不同培养基对水稻胚性愈伤组织诱导及分化的影响
不同培养基及激素配比对小麦成熟胚离体培养的影响
不同培养基及激素配比对小麦成熟胚离体培养的影响王新国,任江萍 (河南农业大学国家小麦工程技术研究中心,河南郑州450002)摘要 [目的]建立适于优良小麦品种遗传转化的高效组织培养再生体系。
[方法]以小麦品种豫麦18和豫麦70成熟胚为外植体,探讨了2种培养基和4种激素配比对小麦成熟胚离体培养的影响。
[结果]L 3培养基的平均愈伤组织诱导率和分化率都明显高于MS 培养基,供试2个品种平均出愈率达91.0%以上,平均分化率达46.4%。
不同激素及其配比均可诱导小麦成熟胚愈伤组织分化,但不同处理分化率差别很大(10.5%～50.0%);以L 3为分化培养基,同时添加2,42D 0.1m g/L ,62BA 1.5m g/L 的激素配比更有利于愈伤组织的分化,平均分化率达到50.0%。
[结论]MS 、L 3两种基本培养基对小麦成熟胚愈伤组织诱导率均比较高,且差别不大。
不同激素配比对小麦成熟胚愈伤组织分化率影响很大。
关键词 小麦;成熟胚;培养基;植株再生中图分类号 S512.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)06-02240-03E ffect of Different M edia and H ormone P roportioning on the I n V itro Culture of M ature Wheat Embryo W ANG X in 2guo et al (H enan Agricultural University/Chinese National Engineering Research C enter for W heat ,Z hengzh ou ,H enan 450002)Abstract [Objective]T he study aim ed to establish high 2efficiency tissue culture regeneration system suitable for the genetic trans form ation of g ood wheat varieties.[M eth od]W ith m ature embry os of wheat varieties Y um ai 18and Y um ai 70as ex plants ,the in fluences of 2m edia and 4h orm one proportioning on the in vitro culture of m ature wheat embry o were discussed.[Result ]T he average induction and differentiation rates of callus on L 3m edium were obvi 2ously higher than that on MS m edium ,the average callus rate of 2tested varieties was over 91.0%and their average differentiation rate was up to 46.4%.Different h orm ones and their proportioning could induce the differentiation of callus from m ature wheat embry o ,but am ong different treatm ents ,there was great difference of differentiation rate (10.5%～50.0%).L 3as differentiating m edium w ith h orm one proportioning of 2,42D 0.1m g/L and 62BA 1.5m g/L was m ore fav orable for the differentiation of callus and the average differentiation rate reached 50%.[C onclusion]T he tw o basic m edia of MS and L 3had higher induction rate of callus from m ature wheat embry o w ith little difference.T he in fluences of different h orm one proportioning on the differentiation rate of callus from m atural wheat embry o were great.K ey w ords W heat ;M ature embry o ;M edium;Plant regeneration基金项目 河南省自然科学基金(0411032200)。
