编号:1000 2790(2005)10 0923 04红景天甙对肝纤维化大鼠Sa m ds 基因表达的影响吴晓玲1,曾维政2,蒋明德2,王丕龙1,邓桂英3,秦建平2(1重庆医科大学附属第一医院消化内科,重庆400016,2成都军区总医院消化内科,四川成都610083,3成都市第六人民医院胃镜室,四川成都610051)收稿日期:2004 06 24; 修回日期:2004 12 20基金项目:成都军区 十五 医药卫生科研基金(01A009)通讯作者:曾维政.Te.l (028)83577558 Em ai.l zeng w ei zheng @163.co m 作者简介:吴晓玲(1970 ),女(汉族),湖北省襄樊市人.博士生(导师曾维政,王丕龙).Te.l (028)83577558 Em ai.l wx ll ady @163.co mE ffects of salidrosi de on expression of S m ads gene i n ratsw ith hepatic fi brosisW U X iao Ling 1,ZENG W ei Zheng 2,J IAN G M ing D e 2,W ANG P i Long 1,DE N G Gui Ying 3,Q I N J ian P ing21D epart m ent o f G astroen tero logy ,F irst A ffiliated H osp ital ofChongqi ng U n i v ersity o f M edical Sc i ences ,Chongq i ng 400016,Chi na ,2D epart m ent o f G astroentero l ogy ,G enera l H osp ital of Chengdu M ilitary Comm and ,Chengdu 610083,Ch i na ,3D epart ment o f G astroscope ,S i x t h H o spita l o f Chengdu C ity ,Chengdu610051,Ch i na【Ab stract 】A I M:To ob serve t he e ff e cts of sa lidro side on the expre ssion o f Sm ads gene in rats w ith CC l 4 induced he pa tic fibro sis and t o investi g a t e its p robab l e mo lecu lar m ech an is m s in in t e rf e ring live r fibrosis .M ETHODS :Hepa tic fi b rosis in ra t s was i n duced by subcutaneous injection o f CC l 4.The exp ressions o f Sm ad s mRNA we re de tect ed w it h i n s itu hyb rid iza ti o n (I SH ).The leve l o f Smads p ro t e in in the li v er tissue was de t ected w ith m i m unoh istochem istry (I H)and the deposition o f co llagen in the live r was ob served w it h HE and M asson stain ing .RESULT S :The con tent o f co llagen obviously increased in t he liver o f m ode l g roup and t he expre ssion o f Smad 4mRNA in fib ro tic live r w as s i g n ifican tly enhanced .The positive ra ti o o f Smad 4p ro t e in sign ifi c antly i n creased .A ll t hese increases w ere sig n ificantly decreased w it h sa lidro side trea t men.t Howeve r ,t he exp ression o f Sm ad 7i n m ode l group wa s ve ry f eeb le but sa lid roside enhanced it obviously .CONCLUSI ON :S a lid ro si d e is e ff ective in p ro t ecting ra t live r aga inst CC l 4 i n duced hepa tic fibrosis perhaps by inter f e ring the gene exp ression o f Smads ,wh ich wa s essen tia l in the fibrogen isis p rocess o f live r .【K ey word s 】sa lid roside ;live r c irrhosis ;s mads gene 【摘 要】目的:观察红景天甙对肝纤维化大鼠TGF S m ad通路的影响.方法:CC l 4诱导大鼠肝纤维化,以红景天甙水溶液干预性治疗,M asson 染色观察肝组织胶原沉积;EL IS A 法检测大鼠血清TG F 1水平;原位杂交(i n sit u hybri d izati on ,IS H )和免疫组化(i m munoh i stoche m istry ,I H )检测大鼠肝组织S m ads 表达情况.结果:红景天甙干预性治疗使肝纤维化大鼠血清TGF 1水平明显下降[(53 4 19 5)vs (88 7 22 8)m g /L ,P <0 05],肝脏胶原占肝组织面积比例减少为(0 041 0 011)[模型组(0 167 0 052),P <0 05];治疗组肝脏Sm ad 4蛋白表达阳性率降低为(0 023 0 008)[模型组(0 137 0 090),P <0 01],Smad 4mRNA 阳性率降低为(0 233 0 018)[模型组(0 741 0 091),P <0 01];S m ad 7蛋白阳性率增加为(0 067 0 010)[模型组(0 019 0 002),P <0 05],S m ad 7mRNA 阳性率增加为(0 198 0 011)[模型组(0 074 0 012),P <0 01];肝组织S m ads 蛋白表达与Sm ads mRNA 水平变化一致.结论:红景天甙防治可显著降低肝纤维化大鼠血清TGF 1水平,减少肝脏胶原沉积,抑制肝脏S m ad 4表达及促进S m ad 7mRNA 表达,从而减弱了由TGF 1介导的肝纤维化信号,可能是其发挥抗肝纤维化作用的分子机制之一.【关键词】红景天甙;肝硬化;S m ad 基因【中图号】R34;R 575 2【文献标识码】A0 引言肝纤维化是多种慢性肝脏疾病发展为肝硬化的中间环节,积极地控制肝纤维化进展具有极为重要的临床意义.红景天具有保护肝细胞、调节机体免疫功能等多种功效,在动物实验观察到其具有良好的干预四氯化碳诱导的肝纤维化作用.本研究旨在观察红景天的主要单体成分红景天甙对四氯化碳(CC l 4)诱导的肝纤维化大鼠肝脏胶原沉积的影响,了解其对大鼠肝脏Sm ad 4,Sm ad 7基因表达的影响,进一步从分子水平探讨红景天甙干预实验性大鼠肝纤维化的可能分子机制.1 材料和方法1.1 材料 化学纯CC l 4(成都联合化工试剂研究所);红景天甙粉剂(昆明同持生物技术公司);大鼠Sm ad 4,7mRNA 探针及原位杂交试剂盒(上海申能生物工程公司);大鼠Sm ad 4,7蛋白SABC 免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);BCIP/NBT为北京中山生物技术有限公司产品;TGF 1 EL I SA 试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);其余试剂为分析纯.1.2 方法 体质量(150 10)g健康SD雄性大鼠80只(购自四川大学华西实验动物中心),随机分为3组:对照组20只,肝纤维化组30只,用CC l4皮下注射(sc)法造模(化学纯CC l4配制成300mL/L浓度的石蜡油溶液,sc剂量3mL/kg,2次/w k 8wk),红景天甙组30只,造模同时给予红景天甙灭菌水溶液(浓度100g/L,剂量5m g/kg,2次/wk 8w k)i p.大鼠肝组织以40g/L中性甲醛溶液固定,石蜡包埋,以多聚赖氨酸涂布的载玻片制作切片.1.2.1 大鼠血清ELI SA检测 参照试剂说明书分别加入待测血清、二抗、显色剂,反应后用酶标仪读数测定血清TGF 1含量.1.2.2 肝组织病理学检测 肝组织切片HE染色、M asson胶原染色作组织病理学检查,显微镜下观察,以计算机图像分析系统进行胶原含量定量分析.1.2.3 大鼠肝组织Sm ads蛋白表达免疫组化检测 切片常规脱蜡至水,经微波修复抗原,抗Sm ad4和抗Sm ad7多克隆抗体稀释度均为1 100,以PBS代替一抗作阴性对照;切片依次加一抗、生物素化二抗孵育, DAB显色、苏木素复染,中性树胶封片,显微镜下观察,随机选取每张切片10个视野( 200倍)测定阳性细胞的所占视野细胞的比例,以计算机图像分析系统进行Sm ads蛋白表达水平定量分析.1.2.4 大鼠肝组织Sm adsmRNA表达原位杂交检测 大鼠Sm ad4mRNA探针序列:5 B io GGT GGC GTT AGA CTC TGC CGG GGC TAA CAG 3 (1035~ 1064bp),Sm ad7mRNA探针序列:5 B i o GAG CTG TCC GAG GCA AAA GCC ATT CCC CTG 3 (2310~2339bp),Sm ad4和Sm ad7探针浓度均为5 m o l/L,切片常规脱蜡至水,经复合酶消化、预杂交、杂交、封闭等步骤,NBT/BC IP显色,核固红复染,中性树胶封片,显微镜下观察,随机选取每张切片10个视野( 200倍),测定阳性细胞所占的比例,以计算机图像分析系统进行mRNA表达水平定量分析.