平消胶囊对实验性大鼠乳腺癌的预防作用及机制

・１２・　２０１　１０月第７卷第５期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｄｉｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１３．Ｖ０１．７．Ｎ０．５　

・论著・　平消胶囊对实验性大鼠乳腺癌的预防作用及机制　韩晓蓉杨剑敏　罗懿忠　韩旎黎剑君　王颀　【摘要】　目的探讨中成药平消胶囊对实验性大鼠乳腺癌的预防作用及其机制。方法　将６０只　２１　ｄ龄雌性ＳＤ大鼠随机分为３组：Ａ组（空白对照组）２０只，腹腔注射甲基亚硝脲，饮清水；Ｂ组（平消　胶囊组）２０只，腹腔注射甲基亚硝脲后饮用平消胶囊混悬液；Ｃ组（他莫昔芬组）２０只，腹腔注射甲基亚　硝脲后饮用他莫昔芬水。观察各组大鼠肿瘤生长情况，记录肿瘤数量及体积；在鼠龄９８　ｄ时，取各组　大鼠乳腺肿瘤组织行常规ＨＥ染色病理学检查，应用免疫组织化学ｓＰ法检测各组大鼠乳腺浸润性导管　癌（ＩＤＣ）中血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达并行微血管密度（ＭＶＤ）计数。采用）（　检验及单因素方差　分析进行统计学分析。结果Ａ、Ｂ、ｃ组大鼠乳腺ＩＤＣ的发生率分别为１００％（２０／２０）、６０．０％（１２／２０）　和５０．０％（１０／２０），３组问比较差异有统计学意义（Ｘ　１３．３３，Ｐ＝０．００１）；Ｂ组ＩＤＣ的发生率比Ａ组低　（Ｐ＜０．０１７），但与ｃ组相比差异无统计学意义（Ｘ　０．４０，Ｐ＞０．０１７）。Ａ、Ｂ、ｃ组乳腺肿瘤的体积分别为　（１０４２＿＋１０２）、（３９８－＋４２）、（５２０－＋３３）ｔｏｎｉ　，３组问比较差异有统计学意义（Ｆ＝４．９９，Ｐ＝０．０１０）；Ｂ组肿瘤　体积明显小于Ａ组（Ｐ＝０．００９），但与Ｃ组相比差异无统计学意义（Ｐ＝０．１２０）。Ａ、Ｂ、Ｃ组乳腺ＩＤＣ组织　ＶＥＦＧ阳性表达率分别为８３．３％（１１５／１３８）、４２．６％（２９／６８）和７５．３％（５８／７７）（Ｘ　＝３７．７１，Ｐ＝０．０００），　Ｂ组的ＶＥＧＦ阳性表达率明显低于Ａ组和ｃ组（Ｘ　３５．８４、１６．０７，Ｐ均＜０．０１７）。Ａ、Ｂ、Ｃ组ＩＤＣ的ＭＶＤ　计数依次为（６８．２＋８．６）、（２９．６±１．２）和（５９．１－＋７．１）个（Ｆ＝４．３１，Ｐ＝０．０１５），Ｂ组ＩＤＣ的ＭＶＤ计数明显　少于Ａ组和ｃ组（Ｐ均＝０．０００）。结论平消胶囊对实验性大鼠乳腺癌的发生有明显的抑制作用，其　抑制乳腺癌的发生可能是通过抑制肿瘤血管生成实现的。平消胶囊对大鼠乳腺癌的发生有一定的化学　预防作用。　【关键词】乳腺肿瘤；化学预防；平消胶囊　【中图法分类号】　Ｒ７３７．９　【文献标志码】　Ａ　

Ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｉｎｇｘｉａｏ　ｃａｐｓｕｌｅ　ｏｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ＨＡＮ　Ｘｉａｏ—ｒｏｎｇ，　ＹＡＮＧ　Ｊｉａｎ—ｍｉｎ，ＬＵＯ　Ｙｉ—ｚｈｏｎｇ，ＨＡＮ　Ｎｉ，ＬＩ　Ｊｉａｎｑｕａ，ＷＡＮＧ　Ｑｉ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＢｒｅａｓｔ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｍａｔｅｒｎａｌ　ａｎｄ　Ｃｈｉｌｄｒｅｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１００００，Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＷＡＮＧ　Ｑｉ，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｑｉｇｚ＠２１ｃｎ．ｃｏｒｎ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｉｎｇｘｉａｏ　ｃａｐｓｕｌｅ　ｏｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　６０　２１一ｄａｙ—ｏｌｄ　ｆｅｍａｌｅ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ，２０　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ．Ａｌｌ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｕｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈａｔ，ｗａｔｅｒ　ｗａｓ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｔｏ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ），ｗａｔｅｒ　ｍｉｘｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｐｉｎｇｘｉａｏ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　（Ｐｉｎｇｘｉａｏ　ｃａｐｓｕｌｅ　ｇｒｏｕｐ），ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｖｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔａｍｏｘｉｆｅｎ　ｉｎ　Ｇｒｏｕｐ　Ｃ（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ　ｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ａｎｄ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ．Ａｌｌ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ　ａｔ　ａｇｅ　ｏｆ　９８　ｄａｙｓ，　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　ｓａｍｐｌｅｄ　ｆｏｒ　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ（ＭＶＤ）ｉｎ　ｒａｔ　ｂｒｅａｓｔ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｄｕｃｔａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＩＤＣ）ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＳＰ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｎｆｉｓｔｒｙ．Ｙ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｏｎｅ—ｗａｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｆｏｒ　ｄａｔａ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ＩＤＣ　ｗａｓ　１００％（２０／２０）ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ，６０．０％（１２／２０）ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ　５０．０％（１０／２０）ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ａ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｘ　＝１　３．３３，Ｐ＝　０．００１）．Ｔｈｅ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ＩＤＣ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ（Ｐ＜Ｏ．０１７），ｂｕｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ（ｘ　＝０．４０，Ｐ＞Ｏ．０１７）．Ｔｈｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒｓ　ｗａｓ（１０４２＿＋　

１）Ｏ１：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—０８０７．２０１３．０５．００４　基金项目：广东省中医药局科研基金（２０１２２１７６）　作者单位：５１００００广‘州，广东省妇幼保健院乳腺科　通信作者：王颀，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｑｉｇｚ＠２１　ｅｎ．ｃｏｎｌ　中华乳腺病杂志（电子版）２０１３年１０月第７卷第５期Ｃｈｉ　Ｊ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｄｉ　（Ｅ１。　ｔｒ０ｎｉｃ　Ｅｄｉｔｉ０ｎ），Ｏｃｔｏｂｅｒ２０　ｏ１．！　・１３・　１０２）ｍｍ。ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ，（３９８＿＋４２）ｍｍ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ（５２０＿＋３３）ｍｍ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｆ＝４．９９，Ｐ＝０．０１０）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒｓ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ｗａｓ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ（Ｐ＝０．００９），ｂｕｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ　（Ｐ＝０．１２０）．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ＩＤＣ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　８３．３％ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ，４２．６％ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ　７５．３％　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｘ２＝３７．７１，Ｐ＝０．０００）．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ（Ｘ　＝３５．８４，Ｐ＜０．０１７）ａｎｄ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ（Ｘ　＝１６．０７，Ｐ＜０．０１７）．ＭＶＤ　ｏｆ　ＩＤＣ　ｗａｓ　６８．２＋８．６　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ，２９．６±１．２　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ　５９．１±７．１　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｆ＝４．３１，Ｐ＝０．０１５）．ＭＶＤ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ　ａｎｄ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ（ａｌｌ　Ｐ＝０．０００）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｐｉｎｇｘｉａｏ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｃａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｒａｔｓ，ｗｈｉｃｈ　ｍａｙ　ｂｅ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｉｔｓ　ａｎｔｉ—ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｅｆｆｅｃｔ．Ｓｏ　Ｐｉｎｇｘｉａｏ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｈａｖｅ　ｃｈｅｍ０ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｒａｔｓ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｂｒｅａｓｔ　ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；　Ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ；Ｐｉｎｇｘｉａｏ　ｃａｐｓｕｌｅ　

