寒凝血瘀证小鼠动物模型的建立及评价
中国中医药科技２０１０年１月第１７卷第１期Ｊａｎ．２０１０ Ｖｏ１．１７ Ｎｏ．１ ・基础研究・
寒凝血瘀证小鼠动物模型的建立及评价 周华妙 郭 勇 （‘浙江中医药大学・杭州３１００５３ 浙江中医药大学第一临床医学院・杭州３１０００６） 摘要 目的：探索寒凝血瘀证动物模型的制作方法。方法：将ＢＡＬＢ／Ｃ雌性小鼠随机分为２组，即空白 对照组、寒凝血瘀组，采用肾上腺素皮下注射加冰浴法进行造模，对造模前后小鼠进行症状和体征的评 价，测定耳温及血液流变学变化等。结果：模型组小鼠出现寒战、蜷缩少动、爪尾部紫癜等症状，耳温下 降，全血黏度增高，与空白对照组比较有显著性差异。结论：该方法建立的寒凝血瘀证小鼠模型符合中医 证侯特点，具有一定的理论和实践意义。 主题词模型，动物，方法寒凝血瘀证，ｊ、鼠
血瘀证是临床上各种疾病的常见证侯之一，近年来国内 外许多学者研究有关血瘀证动物模型的制作，运用各种现代 化手段，采用不同途径、不同思路研制出了多种血瘀证模型， 取得了可喜成就，而寒凝血瘀证作为血瘀证的一个亚型，其 模型研究一直受到人们的关注。目前该模型的制作方法… 大致有局部冻伤法、全身冷冻法、风寒环境法、冰水浸泡法、 冰水浸泡加药物法、冷刺激法、寒凉中药法等方法 ］。而在 上述造模过程中存在许多随意性，如造模时间短，部分更是 急性造模，造模因素单一或局限，模型评价侧重于生化检查、 血液流变学检查等不足，目前尚没有比较成熟且公认的造模 方法。本实验以中医理论为指导，以中医“寒邪致瘀”之病因 病机，结合血瘀的现代医学的病理生理改变，采用肾上腺素 皮下注射加冰浴的方法建立寒凝血瘀证小鼠模型，为该种模 型的制作提供一种方法，以用于实验研究。 １实验材料动物：健康雌性８周龄ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠２０只，中 国医学科学院上海实验动物中心提供。试剂及药品：生理盐 水：由常州康普药业有限公司生产；０．１％盐酸肾上腺素：由 天津金耀氨基酸有限公司生产，批号：Ｈ１２０２０５２６。主要仪 器：红外耳式体温计：由泰尔茂医疗产品（杭州）有限公司生 产。自动血流变测试仪：北京众驰伟业科技发展有限公司。 ２实验方法 ２．１造模每天定点小鼠皮下注射０．１％肾上腺素０．０８ｍｌ／ ｋ（用生理盐水稀释至０．２ｍ１），分２次注射，第一次注射后１ 小时，进行冰浴（４～６￣Ｃ）４分钟，再过１小时后第２次注射， 连续２周，后２周造模隔天进行。 ２．２观察指标及测定 ２．２．１症状和体征量化评分表 依据《中药新药临床研究指导原则》（２Ｏｏ２年）、《中医临 床诊疗术语－证侯部分》（１９９７年）及《实验动物学》（陈主初 吴端生主编）制定，见表１。 表１ ’ 寒凝血瘀证小鼠症状和体征量化评分表
注：以上评分表中，每项症状和体征轻度为１分，中度为２分，重度为３分，其中总分１～７分为轻度寒凝血瘀征表现，８～１４分为中度寒凝 血瘀证表现，１５～２１分为重度寒凝血瘀证表现。未出现上述症状和体征者计为０分。 ２．２．２耳温红外耳式体温计测定。 液流变仪测定。 ２．２．３全血黏度 于第２８天，处死小鼠，取血采用自动血 ２．３统计学处理采用ＳＰＳＳ１３．０软件包统计，数据均用均
△通讯作者 数±标准差（ ±ｓ）表示，组问差异的显著性采用ｔ检验。 ３结果 ・２・ 中国中医药科技２０１０年１月第１７卷第１期Ｊａｎ．２０１０ Ｖｏ１．１７ Ｎｏ．１ ３．１ 小鼠不同时段症状和体征量化评分见表２。 表２ 寒凝血瘀证小鼠症状、体征量化评分积分表（ ±ｓ）
表２表明模型组小鼠因受寒湿之邪侵袭，一般先有畏 寒、发热与饮水增多等表寒证。在连续冰浴１—２周后，小鼠 出现畏寒喜暖，食少便稀，蜷缩少动，背弓毛枯，口周、齿龈、 爪甲、耳缘紫暗等寒凝血瘀证症状。 ３．２小鼠不同时段耳温的变化见图１。
——空白对照组 …寒凝血癀组
图１两组小鼠耳温变化折线图 图１表明模型组小鼠造模２～３天后出现发热，随着冰 浴的进行，体温开始下降至正常，造模１周后体温继续进行 性下降，第ｌ２天左右降至３７℃以下。 ３．３各组小鼠全血黏度的变化见表３。 表３ 两组小鼠全血黏度的检测结果（ ±ｓ，ｍＰａ・ｓ）