统计学处理:数据以x s表示,两组均数比较用双侧t检验,P<0 05差异具有显著性意义.2 结果2.1 红景天甙对大鼠血清TGF 1水平的影响(Tab1) 正常对照组大鼠血清TGF 1水平低,仅为(21 5 10 1)m g/L,模型组大鼠血清TGF 1水平显著升高[(88 7 22 8)m g/L,与正常组比较P< 0 01)],表明CC l4长期注射能够使大鼠合成TGF 1显著增加,进而刺激机体产生过多的细胞外基质在肝脏沉积,形成肝纤维化.红景天甙干预性治疗使血清TGF 1水平明显降低[(53 4 19 5)mg/L,与模型组比较P<0 05].表1 大鼠血清TGF 1水平及肝组织胶原面积比例(肝组织总面积为1 0)T ab1 Seru m concen trati on of TGF 1and area o f co llagen(to tal area:1 0)Group n TGF 1(m g/L)C ollagen areaNor m al2021 5 10 1b0 012 0 002bM odel3088 7 22 80 167 0 052 Treat m en t3053 4 19 5a0 041 0 011aa P<0 05,b P<0 01vs m odel group,respecti vely.2.2 红景天甙对大鼠肝组织病理学改变的影响(Tab1) 模型组大鼠肝脏呈黄褐色,表面布满细小结节,HE染色可见肝细胞广泛变性、坏死,以中央静脉周围为重;M asson染色见正常肝脏胶原纤维含量稀少(平均每个视野约占肝组织总面积的0 012),模型组肝脏胶原纤维明显增生,汇管区-中央静脉区纤维间隔宽大,胶原纤维显著增生并包绕分隔肝小叶,部分已形成假小叶,胶原纤维占肝组织的面积比例平均为(0 167 0 052),红景天甙干预组则减少为(0 041 0 011),两组比较差异有显著性意义, P<0 05,表明红景天甙能够有效地减少肝脏胶原的合成与沉积(Tab1).2.3 大鼠肝组织S m ad4表达(Tab2,F ig1A,B) 免疫组化染色可见,正常大鼠肝组织未检出明显的Sm ad4表达,模型组大鼠肝组织则Sm ad4表达明显增加,棕黄色阳性颗粒定位于细胞质和细胞核,阳性细胞集中于汇管区,以梭状的间质细胞为主,肝细胞未见明确阳性反应.红景天甙干预组大鼠肝组织Sm ad4表达较模型组明显减少,阳性细胞亦主要位于汇管区,以间质细胞为主.原位杂交检测正常肝组织未见明显S m ad4mRNA阳性表达细胞,模型组有大量阳性细胞,肝实质细胞与间质细胞均有表达,蓝紫色阳性颗粒主要定位于细胞质,平均阳性率为(0 741 0 091).红景天甙治疗使阳性率降低为[(0 233 0 018),与模型组相比P<0 05,各组阴性对照未见阳性表达,证实免疫组化和原位杂交检测结果具有特异性.表2 大鼠肝组织Sm ads 表达阳性率比较(肝组织总面积为1 0)T ab 2Positiv it y rate of Sm ads/Smads mRNA i n li ve r tissues(I H,IS H,to tal area :1 0)G roup Sm a d 4Sm ad 4m RNAS m ad 7Sm ad 7m RNAN or m al 0b0b0b0bM odel 0 137 0 0900 741 0 0910 019 0 0020 074 0 012T reat m ent0 023 0 008b 0 233 0 018a 0 067 0 010a 0 198 0 011aaP <0 05,b P <0 01v s m odel group ,respec ti ve l y.A:M od el group ;B:T reat m ent group .F ig 1 Expression o f S m ad 4prote i n i n liver of the rat I H200图1 大鼠肝组织S m ad 4蛋白表达2.4 大鼠肝组织Sm ad 7表达(Tab 1,Fig 2A ,B ) 免疫组化染色可见,正常大鼠肝组织未检出Sm ad 7表达,模型组大鼠肝组织只有少量细胞出现Sm ad 7阳性表达,棕黄色阳性颗粒定位于细胞质,阳性细胞主要位于汇管区,以梭状的间质细胞为主,肝细胞未见明确阳性反应.红景天甙干预性治疗使大鼠肝组织Sm ad 7表达细胞较模型组明显增加.正常组肝组织原位杂交法未检出Sm ad 7mRNA 阳性表达细胞,模型组出现少量阳性表达细胞,蓝紫色阳性颗粒主要位于细胞质,肝细胞和间质细胞均有表达,平均阳性率(0 074 0 012),红景天甙治疗使阳性率明显增加为(0 198 0 011),与模型组相比P <0 05,各组阴性对照未见阳性表达,证实免疫组化和原位杂交检测结果具有特异性.A :M odel group ;B :T reat m en t group.F i g 2 Exp ressi on of Sm ad 7mRNA i n liver of t he rat IS H 200图2 大鼠肝组织Sm ad 7mRNA 表达3 讨论肝纤维化的治疗研究是国内外的热点课题.近年来,分子生物学、分子病理学、分子药理学等边缘学科的快速发展使人们对肝纤维化发生机制的认识不断深化.多项研究表明,TGF Sm ad 信号通路是肝纤维化时主要的信号转导通路[1,2],Sm ads 是一族传递TGF 信号的分子,其中,与受体结合的是Sm ad 2,3,具有抑制作用的是S m ad 6,7,Sm ad 4则为传递信息必须的共用Sm ad 分子,阻断或干扰该信号转导通路有可能阻止肝纤维化进程[3],为肝纤维化的治疗带来了新希望.目前已从化学药物、细胞因子、基因调控等方面进行了广泛的探索,结果不尽如意.我国学者在对中草药的研究中发现,不少中药在控制肝纤维化方面具有一定的疗效,显示了良好的发展前景[4].这些药物价格低廉,副作用小,易于为患者所接受,但多数中药疗效研究仅限于动物实验或简单临床观察,缺乏系统的分子水平研究.红景天的主要成份为红景天甙、酪醇以及多种氨基酸,本单位前期研究证实,红景天精制醇提物能够保护肝细胞,减少肝脏胶原合成与沉积,降低大鼠肝组织NCX (Na +/C a 2+ex changer)、TGF b1与 1(Ⅰ)mRNA 的表达,有效抑制四氯化碳诱导的肝纤维化[5].红景天甙是红景天的主要成分,前期的细胞实验观察到红景天甙对肝星状细胞的增殖、活化具有一定抑制作用,能减少肝星状细胞合成胶原纤维.我们以红景天甙溶液i p 防治大鼠肝纤维化,结果表明CC l 4诱导的大鼠肝纤维化出现Sm ad 4表达明显增加,而Sm ad 7表达水平低下,反映肝脏纤维化病变的进展.红景天甙水溶液ip 能够有效地减轻CC l 4诱导的肝组织损害和肝脏胶原沉积,降低大鼠血清TGF 1水平,且使Sm ad 4蛋白表达阳性率由0 137下降至0 023,Sm ad 4mRNA 表达阳性率由0 741下降至0 233;同时,具有抑制肝纤维化作用的信息分子S m ad 7蛋白表达阳性率由0 019上升至0 067,Sm ad 7mRNA 表达阳性率由0 074上升为0 198,红景天甙减弱Sm ad 4基因的表达,同时促进了抑制性分子Sm ad 7的基因表达,从而有效地干预了TGF 介导的肝纤维化信号传导过程,可能是其抗肝纤维化分子机制之一.【参考文献】[1]Gressner A M,W eis k irch en R ,B reit k opf K,et al .Roles of TGF b etai n hepatic fi bros i s[J].F ron t B i osc i ,2002;7:d793-d807.[2]L i u CH,M ari ann aDA,Gaca E,et a l .Sm ads 2and 3are differen tiall yacti vated by trans f or m ing gro w th factor (TGF )i n qu iescent and acti vated hepati c stellat e cells [J].J B iol C he m ,2003;278(13):11721-11728.[3]Kondou H,M ush i ake S,E t an iY,et a l .A b lock i ng pep ti de for transfor m i ng gro w th factor beta 1acti vati on preven ts hepatic fi brosis i n vi vo [J].J H e patol ,2003;39(5):742-748.[4]徐新保,何振平,梁志清,等.阻断转化生长因子 1信号传导治疗大鼠实验性肝纤维化[J].