绿色荧光蛋白转基因小鼠的生理生化常数
荧光蛋白参数绿色荧光蛋白计算公式

荧光蛋白参数绿色荧光蛋白计算公式荧光蛋白(GFP)是一种广泛应用于生物领域的重要工具。
其中,绿色荧光蛋白(EGFP)是最常用的一种变异型。
EGFP的计算公式如下:EGFP = (0.299 * R) + (0.587 * G) + (0.114 * B)其中,R、G、B分别代表红、绿、蓝三个通道的亮度值。
这个公式的作用是根据RGB值计算出EGFP的亮度值,从而确定样品中EGFP的强度。
EGFP作为一种荧光探针,广泛应用于细胞和分子生物学研究中。
它拥有许多优点,如亮度高、稳定性好、光谱特性窄、抗褪色性强等。
通过对EGFP的表达和检测,可以实现对细胞和分子过程的实时观察和定量分析。
EGFP的计算公式中,红、绿、蓝三个通道的权重分别为0.299、0.587和0.114。
这是由于人眼对不同颜色的敏感度不同,绿色的敏感度最高,红色次之,蓝色最低。
因此,在计算EGFP亮度值时,对于红、绿、蓝三个通道的亮度值进行加权处理,以更准确地反映EGFP的亮度。
EGFP的计算公式不包含任何网络地址,是基于对颜色通道的数学处理得出的。
这个公式在生物学研究中广泛应用,但在具体实验中,可能会根据实际情况进行微调。
例如,通过改变权重值,可以调整EGFP的亮度范围,以适应不同实验需求。
除了EGFP,还存在许多其他荧光蛋白变异型,如黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(RFP)等。
它们的计算公式和EGFP类似,只是权重值不同,以适应不同荧光蛋白的光谱特性。
荧光蛋白作为一种重要的生物标记物,已经被广泛应用于生物学研究中。
通过对荧光蛋白的表达和检测,可以实现对细胞和分子过程的实时观察和定量分析。
荧光蛋白的计算公式是对荧光强度的定量化处理,可以帮助研究人员更准确地获得实验数据,推动科学研究的发展。
总结起来,荧光蛋白参数EGFP的计算公式是根据红、绿、蓝三个通道的亮度值来确定EGFP的亮度。
这个公式在生物学研究中被广泛应用,通过对荧光蛋白的表达和检测,可以实现对细胞和分子过程的实时观察和定量分析。
绿色荧光蛋白的结构与应用

GFP荧光持续时间较长,在450-490nm蓝光激发下,能保持 10min以上荧光。
03 GPF的应用
显像与示踪技术
绿色荧光蛋白(GFP)的结构与应用
由于GFP稳定无毒,所以可 使动物体内复杂结构可视化,使 得实验研究更加直观清晰。You 等通过GFP标记的裸小鼠,检测 GFP基因在小鼠各器官中的表达 状况,为选择疾病模型和移植供 体提供了依据。
报告基因
绿色荧光蛋白(GFP)的结构与应用
GFP由于具有光信号传导机制,可用 作活细胞内的荧光感受器。荧光感受器常 用于检测各种分子对生物的有效性,甚至 可以用于研究活细胞中蛋白质的构象变化。 在检测某物质对于某种生物是否有毒性方 面,GFP荧光感受器也有较大的利用价值。
荧光感C 受器
绿色荧光蛋白(GFP)的结构与应用
GFP
GFP的发光现象由其生色团决定,GFP表达后折叠,在有氧条件下 第66位氨基酸残基脱氢,使Ser65-Tyr66-Gly67环化形成对羟基苯咪唑啉 酮,即生色团。
02 GPF的优点
GPF的优点
绿色荧光蛋白(GFP)的结构与应用
性质极其稳定,高温、甲醛固定和石蜡包埋不影响其发光性 能,对强光或长时间光照都有较强的耐受能力,对大多数普 通酶有较强抗性。
GFP
Байду номын сангаас
目录
CONTENTS
01 GFP的结构
03 GFP的应用
02 GFP的优点
04 +
参考文献
01 GPF的结构
绿色荧光蛋白(GFP)的结构与应用
GFP
绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一类能被蓝紫光激 发而发出绿色荧光的蛋白。
绿色荧光蛋白——结构及应用

