异硫氰酸荧光素发光纳米微球标记双抗夹心固体基质室温燐光免疫分析法测定人IgG

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诺如病毒抗原的异硫氰酸荧光素标记-酶联免疫吸附检测法

Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｈｉｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｏｎＦＩＴＣ— ａｎｔｉ — ＦＩＴＣａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｎｏｒｏｖｉｒｕｓ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ１．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅｆＦＩＴＣ）ｌａｂｅｌｅｄｐａｉｒｓｏｆｎｏｒｏｖｉｒｕｓｓｐｅｃｉｉｆｃｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉ异性单克隆抗体ｌ包被微孔板，用异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记配对的诺如病毒特异性单
克隆抗体２，以辣根酶标记的抗ＦＩＴＣ抗体作为示踪物，建立检测人粪便中诺如病毒抗原的ＥＬＩＳＡ方法，使用商业化酶联免疫法试剂盒和分型试剂进行比对分析。结果该方法的捕获抗体鼠抗诺如病毒单克隆抗体１的最佳包被量为１：２０００，
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２５２・
环境与健康杂志２０１５年３月第３２卷第３期
ＪＥｎｖｉｒｏｎＨｅａｌｔｈ，Ｍａｒｃｈ２０１５，Ｖｏ１．３２，Ｎ０．３
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技术与方法・
诺如病毒抗原的异硫氰酸荧光素标记一酶联免疫吸附检测法
温来欣，司萍，杨东平，方丽萍，吕传臣

罗丹明6G发光分子纳米微球标记凝集素-亲和吸附固体基质室温燐光法测定碱性磷酸酶

记凝集素（Ａ）ＷＧ亲和＊ｆ（））ｆＡＡ固体基质室温燃光法（ＡＳ．Ｔ测定ＡＰＬｆＡ．ＳＲＰ）的一种新方法．本法的线性范围为１ｏ．￣Ｏ３００ｇＰｓｏ。（６．ａＡｔ ’样品体积０４．／ｔ对应浓度２５０ｐ．Ｌ１，ｐ０ｆ．０～９００ｇｍ１，工作曲线的回归方程为ＡＩｌ．Ｏ８５０．ｆ／）０）ｐ＝６２４＋．８６
文章编号：０８７２（０００．０８０１０。８６２１）２０７．６
罗丹明６Ｇ发光分子纳米微球标记凝集素．吸附固体基质室温膦亲和光法测定碱性磷酸酶
林常青
（州职业技术学院食品与生物Ｔ程系，建漳州３３０）漳福６００
摘要：在外重原子微扰剂Ｐ（）ｂＡｅ２存在下，基于罗丹明６Ｇ（ｈｄｍｉｅ６，ＲｏａｎＧｉ￣写为Ｒ）的Ｓ维素膜（Ｍ）上于Ｌｘｋｍ＝４２３／４．ｍ处能发射强而稳定的室温Ｉ光信号－Ｓ０）在ＡＣｅ／ｅ８．６８５ｎ８９膦
由该发
光微球标记的麦胚凝集素（ｒｉｍｖｌｒｌｔｒＷＡ）ＴｉｕｕａｃａｔｅｇｅｅＡＧ，不仅仍能在ＡＭ．￣碱性磷酸酶（Ｐ发生定量￣￣－ｊ称Ｃ．ＬＡ）的特异性亲和吸附反应，且亲和吸附反应产物能发射更强的室温Ｉ光（Ｔ）号，据此建立了Ｒｉ纳米微球标膦ＲＰ信－ＳＯ，
ｐｏｐａａｅＡＰｃｎｂａｒｄｏｔｎｔｅｕｆｃｆＣＡｎｅｒｄｃｏｅｒａｔｎｃｎｅｔｔｎｅＴｇａ．ｈｓｈｔ（）ａｅｒｉｕｒｅＭ．ｄｔｏｕｔｆｈｃｉａｍｉｓｏｇｒＰｓｎ１ｓｃｅｏｈｓａｏＡｈｐｔｅｏｒＲｉ