中华肝脏病杂志,2004;12(5):263-266.Xu XB,H e ZP ,L i ang ZQ ,et a l .Ob structi on of TGF beta 1signal transdu cti on by an ti Sm ad 4gene can t h erapy experi m ental li ver fi brosis i n t he rat[J].J Ch i n H e pa t ol ,2004;12(5):263-266.[5]Dool ey S,H a m zav i J ,Breit kop fK ,et a l .Smad 7prevents acti vati on ofhepatic stellat e cells and li ver fi bros i s i n rats[J ].G astroe n t erol ogy ,2003;125(1):178-191.编辑 许福明经验交流文章编号:1000 2790(2005)10 0926 01地塞米松治疗难治性支扩咯血45例临床分析王胜文,高永忠,胡 兵(河南省永城市公疗医院,河南永城476600)【关键词】地塞米松;难治性支扩咯血;临床分析【中图号】R 562 22【文献标识码】B收稿日期:2004 12 08; 修回日期:2005 02 19作者简介:王胜文(1965 ),男(汉族),河南省永城市人.学士,主治医师.T e.l (0370)5231202 Em ai .lW angs h eng w en@0 引言 支气管扩张感染并咯血一般治疗并不困难,有些病例用常规综合治疗未能控制者,称之为难治性支扩咯血,此时加用地塞米松可收到良好效果.现就我科自1995 02/2005 03收治的216例支扩咯血患者治疗情况报告如下.1 临床资料 患者216(男144,女72)例,其中5~30岁176例,31~72岁40例.所有患者咯血量最多每日不超过200mL,最少不低于50mL,均符合第六版《内科学》关于支气管扩张的诊断标准,且均经胸部CT 确诊,并排除慢性支气管炎、活动性肺结核、二尖瓣狭窄、肺脓肿、先天性肺囊肿、肺癌、活动性消化道溃疡.具体治疗方法:首先常规给予抗感染、清除痰液、止血剂、垂体后叶素、镇静剂及支持对症治疗,对糖尿病患者,要监测血糖,使血糖控制在正常范围内.1w k 后,咯血消失者172例,未能控制者45例.对45例在综合治疗的基础上加iv 地塞米松2~10mg /次,1次/12h ,连用3d 后,咯血停止者,改用po 地塞米松片0 75~4 5m g ,每日晨起1次.维持治疗,3d 后停药;iv 地塞米松3d 后,咯血仍不能控制者,转入外科介入治疗.2 结果 45例中首次用地塞米松24h 内止血者16例,占36 4%(16/45),24~72h 内止血者18例,占40 9%(18/45),3d 后10例无效转入外科介入治疗,占22 7%(10/45),无1例出现感染扩散导致病情恶化.对该组支扩咯血患者,常规综合治疗有效率79 6%(172/216),而加用地塞米松后,则可明显地提高疗效,有效率达92 5%(200/216).对常规综合治疗无效的难治性支扩咯血患者,加用地塞米松后,有效率高达77 3%(34/45).3 讨论 支气管扩张的主要原因是炎症.其病理变化为病变的支气管黏膜有溃疡形成,柱状纤毛上皮常被鳞状上皮所替代,杯状细胞和黏液增生;病变可依次损坏弹性纤维、平滑肌及软骨而使管腔变形扩大,腔内含有大量分泌物,支气管周围结缔组织常受损,并有轻微脓肿,常伴有毛细血管扩张,或支气管动脉与肺动脉的终末支扩张与吻合,形成血管瘤,破裂时引起程度不同的咯血.地塞米松具有抗炎作用,表现在:①抑制白细胞、单核-巨噬细胞的管壁黏附性和向血管外移行,减少炎症区浸润,从而增加了局部组织的顺应性;②减低血管壁通透性,减轻毛细血管内皮水肿,并减少血流量和渗出;③直接作用于血管或通过加强血管平滑肌对去甲肾上腺素的敏感性,加强收缩,减轻充血;④在炎症反应过程中组织受损,释放炎症介质,引起毛细血管扩张,增加血管通透性,地塞米松可抑制炎症介质的合成与释放,并减少血管活性物质的作用,从而达到止血目的.同时地塞米松又具有免疫抑制作用,可引起感染扩散,与有效抗生素联合使用时,并未发现有感染扩散病例.支气管扩张患者,一旦发生呼吸道感染,极易咯血.从本组数据来看,对常规综合治疗无效的难治性支扩咯血患者,加用地塞米松后,具有疗效好,止血快,疗程短,无明显副作用,安全经济的特点,特别对无介入治疗条件的基层医院,更值得推广应用.编辑 潘伯荣。
芍药苷通过IL-13信号通路抑制日本血吸虫病小鼠肝脏纤维化
芍药苷通过IL-13信号通路抑制日本血吸虫病小鼠肝脏纤维化杜明占;沈继龙;吴强;胡向阳;储德勇【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2011(46)4【摘要】目的观察芍药苷(PAE)对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化及白介素13(IL-13)信号转导通路中的IL-13、信号转导蛋白和转录激活子6(STAT6)、白介素-13受体α1(IL-13Rα1)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ) mRNA表达的影响,探讨PAE预防血吸虫病肝纤维化的作用机制.方法 BALB/c小鼠感染血吸虫尾蚴12 d开始,药物组每天灌胃给予PAE[0.2 ml,60 mg/(kg·d)× 30 d],正常和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠,并于感染后第42天起所有各组灌胃给予吡喹酮[500 mg/(kg·d)×2 d]以杀虫.在感染后第8、12周末,分别处死小鼠,取血及肝脏,分别用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量;碱裂解法测量肝脏羟脯氨酸(HYP)含量;苏木精-伊红(HE)和Masson 胶原纤维染色法观察肝虫卵性肉芽肿面积和评价肝纤维化程度;免疫组化染色观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、IL-13、STAT6、IL-13Rα1的表达情况;RT-PCR检测Col–Ⅰ、 Col-ⅢmRNA的表达情况.结果感染后第8、12周时,模型组小鼠血清HA水平和肝脏HYP水平显著高于正常组和药物组(P＜0.01);肝脏虫卵肉芽肿面积和纤维化程度显著高于药物组(P＜0.01);肝脏α-SMA阳性细胞的表达强度显著高于正常组和药物组(P＜0.01);肝脏IL-13表达水平显著高于药物组(P＜0.01);肝脏Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA 水平显著高于正常组和药物组(P＜0.01).感染后第8周时模型组小鼠STAT6、IL-13Rα1表达水平显著高于药物组(P＜0.01).结论 PAE可能通过抑制IL-13信号转导通路而抑制日本血吸虫病肝纤维化.%Objective To investigate the effects of paeoniforin ( PAE ) on hepatic fibrosis and to explore mechanism of PAE in preventing hepatic fibrosis of mice with Schistosomiasis japonica ,IL-13 . STAT6 , IL-13Rαl . Col I and Col IⅢ , which implicated in IL-13 cell signalling were detected. Methods BALB/c mice were infected with S. japonicum cercariae. After 12 days,the mice of drug group were orally given PAE 0. 2 ml, 60 mg/ ( kg . d ) × 30 d. the normal and model groups were given 0. 5％ sodium carboxymethycellulose× 30 d. Each group was orally given praziquantel 0.2 ml,500 mg/( kg . d ) ×2 d,on 42 d after infection. Mice were sacrificed by cervical dislocation on 8 weeks and 12 weeks after infection. Serum hyaluronic acid ( HA ) was detected by radio-immunoassay;Hepatic hydroxyproline ( HYP ) was detected by alkaline lysis. The area of egg granuloma and degree of hepatic fibrosis were observed by HE and masson stainings. The expression of a-SMA, IL-13. STAT6 and IL-13Ral protein were measured by immnohistochemical method. The expression of Col Ⅰ and ColⅢ mRNA were measured by RTPCR. Results When 8.12 weeks after infected, the level of HA and HYP in model group was higher (P ＜0. 