绿色荧光蛋白——结构及应用孙艺佩【摘要】绿色荧光蛋白(GFP)有稳定、灵敏度高、无毒害、载体便于构建等优点,因此在各个领域已经有了广泛的应用,在细胞生物学与分子生物学领域中,基因常被用作一个报导基因作为生物探针,拿来映证某些假设的实验方法;在医学领域,常用利用绿色荧光蛋白观测肿瘤发生、生长和转移等过程.本文就绿色荧光蛋白的发现与应用背景、结构、生色机理、相对于其他荧光分子的优点和在各领域的应用进行了综述.【期刊名称】《化工中间体》【年(卷),期】2017(000)008【总页数】2页(P124-125)【关键词】绿色荧光蛋白(GFP);荧光生色机理;生色团;技术应用【作者】孙艺佩【作者单位】山东省实验中学山东 250000【正文语种】中文【中图分类】Q绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一类能被蓝紫光激发而发出绿色荧光的蛋白,1962年,下村修等人于维多利亚管状水母中第一次发现并提取出了绿色荧光蛋白。
1994年,马丁·查尔菲首次在实验中成功表达GFP基因,向人们展示了绿色荧光蛋白作为遗传标签的价值。
同年,钱永健与其同事提出GFP生色团发光机理并改造GFP,使其更易作为标记物应用于各类试验。
2008年,诺贝尔化学奖授予钱永健、马丁·查尔菲和下修村,以表彰他们发现和发展了绿色荧光蛋白。
这一发现成果为生命科学的进步提供了更便捷的渠道。
从维多利亚多管水母中分离出来的野生型GFP由238个氨基酸残基组成,分子量约27kDa。
它具有β-桶的结构,几乎是个直径2.4nm,长4.2nm的完美圆柱。
11个β-折叠链形成β-筒的外周,筒两端分别被一些分子量较小的短α-螺旋覆盖,组成生色团的三个残基(Ser65-Tyr66-Gly67)与α-螺旋共价相连,位于圆筒中央螺旋中部。
β-圆筒与短α-螺旋形成致密的结构域,使配体不能扩散进入,生色团被严格保护在筒内,因此其性质稳定,不易被淬灭。
绿色荧光蛋白(GFP) 的特性及其在分子生物学研究中 的应用课件

3 GFP的稳定性
❖ GFP荧光极其稳定,在荧光显微镜强光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素 (fluorescein)强[19]。特别在450~490 nm蓝光波长下更稳定,但在340~390 nm或395~440 nm范围内,仍会发生光漂白现象。GFP在不同物种中稳定性不同,在果蝇和斑纹鱼(Zebra fish)中极稳定;在大肠杆菌中会有光漂白;在线虫中10 mM的NaN3将加速光漂白。GFP需要 在氧化状态下产生荧光,强还原剂如5 mM Na2S2O4或2 mM FeSO4能使GFP转变为非荧 光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复。而一些弱还原剂,如2% 巯基乙醇、10 mM DDT、10 mM还原谷胱甘肽、10 mM半胱氨酸等并不影响GFP荧光。 中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等,但GFP对 某些封片指甲油特别敏感,苯氧丙烷对GFP荧光也有影响。强氧化剂如1% H2O2,或硫氢基 试剂如1 mM DTNB会造成GFP不可逆性破坏[20]。大多数中等浓度的有机试剂不减弱GFP 荧光,但其最大吸收峰值会改变[21]。在高蛋白、高盐条件下,GFP通过疏水反应形成二聚体, 使470 nm吸收峰值下降近4倍。GFP很容易从细胞中分离并结晶[22]。在离体状态下,GFP 蛋白对热(70℃)、碱性、除垢剂、盐、有机溶剂和大多数普通蛋白酶(链霉蛋白酶Pronase 除外)有较强抗性[23]。GFP荧光在pH值为7~12时稳定,在pH值为5.5~7.0时开始受影响[24]。 在纳克级水平,SDS-聚丙烯酰胺电泳凝胶中仍能观察到GFP荧光。在高温、极端pH、或胍 基氯化物条件下,GFP会变性,荧光消失。一旦复性,荧光会部分恢复[25],但可能需要某些硫 醇类化合物的作用[26]。GFP在各种生物活体条件下表现稳定。例如氯霉素乙酰转移酶 (CAT)在生物体内很稳定,用35S-甲硫氨酸分别标记CAT和GFP,并转染玉米叶肉原生质体,用 放线菌酮处理原生质体,通过CAT检测,发现5~10μg/ml放线菌酮可完全抑制CAT在玉米原生 质体中的蛋白合成,但通过GFP观察,转染24小时后,仍未发现GFP荧光有明显减弱,仅有部分 GFP被放线菌酮降解。