与空白组比较＊Ｐ＜Ｏ．晒。＊＊Ｐ＜０．０１ ４讨论 中医认为，寒为阴邪，具有凝滞、收引的特性，人体的气 血，得温则行，遇寒则凝，当寒湿之邪侵袭机体，致使血脉瘀 滞，气血运行不畅；且寒可伤阳，阳气具有温煦脏腑及温运血 脉的功能，阳气受损，阴寒凝滞，不能温运血脉、推动气血运 行，以致血行不通则成血瘀之证。《内经》中提到，“寒邪博 击，易损肌肤脉络脏腑”，“寒独留则血凝泣、凝则脉不通，寒 则凝，凝则成瘀。”近年来，根据中医学寒凝血瘀证的病因、病 机或血瘀的病理生理改变而建立的寒凝血瘀证动物模型的 方法有很多，如吴氏等【３ 曾将家兔后肢被毛除去，用冰袋上 下左右围置，冷冻１．５小时，成功建立了家兔的寒凝血瘀模 型；郑氏＿４ 将大鼠置于低温冰柜，在零下１５℃的冷环境中， 持续受冻４小时，建造了大鼠的急性寒凝血瘀模型。又如成 氏 将大鼠置于０ １℃冰水中２ｏ分钟，１次／ｄ，连续２周建 造寒凝血瘀证模型；袁氏利用低温寒冷环境复制法复制 等【６ｊ。 本实验根据朱氏 ７ 等用肾上腺素皮下注射加冰水刺激 建立大鼠寒凝血瘀模型，考虑到小鼠的生理特性不同于大 鼠，将该造模方法加以改良，经多次反复预实验，调整冰浴的 最佳温度为４～ＣＣ，刺激时间为４分钟，盐酸肾上腺素每天 注射量为０．ｏ８ｒｒｄ，ｋ，分２次注射，整个造模时间增加到４周， 以趋符合“久病必瘀”的特点。采用冰浴之寒冷刺激，使小鼠 交感神经兴奋，引起反射性血管收缩，此时小鼠整个机体表 现为生理功能代偿性增强，出现代谢亢进的寒战发热，饮水 增多等表寒发热的症状，随着造模的进行，到第２周逐渐出 现蜷缩少动欲睡，毛枯背弓，寒战但无发热，甚者反应迟钝， 呼吸微弱，机体失去代偿能力，继续寒冷刺激使血管内皮细 胞损伤，受损细胞又释放出生物活性物质，血管壁通透性增 高，血浆大量渗出，使血液增黏、增浓、增聚，微循环障碍，整 个造模过程中联合盐酸肾上腺素皮下注射，造成慢性内皮细 胞损伤，并诱导血小板聚集、红细胞聚集，加重血液凝聚状 态，造模的后两周小鼠状态差，血瘀证症状明显，经反复预实 验采用隔日造模，减少刺激量，以维持寒凝血瘀证证侯或缓 慢加重该证侯的程度，同时减少小鼠死亡率。本实验结果表 明，造模组小鼠较空白组有明显的寒凝血瘀证症状，且全血 黏度均有增高，较空白对照组小鼠有显著性意义，表明建立 的小鼠寒凝血瘀模型成功。 本实验模拟了中医病因病机，结合现代医学病理生理学 基础，从中西医两方面因素出发造模，并且延长了造模时间， 更符合血瘀证“久病～慢性”的特点，这些都与临床较为接 近，较以往采用单一的突发强冷刺激造成的急性模型更接近 血瘀证的发病过程，而且在该模型的评价过程中，更注重寒 凝血瘀证的症状和体征特点，即外部表征，根据《中药新药临 床研究指导原则》及《中医临床诊疗术语・证侯部分》中有关 于寒证、血瘀证的特点，结合小鼠的生理特性，总结出了小鼠 寒凝血瘀证的症候群，并将其量化评分，以评定小鼠寒凝血 瘀证候的程度。在实验过程中，侧重小鼠症状和体征特点的 变化，强调中医“司外而揣内”的思维方式。 中医辨证就是将四诊（望、闻、问、切）所收集的有关疾病 的所有资料，包括症状和体征，概括判断为某种证，四诊是辨 证的基础，而望诊为四诊之首，我们通过望诊对小鼠症状和 体征的变化进行评分，从而辨证为寒凝血瘀证，这与临床中 医辨证论治原则相符合。另外，本实验中对小鼠冷冻的持续 刺激，与盐酸肾上腺素的作用，都是全身性的，使小鼠模型更 全面，更具整体性，同时也体现中医的整体观念。此外，许多 寒凝血瘀证模型大多采用兔、大鼠等较大型动物，较少采用 小鼠，本文采用小鼠造模，该模型有复制简单方便，重复性好 等优点。本实验的小鼠寒凝血瘀证模型符合中医理论的特 点及疾病发病规律，体现了中医辨证论治原则和整体观念， 为该模型的制作提供一种思路，一个方法，以供应用于实验 研究。 参考文献 １谷万里，张俏，史载祥．寒凝血瘀证动物模型的研究述评．中国中 医药信息杂志，２ＯＯ７，６（１４）：８９． （下转第７页） 中国中医药科技２０１０年１月第１７卷第１期Ｊａｎ．