01)than that in other groups. The area of granuloma and the degree of hepatic fibrosis in model group were significantly greater ( P ＜0. 01 ) than that in drug group. The expression of α-SMA in model group was more obvious ( P ＜0. 01 ) than other groups. The expression of IL-13 in model group was higher ( P ＜ 0. 01 ) than that in drug group.The level of Col Ⅰ and Col Ⅲ mRNA in model group was higher ( P ＜ 0. 01 )than that in other groups. When 8 weeks after infected, STAT6, IL-13Rαl in modelgroup was higher ( P ＜0. 01 ) than that in drug group. Conclusion PAE may prevent hepatic fibrosis of mice with schistosomiasis japonica by inhibiting IL-13 cell signalling.【总页数】7页(P314-320)【作者】杜明占;沈继龙;吴强;胡向阳;储德勇【作者单位】安徽医科大学病理学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原生物学教研室、安徽病原生物学省级实验室、人兽共患病安徽省重点实验室,合肥,230032;安徽医科大学病理学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病理学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原生物学教研室、安徽病原生物学省级实验室、人兽共患病安徽省重点实验室,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】R532.21;R575.2;R284.1;R392.3【相关文献】1.sIL-13Rα2 抑制IL-13介导的NIH-3T3胶原I的合成及血吸虫病肝组织中sIL-13Rα2/IL-13的表达 [J], 李静;王维;李小月;储德勇;闻慧琴;周银娣;张诗海;罗庆礼;沈继龙2.白藜芦醇调控 Th1和 Th2应答抑制小鼠日本血吸虫病肝脏纤维化的研究 [J], 张伟伟;朱继峰;王任;高雅楠;张军峰;佟书娟3.芍药苷抑制Src/STAT3信号通路协同替莫唑胺抑制胶质瘤细胞增殖和迁移 [J], 高卓维;陈广鸿;符路娣4.化痰活血方通过IL-13信号通路对哮喘小鼠肺组织MUC5AC分泌的影响 [J], 魏义杰;毛晓健;傅榕冰;伍林泽;胡旭红;童晓云;黄丰5.芍药苷通过IL-13/STAT6信号转导通路抑制成纤维细胞产生胶原 [J], 杜明占;沈继龙;吴强;胡向阳;储德勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
TGF-β1／Smads信号通路在肝脏纤维化中的作用研究进展
TGF-β1／Smads信号通路在肝脏纤维化中的作用研究进展
TGF-β1/Smads信号通路在肝脏纤维化中的作用研究进展赵卫华王燕红丛敏
【期刊名称】肝脏
【年(卷),期】2016(021)010
【总页数】3
·综述·
肝脏纤维化是多种致病因素持续作用于肝脏，导致慢性肝脏损伤后的共同结果。
主要表现为细胞外基质(extracellular matrix，ECM)生成过多，降解相对不足，在肝脏内大量沉积，导致肝脏纤维化，此病理过程是可逆的。
目前认为活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)是肝脏纤维化发生时ECM的主要来源。
肝脏中各种细胞生长因子、血管活性因子及脂肪因子均参与了肝脏纤维化的形成与进展，而转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)是导致肝脏纤维化的最重要的细胞因子之一。
本文将在已知的TGF-β1在肝脏纤维化中的作用基础上，对近3～5年来有关调控因子对TGF-β1/Smads信号通路的影响及靶向TGF-β1信号通路的抗肝脏纤维化治疗策略进行如下综述。
一、TGF-β1概述
20世纪70年代初，在大鼠成纤维细胞培养中发现一种新的多肽被命名为肉瘤生长因子(SGF)，后来发现这个因子是由两个不同功能的物质组合而成，分别命名为转化生长因子-α (TGF-α)和转化生长因子-β(TGF-β)。
TGF-β 是由两个结构相似的二聚体借助分子间的二硫键连接而成。
最新研究发现TGF-β有6种类型异构体，而哺乳动物中则有TGF-β1、β2及β3三个亚型，其体外性质类似，但体内效应不同[1]。
Wnt信号通路与肝纤维化的关系
3Ｗｎｔ信号通路与肝纤维化的关系范 钦１，李红俊２，李晓霞２，杨 尹２，陈海燕２，成家茂１１大理大学基础医学院解剖学教研室，云南大理６７１０００；２大理大学临床医学院超声教研室，云南省第四人民医院超声科，云南大理６７１０００摘要：在各种慢性肝损伤后，肝纤维化是生物体的一种自我修复性病理过程，并能引起肝硬化、肝癌等疾病。
Ｗｎｔ信号通路广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物中，是一类在物种进化过程中高度保守的信号通路。
许多研究已经证实Ｗｎｔ信号通路与肝纤维化的发生发展有密切联系。
主要从经典和非经典Ｗｎｔ信号通路调控肝星状细胞、肝巨噬细胞、肝祖细胞的机制方面进行概述，为后续深入开展Ｗｎｔ信号调控肝纤维化机制研究及探索可逆转肝纤维化的治疗靶点提供新思路。
关键词：肝硬化；Ｗｎｔ信号通路；肝星状细胞；枯否细胞；干细胞基金项目：２０２１年云南省地方本科高校基础研究联合专项资金面上项目（２０２１０１ＢＡ０７０００１－１０１）；２０２２年云南省教育厅科学研究基金（２０２２Ｙ８０９）；２０２１年云南省教育厅科学研究基金（２０２１Ｊ０３８２）；２０１７年度云南省自然科学基金高校联合基金（２０１７ＦＨ００１－０７６）；云南省李云庆专家工作站项目（２０２００５ＡＦ１５００１４）；大理大学神经生物学创新团队项目（ＺＫＬＸ２０１９１０８）ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙａｎｄｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓＦＡＮＱｉｎ１，ＬＩＨｏｎｇｊｕｎ２，ＬＩＸｉａｏｘｉａ２，ＹＡＮＧＹｉｎ２，ＣＨＥＮＨａｉｙａｎ２，ＣＨＥＮＧＪｉａｍａｏ１．（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｕｍａｎＡｎａｔｏｍｙ，ＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＤａｌｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉ，Ｙｕｎｎａｎ６７１０００，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｌｔｒａｓｏｕｎｄ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＤａｌｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｄｅ ｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｌｔｒａｓｏｕｎｄ，ＴｈｅＦｏｕｒｔｈＰｅｏｐｌｅ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｄａｌｉ，Ｙｕｎｎａｎ６７１０００，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒｓ：ＣＨＥＮＧＪｉａｍａｏ，ｃｈｊｍａｏ＠１６３．ｃｏｍ；ＣＨＥＮＨａｉｙａｎ，３１６５７３２３０＠ｑｑ．ｃｏｍＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ（ＨＦ）ｉｓａｓｅｌｆ－ｈｅａｌｉｎｇｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓａｆｔｅｒａｌｌｋｉｎｄｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｉｅｓａｎｄｃａｎｃａｕｓｅｄｉｓｅａｓｅｓｓｕｃｈａｓｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓａｎｄｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒ．ＴｈｅＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｓｈｉｇｈｌｙｃｏｎｓｅｒｖｅｄｉｎｓｐｅｃｉｅｓｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｗｉｄｅｌｙｅｘｉｓｔｓｉｎｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓａｎｄｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ，ａｎｄｍａｎｙｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔｔｈｅＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｓｃｌｏｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＦ．Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔｈｅｃｌａｓｓｉｃａｌａｎｄｎｏｎ－ｃｌａｓｓｉｃａｌＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓ，ｈｅ ｐａｔｉｃｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ａｎｄｈｅｐａｔｉｃｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｉｄｅａｓｆｏｒｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＨＦａｎｄｆｕｒｔｈｅｒｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｓｔｈａｔｃａｎｒｅｖｅｒｓｅＨＦ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＬｉｖｅｒＣｉｒｒｈｏｓｉｓ；ＷｎｔＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙ；ＨｅｐａｔｉｃＳｔｅｌｌａｔｅＣｅｌｌｓ；ＫｕｐｆｆｅｒＣｅｌｌｓ；ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＧｅｎｅｒａｌＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳｐｅｃｉａｌＪｏｉｎｔＦｕｎｄｆｏｒｔｈｅＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＬｏｃａｌＵｎｄｅｒｇｒａｄｕａｔｅＣｏｌｌｅｇｅｓａｎｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓｉｎＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅｉｎ２０２１（２０２１０１ＢＡ０７０００１－１０１）；Ｔｈｅ２０２２ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄｏｆｔｈｅＥｄｕｃａｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ（２０２２Ｙ８０９）；Ｔｈｅ２０２１ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄｏｆｔｈｅＥｄｕｃａｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ（２０２１Ｊ０３８２）；Ｔｈｅ２０１７ＪｏｉｎｔＵｎｉｖｅｒｓｉ ｔｙＦｕｎｄｏｆＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ（２０１７ＦＨ００１－０７６）；ＰｒｏｊｅｃｔｏｆＬｉＹｕｎｑｉｎｇＥｘｐｅｒｔＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖ ｉｎｃｅ（２０２００５ＡＦ１５００１４）；ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＴｅａｍｏｆＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙｏｆＤａｌｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＺＫＬＸ２０１９１０８）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．０２．０３８收稿日期：２０２１－０７－０５；录用日期：２０２１－０８－１１通信作者：成家茂，ｃｈｊｍａｏ＠１６３．ｃｏｍ；陈海燕，３１６５７３２３０＠ｑｑ．ｃｏｍ 肝纤维化是慢性肝损伤后进一步恶化的关键性病理过程，是提升肝癌风险的关键因素，目前尚无特异有效的治疗方法。
盐酸法舒地尔抗日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用
盐酸法舒地尔抗日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用郑丹;梁跃进;毛雯倩;李冉;王勇【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2011(29)3【摘要】目的观察Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化以及肝星状细胞(hepatic stel-late cells,HSCs)的影响。
方法 30只雌性BALB/c 小鼠随机均分为3组,分别为健康对照组、感染组和干预组,感染组和干预组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(14±2)/只,感染后6周,干预组给予盐酸法舒地尔(10 mg/kg)腹腔注射,2次/d,连续7 d,健康对照组和感染组注射等体积生理盐水。
末次注射12 h后剖杀小鼠,分别取健康对照组和感染组小鼠肝脏固定、切片,苏木素-伊红(HE)染色或天狼星红染色后镜下观察。
检测3组小鼠肝脏羟脯氨酸(hydrox-yproline,Hyp)含量,以及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原α1链(typeⅠcollagenα1,Col1α1)和上皮细胞转化序列2(epithelial cell transforming sequence 2,Ect2)的mRNA水平。
采用原位灌注密度梯度离心法分离肝星状细胞,检测α-SMA、Col1α1和Ect2的mRNA水平。
结果感染组小鼠肝内汇管区和虫卵肉芽肿周围炎症细胞浸润,胶原纤维增生。
健康对照组、感染组和干预组每克肝湿重羟脯氨酸含量分别为(279.7±21.2)μg、(528.0±14.9)μg和(355.4±22.6)μg,干预组肝脏羟脯氨酸含量显著低于感染组(P<0.01)。
干预组肝脏和肝星状细胞的α-SMA、Col1α1和Ect2的mRNA水平均显著低于感染组(均P<0.05)。
结论盐酸法舒地尔对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化有一定抑制作用。
ＮＬＲＰ３炎症小体激活促进肝星状细胞活化的机制
!L"!ＮＬＲＰ３炎症小体激活促进肝星状细胞活化的机制彭 憬，袁 维，银思涵，孙克伟湖南中医药大学第一附属医院肝病科，长沙４１０００７摘要：肝纤维化是慢性肝脏损伤的共同结果，可进展为肝硬化甚至是肝癌，目前尚无有效逆转肝纤维化的手段。
在窦周隙中被激活的肝星状细胞转变为肌成纤维细胞并分泌胶原，是肝纤维化进程中的中心事件。
ＮＬＲＰ３炎症小体可被各种损伤刺激激活，介导炎症反应和细胞焦亡。
近年研究发现ＮＬＲＰ３炎症小体与肝星状细胞活化密切相关。
介绍了在各种病理因素刺激下，ＮＬＲＰ３炎症小体在肝星状细胞内不同通路的激活，以及促进胞外炎症微环境的形成，从而介导肝星状细胞活化，在促肝纤维化中发挥重要作用。
关键词：肝硬化；肝星状细胞；ＮＬＲＰ３炎症小体；炎症微环境基金项目：国家自然科学基金青年基金（８１９０４１８２）；湖南省自然科学基金（Ｓ２０２０ＪＪ５４４１）ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐｒｏｍｏｔｉｎｇｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎＰＥＮＧＪｉｎｇ，ＹＵＡＮＷｅｉ，ＹＩＮＳｉｈａｎ，ＳＵＮＫｅｗｅｉ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｕｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００７，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＳＵＮＫｅｗｅｉ，Ｋｅｗｅｉｓｕｎ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００２－９７３４－３７１７）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｓｔｈｅｃｏｍｍｏｎｒｅｓｕｌｔｏｆｖａｒｉｏｕｓｃｈｒｏｎｉｃｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｉｅｓａｎｄｃａｎｐｒｏｇｒｅｓｓｔｏｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓａｎｄｅｖｅｎｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒ，ａｎｄａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｉｓｓｔｉｌｌｎｏｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅａｎｓｔｏｒｅｖｅｒｓｅｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｖａｔｅｄｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓ（ＨＳＣ）ｉｎｐｅｒｉｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｓｐａｃｅｉｎｔｏｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓａｎｄｔｈｅｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆｃｏｌｌａｇｅｎａｒｅａｃｅｎｔｒａｌｅｖｅｎｔｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ．ＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｃａｎｂｅａｃｔｉｖａｔｅｄｂｙｖａｒｉｏｕｓｉｎｊｕｒｙｓｔｉｍｕｌｉａｎｄｍｅｄｉａｔｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ．ＲｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｓｃｌｏｓｅｌｙａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＨＳＣａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐａｔｈｗａｙｓｉｎＨＳＣｕｎｄｅｒｖａｒｉｏｕｓｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓａｎｄｒｏｌｅｏｆＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｎｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｂｙｍｅｄｉａｔｉｎｇＨＳＣａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｐｌａｙｉｎｇａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｐｒｏｍｏｔｉｎｇｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＬｉｖｅｒＣｉｒｒｈｏｓｉｓ；ＨｅｐａｔｉｃＳｔｅｌｌａｔｅＣｅｌｌｓ；ＮＬＲＰ３Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ；ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＮａｔｉｏｎａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｕｎｄｆｏｒＤｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｄＹｏｕｎｇＳｃｈｏｌａｒ（８１９０４１８２）；ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＨｕｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ（Ｓ２０２０ＪＪ５４４１）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．１１．０３５收稿日期：２０２２－０３－２９；录用日期：２０２２－０５－１０通信作者：孙克伟，Ｋｅｗｅｉｓｕｎ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ 肝纤维化是一系列慢性肝损伤的病理生理结果，是一个涉及实质细胞（肝细胞）、肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ，ＨＳＣ）、肝窦内皮细胞以及常驻和浸润免疫细胞之间相互作用的动态过程，细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）的过度积累则是其最突出的特征［１］。
热休克蛋白47在日本血吸虫病肝纤维化病程的动态变化
热休克蛋白47在日本血吸虫病肝纤维化病程的动态变化邓菊红;陶然;焦云桃;李兰;范翔雪;黄加权【摘要】目的观察热休克蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)在日本血吸虫病患者肝脏组织中的表达情况及其在日本血吸虫病肝纤维化小鼠动物模型中的动态变化.方法收集2008—2012年期间同济医院门诊和住院部日本血吸虫病肝纤维化患者肝穿标本72例.用免疫组织化学法检测HSP47表达;Masson染色观察胶原增生情况;实时荧光定量PCR检测HSP47、I型胶原、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)及转移生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA水平的表达.构建实验性日本血吸虫病肝纤维化小鼠模型,分别于感染后第6、8、12周取小鼠肝组织,用免疫组织化学法检测HSP47表达,采用实时荧光定量PCR及Western blot检测HSP47的mRNA和蛋白水平表达及I型胶原纤维增生情况.结果日本血吸虫病肝纤维化患者肝组织中的HSP47主要表达在肝脏间质细胞及虫卵结节周围,并随纤维化程度进展显著增多(P 均<0.01),与I型胶原增生趋势平行.各纤维化分期患者肝组织胶原及纤维化相关因子CTGF及TGF-β1 mRNA表达均明显高于S0期无纤维化患者(P均<0.01).在肝纤维化模型小鼠中HSP47随纤维化进展其表达亦显著升高,感染后第6、8、12周,HSP47及I型胶原的表达量均显著高于正常对照小鼠(P均<0.01),同血吸虫病肝纤维化患者的表达趋势一致.结论 HSP47在日本血吸虫病肝纤维化患者和日本血吸虫病动物模型肝组织中表达均上调,且随I型胶原、CTGF、TGF-β1增多呈相同趋势,其有望成为肝纤维化新的诊断标志和治疗靶点.%Objective To assess the expression of heat shock protein 47 (HSP47) from the liver tissues in patients with Schistosoma japonicum-induced liver fibrosis, and to observe the dynamic changes of HSP47 expression in a rodent model ofSchistosoma japonicum-induced liver fibrosis. Methods Liver biopsy specimens from 72 outpatients and inpatients with Schistosoma japonicum-induced liver fibrosis were collected from Tongji Hospital from 2008 to 2012. Immunohistochemical and Masson staining were performed to assess the expression of HSP47 and collagen proliferation, respectively. The mRNA expression levels of HSP47, collagen type I, connective tissue growth factor (CTGF) and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) were measured by real-time PCR. Experimental mouse model of schistosomiasis liver fibrosis was established, liver tissue was harvested at the 6th, 8th, 12th week after infected. Immunohistochemistry was used to detect HSP47 expression. Real-time PCR and western blot analysis were performed to detect the expression of HSP47 and collagen type Ⅰ at transcriptional and protein level. Results HSP47-positive cells of liver biopsy samples were mainly localized in interstitial areas and the periphery of egg granulomas. The number of HSP47-positive