说明GFP在植物活体细胞中比CAT还要稳定[27]。此外,尽管GFP的 消光系数较低,但和荧光素一样,额定含量可高达80%。在荧光显微镜下,GFP融合蛋白的荧 光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。 但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋 白。由于GFP荧光是生物细胞的自主功能,荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP 是迄今为止唯一一种活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。
小鼠肌肉内绿色荧光蛋白基因电转染

1.1 质 粒 pEGFP—C1绿色荧光蛋白质粒,由吉林大学前
列腺疾病防治研究中心惠赠(以下称为EGFP质 粒)。EGFP质粒置于大肠E.c以菌JMl09内扩增, 碱裂解法提取、纯化。琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒,其 中超螺旋结构占70%~80%,无RNA残留。质粒 溶解于K—PBS溶液(NaCl 30.8 mm01.I。~、KCl 20.7 mmol·I。~、Na2HP0‘8.1 mmol·L~、 KH2PO‘1.46 mmol·L~、MgCl2 10 mmol·I。1溶 解于双蒸水)[103中,定量,调节质粒浓度为
2.3 注入质粒DNA后不同时间间隔对转染率的 影响
质粒DNA 15 pg,电脉冲转染参数为 200 V·cm_1、20 ms、8次及1 Hz。DNA注射后分 别在30 s和1 h后给予电脉冲,两组转染率比较差 异无显著性(P>o.05)。 2.4 电转染后不同天数转染率的变化
1 g·L~。 1.2 动 物
昆明系小白鼠购于吉林大学实验动物中心,共 160只,4~6周龄,体重18~20 g,雌雄各半,随 机分组,每组8只。 1.3电通透仪
电通透仪是由方波电脉冲发生器和针式电极组 成(自行研制)。方波电脉冲发生器输出电脉冲主要 指标:电场强度o~2 500 V·cm~,脉冲时值 o~100 ms,脉冲次数0~15次,脉冲频率o~10 Hz。针式电极为双针电极,正负极间距o~1 cm,为 银制电极。 1.4肌肉基因电转染参数的确定
在电脉冲转染参数相同的条件下,质粒DNA 注入量为7.5弘g时基因转染率与15和30 pg组相 比,明显降低(P<O.05);而15和30弘g两者比较
孙辉,等. 小鼠肌肉内绿色荧光蛋白基因电转染
差异无显著性(P>o.05),见图5。
绿色荧光蛋白转基因小鼠乳腺的移植

绿色荧光蛋白转基因小鼠乳腺的移植张彦龙;华育平;谭婷婷;马建章【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2009(038)003【摘要】目的研究乳腺的发育和乳腺癌的发生机制,探讨乳腺移植技术和新的乳腺移植动物模型.方法应用绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠的乳腺组织,移植到去除乳腺上皮的野生型小鼠的乳腺脂肪垫中,经10至12周后,摘取受体小鼠的乳腺脂肪垫,制备乳腺的组织样本,进行荧光显微镜和组织学检查.结果发现GFP小鼠的乳腺在受体小鼠的乳腺脂肪垫中生长,并分化成管、泡状的乳腺结构.结论 GFP小鼠的乳腺能长期生长在野生小鼠的脂肪垫中并产生乳腺组织,为今后研究乳腺的分化、乳腺干细胞的培养及乳腺癌的发生机制提供了新的动物模型.【总页数】3页(P217-219)【作者】张彦龙;华育平;谭婷婷;马建章【作者单位】东北林业大学,野生动物资源学院,哈尔滨150040;东北林业大学,野生动物资源学院,哈尔滨150040;东北林业大学,野生动物资源学院,哈尔滨150040;东北林业大学,野生动物资源学院,哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R322.8【相关文献】1.绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较 [J], 辛毅;李娜;张颖;黄益民;刘飒;许秀芳;张兆光2.绿色荧光蛋白转基因小鼠神经干细胞移植对海仁藻酸致SD大鼠小脑变性损害的实验研究 [J], 刘诗翔;王琳;胡静;李强;汪洪3.绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞脑内移植后的成活及迁移 [J], 毕涌;林晓滨;李晓莉;魏鹏;王廷华;张旭;洪娟4.bcr启动子驱动增强绿色荧光蛋白表达转基因小鼠的制备和初步鉴定 [J], 刘雷;王宝珠;劳荃蘅;刘民;薛整风;季明春5.绿色荧光蛋白转基因小鼠神经干细胞在脑出血大鼠脑内移植后迁移和神经功能改变 [J], 王华;陆芩;诸葛启钏因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
绿色萤光蛋白

绿色萤光蛋白(green fluorescent protein),简称GFP,这种蛋白质最早在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。
其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。
这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助,且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca+2)可产生交互作用。
由水母Aequorea victoria中发现的野生型绿色萤光蛋白,395nm和475nm分别是最大和次大的激发波长,它的发射波长的峰点是在509nm,在可见光绿光的范围下是较弱的位置。
由海肾(sea pansy)所得的绿色萤光蛋白,仅有在498nm有一个较高的激发峰点。
在细胞生物学与分子生物学领域中,绿色萤光蛋白基因常被用作为一个报导基因(reporter gene)。
一些经修饰过的型式可作为生物探针,绿色萤光蛋白基因也可以克隆到脊椎动物(例如:兔子上进行表现,并拿来映证某种假设的实验方法。
我们这边细胞组的基本上都在用这个东东。
标记细胞GFP的分子结构和发光机制绿色荧光蛋白为一个由238个氨基酸残基组成的单链,GFP有两个吸收峰,主峰在395nm,次峰在470nm,其荧光发射峰在509nm。
GFP 的化学性质相当稳定,其变性需要在90℃或pH<4或pH>12的条件下用6mollL盐酸胍处理,这一性质与GFP的结构特性相关。
Yang等的研究表明,GFP是由两个相当规则的内含一个α-螺旋和外面包围l1个β-折叠的β-桶状结构组成的二聚体,β-桶状结构直径约3nm,高约4nm。
β折叠彼此紧密结合,象桶板一样形成桶状结构的外围,并且形成了一个规则的氢键带。
桶状结构和位于其末端的短α螺旋以及环状结构一起组成一个单独的致密结构域,没有可供扩散的配体进入缝隙。
这种坚实的结构保证了其稳定和抗热、抗变性的特点。
GFP的生色基团附着于α-螺旋上,几乎完美的包被于桶状结构中心。
位于圆桶中央的α-螺旋含有一个由六肽组成的发光中心,而发光团是由其中的三肽Ser65-Tyr66-Gly67经过环化形成了对羟基苯咪唑啉酮。
绿色荧光蛋白

GFP作为标记蛋白的优点
①荧光稳定 ②检测方便 ③无种属特异性,也无有细胞种类和位置的限制 ④GFP对受体细胞基本无毒害 ⑤易于构建载体,不受假阳性干扰 ⑥不需任何反应底物和辅助因子 ⑦可制成永久标本
绿色荧光蛋白
绿色荧光蛋白的分子生物学 及其应用
绿色荧光蛋白的研究史
1962年Shimomure等首先从维多利亚水母(Aequorea Victoria) 中分离出了GFP (Green-Fluorescent Protein) 。
维多利亚水母 (Aequorea Victoria)
A test tube containing a sample of a cyan (greenish-blue) fluorescent protein from a sea anemone illuminated by ultra-violet light from below.