２０１０ Ｖｏ１．１７ Ｎｏ．１ ・ ７ ・ ３结果 正常对照组：见图１。细胞间质内邻近肌问丛神经元可 见ＩＣＣ，呈卵圆形或不规则形，细胞突起较多，表面有短粗状 微绒毛，突起间可见细胞嵌合连接，胞质内可见较多环形线 粒体，嵴清晰，粗面内质网发达，表面附着核糖体颗粒及较多 的游离核糖体颗粒、高尔基复合体及少量溶酶体。核大，呈 椭圆形或不规则形，占细胞绝大部分，异染色质较多见，沿核 膜内侧分布，其壁内神经及ＩＣＣ的突起相互连接形成网络， 分布均匀。ＩＣＣ之间及其与平滑肌细胞、神经细胞之问多见 由紧密并置的质膜形成的缝隙连接。 糖尿病模型组：见图２。大鼠胃体的ＩＣＣ数量较正常对 照组减少，细胞表面间隙增宽，嵌合连接松散，细胞体积变 小，膜不清晰。细胞间连接结构有病理损害，结构不清，胞质 部分溶解，线粒体减少，肿胀，嵴断裂或消失，呈空泡样改变， 粗面内质网扩张，表面核糖体脱落。部分细胞核轻度萎缩， 间隙增宽，核内异染色质集聚成团块状。细胞间、细胞与平 滑肌细胞及神经末梢之间的连接减少，大鼠胃的壁内神经及 ＩＣＣ分布不均匀，结构不清，突起连接杂乱。胃毛细血管细 胞排列不齐，部分肿胀并突人管腔使管腔迂曲，胞质有少量 空泡形成。 胃轻瘫模型组：见图３。大鼠胃体的ＩＣＣ数量较空白组 明显减少，细胞表面间隙增宽，嵌合连接松散、消失，细胞体 积变小，膜不清晰。细胞胞问连接结构有病理损害，结构不 清，胞质广泛溶解，线粒体明显减少，肿胀，嵴断裂或消失，呈 空泡样改变，粗面内质网扩张，表面核糖体脱落，游离核糖体 数量减少，次级溶酶体数量增多。细胞核轻度萎缩，间隙增 宽，核内异染色质明显聚集成团块状，分布在核的内膜侧。 细胞之间、细胞与平滑肌细胞及神经末梢之间的紧密连接显 著减少，大鼠胃的壁内神经及ＩＣＣ分布不均匀，结构破坏，连 接松散，突起连接杂乱或不能连接成网。胃毛细血管细胞排 列不齐，部分肿胀并突入管腔使管腔迂曲，胞质内有大量空 泡形成。 西药治疗组与电针治疗组：两组大鼠胃ＩＣＣ的数量较胃 轻瘫模型组增多，较正常对照组稍减少。ＩＣＣ形态结构基本 正常，细胞表面突起增多，可见细胞连接，胞质内线粒体数量 较胃轻瘫模型组增多，嵴清晰可见，粗面内质网排列整齐，数 量较多，表面核糖体颗粒均匀。ＩＣＣ与平滑肌细胞及神经末 梢间连接的病理损害较胃轻瘫模型组轻，其结构较清晰而紧 密。壁内神经及ＩＣＣ的分布及突起连接的病理损害较胃轻 瘫模型组为轻。见图４～５。
血虚寒凝血瘀证大鼠模型的研制
血虚寒凝血瘀证大鼠模型的研制吴大梅;冯麟;长小容;龚小雪【期刊名称】《贵阳中医学院学报》【年(卷),期】2011(033)006【摘要】目的:探索血虚寒凝血瘀证Wistar大鼠模型的制作方法.方法:大鼠尾部放血0.5～1ml/只,隔日一次,连续7次;放血次日将大鼠浸入0～1℃的冰水中20min,连续7次,共14天,造成血虚寒凝血瘀证模型.结果:模型组大鼠出现蜷缩少动,爪尾部紫暗等症状,血液流变学,血常规,凝血像,SOD、TXB2、6-酮-PGF1α与正常组比较有显著性差异,模型组动物肺脏、肝脏、心脏等水肿、出血、瘀血.经当归四逆汤治疗上述情况明显改善.结论:上述方法建立的血虚寒凝血瘀证大鼠模型符合中医证特点,具有一定的理论和实验意义.【总页数】4页(P29-32)【作者】吴大梅;冯麟;长小容;龚小雪【作者单位】贵阳中医学院,贵州贵阳550002;贵阳中医学院,贵州贵阳550002;贵阳中医学院,贵州贵阳550002;贵阳中医学院,贵州贵阳550002【正文语种】中文【中图分类】R255.7【相关文献】1.不同方向捻转补泻手法对血虚证大鼠血红蛋白、网织红细胞百分率的影响 [J], 褚亚宇;肖敏佳;谷世喆;刘清国;王朝阳2.左右利手捻转补泻手法对血虚证模型大鼠 RBC、Hb、IRF 的影响 [J], 肖敏佳;褚亚宇;柳杨;刘清国;王朝阳3.大小刺激量捻转补泻法对血虚证大鼠红细胞计数的影响 [J], 睢明河;周宇姝;马文珠;马惠芳;王朝阳;于天源4.针刺捻转补泻法对血虚证模型大鼠血红蛋白、血清铁蛋白等的影响 [J], 王伟;睢明河5.老年期痴呆寒凝血瘀证、痰浊阻窍证大鼠氧化应激的实验研究 [J], 秦亚莉;张俊龙;郭蕾;韩诚;陈燕清;于红;郭斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中医证候动物模型研究近况
