反相键合相色谱法保留行为的主要影响因素
色谱复习题答案整理
色谱复习题答案整理一．名词解释1capacity fact：容量因子，也称分配容量或容量比，用k′表示。
其定义为：一定温度与压力下两相达平衡后，溶质在固定相和流动相中分配量（质量或摩尔数）之比.2分配系数：K,一定温度与压力下两相达平衡后，组分在固定相和流动相中浓度的比值;3extra-column effect：柱外效应，即除柱内多种因素产生的色谱峰扩张外，其它产生峰扩张的因素之和：进样系统，系统连接管，检测器及其它柱外因素引起的峰扩张。
4gradient elution：梯度洗脱，在HPLC分析中，控制流动相组成或洗脱强度随时间的改变而改变，以使极性差异较大的多个组分均能分离,同时谱峰间隔较均匀，分析时间尽量短。
5HPSEC：高效体积排阻色谱法,即以多孔性填料为固定相，依据样品组分分子体积大小的差别进行分离的液相色谱方法。
常用于肽和蛋白质的分子量分布测定及多步分离纯化程序中。
其填料一般有硅胶基质和合成高聚物基质以及高交联多糖型凝胶三种。
6ODS：十八烷基键合硅胶，又称C18. 典型的反相色谱柱，表面键和的基团为非极性羟基，适于分离弱极性，中等极性，较强极性及可电离的酸碱性有机物。
7基线：在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的连续的响应信号，一般是一条直线;8峰面积：色谱曲线与基线间所包围的面积;9半峰宽：亦称半宽度,半峰宽度,指色谱峰高一半处的宽度10标准偏差σ：正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。
标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。
σ小，分散程度小、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。
11死时间t0:流动相流过色谱柱所需时间(不保留组分流过色谱柱所需时间)12调整保留时间:tR ’=tR-t，指扣除死时间后的保留时间。
13保留时间tR—进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
14相对保留值:(用γ或α表示,也称分离因子)两个组分调整保留值之比=tR2’/tR1’=VR2’/VR2’;15分离度:相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。
分析化学(本)-国家开放大学2022年1月期末考试复习资料-药学(本)复习资料
分析化学（本）一、单项选择题1.下列提高分析结果准确度的方法,哪项是正确的?()B.作空白试验可以估算出试剂不纯带来的误差2.2. 050X10-*有几位有效数字( ).D.四位3.强酸滴定强碱时,酸和碱的浓度均增大10倍时,则滴定突跃范围将()。
D.增大2个pH 单位，4.某酸碱指示剂的K Hn=1X10~* ,其理论变色范围为( ) .C.4~65.NaOH 溶液的标签浓度为0.3000mol/L,该溶液在放置过程中吸收了空气中的CO2，现以酚酞为指示剂,用HCI 标准溶液标定,其标定结果比标签浓度( ).B.低6.一般情况下,EDTA 与金属离子形成的配位化合物的的配位比是()。
A.1:17.下列哪项叙述是错误的? ( )D.各种副反应均使配合物的稳定性降低8.既能用滴定剂本身作指示剂,也可用另-种指示剂指示滴定终 点的方法不包括( )。
D. KMnO,法9.在重量分析法中,洗涤无定型沉淀的洗涤液应是()。
C.热的电解质溶液10.玻璃电极使用前,需要进行的处理是()。
C.在水中浸泡24小时11.波长为500 nm 的绿色光其能量().A.比紫外光小.12.某化合物λm(正己烷) =329nm,λ m (水) = 305nm,该吸收跃迁类型为( )。
B. n →π13.下列类型的电子能级跃迁所需能量最大的是()。
A. σ→σ14.在紫外-可见光谱分析中极性溶剂会使被测物吸收峰()。
C.位移15.有色配合物的摩尔吸光系数与下述哪个因素有关? ( )。
D.人射光波长16.某物质在某波长处的摩尔吸收系数(c)很大,则表明( )。
A.该物质对某波长的吸光能力很强17.光栅红外分光光度计常用的检测器是()。
