免疫学新技术的应用-20161107
免疫学的新技术与应用
免疫学的新技术与应用免疫学是研究生物体抵御外来病原体侵袭的科学。
近年来，随着基因测序技术的发展和生物信息学的兴起，免疫学也迎来了新的技术和应用。
本文将介绍免疫学的新技术和应用，包括单细胞RNA测序、免疫组织化学、CAR-T细胞治疗等。
这些新技术和应用为免疫学研究提供了更广阔的视野和更深入的理解。
一、单细胞RNA测序单细胞RNA测序技术可以帮助研究人员深入了解单个免疫细胞的基因表达谱，从而更好地理解免疫细胞的类型、特性和功能。
这项技术最初被应用于神经科学领域，但现在已经被广泛应用于免疫学研究中。
通过单细胞RNA测序技术，研究人员可以分析单个免疫细胞的基因表达谱，并将其与其他免疫细胞进行比较，以便深入研究免疫细胞的类型、特性和功能。
二、免疫组织化学免疫组织化学是一种广泛应用于临床和基础研究中的技术。
通过这项技术，研究人员可以在组织层面上研究免疫系统的结构和功能。
免疫组织化学技术可以通过染色或荧光标记来检测免疫细胞、炎症标志物、免疫介导物等，从而揭示免疫细胞和其他生物分子在免疫系统中的作用和相互关系。
三、CAR-T细胞治疗CAR-T细胞治疗是一项新兴的免疫治疗技术。
这项技术利用人工改造的T细胞，使其能够识别并攻击癌细胞。
CAR-T细胞治疗已在治疗淋巴瘤和某些白血病患者中取得了良好的临床疗效。
此外，CAR-T细胞治疗研究正在向其他类型的癌症扩展，如肺癌、前列腺癌等。
与传统的化疗和放疗相比，CAR-T细胞治疗具有明显的优势，包括疗效更好、副作用较少等。
四、免疫基因组学免疫基因组学是一项重要的技术和应用。
通过分析免疫细胞的基因组，免疫基因组学可以揭示免疫系统的结构和功能，尤其是免疫细胞的分化、各种免疫细胞亚型的发育轨迹和功能转化等。
目前，免疫基因组学技术正在迅速发展，包括全基因组测序、RNA测序、单细胞测序等。
这些方法已广泛应用于基础免疫学和临床免疫学研究中。
五、疫苗设计疫苗设计是免疫学中一项重要的技术和应用。
免疫学新进展与应用
免疫学新进展与应用免疫学是研究生物体在抵御感染、过敏、肿瘤和自身免疫性疾病等方面的原则和机制的学科。
随着人类对免疫系统认识的不断深入，免疫学在医疗、药物和生产等领域已经取得了重大急变化与进展。
一、免疫学研究的新进展1. 免疫治疗免疫治疗是一种新兴的治疗方式，其主要以人体免疫系统为基础，通过激发和加强病人自身的免疫功能来攻击疾病。
在免疫治疗中，通过人工制备的生物制品或药物，对免疫系统进行调节，以达到增强或抑制免疫系统的效果。
这种治疗方法具有疗效高、治疗速度快、副作用小等优点，并已经在治疗多种恶性肿瘤、过敏性疾病、神经性疾病等方面得到了广泛应用。
2. 免疫监测现代医学技术的发展和应用，使得免疫监测成为了一种新的研究手段。
免疫监测可以通过检测免疫系统的相关指标，如免疫细胞的数量、分布和功能、各种免疫分子和细胞因子的产生量等指标，及时发现疾病的发展过程，以及治疗效果是否达到预期目标。
免疫监测可以帮助医生了解患者免疫状况，及时调整治疗方案，提高治疗成功率。
3. 免疫遗传学免疫遗传学是研究免疫系统相关基因在疾病发生和发展等方面的作用和机制的学科。
它将免疫学、生物学和遗传学相结合，通过分子生物学技术和基因芯片等手段，研究免疫系统中的相关基因和其表达，探讨免疫系统遗传因素对疾病的影响，以及发现新的治疗方法和靶点。
在肿瘤、自身免疫疾病、过敏性疾病等方面，免疫遗传学已经为疾病的早期诊断和治疗提供了新的思路。
