检验仪器分析技术及应用

检验仪器分析技术及应

用

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一绪论

临床检验技术技术分类：①临床化学检验分析技术（包括自动生化分析、干化学分析、血

气分析、电解质分析、电泳分析）②临床免疫学检验分析技术③临床血液学检验和尿液检验分析技术（血细胞分析、血液凝固分析、血液流变分析、流式细胞分析、血红细胞沉降分析和尿液分析）④临床微生物学检验分析技术⑤临床分子生物学检验分析技术

二．血细胞分析技术

血液由血浆（55%）和血细胞（45%）组成。

（填空题）所谓血细胞计数主要是指计数单位容积中红细胞、白细胞和血小板的个数。

（填空题）白细胞被称为人体卫士，它可以防止外来微生物的侵害及其他感染。

血细胞计数有变阻脉冲法（简称变阻法）、光电计数法和激光计数法。

（大题）变阻法血细胞计数原理：血细胞是电的不良导体，将血细胞置于电解液中，由于细胞很小，一般不会影响电解液的导通程度。但是如果构成电路的某一小段电解液截面很小，其尺度可与细胞直径相比拟，那么当有细胞浮游到此时，将明显增大整段电解液的等效电阻。如果该电解液外接恒流源(不论负载阻值如何改变，均提供恒定不变的电流)，则此时电解液中两极间的电压是增大的，产生的电压脉冲信号与血细胞的电阻率成正比。如果控制定量溶有血细胞的电解溶液，使其从小截面通过，也即使血细胞顺序通过小截面，则可得到一连串脉冲，对这些脉冲计数，就可求得血细胞数量。由于各种血细胞直径不同，所以其电阻率也不同，所测得的脉冲幅度也不同，根据这一特点就可以对各种血细胞进行分类计数。这就是变阻脉冲法原理。

（填空题）变阻脉冲法计数在大多数细胞计数器中是利用小孔管换能器装置实现的。

（填空题）脉冲的个数与通过小孔的细胞个数相当，脉冲的幅度与细胞体积成正比。脉冲信号经过下列步骤得出细胞计数结果：放大，阈值调节，甄别，整形。

（填空题）体积不同的红细胞、白细胞、血小板，其产生的脉冲幅度也不同，排列序列以白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。

（简答）什么叫细胞直方图：以体积为横坐标，以细胞的相对数量为纵坐标。把细胞在一个个很小的体积范围（小于2fld，又称通道，频道）内的数量分布情况表达出来，我们称之为直方图。红细胞直方图（显示范围从24—360fl）血小板直方图（显示范围0—36fl）白细胞直方图（显示范围是30—450fl，在直方图上表现为3个白细胞亚群，35—90fl范围的淋巴细胞群，可以包括淋巴细胞，91—160fl范围的单个核细胞群，可以包括单核细胞、幼稚细胞，161—450fl范围的粒细胞群，可以包括嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、中性粒细胞。）

白细胞直方图除显示分类外，还显示4个报警区域，如果某个报警区域里的计数值异常增多，就在此区域出现R报警，R1为直方图上淋巴峰左侧区域有异常，可能有血小板凝块、巨大血小板、有核红细胞、不溶性红细胞和冷凝集素等因素的影响，R2为直方图上淋巴峰和单和峰之间的区域有异常，可能有异型淋巴细胞、幼稚淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞或嗜碱性细胞等因素的影响，R3为直方图上核峰和中性粒峰之间的区域有异常有不成熟粒细胞、嗜酸性粒细胞等因素的影响，R4为直方图上中性粒峰右侧区域有异常，粒细胞数量过多，Rm为以上区域2个或2个以上同时有异常。

存在着2个以上的细胞同时通过细孔的现象称为重合现象。

为了在物理上最大限度地减少重合现象，开发出了鞘流法，具体方法为：具体做法是用一毛细管对准小孔管,细胞混悬液从毛细管喷出,同时与四周流出的鞘液一起流过敏感区,保证细胞混悬液在中间形成单个排列的细胞液,四周被鞘液围绕.鞘流技术可应用于两种细胞计数原理:一为电阻抗原理,鞘流通过小孔的敏感区进行细胞计数,另一种为激光计数原理,细胞液流室较长,与激光垂直相交,激光光束对流经的每一个细胞照射后产生光散射,利用此原理进行细胞计数。

