遗传标记STR基因座分型
遗传标记STR基因座的高分辨电泳分型 摘要：STR（Short Tandem Repeat，短片段重复序列）广泛存在于人类及哺乳动物的基因组中，具有高度多态性，一般由2～6个碱基构成一个核心序列，核心序列串联重复排列，由核心序列重复数目的变化产生长度多态性。本实验用磁珠法提取人类基因组DNA后，用三对引物（D1S1677、D4S2364和D10S1248）分别对一号染色体、四号染色体和十号染色体的STR序列进行PCR扩增，通过聚丙烯酰氨凝胶电泳技术（PAGE）对PCR产物进行分离，最后用EB染色凝胶后在紫外灯下观察实验结果并进行分析。通过此次实验，我们了解了STR序列的特征和相关应用，掌握了磁珠法提取人类基因组DNA技术、PCR技术，以及聚丙烯酰氨凝胶电泳技术（PAGE）。 关键词：STR磁珠法PCR扩增聚丙烯酰氨凝胶电泳技术（PAGE）
1．引言 DNA指纹技术是一项具有广泛应用价值的技术。它在人类医学中被用于个体鉴别、确定亲缘关系、医学诊断及寻找与疾病连锁的遗传标记；在动物进化学中可用于探明动物种群的起源及进化过程；在物种分类中，可用于区分不同物种，也有区分同一物种不同品系的潜力。在作物的基因定位及育种上也有非常广泛的应用。 DNA指纹技术的发展经历了三代。第一代DNA指纹技术利用了DNA 指纹图谱。1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的人源小卫星DNA用作基因探针，同人体核DNA的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，这种图纹极少有两个人完全相同，故称为“DNA指纹”，意思是它同人的指纹一样是每个人所特有的。众多“DNA指纹”组成“DNA指纹图谱”。第二代DNA指纹技术用PCR的方法对STR位点进行PCR扩增可得到不同长度DNA片段，用银染或荧光的方法对扩增后的DNA片段检测得到DNA指纹。第三代DNA指纹技术是用PCR的方法对SNP位点进行PCR扩增。 STR（Short Tandem Repeat，短片段重复序列）广泛存在于人类及哺乳动物的基因组中，具有高度多态性。它们一般由2～6个碱基构成一个核心序列，核心序列串联重复排列，由核心序列重复数目的变化产生长度多态性。对于一个特定的个体，染色体上某个特定位置的重复序列的重复次数是固定的，而对于不同的个体在同一位置处的重复次数可能不同，这就构成了人群中这些重复序列的多态性。由于人类基因组中这种重复序列非常多，通过对这种多态性的检测，就可以明确区分个体与个体的不同，确定父母子的亲缘关系，这就是STR分型。联合应用16个STR位点的特异性，其个体识别率可达0.999999999998，其父权排除率可达0.99998。 本次实验中人类基因组DNA的提取使用的是磁珠法核酸纯化技术。它采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。该方法快速简捷，一般可在36分钟内完成。不用多次漂洗磁珠也可确保基因组DNA的高纯度，提取出的基因组DNA OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达20kb～50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外核酸扩增技术，由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。本实验以人类基因组DNA为模板，以dNTP为原料，以含有Mg2+的buffer为缓冲液，在Taq酶催化下，用特定引物（D1S1677、D4S2364和D10S1248）为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，获得不同基因座的STR扩增片段。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。总之，PCR是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。 聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语： polyacrylamide gelelectrophoresis，简称PAGE），可以用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（简称Acr）和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在加速剂N,N,N,N-四甲基乙二胺（简称TEMED）和催化剂过硫酸铵（简称AP）或核黄素（C17H20O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，具有分子筛效应，因此，可以分离大小不同的STR扩增片段。核酸经过染色才能显示带型，最常用的是溴化乙锭染色法。EB（溴化乙锭）是一种具扁平分子的核酸染料，可以插入到DNA或RNA分子的碱基之间，并在300 nm波长的紫外光照射下放射出荧光，所以可用来显现凝胶中的核酸分子。在适当的染色条件下，荧光的强度是同DNA片段的大小（或数量）成正比。溴化乙锭（EB）是一种荧光染料，这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间，与核酸形成络合物，在紫外线激发下，发出红色荧光。因此，可以在紫外灯下观察电泳结果。 本实验用磁珠法提取人类基因组DNA后，用三对引物（D1S1677、D4S2364和D10S1248）分别对一号染色体、四号染色体和十号染色体的STR序列进行PCR扩增，通过聚丙烯酰氨凝胶电泳技术（PAGE）对PCR产物进行分离，最后用EB染色凝胶后在紫外灯下观察实验结果并进行分析。 2．材料和方法 2.1 材料、试剂和器材 实验材料：人类口腔上皮细胞 实验试剂：饮用水、Buffer MACL、Buffer MCL、Proteinase K、Buffer MA、MagicMag Beads、70%乙醇、TE(pH8.0)、碎冰、ddH2O、10×buffer（含Mg2+）、2.5mmol/LdNTP、10 μmol/L引物（D1S1677-F、D1S1677-R、D4S2364-F、D4S2364-R、D10S1248-F、D10S1248-R）、1U/μlTaq酶溶液、琼脂糖、10×TBE、30%聚丙烯、APS、TEMED、电极缓冲液、6×loading buffer、20bp DNA Ladder、溴化乙锭（EB） 实验仪器：10 mL离心管、1.5 mL离心管、台式高速离心机、微量移液器、蓝枪头、黄枪头、白枪头、恒温水浴锅、磁力架、PCR管、PCR仪、marker笔、贮槽、螺丝销钉、长玻璃板、短玻璃板、“凵”形硅橡胶框、细长头的滴管、电泳仪、紫外灯凝胶成像仪 2.2 方法 2.2.1 磁珠法提取人类基因组DNA （1）漱口：用10mL饮用水或自来水持续用力漱口，之后将其收集于10mL离心管中，2000 rpm离心5 min，将上清液小心用微量移液器吸除，沉淀为收集得到的口腔脱落细胞。 （2）裂解：向细胞沉淀中加入400μL Buffer MACL，200μL Buffer MCL和20μL Proteinase K，用微量移液器反复吸打，均匀悬浮起细胞沉淀。然后将其转移至1.5 mL离心管中。65℃水浴20～30min。12000rpm离心5～10min，小心取出500μL上清至新的离心管中。 （3）结合：向样品中加入400μL Buffer MA和10μLMagicMag Beads。剧烈颠倒震荡混匀10s。在加入MagicMag Beads之前，要将MagicMag Beads充分颠倒混匀。务必将MagicMag Beads加至液面以下，并尽量将枪头上残留的MagicMag Beads吸打干净。震荡后如管口沾有少量beads，用微量移液器吸取上清液并将其冲洗至离心管内。 （4）磁吸附：将离心管至于磁力架上2 min，待MagicMag Beads全部吸至离心管壁上，用微量移液器吸弃上清，然后从磁力架上取出离心管。吸弃上清时尽量吸净，但要避免吸入Beads。 （5）洗涤：加入700μL70%乙醇，颠倒震荡混匀10 s。震荡后如管口沾有少量beads，用微量移液器吸取上清液并将其冲洗至离心管内。将离心管置于磁力架上1 min，待MagicMag Beads全部吸至离心管壁上后，用微量移液器吸弃上清，然后从磁力架上取出离心管。吸弃上清时尽量吸净，但要避免吸入Beads。 （6）重复步骤（5）一次。 （7）干燥：干燥前应尽量吸净上清，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心后，再次将其至于磁力架上1 min，待MagicMag Beads全部吸至离心管壁上，用微量移液器吸净上清，然后从磁力架上取出离心管。室温开盖干燥15 min（或者放入37℃的温箱中，放入时间不得超过5min）。 （8）洗脱：加入20μL TE(pH8.0)，用枪头吸打混匀，将管壁上所有Beads都悬浮于TE溶液中。65℃水浴10 min，间或摇匀，使DNA充分洗脱。 （9）取出离心管，短暂离心，置于磁力架上1 min，用微量移液器小心吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。 2.2.2 PCR扩增人类的STR基因 （1）取3个PCR管，做好标注后至于冰上，按照表1的PCR反应体系加样。 表1PCR反应体系的构建 成分 体积（μL） ddH2O 16 10×PCR缓冲液（含MgCl2） 2.5 2.5mmol/LdNTP 1 10 μmol/L引物1 1 10 μmol/L引物2 1 1U/μlTaq酶溶液 0.5 DNA样品 3 25
（2）将样品管稍稍离心集液于管底，按照表2设置PCR反应条件。 表2 PCR反应条件 项目 温度 时间 预变性 94℃ 11min 变性 94℃ 1 min 复性 59.4℃ 1min 延伸 72℃ 2min 终延伸 60℃ 30min 保存 10℃ ∞
2.2.3 8%的聚丙烯酰氨凝胶电泳技术（PAGE） （1）安装夹心式垂直板电泳槽。 ①装上贮槽和固定螺丝销钉，仰放在桌面上。 ②将长、短玻璃板分别插到“凵”形硅橡胶框的凹形槽中，勿用手接触灌胶面的玻璃。 ③将已插好玻璃板的凝胶模平放在上贮槽上，短玻璃板应面对上贮槽。 ④将下贮槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上贮槽，双手以对角线的方式旋紧螺丝帽。 ⑤竖直电泳槽。在长玻璃板下端与硅胶模框交界的缝隙内加入已融化的1%琼脂（糖）。凝固后的琼脂（糖）中应避免有气泡。 （2）制胶与制备凝胶板。 ①配制36mL8%的PAGE凝胶两块，按照表3配置36mL的PAGE凝胶。
35个循环
细胞STR鉴定
细胞遗传质量检测的重要性
细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发，然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代。
细胞系错误鉴定问题已有50年历史，基于国际细胞库的分析数据显示：1984年细胞错误鉴定率为35%，1999年为18%，直到最近几年，应用于生物医学领域的细胞系需要鉴定的问题仍然很少有人关注。
细胞系错误鉴定所造成的后果
l 细胞系的损失
l 时间和金钱的损失
l 在公众领域(文献，专利等)提供错误信息
l 造成实验结果不一致或不可重复
l 个人：尴尬;公众：羞辱
细胞系鉴定与STR的关系
STR(Short TandemRepeat，短串联重复序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定。
STR基因位点由长度为3～7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，可作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹。
STR 基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。