二、免疫学应用的发展1. 肿瘤免疫疗法在肿瘤的治疗中，免疫疗法已成为一种重要的治疗策略。
肿瘤细胞会通过抑制免疫系统的功能，来逃避身体的免疫监控。
而免疫疗法则是通过人工激活和加强免疫系统，以攻击并杀死恶性肿瘤细胞。
针对肿瘤细胞表面的免疫调节分子，如PD-1、CTLA-4等，人们研发出了一批有效的抗体药物，并已经在人类肿瘤治疗中得到广泛应用。
同时，CAR-T细胞免疫疗法也是当前肿瘤免疫疗法发展的重要方向之一。
2. 免疫诊断免疫诊断是一种基于免疫反应的诊断方法，它可以检测微小的抗原和抗体，具有灵敏度和特异性极高的优点。
免疫学研究中的新技术和方法
免疫学研究中的新技术和方法随着人们对健康的关注日益增加，医学研究也越来越重视免疫学领域的发展。
近年来，免疫学研究中出现了许多新的技术和方法，这些技术和方法对于研究免疫系统的功能机制和疾病的发生机理有着重要的作用。
下面，我们将针对免疫学研究中的新技术和方法进行阐述。
一、免疫细胞检测技术免疫细胞检测技术是一种比较成熟的方法，可以通过检测免疫细胞的表面标志物，对免疫系统的功能状态进行分析。
目前，免疫细胞检测技术已经涵盖了多种细胞类型，比如T细胞、B细胞、自然杀伤细胞等。
免疫细胞检测技术的主要应用场景包括：免疫缺陷病理学、免疫治疗、肿瘤学、传染病学等。
在免疫细胞检测技术中，单克隆抗体成为了一种重要的研究工具。
单克隆抗体具有高度的特异性，可以识别并结合细胞表面的特定分子，从而帮助研究人员对细胞进行定量和定位的分析。
此外，现在也出现了一些快速检测方法，比如流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术等，这些方法可以大幅度提高细胞检测的精度和效率。
二、细胞之间交流的研究方法免疫系统中的细胞之间会通过分泌细胞因子来进行信息交流。
在疾病状态下，某些细胞的分泌因子水平与正常情况下有所不同，因此研究这些细胞因子的分泌机理和调控机制对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
一些新的技术和方法被用于免疫细胞因子的研究中。
比如，ELISA技术可以用于定量测定细胞因子的含量，从而帮助研究人员评估不同状态下免疫细胞因子的分泌情况。
此外，新型的多重分析技术，例如速率显微镜、质谱分析技术等，可以帮助研究人员探测细胞因子之间的相互作用和调节机制。
三、基因工程技术基因工程技术在免疫学研究中得到了广泛的应用。
研究人员可以通过改变细胞表面分子的表达，来探究这些分子在免疫功能中的作用。
为此，研究人员可以利用基因编辑技术，通过特定的剪切核酸或CRISPR技术来精确编辑特定基因的表达。
如此可以有效地改变免疫细胞的表面表现，从而实现抗肿瘤、抗病毒等免疫治疗的目的。
此外，基因芯片和RNA测序等技术也为研究人员提供了一种有效的分析工具。
免疫学研究方法的新进展和应用
免疫学研究方法的新进展和应用免疫学是现代医学领域的一个重要分支，它主要研究生物体对抗病原体的免疫机制。
免疫系统包括多种细胞、分子和组织，其功能涉及到人体健康的众多方面。
近年来，随着科技的不断进步和发展，免疫学研究方法也在不断创新和改进，为抗疾病、护健康提供了更多的手段和技术。
一、单细胞技术单细胞技术是近年来免疫学研究中的一大进展，它可以对某些具有重要功能的细胞进行单个细胞层析和分析，避免了多细胞混杂而造成的数据误差和掩盖。