cells was significantly increased with the aggravation of liver fibrosis (P < 0.01), in parallel with collagentypeⅠdeposition. The relative expression levels of HSP47, collagen type I, CTGF and TGF-β1 mRNA were significantly increased from fibrosis stage 1 to stage 4, as compared to stage 0 (P < 0.01). In rodent model of Schistosoma japonicum-induced hepatic fibrosis, the expression of HSP47 a nd collagen type Ⅰ was significantly higher than that in normal control mice at the 6th week, the 8th week and the 12th week after they were infected (P < 0.01), which was consistent with the expression change in patients with Schistosoma japonicum-induced liver fibrosis. ConclusionsThe expression of HSP47 is increased in patients with Schistosoma-induced fibrosis, as well as in animal models, and is raised with the expression increased of CTGF, TGF-β1 and collagen typeⅠ. HSP47 may be a new diagnostic marker and a potential therapeutic target for liver fibrosis.【期刊名称】《传染病信息》【年(卷),期】2017(030)003【总页数】6页(P156-160,167)【关键词】HSP47;肝纤维化;日本血吸虫病;Ⅰ型胶原;CTGF;TGF-β1【作者】邓菊红;陶然;焦云桃;李兰;范翔雪;黄加权【作者单位】430077 武汉,华中科技大学同济医学院附属梨园医院内科;430030 武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科;430030 武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科;430030 武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科;430030 武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科;430030 武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科【正文语种】中文【中图分类】R512.91日本血吸虫病是一种严重威胁人类生命健康的寄生虫病，该病广泛流行于亚洲、非洲和拉丁美洲，中国共有日本血吸虫病患者约36万人[1]。
ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后HSCs活化效应及对肝纤维化的影响
ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后HSCs活化效应及对肝纤维化的影响梁松;王波;许静;董兰兰;王言言;赵波;夏超明【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2014(30)11【摘要】目的观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后原代肝星状细胞(HSCs)的活化效应,探讨ICOSL/ICOS信号介导HSCs活化在血吸虫病肝纤维化形成中的作用.方法建立ICOS-Tg小鼠及野生型小鼠日本血吸虫模型,通过肝脏酶灌注法和密度梯度离心法分离感染前(0周)和感染后(4～9周)的小鼠原代HSCs,运用台盼蓝拒染法鉴定分离的原代HSCs成活率;应用其在328 nm波长紫外激发光下自发荧光特性以及在肝细胞中其特异性表达神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定分离的原代HSCs纯度;培养7d后,采用SYBR染料法实时荧光定量PCR检测原代HSCs中TGF-β1,Ⅰ、Ⅲ型胶原及α-SMA mRNA的表达变化.结果分离的原代HSCs纯度达到90％,其成活率为95％.ICOS-Tg小鼠肝HSCs中α-SMAmRNA表达水平即HSCs的活化程度在感染后6、9周显著高于同时期野生型小鼠(P＜0.01).ICOS-Tg 小鼠肝HSCs中TGF-β1,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平亦高于同时期野生型小鼠的水平,特别是在感染后6、9周呈显差异有统计学意义(P＜0.01～0.05).结论与野生型小鼠相比,感染日本血吸虫的ICOS-Tg小鼠肝HSCs活化增强,显著上调TGF-β1 mRNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及α-SMA mRNA的表达,提示在ICOS-Tg小鼠,ICOSL/ICOS信号的增强可明显上调HSCs活化促进肝纤维化的形成.【总页数】7页(P1103-1109)【作者】梁松;王波;许静;董兰兰;王言言;赵波;夏超明【作者单位】苏州大学医学部病原生物学系,苏州 215123;苏州大学医学部病原生物学系,苏州 215123;苏州大学医学部病原生物学系,苏州 215123;苏州大学医学部病原生物学系,苏州 215123;苏州大学医学部病原生物学系,苏州 215123;苏州大学医学部病原生物学系,苏州 215123;苏州大学医学部病原生物学系,苏州 215123【正文语种】中文【中图分类】R383【相关文献】1.水蛭桃仁煎剂对血吸虫性肝纤维化模型小鼠HSC活化及肝细胞凋亡的影响 [J], 晏丹;舒赛男2.ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫对CD28/CD86表达及Th1/Th2极化的影响[J], 王瑜;蔡茹;王波;夏超明3.日本血吸虫感染可诱导共刺激分子(ICOS)转基因小鼠的免疫应答及其病理反应[J], 夏超明;濮翔科;龚唯;骆伟;张惠琴;邓忠彬;薛智谋4.丹芍化纤胶囊对大鼠肝纤维化的预防作用及对HSCs增殖和活化的影响 [J], 胡爱荣;丁一生;程明亮5.uPA基因转染骨髓源性肝干细胞移植对肝纤维化大鼠HSC活化的影响 [J], 孙超;汪保灿;陈源文;陈颖伟;李定国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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Smads
蛋白在日本血吸虫性肝纤维化小鼠体内的表达
发表时间：
2009-08-17T10:27:11.107Z 来源：《中外健康文摘》2009年第21期供稿 作者： 王淑云
[导读] Smad蛋白作为转化生长因子β（TGF-β）受体下游迄今发现的惟一底物，对TGF-β信号传导具有重要作用，而Smad蛋白在日本血吸
虫肝纤维化形成过程中的作用机理尚不清楚。
Smads
蛋白在日本血吸虫性肝纤维化小鼠体内的表达
王淑云
(哈尔滨市香坊区哈纺社区卫生服务站 黑龙江哈尔滨 150039)
【中图分类号】
R541.7+1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2009)21-0165-02
【关键词】
日本血吸虫病; 肝纤维化; 转化生长因子β1; Smad;
Smad
蛋白作为转化生长因子β（TGF-β）受体下游迄今发现的惟一底物，对TGF-β信号传导具有重要作用，而Smad蛋白在日本血吸虫肝纤
维化形成过程中的作用机理尚不清楚。为此，本研究动态观察
Smads蛋白在日本血吸虫感染小鼠形成肝纤维化过程中的表达，以期揭示其
在日本血吸虫病性肝纤维化发病过程中的作用。
材料与方法
1
动物模型构建
通过腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴（
20±1）条[1]。于感染后8、12、16、24周分别处死小鼠8只、8只、8只 和10只。所取肝组织置入常规
10
％福尔马林固定液中，用于苏木素-伊红 (HE) 染色和天狼猩红染色，测定血吸虫虫卵肉芽肿大小，判断肝纤维化程度；免疫组织化学染
色观察
Smads蛋白的表达部位，并利用图像分析系统对所表达蛋白进行半定量分析。
2
病理学检查
2.1
染色方法 HE染色：用于判断小鼠感染日本血吸虫尾蚴后，形成虫卵肉芽肿的面积，用测微量器在低倍镜下（×100）测定单个血吸虫虫
卵肉芽肿的面积（最大横径
×最大纵径，单位mm2），每份标本随机测量5个虫卵肉芽肿，求平均值。天狼猩红染色：用于判断小鼠感染日
本血吸虫尾蚴后，形成肝纤维化程度。肝纤维化程度判断标准
[2]：
2.2
免疫组织化学检测（EnVision法）
3.