(2021年整理)第三章-愈伤组织诱导
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第三章愈伤组织的诱导与培养第一节愈伤组织的诱导与继代培养愈伤组织（callus）: 在培养基上，由外植体经脱分化和细胞分裂形成的一团无序生长的薄壁细胞。
大部分外植体细胞须经脱分化形成愈伤，才能再分化成完整植株，只有茎尖等少数细胞只恢复为分生状态但不分裂，直接再分化。
愈伤组织的诱导与分化是植物组培的基本环节。
一、愈伤组织的诱导及其形态特征1、愈伤组织的诱导1）起动期/诱导期（initiation/induction stage， Induction of growth）外植体细胞在外源激素作用下,经脱分化而恢复分裂状态，开始形成愈伤。
细胞外观无明显变化，代谢旺盛,合成加强,为分裂做准备.持续十几小时～几天。
2）分裂期（divition stage/phase)：外植体切口边缘膨大,外层细胞迅速分裂，体积变小，具分生细胞的特征，细胞数速增。
3）形成期(formation stage/Differentiation phase）：外植体表层细胞分裂减缓，内部细胞开始分裂，大量细胞形成瘤状/泡状或片状结构。
若不及时继代，将分化出拟分生组织瘤状物和维管组织，又称分化期。
2. 愈伤组织的形态特征质地:松脆易碎的颗粒状;紧密坚实的结块状；水渍或浆糊状。
颜色：白色或淡黄色;淡绿色或绿色；黄色至褐色。
一般,淡黄或淡绿/绿色松脆（近圆形）或致密的颗粒状愈伤再生能力较强，白色/灰白色或黄褐色、浆糊状或紧实（香蕉形）的愈伤再生能力差。
不同因素对水稻愈伤组织形成的影响
不同因素对水稻愈伤组织形成的影响王玉洋;蒋柳青;董雪梅;孙冬梅【期刊名称】《黑龙江农业科学》【年(卷),期】2013(000)001【摘要】以垦鉴稻10号为试验材料,消毒液选用75%的酒精、0.1%的升汞及5%次氯酸钠,研究不同消毒液、不同处理时间对成熟胚愈伤组织诱导的效果.利用试验筛选的最佳消毒条件,以 MS 、B5、N6以及 NMB 为筛选培养基,研究垦鉴稻10号种子诱导愈伤的最佳培养基质.结果表明：诱导愈伤的最佳消毒处理组合为75%酒精1 min +0.1%升汞10 min +10%次氯酸钠4 min ；经过方差分析 B5培养基对该品种愈伤组织的诱导效果明显优于其它基质,B5培养基上平均每个培养皿愈伤组织形成率高于其它培养基质,且诱导的愈伤组织大而新鲜.【总页数】4页(P11-13,14)【作者】王玉洋;蒋柳青;董雪梅;孙冬梅【作者单位】黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆 163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆 163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆 163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆 163319【正文语种】中文【中图分类】S511【相关文献】1.γ射线辐照对水稻花药培养愈伤组织形成和绿苗再生的影响 [J], 吕忆梅;王彩莲2.高温热击处理对培养水稻花药愈伤组织形成的影响 [J], 张跃非;王金玲;邓晓容3.诱导培养基对水稻胚愈伤组织形成和分化的影响 [J], 卢勤;陈璋4.不同消毒剂对苹果幼叶愈伤组织形成的影响 [J], 邓金祥;杨光柱;马钧;郑丽萍;李帆;黄文静5.N_2激光和^(60)Co-γ射线对水稻胚愈伤组织形成及再分化的影响 [J], 易小平;周开达;陈芳远;卢升安因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
第六章 目的基因的转化
2. 根癌农杆菌Ti质粒基因转化
3. 发根农杆菌Ri质粒基因转化 4. 植物病毒载体介导基因转化 5. DNA直接导入法基因转化 6. 植物种质系统介导基因转化 7. 植物质体基因转化系统
第一节 植物基因转化受体系统的建立
植物基因转化受体系统，是指用于转化 的外植体通过组织培养途径或其他非组 织培养途径，能高效、稳定地再生无性 系，并能接受外源DNA整合，对转化选择 性抗生素敏感的再生系统。
2.较高的遗传稳定性 植物受体系统接受外源DNA后不影响其自身的遗传
体系，同时又能稳定地将外源基因遗传给后代，保
持遗传的稳定性。 组织培养发现体细胞无性系变异非常普遍，而这些 变异与组织培养的方法、再生途径及外植体的基因 型等都有密切关系。 因此，在建立基因转化系统时应充分考虑到这些因素， 确保转基因植物的遗传稳定性。