随后通过一定的计算方法，即可根据所得的STR分型结果与细胞STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞
系或可能的交叉污染的细胞系名称。
因此应定期进行细胞STR鉴定，确认细胞身份是否正确。
人源细胞STR位点信息
细胞系鉴定服务流程
STR位点扩增及毛细管电泳分离STR分型图谱及检测结果。
STR参考知识
第二代DNA遗传标记-STR1,.小卫星DNA-重复单位6-12个bp的VNTR2.微卫星或短串联重复（STR)-重复单位2-6个bp的VNTR（串联重复序列）优点：1.作为遗传标记的“多态性”与“高频率”。
2.采用重复序列两侧的特异性单拷贝序列作为在基因组中定“点”标记，以PCR技术操作，可以实现机械化、自动化、电脑化。
3.以“长度”为差异的检测手段STR是由2-6个碱基组成核心的串联重复序列，重复次数一般为15-30次，核心序列拷贝数目因个体而异，数目不同所致的长度变化产生了长度多态性。
毛细管电泳机制：荧光标记STR基因分析技术是利用荧光标记的引物在PCR扩增STR基因座时，使PCR产物的一条链带上荧光标记。
这种带有荧光分子的DNA片段在凝胶中从阴极向阳极迁移，按片段长度大小排列，当迁移到阳极端的激光扫描仪的扫描窗口，荧光染料受到激发，发出一定波长的光，按荧光强度记录下来，每一个带荧光染料的DNA片段电泳轨迹按各自通过激光扫描窗口的实际时间被记录下来，以荧光吸收峰表示每一个片段。
峰值越高，表示该片段量越多；峰出现的时间与片段大小有直接关系，片段越小，峰越早出现。
计算机保存所有片段通过扫描窗口的实际时间以及荧光特征。
甲酰胺以及500LIZ对检验结果的影响：长久暴露于空气中的去离子甲酰胺被氧化成甲酸盐，后者在电泳进样时有两个不利作用，一是甲酸盐会与PCR产物中的DNA竞争吸附于毛细管上，减少PCR产物中DNA上样量。
二是甲酸盐本身会淬灭荧光，这两个作用的结果是降低毛细管电泳检测灵敏度，使本该检测PCR扩增产物的结果表现为阴性。
PCR扩增后模板DNA量会成千上百万倍增长，有时分析结果时虽可以看到很高PCR峰，但无法分析这些结果，原因是甲酸盐竞争的结果使500LIZ 进样量很少（甲酸盐也能降解DNA),无法对比分析。
所以，去离子甲酰胺应分装于0.5ml离心管内，冰冻保存，防止氧化，每次使用一个；去离子甲酰胺较甲酰胺纯度为高，可增加毛细管电泳检测灵敏度。
亲子鉴定中STR基因座D2S1338突变分析与解决对策杨文海
亲子鉴定中STR基因座D2S1338突变分析与解决对策杨文海发布时间：2023-06-20T09:47:35.362Z 来源：《世界复合医学》2023年6期作者：杨文海[导读] 探讨亲子鉴定中短串联重复序列（STR）基因座D2S1338突变情况蚌埠市企业职工疾病研究所邮编：233000摘要：目的：探讨亲子鉴定中短串联重复序列（STR）基因座D2S1338突变情况，并提出相应的解决对策。
方法：对基因组DNA进行提取，选择IdentifilerTM15+1、AGCU21+1系统的STR基因座荧光标记试剂盒检测36个常染色体STR基因座。
结果：使用IdentifilerTM15+1系统检测后得知，除D2S1338基因座的分型外，其余14个被检基因座均与遗传规律相符。
使用AGCU21+1系统检测后得知，STR基因座荧光标记试剂盒补充检测，所检测的21个常染色体STR基因座均与遗传规律相符。
结论：若STR基因座D2S1338发生突变，则需要使用AGCU21+1系统予以补充检测。
关键词：亲子鉴定；STR基因座D2S1338；突变分析；解决对策短串联重复序列(STR)是一类存在高度多态性的DNA序列，在人类基因组中广泛存在。
当前不论是在国内还是在国外，在进行亲子鉴定中，检测人员多选择STR基因座分型法进行检测。
然而因受到环境诱变剂、射线等因素的不良影响，STR基因座可能会出现变异的不良情况，复制滑脱是导致STR基因座突变的主要因素，常用STR基因座的突变率约为0.1%-0.5%，因此需要加强对该种情况的重视[1]。
本研究将予以如下报道。