பைடு நூலகம்
GFP发色团的骨架在左边。蛋白质链形成一个圆柱形罐头(蓝色),子链的一部分 直接从中间穿过(绿色),发色团刚好在罐头盒的中间,它被保护起来以免受周围环境 的影响。这种保护对于发射荧光是必需的。一但发色团吸收一个光子,激活的水分子通 常就会夺取它的能量。但是在蛋白质内部改为发射能量稍低的光子来释放能量,使它得 到了保护。发色团(右图)由蛋白质链上的三个氨基酸:甘氨酸,酪氨酸和苏氨酸(或 丝氨酸)自发形成。
绿色荧光蛋白的研究史
1994年Chalfie等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了 GFP,开创了GFP应用研究的先河。
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0O ) . 1 。④ 脏 器 系数 : 8周 龄 , 2周 龄 的 G P小 鼠 , 胸 腺 的 脏 器 系 数 明 显 低 于 对 照 组 , 异 具 有 显 著 性 ( 6— 9—1 F 其 差 P
< .1 ; 0 0 )9—1 龄 ,3~1 2周 1 4周 龄 的 G P小 鼠 , 肝 脏 的脏 器 系 数 明显 高 于 对 照 组 , 异 具 有 显 著 性 ( 0 O ) F 其 差 P< . 1 。 ⑤ 病 理 检 测 : 8周 龄 有 部 分 G P小 鼠胸 腺 发 育不 良 , 他 受 检 脏 器 和其 他 年 龄 段 动 物 未 见 明显 病 理 改 变 。 结 论 6— F 其
异 具 有 显 著 性 ( < . 1 ; 5周 龄 的 G P小 鼠 , 摄 食 量 明显 高 于对 照 组 , 异 具 有 显 著 性 ( < . 1 。 ② 血 常 P 00 ) 4~ F 其 差 P 0O ) 规 测 定 : 8周 龄 , 2周 龄 的 G P小 鼠 , 红 细胞 计 数 ( B ) 6— 9—1 F 其 R C 明显 低 于 对 照 组 , 异 具 有 显 著 性 ( < . 1 ; 差 P 00 )9
H ioy ,H u , U Y nfn ,Q N- h o A — o g E X a —u E J n X a — g I C a ,G O H n e
( nt ueo a oaoyAnma ce c ,C iee A a e fMe ia ce c I si t fL b rtr i lS in e hn s c d myபைடு நூலகம் dc l in e,Ke a oao t S yL b rtr y
2 1 年 4月 01
中 国 实 验 动 物 学 报
ACT LAB0RAT RI A O UM ANI AL S S I M I C ENT A S NI A I I C
Ap i , 01 rl2 1 V0 . 9 No 2 11 .