20世纪70年代以来，对植物基因转化受体系统的研 究已进行了大量的工作，先后建立了多种有效的受 体系统，适应于不同转化方法的要求和不同的转化 目的。这些受体系统类型各有所长。
植物组织培养转化受体系统
植物非组织培养转化受体系统
二、植物组织培养转化受体系统
愈伤组织再生系统 直接分化再生系统 原生质体再生系统 胚状体再生系统
胚状体胚性细胞接受外源DNA能力强，是理想的基因
转化感受态细胞；
多数为单细胞起源，嵌合体少； 具有两极性，可分化出芽和根，减少生根培养环节；
利用转基因胚状体可以生产人工种子；
个体遗传背景一致、无性系变异小、胚结构完整、成 苗快、数量大等，有利于转基因植株的生产和推广； 现今普遍认为胚状体是较理想的基因转化受体系统。
胚状体再生系统 胚状体是指经体细胞胚发生而形成的形态结构和功能 上类似于有性胚的结构，又称为体细胞胚。与有性胚 一样，在一定条件下可发育成完整的植物体。 有些植物本身在自然条件下其珠心组织或助细胞就 可自发地形成胚状体。 组培过程中，一些体细胞及其单倍体细胞也诱导形 成胚状体。
不同育秧基质对机插稻不同秧龄秧苗素质的影响
随着水稻种植机械化的迅猛发展,为水稻获得高产稳产奠定了较好的基础条件,然而,在机插育秧床土利用方面,传统一直来沿用营养土作为育秧床土,这给历年机插育秧时取土培制带来较多困难,不仅劳动强度大而且工序繁杂,又易破坏秧池土壤表层熟土,同时床土培制的安全性也较差,若床土培肥稍不慎,极易导致烧种、烧芽、损苗现象而影响机插[1-3]。
为此,笔者开展了机插稻不同育秧基质的试验研究,以明确适合机插稻较为安全的育秧基质,为水稻机插培育壮苗提供技术保障。
1材料与方法1.1试验概况试验于2011年在江苏省金坛市直溪镇建湖农业合作社示范基地内进行。
供试水稻品种为优质早熟晚粳稻南粳46。
采用硬盘(内径58cm×28cm )育秧,无纺布覆盖;育秧基质选用稻田营养土、淮安基质(淮安市柴米河有限公司出品)、神农基质(金坛市神农生物肥料有限公司出品)和科杰基质(武进区科杰生物肥料有限公司出品)4种材料。
5月21日播种,每盘播芽谷150g 。
1.2试验设计试验以不同基质为处理,设4个处理,分别为:床土为稻田营养土(75kg 过筛细土中匀拌0.8kg 壮秧剂),铺设底土厚1.5cm+盖籽土厚0.5cm (A );床土为淮安基质(底土厚1.5cm )+营养土(盖籽土厚0.5cm )(B );床土为神农基质(底土厚1.5cm )+营养土(盖籽土厚0.5cm )(C );床土为科杰基质(底土厚1.5cm )+营养土(盖籽土厚0.5cm )(D )。
每个处理6盘。
1.3测定项目与分析苗期性状考查:播种后12d 和19d 每个处理分别取其代表性秧苗120株(取3盘,每盘40株),分别测定苗高、叶龄、单株假茎粗、地上部百苗干重;移栽前测定成苗率。
数据分析:试验中所得数据资料进行方差分析[4-6]。
2结果与分析2.1不同育秧基质对12d 秧龄秧苗素质的影响2.1.1对苗高的影响。
在本试验条件下,不同育秧基质的各处理12d 秧龄的苗高优势顺序为:处理D>处理B>处理A>处理C ,经方差分析测定,处理间均达显著差异和极显著差异,处理D 与处理B 、处理A 、处理C 以及处理C 、处理A 与处理B 间均达极显著差异;处理C 与处理A 之间达显著差异(表1)。
水稻遗传转化体系Protocol
一、接种
步骤：
1、保存在-20度的种子使用前取出（用多少取多少，用纸包好），置于37度恒温箱烘烤10-20小时左右（最好过夜）。
2、拨去种皮（1），尽量不要损害到种胚，拨皮后检查，将胚乳表面发黑或胚死亡的种子剔掉（2），用纸包好带入组培操作间。
3、（以下操作均在超净工作台内进行）将种子倒入干净的100ml三角瓶中，加入75%乙醇消毒2分钟，期间要不断的摇动，倒出酒精，再加入20ml2%的NaClO(3),覆盖种子即可，室温在摇床上160rpm摇25min，将NaClO倒掉，将种子用无菌镊子转移至高压灭菌过的滤纸上，在超净工作台上吹干为止，然后将种子接入诱导培养基（NB培养基）（5）上，每皿20粒（4），注明日期，封口膜封口，置于27℃恒温箱中暗培养（15）；
b．50mg/mlHyg：默克牌的买来就应该是这个浓度，即1g/20ml
c．Hyg30：是指潮霉素浓度为30mg/ml（即：480ul×1g/20mg÷800ul）。
d．有机、2,4-D、Cb、Hyg混匀，抽滤。
(23) 可以看到愈伤一天一天开始慢慢褐化，就像死了一样；
(19)AS的配制：
9.81mgAS用1mlDMSO溶解即可；一般称98.1mg,用10mlDMSO溶解,用1.5ml离心管分装，每管装1ml；-20°保存；
(20)AMM液体培养基的配制
(21) AS培养基（共培养培养基）的配制（800ml）：