中医证候动物模型研究近况中医证候模型是在中医整体观念及辨证施治思想指导下，运用脏象学说和病因病机理论，把人类疾病原型的某些特征在动物身上加以模拟复制而成，是中医学人体证候的具体再现。
经过40多年的努力，我国现已建立了40多类中医证候的动物模型[1]。
本文对较为常见的中医证候动物模型造模方法加以论述，以便从中把握模型的动态变化，为今后建立更合理的中医动物模型打下良好的基础[2]。
1 脏腑兼病证动物模型人体各脏腑之间，即脏与脏、腑与腑、脏与腑之间，是一个有机联系的整体。
凡两个或两个以上脏腑同时发病者称为脏腑兼病，脏腑兼病在临床上较为多见，证候也较为复杂。
1.1 肝郁脾虚证动物模型肝郁脾虚证是肝失疏泄、脾失健运所表现的证候，临床上又称肝脾不和证。
湖南医学院第一附属医院中医基础理论研究室科研人员取雄性大白鼠，体重220～300g，在实验第一天及第四天腹部皮下注射纯CC14花生油溶液，每次剂量0.5ml/100mg体重。
对照组注射生理盐水。
在实验过程中观察动物一般表现并进行有关机能生化测定，第六日处死，取肝、肠作组织学与组化学观察。
1.2 肝肾阳虚证动物模型肝肾阳虚证是指肝肾阳气亏虚，温化失衡，表现以泄泻和水肿为主证的虚寒证候。
张永华等选择健康小白鼠620只，每只体重22～27g，日龄30～35天，随机分11批，每批又分造型组与对照组两组，对照组喂正常饲料，造型组喂造型饲料（即每3g正常饲料含相当于1g生大黄的煎出液）。
采取每只小鼠单独自食喂养法，每日分次定时供给饲料3g，量不足时由正常饲料补充，待虚证形成后（一般要7～9天），停用造型饲料，将造型小鼠再分成自然恢复组与药物复健组。
1.3 少阴病肾阳虚水停证动物模型心肾阳虚证是指由于心肾阳虚气虚衰，温运无力至血行淤滞，水湿内停所表现的虚寒证候。
龙新生等选择体重2.5～3.5kg新西兰兔42只，随机分为假手术组和造模组。
造模运动先灌服寒凉药7天，剂量为7ml/mg，停灌寒凉药的次日，将兔固定于手术台，在无菌操作手术下，暴露出心脏，在冠状动脉起始部下0.5cm 处，用丝线结扎处的下方约1cm处再行结扎，然后用血管分离钳分离主动脉，用自制缩窄环套住外主动脉，使两端相连。
5气虚血瘀证动物模型制作方法与评价
老年人是患慢性难愈合性伤口的高发人群 , 由于合并 多种疾病如糖尿病 、营养不良 、放化疗损伤等 , 由此导致 的慢性溃疡本质上多有气虚 , 与伤口表现如皮肤黑黯 , 筋 脉青紫的局部辨证相结合 , 多属气虚血瘀之证 。以往的研 究已证实老年大鼠可自然形成血瘀体质[13] , 因此本模型以 老年大鼠为对象 , 以临床常用的化疗药物阿霉素攻击复制 慢性伤口气虚血瘀证之中医病证结合模型有一定的推广适 用价值 。
以上三种因素维持 10d
①气虚症状 ②血瘀症状
大鼠
老年 + 阿霉素 + 外伤
①老年 24 月龄大鼠 ②阿霉素 实验前 4 天尾静脉注射阿霉素(8mg/ kg) ③外伤 背部切直径 115cm 伤口 , 伤口包扎后 , 隔日换药
①脾气虚证 ②TXB2 与 62酮2PGF1α失调 ③血小板 ④血管舒缩功能
家兔 去甲肾上腺素
①充血性心力衰竭
按 1mg/ kg 体重经耳缘静脉滴注去甲肾上腺素 , 90min 滴 ②病理性心肌损伤
中医证候动物模型研究述评
此类模型的优点是 ，造模 因素的选择主要根据 中医学的 发病学原理来考虑 ， 型的病 因 、 模 症状 、 客观指标 和药物反证
比较一致 ， 故其实验结果与 中医理论较易吻合 ， 有利于探讨 中医 中药的疗效 和机理 ， 并使 中医
种临床常见 的 Ⅱ型糖尿病动 物模 型 ， 过考察不 同的行为体 通
征变化和相应 的客 观指标 ， 并进行药物 干预验证模型 的合理 性。孙广仁等 『 ｌ应用烟熏 、 ｓ 气管 内注入脂 多糖（ Ｐ ） Ｌ Ｓ 配合 寒