单细胞技术的应用使得免疫学研究得以更加深入，例如可以更好地了解抗体的形成、各类淋巴细胞的功能及其与肿瘤、自身免疫性疾病的关系等。
二、细胞流式技术细胞流式技术是一种基于单细胞的免疫学检测工具，它依赖于自动化设备实现多个参数的单细胞检测和分析。
细胞流式技术将光源与荧光探针紧密结合，使得检测精度更高。
同时，该技术也可以用于病毒、细菌的检测和分析，具有引领性的科学和应用价值。
三、免疫组化与细胞图像技术免疫组化技术以其高灵敏度的特点，被广泛用于病理诊断和药物研发。
在免疫组化技术的基础上，细胞图像技术更加突出了分子和细胞定位的重要性，能够对生物分子和细胞的特异性分子或者某项基因表达情况进行检测，为研究细胞的基本行为提供了有效手段。
四、抗原刺激诱导免疫细胞分离技术抗原刺激诱导免疫细胞分离技术是近年来非常新颖的技术方法。
该技术基于单个抗原上的高度特异性，可以有效地将免疫反应中所有与该特定抗原相关的免疫细胞分离出来，具有极高的分离纯度。
该技术不仅可以发掘已知和未知的新靶点，并且能够用于体外筛选多肽和激动剂，对免疫抗肿瘤治疗等方面的研究有着重要的意义。
五、多能免疫疗法多能免疫疗法充分利用了单细胞技术和制备技术的结合，即选取具有特定功能的单细胞进行操作和改造，再进行规模化制备。
这种技术能够开发出针对多个细胞表面分子的结合和重组抗体，为肿瘤等多种免疫疗法的研究提供了新的思路和方向。
总的来说，免疫学研究方法的新进展和应用，不仅要求我们具备先进和不断革新的技术手段，也需要我们不断深入地了解免疫学基础、挖掘免疫机制的本质，这样才能更好地推动免疫学研究的深入发展。
免疫学中的新技术与新突破
免疫学中的新技术与新突破免疫学是一门研究人体免疫系统的学科，它对于人类的健康至关重要。
近年来，随着科技的进步，免疫学的研究也取得了一系列的新技术和新突破，为人类疾病的治疗和预防提供了更多的选择和可能。
一、单细胞技术的应用单细胞技术是一项新兴的技术，它能够将细胞按照不同的特征分离开来，以获取更为准确的数据。
在免疫学中，单细胞技术的应用可以对免疫细胞的类型、数量和功能进行更加深入的研究。
例如，最近一项名为“人类细胞图谱计划”的研究项目，运用单细胞技术对人类免疫细胞进行了高通量筛查，揭示了免疫系统内部的细胞组成和功能等重要信息，推动了人类免疫学研究的进一步深入。
此外，单细胞技术还可以应用于疾病的诊断和治疗。
例如，在癌症研究中，通过单细胞技术可以检测到癌细胞中的各种不同类型，从而为治疗提供更加精准和个性化的方案。
二、免疫基因工程的发展免疫基因工程是指将基因工程技术应用于免疫学领域，以开拓新的治疗手段。
其中最具代表性的就是免疫细胞治疗（Immunotherapy）。
免疫细胞治疗利用基因编辑技术改变免疫细胞的DNA序列，使免疫细胞可以攻击癌细胞等外来入侵物。
例如，经过基因编辑的T细胞就可以自主识别和消灭早期肿瘤，从而有效提高癌症患者的存活率。
此外，免疫基因工程还可以应用于预防疾病。
例如，在传染病的防治中，用病毒载体将免疫细胞的基因改造，使其能够有效识别和消灭病毒，从而达到预防传染病的目的。
三、免疫组学的发展免疫组学是指通过对免疫系统内部各种分子进行全面、系统的研究，以深入了解其结构、特点及功能。
免疫组学的研究成果不仅有助于人类理解免疫系统的运作机制，还可以引发对疾病的深入探究和新型治疗策略的开发。
例如，最近一项针对人类免疫系统的“深度免疫组学研究”发现，免疫系统中的一类细胞——T细胞存在着不同的表型和功能，这为临床上提供了新的治疗思路。