D.真空热电偶18.下面有关红外分光光度法错误的是（）B.是分子结构研究的重要手段19.若外加磁场强度H 。
逐渐增大时，则使质子从低能E:跃迁到高能级E:所需的能量( )。
B.逐渐变大20.下列各组原子核中核磁矩等于零,不产生核磁共振信号的是(D.、O)。
《仪器分析》第八章 液相色谱分析
Si Cl
+ R H N 2
Si N R H
热和化学稳定性比酯型好。 热和化学稳定性比酯型好。
Si C l
+ R M X g
Si R
从理论上讲，这种结构具有更好的稳定性， 从理论上讲 ， 这种结构具有更好的稳定性 ， 特别是对于微碱性流动相， 而且R基可以多 特别是对于微碱性流动相 ， 而且 基可以多 次氯化，形成聚烷基键合相， 但是制备困难。 次氯化 ， 形成聚烷基键合相 ， 但是制备困难 。
柱体为直型不锈钢管，内径1～ 柱体为直型不锈钢管，内径 ～6 mm， ， 柱长5～ 柱长 ～40 cm。发展趋势是减小填料 。发展趋势是减小填料 粒度和柱径以提高柱效。 粒度和柱径以提高柱效。 以提高柱效
(7)检测器 检测器
♥ 紫外检测器
70％应用，氘灯，适用于梯度淋洗 对流动相速度变化不敏感 溶剂选择时紫外检测器波长不能小于溶剂的紫外截至波 长；
(5)进样器 进样器
♥ 高压进样阀－用微量注射器将样品注入样品环管（10µL到 2mL）
(6)色谱柱 色谱柱
♥ 色谱系统的心脏 ♥ 优质不锈钢管，内壁光洁平滑 ♥ 接头死体积尽可能小 ♥ 为了保护色谱柱不被污染，有时候需要在分析柱前加一根 短柱，称为卫柱。为了防止由于卫柱而过分增加压力，在 卫柱中使用的颗粒大小约10－30 µm。
3. Si-O-Si-C键型（硅胶和有机硅烷的反应）
R Si O + R SiX H 3 Si O Si R R
目前用得最多的类型。 目前用得最多的类型 。 具有良好的热合 化学稳定性， 能够在pH2~8.5的介质中 化学稳定性 ， 能够在 的介质中 使用。 使用。
第十八章_高效液相色谱法
疏水基团 C18基 C8基 苯基
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（3）键合相色谱法分离机理 ）
反相键合相色谱: 固定相极性<流动相极性 反相键合相色谱 固定相极性 流动相极性 常用固定相： 常用固定相：C18（ODS） ） 常用流动相 甲醇-水 甲醇 水 乙睛-水 乙睛 水 分离对象 非极性 中等极性化合物
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3）流动相 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的 越大 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k越大 溶剂种类：水为弱溶剂， 溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂 溶剂比例：水的比例增加， 溶剂比例：水的比例增加，使k增大 增大 中性盐的加入：使中性溶质的k增大 中性盐的加入：使中性溶质的 增大 pH：影响弱酸、弱减的离解 ：影响弱酸、 流动相的pH降低，弱酸 增大 增大， 增大； 流动相的 降低，弱酸k增大，tR增大；弱 降低 变小。 碱k变小。 变小
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一、化学键合相色谱法的固定相
• 固定相应符合下列要求： 固定相应符合下列要求： –颗粒细且均匀；传质快；机械强度高，能耐高压； 颗粒细且均匀；传质快；机械强度高，能耐高压； 颗粒细且均匀 –化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。 化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。 化学稳定性好 1、键合相的种类 （1）非极性键合相 ： 与苯基等键合在硅胶表面； －非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等键合在硅胶表面； 非极性烃基， －用于反相色谱； 用于反相色谱； －长链烷基可使溶质的k增大，选择性改善，载样量提高， 长链烷基可使溶质的k增大，选择性改善，载样量提高， 稳定性更好。 稳定性更好。