冷刺激建立 慢性阻塞性肺疾 病（ Ｏ Ｄ 寒饮蕴肺 证大 鼠病 证 ＣＰ ）
炎证。倪亮 等 ］ 手术结扎大 鼠腹 主动脉 ， 制作血瘀气虚 型心
肌肥厚动物模型 ， 并运用 中西医结合虚证 和血瘀 证 的全 国统
一
诊 断标 准 ， 将其定性 的问诊 内容代 以定 量 的同等 意义 的指
标 测试 ， 对动 物模 型进行 中医证候 的评 价 ， 验结果证 明模 实 型具有心气虚证 的特点 ， 随着病变 的发展 进一步加重 。富 并
离于疾病之外 ， 疾病发展过程本身就存在着 中医证候的变化 ， 并不是 因为施加了 中医病因之后才出现中医证候 。对西 医疾 病模型进行辨证建立的病证结合动 物模 型是指在西 医疾病模 型的基础上 ， 不施加人为干预 因素 ， 观察疾病在形成过程 中证 的演变过程及疾病模 型成立后表现 的中医证型 ，进而确定某
理论和治疗 手段有可能 出现新 的突破 ］ 。
研 制了首例 中医阳虚证动物模 型以后 ， 国内学者开 始致 力于 证候动物模 型的研究 ， 各类“ ” 证 的动物模型应运而生 ， 中肾 其
建立冠心病阳虚血瘀证动物模型的若干问题探讨
建立冠心病阳虚血瘀证动物模型的若干问题探讨摘要:对建立冠心病阳虚血痰证动物模型的相关问题进行了分析、探讨。
关键词：冠心病；阳虚血瘀证；动物模型心血管疾病是人类致死率最高的疾病，且发生率和死亡率逐年增高。
据流行病资料统计，在我国冠心病发生心肌梗死的每年约有35~40万人，死亡15~20万人，占死亡病因的半数左右，且呈发病率逐年升高、发病年龄年轻化的趋势。
冠心病已成为严重危害人类健康的疾病之一，属中医“胸痹”、“心痛”、“厥心痛”、“真心痛”等病证范畴。
为了更好地将中药、中药复方应用于冠心病的临床研究，我们运用病证结合的模式建立了冠心病阳虚血瘀证动物模型，现就其理论基础进行如下探讨。
1 建立病证结合动物模型的必要性“证”是中医的专用名词，指的是疾病发展过程中某阶段本质的反映,体现其相对的稳定性,但是中医的“证”是动态变化的，具有不确定性和模糊性。
学术界一直致力于中医“证”的研究,希望以此作为中医基础理论研究的突破点，使中医证候研究能够客观化、规范化和标准化。
随着现代科技的迅猛发展,特别是应用现代科研理念建立中医动物模型的发展，在中医病证结合复合造模方面取得了很大成就，但是仍存在诸多不尽人意之处:①基础研究相对滞后,缺乏稳定、可靠、可重复的病证结合的动物模型；②少见对中医证候从定位、定性上升到定量的客观指标进行系统研究及科学分析；③很难筛选出对某一病证独具特异性的客观指标[1]。
因此，建立科学、合理的病证结合动物模型并确立相关客观指标对其进行特异性检验，仍是目前证候研究领域的当务之急。
2 冠心病阳虚血瘀证动物模型建立的理论基础2.1 冠心病动物模型建立的理论基础应用现代医学动物造模的理论和方法，建立冠心病动物模型。
首先，采用高脂饮食造成大鼠AS模型，再对大鼠注射大剂量脑垂体后叶素（pit）造成MI模型，使冠心病的两种最基本的病理改变――AS和MI同时体现在同一动物模型上，使其能够更加接近临床上冠心病的病理改变和临床表现[2]。
子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型的建立及评价
（ 北京中医药大学， 北京 100029 ） 摘 要：目的： 采用多因素整合方法建立子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型 ， 为深入研究子宫内膜异 。 ： 位症气滞血瘀证的病理机制和治疗药物提供合适的动物模型 方法 在自体内膜移植法建立子宫内膜
*