统计分析
实验数据以均数
±标准差（x±SD）表示，利用SPSS11.0统计软件，进行单因素方差分析（One-Way ANOVA），独立样本t检验，并利用
Graphpadprism3.0
作图。
结
果
1.
日本血吸虫尾蚴感染小鼠形成肝纤维化过程中，肝纤维化程度变化正常BALB/c小鼠汇管区及中央静脉管壁可见少许胶原纤维。感染8周
后，虫卵肉芽肿周围出现胶原纤维沉积，随感染时间延长，胶原沉积量增加，并向肝小叶内延伸，在感染
24周后，胶原沉积量达到高峰。
2.
日本血吸虫尾蚴感染小鼠形成肝纤维化过程中Smad2/3、Smad4 和 Smad7在小鼠肝组织中的表达正常小鼠肝组织的肝窦区可见呈低水平
表达的
Smad2/3蛋白，感染8周后，虫卵肉芽肿形成，虫卵肉芽肿周围的细胞的胞浆和胞核内呈棕色表达，肝窦有一定程度的扩张，感染12
周时，虫卵肉芽肿周围和肝窦处
Smad2/3表达增强，而在感染16周时，表达较12周有所减弱，但在感染24周时，表达再次增强。
Smad7
在正常小鼠肝组织的肝窦区呈低水平表达。感染8周时，在虫卵肉芽肿周围可见散在的胞浆内呈现阳性表达细胞，肝窦区表达不明
显，感染
12周时，Smad7的表达弱，在虫卵肉芽肿周围阳性表达面积明显减少，肝窦区表达与感染8周组比较无明显差异，随着感染继续
发展，
Smad7的表达无明显变化，表达水平持续在感染12周时的水平。
讨
论
日本血吸虫感染模型与人类日本血吸虫病患者具有相似性
[3]，因而，建立此模型有利于研究人类日本血吸虫病的发病机制，同时亦为肝纤
维化的研究提供了较好的模型，迄今人们已经利用此模型进行了各种相应研究
[4-6]。
感染日本血吸虫的小鼠对虫卵肉芽肿形成应答是随着感染过程的延长而减弱的，其体积和所含细胞总数也是随着时间的推移而逐渐缩小和
减少。可能机制是早期
Th细胞反应活跃而后期炎症反应受到抑制性T细胞作用而导致炎症反应减弱。
小鼠感染日本血吸虫尾蚴
8周时，虫卵肉芽肿面积达到高峰因而属于急性期，此时虫卵肉芽肿周围所产生的胶原是由于机体对炎症反应的一
种反馈修复过程，其来源可能是肉芽肿周围受到炎症刺激活化的肝星状细胞（
HSC）。我们曾利用透射电镜观察了小鼠肝组织中HSC的演
变过程，发现感染
8周时肌成纤维细胞数量增多，脂滴进一步减少。随着虫卵肉芽肿周围细胞成分的改变，成纤维细胞增加，HSC通过旁分
泌效应不断活化增殖，使得肉芽肿周围胶原含量不断增加，其中以
HSC的旁分泌效应更为重要，因为通过检测α-SMA在小鼠肝组织中的表
达，发现随疾病进展，
HSC活化数量逐渐增加，因此，感染24周后，小鼠肝纤维化程度达到峰值。
在
BALB/c小鼠感染日本血吸虫尾蚴形成肝纤维化的过程中，TGF-β1的作用在我们以往的研究中已经得到认可。Smads蛋白家族是将TGF-
β
与其受体结合后产生的信号从胞质传导到细胞核内的中介分子，是一个在脊椎动物、昆虫和线虫内发现的转录因子家族，它是迄今为止惟
一已被证明的
TGF-β受体作用的底物。为此，我们动态观察了参与介导的TGF-β的信号传导中三类Smad蛋白：受体调节型Smads（Smad2
和
Smad3）、通用调节型Smad(Smad4)和抑制型或拮抗型Smads(Smad7)的表达部位和表达量的动态变化。
多项研究表明，受体调节型
Smad2和Smad3在肝纤维化中均具有重要作用，因而本文将Smad2和Smad3作为整体进行研究。在感染8周
时，小鼠肝脏处于急性感染期，
TGF-β信号活化以诱导炎症反应。有研究发现TGF-β信号活化后，通过泛素化蛋白酶系统快速降解癌蛋白
SnoN,
而SnoN主要降解R-Smad的酶，因而，R-Smad表达增强，至感染12周时，炎症反应减弱，肝脏修复过程增强，HSC活化，在TGF-
β
自分泌和旁分泌共同作用下，使R-Smad表达持续增强，但在感染16周时，R-Smad表达下降至感染8周时的水平，至感染24周时，R-
Smad
表达水平恢复至感染12周时水平，R-Smad的这种表达变化可能与纤维化形成即是组织病理学的一种修复，同时又是疾病进一步向硬
化发展的必经之路有关，也就是说，如果在感染
16周时，给与祛除病因的治疗，肝纤维化极有可能逆转。
研究显示
Smad4在正常肝组织中无明显表达，感染8周~感染24周的过程中，虽然均高于正常组织，但呈低水平表达，并且表达程度持续在
感染
8周水平，并未随感染时间的延长而变化。结合Smad4的生物学效应，提示Smad4可能对肝纤维化形成无明显作用。
Smad7
的转录过程是由Smad3和Smad4复合物直接结合到Smad7启动子而启动的，而合成的Smad7通过负反馈机制抑制上述信号传导，
从而减少
Smad7的生成以及TGF-β1介导的生物学效应。本研究发现，在感染8周时，Smad7表达水平升高，但随着感染时间的延长，其表
达水平未有明显变化，维持在感染
8周时的水平，提示Smad7的低水平表达，降低了对TGF-β1生物学效应的拮抗性，从而促进了小鼠肝纤
维化的进展。
上述研究提示，在小鼠形成肝纤维化过程中，
Smad2/3具有促进作用，而Smad4和Smad7不具有促进作用。
参
考 文 献
[1]
樊中丽, 杜幼芹, 望西玉. 日本血吸虫尾蚴不同途径感染小鼠的比较，热带医学杂志，2001，1（2），151.
[2]
陈峰, 蔡卫民, 陈智, 等.日本血吸虫病兔肝纤维化胶原合成与降解转录水平的研究. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2001, 19(2):76-79.
[3]Kresina TF, He Q, Degliesposti ES, et al. Hepatic fibrosis and gene expression changes induced by praziquantel treatment during
immune modulation of Schistosoma japonicum infection. Parasitology, 1993, 107:397-404.
[4]
季曼珺，蔡晓萍, 苏川, 等. 干扰素对感染日本血吸虫小鼠GTP 表达的影响. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2004, 2(1): 29-32.
[5]
姚万红, 陈静卿, 杨孟祥, 等. 日本血吸虫感染小鼠肝脏成纤维细胞的培养观察. 湖北医科大学学报,1999, 20(1): 21-23
[6]
夏超明, 龚唯, 骆伟, 等. 日本血吸虫感染小鼠肝肉芽肿与Thl／Th2 细胞因子水平的动态变化. 复旦学报(医学科学版), 2001, 28(1): 39-42