异硫氰酸荧光素-酚藏花红双发光磷光探针测定DNA

ＰｈｐｈｒｓｅｅＰｒｂｅ０ｓ０ｅｃｎｆｅｓｙａｄＥｖｒｎｎａｃｅｃ，ｈｎｚｏｏｍａｏｌｇ，ｈｎｚｏ，ｕｉｎ３３０，ｉａＤｐｒｍｅｔｍｉｒｎｎｉｍｅｔｌｉｅＺａｇｈｕＮｒｌｌｅＺａｇｈｕＦｊ６００Ｃｈｎ）ｏＣｈｔｏＳｎＣｅａ
ＤｐｔＩ（ａｌｖｌｍｅｗａ．ＯＬｃｒｅｐｎｉｇｃｎｅｔａｉｎｗａ．× Ｏ１一）ｏｌａｓｈＮＡｓｏ－ｓｍｐｅｏｕｓ４，ｏｒｓｏｄｎｏｃｎｒｔｓ２１一５ｇｍＬ１ｃｕｄｃｕｅｔｅ０ｏ８
摘
稳定的室温磷光（Ｔ信号；当两者混合时，ＲＰ）发现Ｐ和ＦＴＦＩＣ的ＲＰ号均显著增强；而１２ｇＮｏ。Ｔ信．Ａｓｔ１ａＤｐ－均使ＰＦ和ＦＴＩＣ的ＲＰ号剧烈增强，６４６９ｍ处ＰＴ信在３与５ａＦ和ＦＴＩＣ的ＡｐＤＡ含量成线性关系，ｌ与Ｎ据此建立了ＦＴＰＩＣ．Ｆ双发光磷光探针测定蛋白的新方法．质该方法的检出限（Ｄ）Ｌ分别为１ｚＮｏＰ）４ｇＤＡｓｔＦ和ｐ（１ｚＮｏＩＣ，灵敏度高，并成功用于花蜜样品中ＤＡ含量的测定．８ｇＡｓｔ（Ｔ）Ｄｐ－ＦＮ同时探讨了ＦＴＰ双发光磷ＩＣ－Ｆ
２１年第３期０１（总第７３期）
漳州师范学院学报（自然科学版）
ＪｕｎｌｆａｇｈｕＮｏｍａｉｅｓｔＮａ．ｅ．ｏｒａｎｚｏｒｌｏＺｈＵｎｖｒｉｙ（ｔＳｉ）

荧光免疫技术

荧光免疫技术将抗原抗体反应与荧光技术相结合而建立的一种免疫标记技术，具有高度特异性、敏感性和直观性。

概述荧光抗体技术荧光免疫分析的类型荧光免疫技术在医学检验中的应用荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。

荧光荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。

荧光物质其他荧光物质铕（Eu3＋）为三价稀土镧系元素，其螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。

荧光抗体技术荧光抗体技术是以荧光素标记抗体，与切片中组织或细胞抗原反应，经洗涤分离后，在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其部位。

荧光抗体技术包括荧光抗体制备、标本制作、荧光抗体染色和荧光显微镜检查等内容。

荧光抗体的制备1.抗体要求：用于标记的抗体应该具有高特异性和高亲和力。

2.荧光素要求：①与蛋白质结合后不易解离，而未结合者易于清除；②荧光效率高；③荧光色泽与背景组织对比鲜明；④不影响蛋白质原有的生化与免疫性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。