极性基团 丙氨基 氰乙基 醚和醇等
离子交换基团 胺基、 胺基、季铵盐 磺酸、 磺酸、羧酸
流动相对色谱峰形及保留值的影响
? 有的药物在结构上同时含有酸性、碱性基团 , 却表现出不同 色谱行为。如环丙氟呱酸和氨甲苯酸呈碱性 , 丙谷胺为酸性 , 而氟呱酸却类似中性。磺胺类药物多为中性或呈弱碱性。
? 一般来说 , 碱性药物的保留值对 pH值的敏感性差异较大 , 保 留值大的药物对 pH值的敏感性较大 , 碱性药物对 pH值敏感 性在 pH>4 时显著增加 , 如酮康哇和益康哇。所以当分离碱 性或酸性药物采用的流动相 pH值在4左右时 , 要特别给予注 意, 以免影响分离度和峰序的改变 , 如环丙沙星与氟哌啶 , 地 卡因与普罗帕酮等在一之间发生峰序倒置。
所谓的促溶效应(chaotropic effect) ,被测物与盐相互作用, 离子化
的被测物相互间的排斥作用减弱 , 从而显著地影响被测物在固定
相上的吸附行为; 在制备色谱系统中或被测物浓度较高时, 流动相
中
应
含
有
足
量
的
缓
冲盐以改善色谱峰形和分离效果。
? 色谱柱的饱和容量可随缓冲盐的单价阳离子 (如Na + 、 NH4+ 、K+ 、Cs+ ) 直径的增加 而降低, 选用Na+ , 色谱 柱的饱和容量相对较高。
? 解离的化合物在固定相表面的相互排斥作用以及较难渗透 进入疏水性的固定相中也是可能的原因，采用反相高效液 相分离可解离的(尤其是碱性的) 化合物时色谱柱易于过载, 甚至低达 10ng 的碱性化合物也可使常规色谱柱的表观柱 效明显降低; 减少进样量则可改善色谱峰形并使表观柱效 显著增加;过载效应可随着流 动相的离子强度的增加而逐渐减弱。
甲醇∶ NH4H2PO4(0.025M) =55∶45
HPLC测验(1)
百度文库 HPLC测验一、填空题1.高效液相色谱法中的高压输液泵按照其工作原理可分为恒压泵和恒流泵。
2.高效液相色请仪通常包高压输液泵；进样系统; 分离系统; 检测系统; 梯度洗脱系统; 等部分。
3.液相色谱中的梯度洗脱技术与气相色谱中的程序升温技术类似,只不过前者连续改变的是流动相的种类和极性，而后者改变的是温度，前者适用于分离极性变化范围宽的样品,后者适用于分离沸点和极性差异大的样品。
4.流动相的极性小于固定相极性的液液色谱,称为正相分配色谐即亲水固定液采用疏水流动相,适合合于分离极性化合物，极性小的先流出，极性大的后流出。
5.利用化学反应将固定液键合到载体表面所制备的固定相称为化学键合固定相。
6.化学键合相色谱的重要优点是化学键合固定相稳定，使用过程中不易流失，适用于梯度洗脱，适合于分配比k'范围宽的样品分析。
7.高效液相色谱分析时,如果进样量超过柱容量(即超载),即柱效迅速降低，色谱峰变宽。
8.高效液相色谱的发展趋势是减小填充颗粒的大小和柱径以提高柱效。
9.改变流动相的组成和极性可以改善液相色谱的分离度及调整出峰的时间。
二、判断题（√） 1.在液相色谱中,常用做固定相，又可用做键合相载体的物质是硅胶。
（×） 2.在正相色谱体系中极性强的组分先出峰。
（× ) 3.流动相和固定相都是液体的色谱，称为液相色谱。
（√）4.液相色谐中流动相组成和极性的微小变化都会引起组分保留值的显著变化。
( √ ) 5.液液色谱中的梯度洗脱就是改变洗脱液(流动相)的组成和极性,以显著地改变组分的分离效果( √ ) 6.高效液相色谱法适用于大分子热不稳定及生物样品的分析。
( × ) 7.高效液相色谱法通常是采用降低分离温度和提高流动相流速来提高分离效果。
( √ ) 8.反相分配色谱法的流动相极性大于固定相极性,适用于非极性化合物。
( √ ) 9.化学键合固定相具有良好的热稳定性,不吸水,不易流失,可用于梯度洗脱的特点。
09第三章液相色谱
出峰顺序相反。
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性；
按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。
常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、
乙腈、水