1.资料与方法1.1一般资料研究选取案例为30岁争议父亲、25岁母亲、出生4个月的男孩。
1.2方法（1）收集血液样本。
抽取三人0.5ml的静脉血，分别将其放置于装有EDTA抗凝剂的试管中，之后将其放置于-20oC的环境进行保存。
（2）提取DNA。
检测人员选择Chelex-100法对血液样本中的基因组DNA进行提取。
y染色体str基因位点
y染色体str基因位点
Y染色体，作为人类性别决定的关键因素，起着至关重要的作用。
在人类的遗传中，Y染色体承载着一批特殊的基因——STR（短串联重复）基因位点。
这些基因位点在法医学、遗传学等领域具有广泛的应用价值。
STR基因位点，又称短串联重复序列，是指在基因组DNA上具有重复序列的一段基因。
在Y染色体中，STR基因位点具有高度多态性，即不同个体之间存在大量的等位基因差异。
这一特性使得Y染色体STR基因位点成为法医学的重要遗传标记。
通过对Y染色体STR基因位点进行基因型分析，可以实现对个体身份的识别，为犯罪侦查提供有力证据。
除了法医学领域，Y染色体STR基因位点在其他领域也具有实用性。
例如，在遗传学研究中，通过对Y染色体STR基因位点进行分析，可以探讨人类的进化历程、族群迁徙等遗传学问题。
此外，Y染色体STR基因位点还被应用于人类基因组多样性研究、疾病基因定位等领域。
在我国，Y染色体STR基因位点研究取得了显著成果。
科学家们通过对我国不同民族、地区的Y染色体STR基因位点进行调查，揭示了我国人群的遗传结构、族群关系等信息。
同时，我国在Y染色体STR基因位点技术应用于法医学方面也取得了重要突破，为打击犯罪、维护社会安定做出了贡献。
总之，Y染色体STR基因位点作为一种重要的遗传标记，不仅在法医学领域具有显著的应用价值，还在遗传学、人类基因组研究等领域发挥着重要作用。
STR基因座中检测出三带型等位基因2例
STR基因座中检测出三带型等位基因2例王亚丽;宋振祥;白慧茹;顾捷;周圆圆;张佳怡;贾富全;杨越;陈丽琴【摘要】针对出现的三等位基因2例亲子鉴定案件,同时检测其唾液斑及毛发,应用Goldeneye 20A、PowerPlex 6C、Investigator 24plex QS及华夏白金试剂盒进行检测验证.结果显示在2例二联体亲子鉴定案件中,一例母亲的D18S51基因座分型为13/16,孩子的分型为15/16/17;另一例父亲的D7S820基因座分型为8/11/12,孩子的分型为10/11.唾液斑及毛发样本结果与FTA血卡结果一致,应用Goldeneye 20A、PowerPlex 6C系统、Investigator 24plex QS及华夏白金试剂盒验证检测的结果相同.在日常亲子鉴定案件中,出现三带型现象较为罕见,针对这种现象,需进行认真判读及确认,以保证检测结果的准确性.【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2019(028)003【总页数】6页(P264-269)【关键词】法医遗传学;短串联重复序列;三带型等位基因【作者】王亚丽;宋振祥;白慧茹;顾捷;周圆圆;张佳怡;贾富全;杨越;陈丽琴【作者单位】内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学附属医院心脏大血管外科,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030;内蒙古医科大学基础医学院法医学实验室,内蒙古呼和浩特010030【正文语种】中文【中图分类】R394法医遗传学鉴定的主要工作内容是个体识别和亲权鉴定[1]。
STR参考知识
第二代DNA遗传标记-STR1,.小卫星DNA-重复单位6-12个bp的VNTR2.微卫星或短串联重复（STR)-重复单位2-6个bp的VNTR（串联重复序列）优点：1.作为遗传标记的“多态性”与“高频率”。
2.采用重复序列两侧的特异性单拷贝序列作为在基因组中定“点”标记，以PCR技术操作，可以实现机械化、自动化、电脑化。
3.以“长度”为差异的检测手段STR是由2-6个碱基组成核心的串联重复序列，重复次数一般为15-30次，核心序列拷贝数目因个体而异，数目不同所致的长度变化产生了长度多态性。