异位症疾病模型的基础上， 采用药物加情志刺激等多因素干预方法造成气滞血瘀证候模型 ， 观察模型大 鼠的外部体征和行为学表现、 在位和异位内膜的组织形态学表现、 血管内皮因子、 单胺类神经递质等的 变化， 对子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型进行评价。 结果： 大鼠建模成功率为 78% ； 病证结合组 NO 含量较疾病模型组、 伪手术组均增高， 差异有显著性 （ P ＜ 0． 05 ） ； 病证结合组 ET 含量较疾病模型组 NE 含量均明显增高， 增高， 差异有显著性（ P ＜ 0． 05 ） ； 与疾病模型组相比， 病证结合组血清 DA、 差异有 显著性（ P ＜ 0． 05 ） 。结论： 多因素整合方法建立的子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型基本符合子宫 内膜异位症的病理特征和中医证候特点 。 关键词：子宫内膜异位症； 气滞血瘀； 大鼠模型 中图分类号：R711． 71 文献标识码：A 文章编号：1002 － 2392 （ 2012 ） 02 － 0031 － 04 1 1． 1 材料
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中 医 药 学 报 Acta Chinese Medicine and Pharmacology
2012 年第 40 卷第 2 期 Vol. 40 ， No. 2 ， 2012
cia 公司 ） ； 全自动放免计数仪 （ r － 911 ， 中国科技大学 实业总公司） 。 2 2． 1 方法 分组及给药 56 只 SD 大鼠随机分为 4 组， 即正常组、 伪手术 组、 疾病模型组、 病证结合组。 正常组常规饲养； 伪手 术组做大网移植； 疾病模型组采用自体移植法复制子 宫内膜异位症模型； 病证结合组在手术移植子宫内膜 的基础上给予多因素刺激造成气滞血瘀证 。 伪手术 组、 疾病模型组和病证结合组， 于术前第 5 天和术后第 10 天开始给予己烯雌酚灌胃 0． 02mg / kg， 连续 5 天， 使 ； 手术时大鼠统一处于动情期 术后给予氨苄青霉素肌 连续 5 天。 注 16 万 U / kg， 2． 2 模型建立 2． 2． 1 EMT 模型复制 手术在室温 23 ～ 28℃ 环境下进行， 无菌操作。 用 4% 水合氯醛 （ 30mL / kg， 腹腔注射 ） 麻醉大鼠， 待麻醉 后将其固定在手术板上， 腹部备皮， 常规消毒铺巾。选 取尿道口上端约 1cm 处为切入点， 沿腹中线切开 2cm， 逐层分离腹壁进入盆腔， 探查大鼠子宫 （ 呈 V 型 ） ， 细 丝线结扎局部子宫血管后， 取左侧子宫角 1 ～ 2cm， 立 即放入 PBS 溶液中， 修剪去除子宫浆膜外的脂肪组 织， 纵向切开子宫腔， 切取 5mm × 5mm 大小的子宫片， 使其内膜面与右侧腹膜相对， 以 5 － 0 号丝线将其四角 ， 缝于腹壁 缝合处尽量远离手术切口， 以减少组织粘 连， 并防止取材再次开腹时损伤已种植的异位组织 。 剩余部分子宫片进行组织学观察， 以证实移植物确为 子宫内膜组织。止血后向腹腔滴入以 0． 9% 生理盐水 溶解的氨苄青霉素 16 万 U / kg 腹腔消毒， 逐层缝合关 腹。动物分笼单放， 常规饲养。 建模 3 周后随机选取 3 只模型大鼠开腹检查移植物生长状况 。 2． 2． 2 气滞血瘀证模型复制 术后 1 周， 待腹部切口基本愈合进行以下证候干 各组动物用 4% 水合氯醛 （ 30mL / 于术后第 5 周， kg 体质量） 腹腔注射麻醉后， 取正常、 在位及移植子宫 内膜组织， 置于 10% 甲醛溶液中固定， 石蜡切片， 进行 HE 染色， 显微镜下观察组织病理学变化。 2． 3． 3 血液指标测定 上述方法将动物麻醉后， 腹主动脉采血， 检测血清 一氧化氮（ NO） ， 内皮素（ ET） ， 去甲肾上腺素 （ NE ） ， 多 5 － 羟色胺（ 5 － HT） 等。 巴胺（ DA） ， 2． 4 统计分析 ± s ） 表示， 实验数据以均值 ± 标准差 （ x 珋 组间比较 采用单因素方差分析及 LSD 检验。 应用 SPSS16． 0 软 P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。 件作统计学分析， 3 结果 3． 