780ml NB +16ml有机+1.6ml2 mg·L-12,4-D+800ulAS；
抗性愈伤的继代筛选当抗性愈伤在朝霉素30培养基22上生长15天后23将愈伤换到新朝霉素30培养基上15天后可观察到一些褐化愈伤开始长出的新的愈伤继续培养等新愈伤长出很多时转移至朝霉素50培养基24上筛选37分化从朝霉素50培养基中将继续增生分裂的抗性愈伤转入分化培养基25上再生成团而不是分散放置26一周后愈伤开始转绿三周后开始长出幼芽后根也长出当芽长至23cm时就可移至12ms培养基生根培养基上27
不同培养基及激素配比对小麦幼胚离体培养的影响（精品）
2 结果分析
2. 1 不同基本培养基对幼 胚愈伤组织诱导和分化的 影响
品种 V ariety
表 1 不同基本培养基对小麦幼胚离体培养的影响 Table 1 Effects of d ifferen t m ed ia on em bryos in v itro
Abstract: In o rder to estab lishm en t a h igh ly efficien t p lan t regeneration system that su ited to gene gun tran sfo rm ation, tw o w in ter w heat cu ltivars includ ing J ing 841 and Zhongm ai 9 w ere u sed as testing m aterials. T he facto rs affecting the p lan t regeneration, such as m ed ium and ho rm one p ropo rtion s, w ere stud ied. T he resu lt show ed that L 3 m ed ia w as the m o st idealm ed ium fo r inducing callu s and d ifferen tiation am ong the 4 u sed m ed ia includ ing M S, L 3, N 6B 5M S and B 5, the average inducing callu s frequency of tw o cu ltivars w as 88. 9% , d ifferen tiation frequency w as 36. 6%. T he op tim um ho rm one concen tration added to L 3 m ed ium fo r callu s d ifferen tiation w as NAA 1 m g L and ZT 3 m g L w ith a callu s d ifferen tiation frequency m o re than 50%. Key words: W heat (T riticum aestivum L. ) ; Imm atu re em b ryo s cu ltu re; M ed ium ; Ho rm one p ropo rtion s
不同培养基对小麦幼胚再生能力的影响
安徽农业大学学报,2003,30(1):6～9Jou rnal of A nhu i A gricu ltu ral U n iversity不同培养基对小麦幼胚再生能力的影响①林 毅1,高俊山1,李 艳2(11安徽农业大学生命科学学院,合肥230036;21中国科技大学生命科学学院)摘 要:以安徽省小麦主栽品种扬麦87158、安农98005、安农92484三个品种的小麦幼胚为试验材料,接种于SD2和MM2种培养基上,探讨不同培养基对不同基因型小麦幼胚再生能力的影响。
通过对其愈伤组织诱导率、愈伤组织的质量和绿苗分化率的比较,初步证明SD2培养基对小麦幼胚的再生能力效果较好,可以作为转基因小麦育种中的培养手段。
关键词:小麦幼胚;组织培养;再生能力 中图分类号:S5121103153文献标识码:A文章编号:100022197(2003)0120006204小麦是我国重要的粮食作物之一。
小麦种植在我国具有悠久的历史和广大的种植面积,小麦品种的遗传改良一直受到广泛的重视。
由于传统育种技术存在育种周期长、增产潜力有限等局限性,因而采用基因工程技术将优良性状的基因导入小麦等重要的禾谷类作物,是近年来发展起来的新的品种遗传改良方法。
在此方法中,组织培养技术是基本的关键技术。
由于组织培养具有缩短育种周期和不易发生遗传性状突变等优点,已在育种改良中广泛应用。
但是,禾谷类作物尤其是小麦的组织培养再生植株较困难,而它的胚较其它组织易培养。
因此,胚培养这一技术目前在育种研究领域中被广泛地采用,使其成为作物改良的重要手段之一。