毛细管电泳机制：荧光标记STR基因分析技术是利用荧光标记的引物在PCR扩增STR基因座时，使PCR产物的一条链带上荧光标记。
这种带有荧光分子的DNA片段在凝胶中从阴极向阳极迁移，按片段长度大小排列，当迁移到阳极端的激光扫描仪的扫描窗口，荧光染料受到激发，发出一定波长的光，按荧光强度记录下来，每一个带荧光染料的DNA片段电泳轨迹按各自通过激光扫描窗口的实际时间被记录下来，以荧光吸收峰表示每一个片段。
峰值越高，表示该片段量越多；峰出现的时间与片段大小有直接关系，片段越小，峰越早出现。
计算机保存所有片段通过扫描窗口的实际时间以及荧光特征。
甲酰胺以及500LIZ对检验结果的影响：长久暴露于空气中的去离子甲酰胺被氧化成甲酸盐，后者在电泳进样时有两个不利作用，一是甲酸盐会与PCR产物中的DNA竞争吸附于毛细管上，减少PCR产物中DNA上样量。
二是甲酸盐本身会淬灭荧光，这两个作用的结果是降低毛细管电泳检测灵敏度，使本该检测PCR扩增产物的结果表现为阴性。
PCR扩增后模板DNA量会成千上百万倍增长，有时分析结果时虽可以看到很高PCR峰，但无法分析这些结果，原因是甲酸盐竞争的结果使500LIZ 进样量很少（甲酸盐也能降解DNA),无法对比分析。
所以，去离子甲酰胺应分装于0.5ml离心管内，冰冻保存，防止氧化，每次使用一个；去离子甲酰胺较甲酰胺纯度为高，可增加毛细管电泳检测灵敏度。
Y-STR基因座的特殊分型现象
Y-STR基因座的特殊分型现象吴微微;苏艳佳;章申锋;傅汀;陈国林【摘要】@@ Y染色体为男性所特有,在减数分裂中呈连锁遗传,在法医学中具有常染色体基因座不可比拟的独特作用.自从1997年Kayser[1]首次报道DYS19基因座以来,越来越多的Y-STR基因座被发现与应用.【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2008(024)005【总页数】2页(P355-355,360)【关键词】法医遗传学;Y染色体;短串联重复序列【作者】吴微微;苏艳佳;章申锋;傅汀;陈国林【作者单位】浙江省公安厅,刑侦总队,浙江杭州 310009;浙江省公安厅,刑侦总队,浙江杭州 310009;宁波市公安局,浙江宁波 315040;绍兴市公安局,浙江绍兴312000;丽水市公安局,浙江丽水 323000【正文语种】中文【中图分类】DF795.2Y染色体为男性所特有，在减数分裂中呈连锁遗传，在法医学中具有常染色体基因座不可比拟的独特作用。
自从1997年Kayser[1]首次报道DYS19基因座以来，越来越多的Y-STR基因座被发现与应用。
通常情况下，单个男性样本在每个Y-STR基因座仅有一个等位基因（DYS385基因座的一对引物与Y染色体有两个结合位点，因此才扩增出两组片段大小有交叉的PCR产物）。
但是，在实际应用中并非所有基因座的扩增片段均符合此种规律。
本研究对4467个无关男性个体的Y-STR数据进行分析，发现有15个样本在单基因座出现了多于1条谱带的分型结果，在法医学的实际应用中应予以注意。
1.1 实验材料1.1.1 样本4467 名汉族无关男性个体的血样来自浙江省各地，系本实验室日常检案积累。
1.1.2 主要试剂采用Y-filerTM试剂盒（AB公司）。
1.2 实验方法1.2.1 模板DNA的制备所有血样均采用磁珠法在自动工作站提取DNA。
1.2.2 复合扩增及产物的分离与检测参照文献[2－3]，采用Y-filerTM试剂盒进行PCR扩增，体系的体积为10μL，其中引物2μL，PCR反应缓冲液3.7μL。
法医物证学：性染色体STR分型期末单元测试与答案