1 大鼠成模率情况 气滞血瘀证模型建立第 4 周开腹观察并记录异位 病灶生长情况。用游标卡尺测量异位病灶大小， 根据 Katsuki 方法： 体积 （ V ） = 长 × 宽 × 高， 计算并记录病 。 灶体积 满意的异位病灶应呈透明结节状或囊状， 体 积增大， 内有不透明囊液， 周围及表面有结缔组织粘连 及血管形成。（ 成模标准： 移植物已生长为圆形或椭 圆形囊泡， 内有透明或半透明囊液， 部分为粘稠不透明 液体， 表面有血管形成， 直径 5mm 以上 ） 。 建模所用 28 只大鼠， 建模成功 21 只， 合计成模率为 78% 。 见 表 1。
“寒热并见”大鼠模型的建立及评价
“寒热并见”大鼠模型的建立及评价宋捷民;钱旭武;滕晔;周尧【摘要】目的:探索建立寒热并见证动物模型.方法:采用多因素制寒热并见模型,先以丙硫氧嘧啶和寒凉中药石膏、知母、番泻叶长时间灌胃,加上冰柜中冷冻的复合造模法,制作虚寒证模型.在此基础上,皮下注射干酵母混悬液致大鼠发热,造成约40 h左右的“寒热证并见”动物模型.结果:大鼠出现中医寒热错杂的临床表现.结论:利用丙硫氧嘧啶加传统中医病因因素造模制作虚寒证模型,在此基础上皮下注射干酵母造成大鼠发热的寒热错杂模型是可行的.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2014(020)001【总页数】3页(P39-41)【关键词】寒热并见证;大鼠;模型;石膏;知母【作者】宋捷民;钱旭武;滕晔;周尧【作者单位】浙江中医药大学,杭州 310053;浙江中医药大学,杭州 310053;浙江中医药大学,杭州 310053;浙江中医药大学,杭州 310053【正文语种】中文【中图分类】R332临床上寒热错杂证，是病人个体在同一时间既有寒证表现又有热证表现、寒证与热证混杂而成的一类证候群。
从转换医学的角度出发，中医动物模型必须以临床应用主，强调从实验室到病床旁的连接。
临床上“寒热错杂［1］”证颇多，中医治拟“寒热并用”［2］，如治疗上热下寒证之乌梅丸、治寒热互结中焦证之半夏泻心汤、治表寒里热证之大青龙汤、治少阳经寒热夹杂证之小柴胡汤等。
但在中医现代实验动物模型的研究中，“寒热证并见”动物模型的建立尚未见报道。
本课题组初次研究并建立中医寒热错杂证动大鼠模型及评价指标，现报道如下。
1 实验材料1.1 动物清洁级雄性SD大鼠20只，体质量180～200 g，购自浙江省实验动物中心(许可证号SCXK(浙)2008-0033)。
1.2 试剂与药品丙硫氧嘧啶片，上海朝晖药业有限公司(批号1304E16);知母(批号 130301)、石膏(批号130201)、番泻叶(批号130305)，浙江中医药大学中药饮片有限公司;安琪高活性干酵母由安琪酵母股份有限公司生产;大鼠甲状腺素(T4)酶联免疫检测试剂盒 (货号 RGB-20259R，LOT20131030、20259R)、三碘甲状腺原氨酸(T3)酶联免疫检测试剂盒，北京瑞格博科技发展公司;SOD酶联免疫检测试剂盒(LOT 201306)、NO酶联免疫检测试剂盒(LOT 201306)、MDA酶联免疫检测试剂盒(LOT 201306)，上海信帆生物科技有限公司。
血瘀证动物模型制备的研究进展
LIU Xiaotong1,2 , LYU Guanghua3 , WANG Qiaozhi2∗ , WANG Qiong1,4∗
(1. Sino-Portugal TCM International Cooperation Center, Affiliated TCM Hospital, Southwest Medical University, Luzhou 646000, China. 2. School of Basic Medicine, Southwest Medical University, Luzhou 646000. 3. College of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 61113.