第1 9卷
第 2期
绿 色荧 光 蛋 白转 基 因小 鼠的生 理生 化 常数
两 种 动 物 定 期 取 血 , 定 血 生 化 及 血 液 学 指 标 , 动 物 进 行 大 体 解 剖 , 算 主 要脏 器 ( 、 、 、 、 、 、 腺 , 测 对 计 心 肝 脾 肺 肾 脑 胸 性
腺) 的脏 器 系数 并 进 行组 织病 理 学 检 测 。结 果 ①体重和 摄食量 : 4周 龄 的 G P小 鼠 , 体 重 明 显 低 于 对 照 组 , F 其 差
测定绿色荧光 蛋白转基 因小 鼠不 同年龄段 的生理 生化 、 织病理学 等方面 的指 标 , 组 为该 品种
定 期 测 定 不 同周 龄 段 ( 6周 龄 , 8周 龄 , 4— 6~ 9—1 2周
转 基 因小 鼠应 用 于毒 理 学 等 领域 研 究 提 供 理 论 依 据 。 方 法
龄 ,3~1 龄 ) 4 只 绿 色 荧 光 蛋 白转 基 因 ( F ) 鼠 和 10只 对 照 组 C 7 L 6 1 4周 11 GP小 0 5 B / J小 鼠 的体 重 和 摄 食 量 , 上 述 对
① 绿 色 荧 光 蛋 白转 基 因小 鼠 与 对 照 组 C 7 L 6 小 鼠相 比 , 体 重 ( 5B /J 在 4周 龄 ) 摄 食 量 ( 、 4~5周 龄 ) 血 常 规 ( 细 、 红
胞 计 数 R C 白细 胞 计 数 WB 、 红 蛋 白 H B 、 生 化 ( 酸 u 总 蛋 白 T 、 B 、 C血 G )血 尿 A、 P 白蛋 白 A B 、 器 系 数 ( 腺 , 脏 ) L )脏 胸 肝 等 指 标 上 存 在 明显 差 异 , 是 其 值 均 在 正 常 范 围 内 。② 绿 色 荧 光 蛋 白转 基 因小 鼠在 6— 但 8周 龄 有 部 分 小 鼠胸 腺 发 育不 良。
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1 龄 ,3~1 龄 的 G P小 鼠 , 白细 胞 计 数 ( C 明 显 高 于 对 照 组 , 异 具 有 显 著 性 ( 2周 1 4周 F 其 WB ) 差 P<0O ) . 1 。③ 血 生
化 测 定 : 8周 龄 , 1 6~ 9~ 2周 龄 ,3~1 1 4周 龄 的 G P小 鼠 , 尿 酸 ( A) 明 显 高 于 对 照 组 , 异 具 有 显 著 性 ( F 其 u 值 差 P< 0 O )6— . 1 ; 8周 龄 , 9~1 2周 龄 的 G P小 鼠 , 总 蛋 白 ( P ,白蛋 白 ( L 明 显 低 于 对 照 组 , 异 具 有 显 著 性 ( F 其 T) A B) 差 P<
Phy i l g c la i c m i a n x s o h r e so o i a nd b o he c li de e ft e g e n
l o e c n r ti ta s e cm c fu r s e t p o e n-r n g ni i e
【 关键词】 绿色荧光蛋 白转基 因小 鼠; 血液常规 ; 血液生物化学 ; 病理学 【 中图分 类号】Q 5— 3 R 4 .3 9 3 ,3 9 8 【 文献标识码 】A 【 文章编号 】10 48 7 2 1 )20 4 —5 05 4 (0 1 0 .150
Do :0 3 6 / .sn 1 0 48 7 2 1 . 2. 1 i1 . 9 9 j is . 0 5 4 . 0 1 0 0 3
贺 晓 玉 , 君 , 艳 峰 , 超 , 虹 何 徐 秦 高
( 国 医学 科 学 院 医学 实 验 动 物 研 究 所 北 京 协 和 医 学 院 比较 医 学 中 心 中
卫 生 部 人 类 疾 病 比较 医 学 重 点 实 验 室 , 京 10 2 ) 北 00 1
【 摘要 】 目的