3.抗体的荧光素标记：搅拌法和透析法。

4.荧光素标记抗体的纯化：去除未结合的游离的荧光素。

可采用透析法或层析分离法。

5.荧光抗体的鉴定：荧光素与蛋白质的结合比率（组织切片的荧光抗体染色以F/P＝1.5为宜，用于活细胞染色以F/P＝2.4为宜）、抗体效价、抗体特异性。

6.荧光抗体的保存：小量分装，-20℃冻存可保存1～2年。

真空干燥后可长期保存。

稀释后的抗体不宜长时间保存，在4℃可保存1～3天。

标本的制作临床标本主要有组织、细胞和细菌三大类。

制作标本要力求保持抗原的完整性、切片要求尽量薄、干扰物质要充分洗去、安全。

免疫组化

（一）酶桥法
过氧化物酶(HRP)
兔抗过氧化物酶抗体
羊抗兔IgG(二抗，桥抗体)
用特异性抗体与标本中抗原兔抗人IgG （一抗）结合之后，将桥抗体结合于其
上，再将抗酶抗体结合于桥抗组织中的抗原体上，最后把酶结合在抗酶抗
体上，经过底物的呈色反应而将抗原显示出来。
酶桥法的缺点：
（一）酶桥法
所用的抗酶抗体血清中含有低亲合力的抗酶抗体分子，与酶的结合力较弱，容易洗脱丢失，致方法的敏感性降低。
• 底物显色剂
DAB有致癌性，应注意防护。
① DAB （二氨基联苯胺）：
阳性产物呈棕褐色；
② AEC （ 3-氨基 -9- 乙基-卡巴唑）：
阳性产物呈红色或紫红色。
（二）碱性磷酸酶(AP)
最佳反应pH值8.9-9.4。 AP在碱性环境下，可催化下列水解反应: α-磷酸萘酚酯十H2O→α-萘酚十磷酸盐 α-萘酚十偶氮染料→有色沉淀↓
组织抗原二抗一抗酶多聚化合物
特点： 1、敏感性高：每1个分子的复合物中约含10个分子
的HRP和10个分子的第二抗体，复合物中的 HRP的绝对数量远高于其他复合物(如ABC)，本身已具备高度放大作用。
2、特异性强：人体内不存在该多聚化合物，无非
特异性干扰，故背景染色浅。
此外，染色步骤为两步，且第二抗体孵育时较短，使该方法更省时而简便。
(2)四甲基异硫氰酸若丹明（TRITC）：
易溶于水，最大激发光波长550nm，最大发射光波长620nm，呈橙红色荧光，与蛋白质结合方式同FITC。
Байду номын сангаас
(3)四乙基罗达明(RB200)：
不溶于水，溶于乙醇和丙酮。最大激发光波长570nm，最大发射光波长595～600nm，呈明亮橙红色荧光。

异硫氰酸荧光纳米复合粒子的研制与应用

异硫氰酸荧光纳米复合粒子的研制与应用
张念椿;高燕红;万垂铭;刘应亮
【期刊名称】《分析化学》
【年(卷),期】2010(038)002
【摘要】采用改进的St(o)ber法制备了二氧化硅外壳的纳米复合荧光粒子.利用异硫氰酸荧光素(FITC)与3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTEOS)反应制备前驱体),再用正硅酸乙酯(TEOS)在一定的条件下水解与缩合,制备有机-无机纳米复合荧光颗粒,利用透射电子显微镜(TEM)测试表明,此纳米复合颗粒呈球形、大小均一,直径约为70 nm.制备的纳米复合荧光粒子经过多次水洗后,仍有较强的荧光特性,有效地防止FITC泄露.用激光共聚焦显微镜观测纳米复合荧光粒子标记的牛血清白蛋白(BSA),可以明显看出BSA上的绿色荧光.
【总页数】5页(P202-206)
【作者】张念椿;高燕红;万垂铭;刘应亮
【作者单位】暨南大学纳米化学研究所,广州,510632;暨南大学纳米化学研究所,广州,510632;暨南大学纳米化学研究所,广州,510632;暨南大学纳米化学研究所,广州,510632
【正文语种】中文
【相关文献】
1.嵌合异硫氰酸罗丹明B核壳荧光纳米颗粒制备的新方法研究 [J], 原茵;何晓晓;王柯敏;谭蔚弘;彭娇凤;黄杉生;林霞
2.发光标记物--异硫氰酸曙红荧光的介质效应 [J], 吴娅兰;李隆弟;刘佳铭;朱国辉
3.异硫氰酸荧光染色法在真菌性角膜炎诊断中的应用观察 [J], 成拾明;阮坤炜;韩芳芳;郑武;张巍;张勇
4.羊抗人IgG的异硫氰酸荧光黄标记法 [J], 褚佩英
5.人造芥子油中异硫氰酸烯丙酯与硫氰酸烯丙酯的气相色谱分析 [J], 刘敬兰;陈连文;周鸿娟
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荧光(荧光显微镜和荧光分光光度计)

7 荧光分光光度计
荧光分光光度计工作原理：由光源氙狐灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后，此光即为荧光物质的激发光，被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上，由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪，激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制，当测绘荧光发射光谱时，将激发光单色器的光栅，固定在最适当的激发光波长处，而让荧光单色器凸轮转动，将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上，所记录的光谱即发射光谱（emission spectrum），简称荧光光谱。
药物筛选荧光探针分布是利用信号传导中信号分子的迁移功能，将一荧光蛋白与信号分子相偶联，根据荧光蛋白的分布情况即可推断信号分子的迁移状况，并推断该分子在迁移中的功能。由于GFP 分子量小，在活细胞内可溶且对细胞毒性较小，因而常用作荧光探针。
标记的蛋白质进行细胞内的活体观察
（3）荧光原位杂交原位杂交技术(In situ hybridization，ISH)是用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织，细胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
荧光技术
韩东洺细胞生物学科 2014-11-5
2015年6月15日
1 荧光和荧光素利用较短波长的光(激发光)照射样品，使样品受到高能量激发，产生较长波长的荧光(发射光)，用来观察和分辨样品中产生荧光的物质的成分和位置。
2 常见荧光素：
（1）异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)
6 使用荧光显微镜的注意事项
（1）严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。（2）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。（3）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。（4）检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。