究也就正式拉开了帷幕。 传统中医上的血瘀证是 指脉管内血行迟滞,或血溢脉外而停蓄体内所引起 的证候。 随着医学的进步和发展,现代医学主要着 眼于血瘀证引起的血液流变学,生化以及组织形态
[ 基金项目] 国家自然科学基金(81773896) ,四川省科技厅国际科技创新合作 / 港澳台科技创新合作项目( 2019YFH0023) ,泸州市高端人 才引进项目( 刘新民团队) 。
次 60 ~ 120 s 的频率为 1 ~ 3 KHz 强度的闪烁光刺 激,持续 10 ~ 12 h;进行每小时 1 次持续 4 min 的夹 尾,每天 8 次;进行连续 21 d,每日 1 次 45°倾斜鼠笼 2 h。 通过对 TNF-α、TLR2 基因与蛋白的表达检测, 显示出膈下逐瘀汤加减方对气滞血瘀大鼠的确切 疗效。 刘丹彤等[5] 采用夹尾、束缚后腿、食用油灌 胃联合皮下 肾 上 腺 素 注 射 复 合 造 模, 具 体 为: 用 贴 有纱布 的 止 血 钳 夹 鼠 尾, 使 动 物 保 持 激 惹 争 斗 状 态,每周 1 次,每次 2 min;绷带束缚大鼠后肢使之行 走 困 难, 每 周 1 次, 每 次 30 min; 食 用 油 (0. 01 mL / g) 灌胃,每周 1 次;每只大鼠 0. 2 mL ( 1 g / L)肾上腺素皮下注射,每周 1 次。 以上操作 1 周 内交替进行。 通过检测多巴胺( dopamine,DA) 、去 甲肾上腺素( noradrenaline,NE) 的含量,显示气滞血 瘀证的体内变化,提示模型复制成功。 1. 2 气虚血瘀
大鼠_小鼠常见证候计量化辨证方法的建立及其评价
【实验研究】大鼠、小鼠常见证候计量化辨证方法的建立及其评价Ξ方肇勤,潘志强,卢文丽,刘小美,侯 俐,廖明娟(上海中医药大学基础医学院,上海 201203) 关键词:大鼠;小鼠;四诊;辨证;计量化;标准;药理 中图分类号:R28515 文献标识码:B 文章编号:100623250(2007)0720502204 1 材料与方法111 四诊设备和方法11111 主要仪器设备 MP200B型电子天平用于动物和饲料称重,数字W MY201型温度计用于检测腋温,S QF2E A体视显微镜用于显微爪、尾、舌的显微拍摄,口颌定位器用于舌的显微拍摄,3200K(色温)500W摄像专用光源显微和普通照明,NIK ON C oolpix4500数码相机显微和普通拍照,底部划有615cm×515cm方格的实验笼用于旷场检测,Y LS2 13A型大、小鼠抓力测定仪用于抓力检测,个人电脑用于图像和数据处理。
11112 四诊计量化所观察的指标 体重(g),摄食量(g),饮水量(ml),抓力(g),旷场水平跨格(跨格数)和垂直站立(前肢离地站立数),腋温(℃),爪、尾、舌显微拍照及图像处理,自然状态下心电图检测,以及疾病的特殊检测如肿瘤瘤径测量等。
112 部分四诊数据的转换[1～4]11211 采用Photoshop710图像软件,选取爪、尾、舌特定区域定量提取色度R、G、B,进而求出反映红色程度的r值(r=RΠ(R+G+B))。
11212 电脑播放旷场录像,记录各动物水平跨格数,以及前肢离地站立次数。
11213 肿瘤估算体积(cm3)=015×瘤径长×瘤径宽2(cm);并计算出去瘤体重(g)=体重-估算瘤体积(假设肿瘤比重为1)。
113 所有四诊数据的处理11311 建立原始检测数据库 不同日期的检测插入新表,形成完整的证候演变档案。
每张表的“行”为不同组别、各动物及其编号,“列”为各检测内容及实测值和换算值,包括饮水量、摄食量、体重Π去瘤体重、抓力、水平、直立、腋温、心率、舌r、爪r、尾r、瘤体积。
子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型的建立及评价
大鼠活动状况、 精神状态、 毛皮、 舌质等， 以及子宫 内膜异位灶生长情况。 2． 3． 2 组织病理学观察
2012 年第 40 卷第 2 期 Vol. 40 ， No. 2 ， 2012
中 医 药 学 报 Acta Chinese Medicine and Pharmacology
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基金项目：北京中医药大学自主选题项目 （ No． 2009JYB22 － XS001 ） 作者简介： 刘丹彤 （ 1982 － ） ， 女， 博士研究生， 研究方向： 子宫内膜异位 症证候及动物模型研究 ， 经方配伍规律及作用机制研究 。 * 通讯作者：王庆国（ 1952 － ） ， 男， 教授， 主任医师， 博士研究生导师， 研 究方向： 经方作用机理及配伍规律研究 ； 基于经方的中药 新药开发研究； 中医证候规范及其生物学基础研究 。
ET（ pg / mL） 106． 42 ± 37． 7 120． 06 ± 40． 97 100． 46 ± 23． 51 130． 17 ± 36． 80
▲
组别 正常组 伪手术组 疾病模型组 病证结合组
n
NO（ μmol / L）
ET / NO 1． 70 ± 0． 93 1． 83 ± 0． 72 1． 41 ± 0． 35 1． 53 ± 0． 45
预： ①用贴有纱布的止血钳夹鼠尾， 使之保持激怒争斗 2min / 次， 状态， 每周 1 次； ② 用绷带细条束缚大鼠后 30min / 次， 肢， 使 之 行 走 困 难， 每 周 1 次； ③ 食 用 油 1mL /100g 灌胃， 每 周 1 次； ④ 1g / L 肾 上 腺 素 皮 下 注 0． 2mL / 只， 射， 每 周 1 次。 以 上 方 法 在 1 周 内 交 替 。 进行 2． 3 2． 3． 1 观察指标与检测方法 大鼠一般行为、 体征观察