采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极 性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
3. 流动相选择
非极性~中等极性组分（用于HPLC 80%）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
离子交换色谱 ion-exchange chromatography
固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液 ；阳离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；
基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组
4.7.2
离子色谱流程与装置类型
抑制型；非抑制型:
排阻色谱
size- exclusion chromatography
固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分离。 小分子可以扩散到凝胶空隙， 由其中通过，出峰最慢；中等 分子只能通过部分凝胶空隙， 中速通过；而大分子被排斥在 外，出峰最快；溶剂分子小， 故在最后出峰。 全部在死体积前出峰； 可 对 相 对 分 子 质 量 在 100-105 范围内的化合物按质量分离
兼顾柱效和分析时间， 选择u 1ml / min
2）涡流扩散项及其影响因素
A 2 dp
A dp
，dp A H ，n 柱效
第三章
高效液相色谱
(High Performance Liquid Chromatography )(HPLC)
液相色谱仪
浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理[技巧]
![浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理[技巧]](https://img.taocdn.com/s3/m/3fc34a2deffdc8d376eeaeaad1f34693daef10af.png)
浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理浅谈缓冲盐、离子对和有机改性剂对反相高效液相色谱保留的影响机理使用化学键合有机固定相的反相高效液相色谱已成为液相色谱中最重要的方法，在所有要进行分离分析的化合物中，有三分之二可用之来完成。
反相液相色谱最初是用来分离非极性和非离子型化合物的。
随着研究的不断深入，实践证明，将流动相的组分进行调节，往水溶性流动相中加入适当的缓冲液或有机改性剂，即控制流动相的二次化学平衡，能使大多数极性和离子性化合物在反相色谱中获得成功的分离；除对保留和选择性进行控制外，还可靠抑制干扰竞争平衡或副反应来改善峰形。
一、缓冲液的使用及离子抑制大量实验结果证实，对弱酸、弱碱这些在水溶性溶液中易发生离子化的样品进行分离时，最简便的方法就是用缓冲液来调节流动相的pH值,亦即对离子化过程进行抑制，所以此方法被称为“离子抑制”(lon Suppress)，且离子抑制最有效范围是在pH3—8。
由于ODS柱的化学不稳定性，在pH1.5—8范围之外，固定相会发生降解，所以对pKa小于2或大于7的化合物就不适宜用缓冲液来抑制离子化。
但近年来HPLC迅速发展，使用化学性质更为惰性的大孔聚合物（苯乙烯—二乙烯苯）固定相，使得流动相使用的PH范围达到1—13,因而离子选择性的优点也可用于强酸和强碱的分离。
关于离子抑制的机理还未确切了解，目前认为有两个主要原因，第一，认为流动相中的缓冲液与被分析样品相互反应，使得样品的离子平衡向“中性”形式移动，这就易于在反相柱上进行色谱分配。
当PH值低于某弱酸的PKa时，则其保留时间就长（抑制了离子化），反之，当pH值高于PKa时，洗脱就快；碱性样品正好相反。
PH值高于PKa，保留时间则长，PH值低于pKa，洗脱就快。
之所以样品的离子形式比中性形式洗脱较快是因为离子形式更易溶于水溶性流动相。
上述机理是离子化的控制。
第二种解释是缓冲调节剂使得表面残留硅醇基与样品的相互作用减到最小，这是因为缓冲调节剂能“复盖”这些硅醇基团，阻止其吸附样品分子和参与离子样品的保留。