一、单选题1、白银市连环杀人案中，在锁定犯罪嫌疑人后，采集了他的什么来进行比对确认A.指纹和DNAB.手机通话记录C.身高和体重数据D.面部特征正确答案：A2、下列不是性染色体遗传标记A.X-SNPB.Y-STRC.Y-SNPD.X-ray正确答案：D3、人类Y染色体比X染色体短的主要原因是A.重组B.突变C.重组抑制D.交换正确答案：C4、Y染色体异染色质区主要由什么组成A.X染色体置换序列B.与X染色体重组和交换的序列C.高度重复的序列D.X染色体兼并序列正确答案：C5、Y染色体的非重组区NRY大概占了Y染色体的A.45%B.5%C.95%D.15%正确答案：C6、Y染色体STR的突变率与常染色体STR的突变率相比，A.前者高于后者B.后者高于前者C.前者不会发生突变D.相近正确答案：D7、关于Y染色体STR用于法医混合斑鉴定的描述，错误的是A.检测单拷贝Y-STR分型男女混合样本只有1个峰B.Y-STR分型可用于多个体男性混合斑中最少男性个体的推断C.检测Y-STR分型可以不受女性样品的影响D.Y-STR检测中，男女均会有扩增产物正确答案：D8、在父系亲缘关系鉴定中，Y染色体STR分型结果发现1-2个Y-STR 基因座分型结果不一致时A.可以作出排除的结果B.可以作出认定的结果C.需要加做X染色体STRD.需要考虑突变的可能性正确答案：D9、Y染色体STR的分型图谱中，在多个单拷贝基因座有三个峰，我们可以推断此样本为A.1个女性和1个男性的混合B.1个女性和2个男性的混合C.至少为3个男性的混合D.多个基因座出现多拷贝正确答案：C10、X-STR的分型图谱，下列描述正确的是A.女性1个峰B.女性2个峰C.男性没有峰D.男性1个峰正确答案：D11、下列鉴定中，不适合使用X-STR分型的是A.母—子关系鉴定B.同父兄弟关系鉴定C.同父姐妹关系鉴定D.父—女关系鉴定正确答案：B12、下列关于姐妹关系的亲权鉴定描述，正确的是A.姐妹在每个X-STR基因座上均有相同的等位基因，可以认定两人为同母所生B.姐妹在多个X-STR基因座上没有相同的等位基因，可以排除两人为同父所生C.姐妹在每个X-STR基因座上均有相同的等位基因，可以认定两人为同父所生D.姐妹在多个X-STR基因座上没有相同的等位基因，可以排除两人为同母所生正确答案：B二、多选题1、下列哪些属于性染色体遗传标记A.X-STRB.Y-SNPC.Y-STRD.X-Indel正确答案：A、B、C、D2、关于X染色体和Y染色体的描述错误的是A.两条染色体完全互补配对B.两条染色体完全一样C.在任何部位都不相同D.在一些部位具有高度同源性正确答案：A、B、C3、关于X染色体描述正确的是A.组成上男女不同B.在女性随机遗传其中一条给后代C.在男性从父亲向下遗传给儿子D.在男性表现为单倍型，直接遗传给女性后代正确答案：A、B、D4、Y染色体拟常染色区位于A.Y染色体短臂末端和长臂末端之间B.Y染色体短臂末端C.Y染色体长臂末端D.靠近着丝粒附近正确答案：B、C5、关于DYS389 I/II基因座检测的描述，正确的是A.DYS389 I的突变也会引起DYS389 II重复单位次数改变B.用一对引物扩增的时候，正向引物有两个结合部位C.可以得到两个长度不同的片段D.DYS389 I的突变时不会引起DYS389 II重复单位次数改变正确答案：A、B、C6、因为X和Y染色体部分序列具有高度相似性，有些Y-STR基因座分型时A.男性个体可见额外的产物峰B.常染色体上也能检出扩增产物C.女性样本也能获得分型结果D.在X染色体上也能检出扩增产物正确答案：A、C、D7、Y染色体STR分型主要在下列哪些法医学实践中有其特殊的应用价值A.父系亲缘关系鉴定B.群体溯源C.混合斑鉴定D.种族溯源正确答案：A、B、C、D8、Y染色体STR分型在混合斑鉴定中有其独特的应用价值，主要是根据A.Y染色体是男性所特有B.同一父系的所有男性个体均具有相同的Y-STR单倍型C.不受女性样品的影响D.单拷贝Y-STR基因座，每个男性个体仅有1个等位基因正确答案：A、C、D9、Y染色体STR分型在种族或群体溯源中有其独特的应用价值，主要是根据A.单拷贝Y-STR基因座，每个男性个体仅有1个等位基因B.不受女性样品的影响C.特定的Y-STR单倍型推断种族或群体来源D.父系亲属往往形成Y-STR单倍型分布的群体差异正确答案：C、D10、下面关于X染色体STR的描述，正确的是A.形成连锁群或连锁组B.密度与常染色体相当C.突变率与常染色体STR相近D.男性样本没有峰正确答案：A、B、C11、在X-STR分型的时候需要注意A.等位基因个数异常B.Y染色体同源造成X-STR在男性样本中可能出现2个等位基因C.疾病造成等位基因个数异常的现象D.多拷贝基因座的出现正确答案：A、B、C12、基于X-STR的遗传特点，其分型的法医学应用主要体现在A.一些缺如的亲权鉴定B.有女性参与的亲子鉴定C.隔代的祖孙关系鉴定D.同父姐妹关系鉴定正确答案：A、B、C、D三、判断题1、X和Y染色体大约是在3亿年前由一对常染色体逐渐演变而来。