（大题）为控制细胞通过小孔时的精密度，除采用鞘流技术外，各厂家还采用了一系列相关技术：脉冲编辑，高精度体积分析，扫流技术，防反流装置VonBehrens感应器，延时计数。

定量装置中的特殊部件主要有负压泵、压力调节器、废液瓶等。

（大题）白细胞分类技术：1.容量、电导、光散射法(VCS)体积（V）：测量使用的是电阻抗原理。电导法（C）：根据细胞壁能产生高频电流的性能采用高频电磁探针，测量细胞内部结构、细胞核和细胞浆的比例以及细胞内质粒的大小和密度。光散射（S）：是根据细胞表面光散射的特点提供了注重细胞类型的鉴别方式，来自激光光源的单色光束直接进入计数池的敏感区，在10~70°时对每一个细胞进行扫描分析，提供了细胞结构，形态的光散射信息。2.阻抗与射频联合法：此类仪器白细胞分类通过三个不同检测系统完成.a嗜酸性细胞检测系统b嗜碱性细胞检测系统c淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）检测系统3.光散射与细胞化学技术联合法4.多角度偏振光散射技术。测量正常标本时，可以从这4个角度（0°<1-3>、10°<7-11>、90°垂直光散射<70-110>对白细胞进行测量。同一种特定的程序自动存储和分析数据，将白细胞分为嗜酸性粒、中性粒、嗜碱性粒、淋巴和单核五种。

（大题）血红蛋白测量原理：血红蛋白的单位是g／100m1(新制是g／L)，临床检验时因难以从血液中将其分离出来而采用相对比色法进行间接测量。用溶血剂将经过稀释的血液中的红细胞破坏，血红蛋白便溶解出来，再加入转化试剂进而转化为颜色稳定的氰化血红蛋白。血红蛋白含量越高，它的颜色就越深，透光性就越差(或吸光性越强)。用光电器件检测透射光强度，并与已定标的血红蛋白值相比较，即可得出血红蛋白含量。常用的光路系统为了防止光散射和外来光干扰，均采用双波长法测量。在血液样品中加入氰化钾，将生成氰化血红蛋白，这是一种颜色很稳定的物质。它的光密度曲线在540nm处有一个吸收峰。

（填空）血样分析一般包括吸样、稀释、送样等过程。

三．流式细胞分析技术

（简答题）流式细胞仪（FCM）：主要功能：可进行细胞多参量分析，包括细胞大小、形状、蛋白荧光、氧化还原状态、膜的结构、流动性、微黏性、膜电位、酶活性、钙离子含量、pH、染色质结构、DNA合成、碱基比例等；进行细胞表型分析；细胞分选、DNA含量分析以及细胞分化周期分析等。

FCM工作原理：将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包围着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过监测区域。流式细胞仪通常以激光作为激发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激光荧光。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小。这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号。细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。

流式细胞仪中所用的滤片有中性滤片、带通滤片、带阻滤片、长波通滤片、短波通滤片、长波通双色性反射片

（填空题）影响流式细胞术分析的因素：细胞的荧光染色、激光光源的稳定性、细胞流速的稳定性、细胞悬液样品的影响（细胞黏连，团块常造成管道阻塞，重叠细胞可造成分析误差。）

流式细胞仪的组成：光学系统，液流系统，电子系统，计算机系统和数据转换处理系统。

（大题）流式细胞仪的临床应用：在免疫学中的应用（外周血T淋巴细胞亚群的测定，T淋巴细胞亚群用于器官移植后排斥反应的监测，肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群的测定，在艾

滋病监测中的应用，细胞内染色和细胞因子的测定）；在血液病学中的应用。

四．血凝分析技术