一种基于异硫氰酸荧光素的ph纳米传感器制备

料分子ꎬ通过纳米颗粒负载荧光染料可提高探针
的稳定性和发光强度 [１２￣１４] ꎮ 在荧光生物分析中ꎬ
ＰＬＬ的去离子水溶液( ｐＨ＝９) 中ꎬ随后避光静置
２ｈ后ꎬ再于去离子水中透析１２ｈ以去除有机溶
剂ꎬ即可得到荧光ｐＨ纳米传感颗粒ꎮ
ｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｐＨ. ＷｈｅｎｔｈｅｐＨｃｈａｎｇｅｓｆｒｏｍ３ｔｏ９ꎬ ｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆＦＩＴＣｉｎｃｒｅａｓｅｓ
ｕｐｔｏａｂｏｕｔ３８ｔｉｍｅｓ. ＴｈｅｐＨｄｅｔｅｃｔｉｏｎｃａｎｂｅｒｅａｌｉｚｅｄｂｙｍｅａｓｕｒｉｎｇｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｃｈａｎｇｅｓ
究者的广泛关注 [６￣８] ꎮ 异硫氰酸荧光素( ＦＩＴＣ) 是
收稿日期: ２０２０￣０３￣１１ꎻ 修订日期: ２０２０￣０４￣１６
基金项目: 北京邮电大学大学生研究创新基金( 北京市共建项目专项) ꎻ 国家自然科学基金(６１６０５０１４) 资助项目
ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＦｕｎｄｆｏｒＣｏｌｌｅｇｅＳｔｕｄｅｎｔｓｏｆＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＰｏｓｔｓａｎｄＴｅｌｅｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎻ ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔ￣
ｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐＨｄｅｔｅｃｔｉｏｎ.
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ: ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅꎻ ｐＨｄｅｔｅｃｔｉｏｎꎻ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅꎻ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｅｎｓｉｎｇ
１引言
学和光纤传感器无法精确监测细胞等微环境的
作用ꎬ一些生命现象的发生常伴随着氢离子浓度