乳腺癌是女性最常见恶性肿瘤之一。近年　来，乳腺癌的发病率逐年上升，死亡率也居高不　下。乳腺癌的化学预防是降低乳腺癌发病风险的　重要措施　Ｊ。具有乳腺癌高危因素的妇女面临着　巨大的心理压力，如何安全有效地降低这些妇女　罹患乳腺癌的风险是化学预防的关键。目前已证　实对乳腺癌有确切预防作用并用于临床的药物有　他莫昔芬　Ｊ。但他莫昔芬只对ＥＲ阳性乳腺癌有　预防作用，且长期服用可能导致子宫内膜癌的风　险增加。平消胶囊是具有抗肿瘤作用的中成药，　可在体外抑制乳腺癌细胞的增殖　Ｊ。将平消胶囊　用于乳腺癌的化学预防国内外鲜见相关文献报　道。本研究拟采用化学诱导剂诱导大鼠乳腺癌模　型，在大鼠乳腺癌发生过程中观察平消胶囊对大　鼠乳腺癌发生的影响，并初步探讨平消胶囊预防　大鼠乳腺癌发生的机制。　１材料与方法　１．１实验动物与试剂　无特定病原体（ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｒｅｅ，ＳＰＦ）级　ＳＤ大鼠由广东省医学实验动物中心提供，许可证　号：ＳＣＸＫ（粤）２００８－０００２，雌　，２１　ｄ龄，体质量为　４０～５０　ｇ。饲养条件：ＳＰＦ级动物实验室饲养，国　标鼠料饮食，湿度４０％～５０％，温度（２２±２）ｏＣ。　甲基亚硝脲购自美国Ｓｉｇｍａ公司，枸橼酸他　莫昔芬购自扬子江药业集团有限公司，规格：每片　１０　ｍｇ，平消胶囊由西安正大制药有限公司馈赠，　规格：每粒０．２３　ｇ，主要成分为郁金、枳壳、五灵　脂、白矾、硝石、马钱子、仙鹤草及干漆。小鼠抗　ＶＥＦＧ抗体及抗ＣＤ３４抗体购自丹麦ＤＡＫＯ公司。　１．２实验步骤　甲基亚硝脲使用前以ｐＨ　６．０的乙酸为溶剂，　新鲜配制质量浓度为５　ｍｇ／ｍＬ，３０　ｍｉｎ内使用。选　取２１　ｄ的ｓＤ大鼠６０只，按体质量采用数字表法　随机分为Ａ组（空白对照组）２０只，腹腔注射甲基　亚硝脲，注射剂量为５０　ｍｇ／ｋｇ（共２次），注射后　饮清水；Ｂ组（平消胶囊组）２０只，腹腔注射甲基　亚硝脲，注射剂量为５０　ｍｇ／ｋｇ（共２次），注射后　饮用平消胶囊混悬液，配制方法：平消胶囊内容物　３００　ｍｇ加入３０００　ｒｎｌ饮水中混匀，按每１００　ｇ体质量　给６０　ｒｎｌ的标准饮水量，给予平消胶囊约５０　ｍｇ／ｋｇ／ｄ；　Ｃ组（他莫昔芬组）２Ｏ只，腹腔注射甲基亚硝脲，　注射剂量为５０　ｍｇ／ｋｇ（共２次），注射后饮用他莫　昔芬水，配制方法：他莫昔芬２０　ｍｇ加入３０００　ｍｌ　饮水中，按每１００　ｇ体质量给６Ｏ　ｍｌ的标准饮水　量，给予他莫昔芬约４　ｍｒ／ｋｇ／ｄ。观察并记录肿瘤　数量及大小，在鼠龄９８　ｄ时处死所有大鼠。　１．３标本采集、制备及检测　取已处死的大鼠，将其颈部至腹股沟备皮　后，取下整块腹部皮肤及皮下乳腺组织，测量所　有乳腺肿瘤３个径线：最长径（Ｌ）、最短径（Ｗ）、　高（Ｄ），计算肿瘤体积　（Ｖ）＝６ｘＬｘＷｘＤ。之后　以１０％甲醛固定乳腺肿瘤，取材行石蜡包埋，切　片厚度４　ｍ，进行ＨＥ染色，光学显微镜下观察。　大鼠乳腺浸润性导管癌（ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｄｕｃｔａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ，　ＩＤＣ）的诊断，参照国际常用标准　。　检测各组肿瘤组织血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）的表达，并行微血　管密度（ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ，ＭＶＤ）计数。免疫组　织化学检测采用ＳＰ法。　１．４　ＶＥＧＦ判断标准和ＭＶＤ计数方法　ＶＥＧＦ判断标准　：肿瘤细胞质出现棕黄色　颗粒为阳性细胞，阳性肿瘤细胞占肿瘤细胞的比　例＜ｌ０％为阴性，≥１０％为阳性。　ＭＶＤ计算方法：任何被抗ＣＤ３４抗体染成棕　色的单个内皮或内皮细胞群，只要它们和邻近的　微血管、肿瘤细胞或其他结缔组织分开，就把它们　作为一个微血管。ＭＶＤ计数方法　Ｊ，先在低倍