作者利用安徽地区广为栽培的3种不同品种的小麦幼胚为材料,研究不同培养基对其再生能力的影响,探索相关培养条件及影响因素,筛选适宜于小麦胚培养的培养基,以提高和改良组织培养技术并应用于小麦转基因工程上。
1 材料和方法111 材料11111 供试小麦 扬麦87158、安农98005、安农92484,3个品种均为安徽省主栽品种,并作为转基因的受体,由安徽农业大学小麦转基因课题组提供。
玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究
玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究引言玉米是世界上最重要的粮食作物之一，也是全球最主要的农业经济作物之一。
玉米的种质资源非常丰富，但是其遗传改良和育种工作一直面临着诸多挑战。
细胞培养技术是现代生物技术研究中的关键技术之一，通过组织培养技术，可以实现玉米杂种优势的利用、快速育种和遗传改良等目标。
对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导和继代研究，具有非常重要的理论和应用价值。
1. 选择适宜的供体材料玉米幼胚是玉米胚胎发育的过程中，从受精卵形成到种子成熟前期的一个重要的阶段。
为了获得良好的愈伤组织诱导效果，选择适宜的供体材料是非常关键的。
一般来说，玉米幼胚在发育初期，生长速度快，细胞活力强，是胚性愈伤组织诱导的优质材料。
2. 优化培养基配方玉米幼胚愈伤组织的诱导受到培养基配方的影响很大，不同的培养基配方会对愈伤组织的形成和继代产生重要影响。
研究表明，含有不同植物激素浓度的培养基对玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导效果有显著影响，在实验中需要对培养基的配方进行优化，以获得更好的诱导效果。
3. 适宜的诱导条件除了供体材料和培养基配方外，适宜的诱导条件也是影响玉米幼胚胚性愈伤组织诱导效果的重要因素。
如培养温度、光照条件、气体环境等都会对诱导效果产生重要影响。
通过调控这些诱导条件，可以更好地促进玉米幼胚胚性愈伤组织的形成。
1. 愈伤组织的快速增殖玉米幼胚胚性愈伤组织的继代研究是指在得到初代愈伤组织后，通过培养和传代，使其不断增殖和繁衍的过程。
为了实现愈伤组织的快速增殖，需要优化培养基中的植物激素浓度和种类，以及培养环境中的温度、光照和气体环境等条件，从而促进愈伤组织的增殖和繁衍。
2. 愈伤组织的遗传稳定性研究在愈伤组织的继代过程中，其遗传稳定性是一个非常重要的问题。
通过继代研究，可以对愈伤组织的遗传稳定性进行评估和分析，从而为玉米杂交、育种和遗传改良等工作提供重要的理论依据。
3. 愈伤组织的分化调控研究在愈伤组织的继代研究中，也可以对其分化调控进行研究，例如通过培养基中不同植物激素的配比和浓度进行调控，从而可以实现愈伤组织向不定芽、花芽和根系等不同类型组织的分化方向调控，为后续的组织工程和遗传改良工作奠定重要的基础。
微量元素对籼稻品种愈伤组织诱导和褐化的影响
响不大 ， 而对褐化的控制有明显的影响 ， １２ 在 ． 倍浓度下愈伤组织的褐化率最低为 １． ５ ， ｏ ３ 并且 愈伤组织致密 、
状态较好 ，． ０８倍次之 ， 褐化率为 ２． ５ ， ６ １ 而一般使用的 １０ ． 倍浓度下褐化率为 ４． ５ ， ４ ５ 褐化情 况是最严重的 ，
收稿 日期 ：０９０ ８ 修 回 日期 ：０９０ —２ ２ ０ —４１ ； ２０ —９１
＊国家 自然科学基金项 目（０ ０ ４ ０ 、 ３ ６ ０ ０ ）武汉市青年科技晨光计划 （（］５ ７ １Ｏ ） ２）７ ０ ３３ ２ 和中南 民族大学引进 人才启动基金项 目（ Ｚ ５ １） （ ＹＺ Ｏ ０ ２ 资助 ＊＊通讯作者． － ｉ ｉｑ ｎ ｌ ＠１６ ＣＮ Ｅｍａｌ ｎ ｉ ｇｉ ２ ．Ｏ ：ｘ ｏ ｕ 王维旭 ， １８ 男，９ ５年生， 硕士研究生．研究方 向： 植物分子生物学．Ｅ ｍａｌ ｗｗｘ ｌｒｅ＠１３ ｃｍ － ｉ ： ｕｋ ｒ ６．ｏ
王维旭 张骥诚 刘学群 王春 台 刘新琼 一
中南民族 大学生命科 学学院／ 生物技术 国家民委 重点 实验室 ， 武汉 ４０ ７ ３０４
摘要 为 了优化籼稻品种 的组织培养 特性 ， Ｎ 培养基为基础 ， 以 ｓ 分析 了微量元素 ３种不同浓度处理对籼稻
品种粤泰 Ｂ在组织培养 中愈伤组织诱导率及褐化率的影 响。结果 表明 ： 微量元 素的浓度对愈伤组织 的诱导率影
０８ ，． 和 １２ ， ． 倍 １０倍 ． 倍 其余成 分不变 。 将 ＹＴ Ｂ水 稻 成 熟 种 子剥 去 颖 壳 ， 用 无 菌 水 先
本 试验 中所 采 用 的受 体 品种 粤 泰 Ｂ是 一 种 典 １ 试验 方法 ． ３
系 ， 品种在组 织培 养 过程 中表 现 为愈 伤 组 织 的继 冲洗 ５次 ， 着用 １５ Ｎａ ｌ 浸泡并 置于 ２ 该 接 ． ＣＯ ０℃摇