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反应，并能在免疫反应后保持优良的烯光特性，且室温烧光信号进一步增强．据此建立了固体基质室温媾光免疫
分析（ＳＲ．测定人ＩＧ的一种新方法．Ｓ．ＴＰＩＡ）ｇ本方法线性范围为Ｏ０￣２．ｐ．８００ｇ人ｌＧ￣（ｇ／样品体积Ｏ肛／．Ｌ斑，对４
ｏｎｍａｓｆ２０ｗｓｙｎｔｓｚｄｈｅｉｅｂｙＳｏｌＧｅｍｅｈｏ — ｌｔｄ．ｉａｎｅｍｉｔｏｎｇａｎｄｓａｂｌｏｌｄｕｂｓｒｅｒｔｃｔｓｒｔｅｓｉｓｔａｔ —ｏｏｍｔｍｐｅａｕｒｅｒｔｅ
文章编号：０８７２（０００ —０５０１０—８６２１）４０９－５
异硫氰酸荧光素发光纳米微球标记双抗夹心固体基质室温膦光免疫分析法测定人ＩＧｇ
林常青
（漳州职业技术学院食品与生物工程系，福建漳州３３０）６００
摘要：基于Ｓ１ｅ技术合成了粒径为２ｎｏｇｌ．０ｍ、包含了异硫氰酸荧光素（ＩＣＦＴ）的ＳＯ纳米微球（ｉ２简写作
ｓｅｉｃｒａｔｎｂｔｅｇａ・ｎｉｈｍａＩＧａｔｂｄｌｂｌｄｗｉｈＦＩｐｃｆｅｃｉｅｗｅｎｉｏｏｔａｔ— ｕ－・ｎｇｎｉｏｙａｅｅｔＴＣ－ｉａｄｈｍａｌＧ・ＯｚｎｕＳｎｇ
ＤｅｅｍｉｔｏｎｏｕｍａｎＩｔｒｎａｉｆＨｇＧｌｄＳｕｂｓｒｔ — ｏｍｂｙＳｏｉｔａｅｒｏＴｅｐｅａｕｒｍｒｔｅＰｈ０ｓｐｈ０ｒｓｅｅＩｍｕｎｏｓａｅｃｎｃｍａｓｙ
ＬＩＣｈａｇｑｉＮｎ－ｎｇ
ｐｏｐｏｅｃｎｅｓ — Ｔ）ｉａｏｈｕｓａｅｏｏａｄｍｂａｅＩｗａｕｄｉｈｅｅｒｈｔａｅｈｓｈｒｓｅｃ（ｓＲＰｓｎｌｎｔｅｂｔｔｆｌｍｉｅｍｅｒｎ．ｔｓｆｎｎｔｅｒＯ０５．ｇＬ样品重复测定ｌ次，ＲＤ为３５．和０ｎ／２０ｍ１Ｓ．％和４％，表明本方法的重现性好．４．１
关键词：人ｌＧ；发光纳米微球作标记物；固体基质室温烧光免疫分析法；异硫氰酸荧光素ｇ中图分类号：０６７３５。９文献标识码：Ａ
ｒｍａｎｄｏｄｐｏｐ０ｅｃｎｅｒｐｒｉｓｎｔｅｉｎｌｆｈｓｈｒｓｅｃｗａｅｈｎｅａｔｒｈｅｉｅｇｏｈｓｈｒｓｅｃｐｏｅｔｅａｄｈｓｇａｏｐＯｐＯｅｃｎｅｓｎａｃｄｆｅｔｅ
ｉｍｕｎｏａｓｙｒａｃｉｍｓａｅｔｏｎ．Ｂａｅｏｎｔｆｃｓａｂｏｅａｎｅｓｄｈｅａｔｖ，ｗｍｅｈｏｄｏｆｏｉｓｂｓｒｔ — ｏｏｔｔｓｌｄｕｔａｅｒｍｅｍｐｅａｔｅｒｕｒ
（ｉｍｍｕｏｌｂｌ）ｃｎｂａｒｄｏｈｏｙｍｉｅｍｅｒｎｕｎｉｔｅ，ｈｎｉｅ－ｎｉｏｙｃｎａｅｎｇｏｕｉａｅｃｒｉｎｔｅｐｌａｄｍｂａｅｑａｔａｉｌｔｅａｔｎａｔｄｏｊｇｔｎｅｔｖｙｇｂｕ
ＦＴＳ．ＩＣｉ）该发光纳米微球在聚酰胺膜（Ｃ）ＯＡＭ基质上可发射强而稳定的室温ｊ光．究发现，由该发光微球；研隼标记的羊抗人ｌＧ抗体（ｇ简记为ＦＴ．ｉ－ｂ）ＩＣＳＯ２Ａ１，不仅能在ＡＣＭ固体基质上与人ＩＧ发生定量的特异性免疫ｇ
应浓度０２～５．ｎ／）工作曲线的回归方程Ａｌ．００ｇｍＬ，０ｐ＝１．１．２９９５ｍ（ｇ斑）相关系数ｒ．９７按３ｂｋ７＋９Ｐ／、＝０９，Ｓ／９计算本方法的灵敏度，其检出限为０１ｇ斑．．５ｐ／与用ＦＴ０ＩＣ标记羊抗人ＩＧ的方法相比，灵敏度有较大提高．ｇ分别
ＡｂｔａｔＳｌｏｉｘｄａｏａｔｌｃｎａｎｎｕｒｓｅｎｉｏｈｏｙｎｔＦＩｓｒｃ：ｉｃｎｄｏｉｅｎｎｐｒｉｅｏｔｉｉｇｆｏｅｃｉｓｔｉｃａａｅ（ＴＣ— ｉ）ｗｉｈｔｅｐｒｉｌｓｚｉｃｌＳＯｚｔｈａｔｅｉｅｃ
２１００年筇４期（总第７）Ｏ期
漳州师范学院学报（自然科学版）
ＪｕｎｌｆａｇｈｕＮｏｍａｉｅｓｔ（ｔＳｉ）ｏｒａｎｚｏｒｌｏＺｈＵｎｖｒｉｙＮａ．ｃ．
Ｎｏ４２１．．００年
ＧｅｅａｎｒｌＮＯ．７０
（ｅａｔｎｏｄａｄＢｏｇｎｉｅｒｇＺａｇｈｕｒｆｓｎａｄＴｃｎｌｙＩｓｔｔＺａｇｈｕＦｊｎ６００ＣｉａＤｐｒｍｅｔｆｏｉｏｙｇｅｉ，ｈｎｚｏｏｅｉｎｅｈｏｏｔｕｅｈｎｚｏ，ｕｉ３０，ｈｎ）ｏＦｎｌＥｎｎＰｓｏｇｎｉ，ａ３