亲子鉴定
式中PEk为第k个遗传标记的PE值。检查多种遗 传标记，按各种遗传标记的遗传方式求出PE值后， 再按公式求出总的CPE值。
注意：
①基因座多态性程度越高，非父排除概率越高，排 除非生物学父亲的能力就越强。
②所用遗传标记数目越多，累积非父排除概率愈高，
鉴定能力愈强。
三、错误否定父权的风险
测试的遗传标记增多，遇到遗传变异的可能性也增加。遗传变异
3 、Y-染色体上基因座或遗传标记。按父系遗传方式传递，可
以确定样品是否来源于同一父系。适用于那些母亲不能参加鉴
定的父子间的单亲鉴定或男性同胞之间或隔代或旁系的亲缘关 系鉴定，如再结合按孟德尔遗传的遗传标记检验，可以正确确 定样品间的亲缘关系 ；
4 、X-染色体上基因座或遗传标记。由于遗传的定向性，它适 合三联体的亲子鉴定或除父子关系外的其他单亲的亲缘鉴定。
肯定父权的机会
在亲子鉴定中，当不能排除受检者与孩子有父子或母子 关系，则倾向于认同受检者与孩子有亲子关系。此时需要评 价假设父与孩子有亲生关系可能性大小（即亲权机会），以 判定是否具有亲生关系。 常用评价亲权机会的指标有：父权指数（PI）、似然比 率（LR）和父权相对机会。
一、父权指数（PI）
父权指数(PI)是判断亲子关系所需的两个概率的似然比， 即具有AF遗传表型的男子是孩子生物学父亲的概率(X)与随机 男子是孩子生物学父亲的概率(Y)的比值。 即PI代表AF具备生父基因成为孩子生父的概率比随机男 子具备生父基因成为生父的概率大多少倍 。
献报道在真实的家系中存在两个遗传标记的突变。因此，
一个遗传标记的不符合不能否定其亲子关系，要求在2个以
上不同基因座同时不符合才能否定其亲子关系。
Penta_D基因座出现II_型三等位基因型1_例
科技视界Science & Technology Vision23 ◼科普简介亲子鉴定是通过对人类遗传标记的检测，根据遗传规律分析，对有争议的父母和子女血缘关系的鉴定。
目前，常通过短串联重复序列（STR ）的基因分型等手段，综合检测分析人类遗传标记，应用于司法鉴定领域。
本文通过亲子鉴定常用的试验设备、生物试剂盒和技术方法，发现了1例II 型Penta D 基因座三等位基因（8/9/11），系国内外首次报道。
◼引言日常法医物证鉴定活动中，STR 一般出现1个峰或2个峰，偶尔会出现3个峰，作者选择2022年8月12日发现的一例Penta D 基因座II 型三等位基因型（8/9/11）亲子鉴定予以报道，同时传播相关科学知识。
◼1 案件资料1.1 案件简介可疑父、被检母及孩子（男）要求进行父子关系鉴定，本机构采取3人指尖末梢血，制作成血卡，作为此次鉴定的样本。
在征得同意的情况下，采集了孩子带毛囊的头发样本和口腔拭子。
1.2 STR 分型检验分别采用Microreader 21D 人类荧光标记STR 复合扩增检测试剂盒（苏州阅微基因技术有限公司）、Goldeneye 20A 人类荧光标记STR 复合扩增检测试剂盒（基点认知技术北京有限公司）和Microreader 29Y 检测试剂盒（苏州阅微基因技术有限公司），使用ABI9700型PCR 仪器（美国 Applied Biosystems 公司）进行复合PCR 扩增，扩增所得产物用3 100遗传分析仪（美国AB 公司）进行毛细管电泳，电泳所得数据使用 GeneMapper v3.2 软件（美国Applied Biosystems 公司）进行数据分析。
1.3 结果1�3�1 常染色体 STR 基因座分型结果经Goldeneye 20A 检测，结果显示，除Penta D 基因座外，孩子各基因座的等位基因能从可疑父的基因型中作者简介：陈凤清，硕士，司法鉴定，研究方向为司法鉴定。