此外，免疫组学的研究也可以帮助人类对抗疫情。
例如，可以通过免疫组学技术分析病毒和免疫系统之间的相互作用，了解病毒如何在人体内传播和影响免疫系统，从而为制定防疫策略提供更加科学的依据。
免疫学中的新突破和应用
免疫学中的新突破和应用免疫学是研究生物在抵御感染和肿瘤方面的防御机制，发现并应用有效的免疫治疗手段是这个领域最重要的目标之一。
近年来，免疫学领域发生了令人瞩目的一些新突破，这些突破不仅丰富了我们对免疫系统的了解，还为开发更加有效的治疗手段提供了更多的可能。
本文将会介绍免疫学中的一些新突破和应用。
1. 免疫记忆和疫苗研究免疫记忆是指免疫系统中存留下来的记忆细胞，这些细胞能够持续保护肉体免受致命感染。
通俗地说，免疫记忆就像是一个人的兵库，存储着已经学习到的“战斗经验”，下次再遇到同样的病原体时能够直接出击，从而迅速有效地击败入侵者。
免疫记忆的存在是疫苗接种的基础。
近年来，科学家们在疫苗研究方面做出了一些新的探索。
疫苗的基本原理就是通过引入病原体的外壳（比如病毒或细菌等）或其中的一部分，让人体免疫系统生成对其的应答，从而建立一种持久的免疫保护。
但之前的疫苗在某些情况下并不够有效，原因在于人体免疫系统对于病程短暂或是仅仅打败了一部分入侵病原体的感染并不会生成足够的免疫反应。
这种问题被称为非经验性免疫——无法通过免疫系统的记忆来应对外部刺激。
最近，一些研究人员发现，只有在与白细胞捆绑后才能触发免疫响应的新型疫苗或许能够解决这些问题。
他们在研究这种疫苗时发现，白细胞一旦与疫苗结合后，就会释放一些信号分子，这些信号分子会刺激免疫系统生成充分的免疫反应，从而满足对于病原体的有效保护。
2. 免疫治疗肿瘤免疫治疗是指利用人体免疫系统抵御癌症的一种方法。
癌症细胞可以通过很多方式逃脱免疫系统的攻击，但是对于某些患者来说，免疫治疗可能是生命的救赎。
免疫疗法的基本原理是在患者体内引入某些物质来激活或改变免疫系统的工作，从而使癌症细胞暴露于免疫系统的攻击下。
其中有一种治疗方法叫T细胞免疫疗法。
这种疗法是在患者体内提取出一部分T细胞后，人工培育这些细胞，使它们产生针对癌细胞的应答，再注射到患者体内。
这种方法目前已经获得了一定的成功，有些患者甚至在几个月的治疗后癌症得到了完全消失。
免疫学研究中的新进展与应用
免疫学研究中的新进展与应用免疫学是研究生物体免疫系统及其对疾病的防御和治疗作用的科学。
随着科技的不断进步和研究的不断发展，免疫学研究也取得了新的进展。
本文将介绍免疫学研究中的一些新进展与应用。
1. 免疫治疗免疫治疗是一种通过激活或抑制免疫系统来治疗疾病的方法。
例如，免疫检查点抑制剂是一类通过抑制肿瘤细胞对免疫系统的攻击保护机制，从而增强肿瘤治疗效果的治疗方法。
此外，还有一些利用细胞免疫学原理的治疗方法，如CAR-T 细胞疗法和T细胞受体基因治疗法。
这些方法可以使T细胞针对恶性肿瘤等疾病进行特异性攻击，从而达到治疗的效果。
2. 免疫组织化学技术免疫组织化学技术是通过特异性抗体和细胞免疫学原理来检测组织中免疫细胞、免疫因子和肿瘤等因素的方法。
这种技术广泛应用于生物医学研究中，例如了解细胞分化和病理分子机制。
3. 免疫信号转导免疫信号转导是研究免疫细胞如何接收、解释和响应不同类型的信号，以及这些信号是如何调节和协调免疫细胞的行为的基础。
通过了解免疫信号转导，可以开发新的治疗方法，例如使用抗体或小分子化合物来调节免疫信号的传递和活动。
4. 免疫计算机辅助设计免疫计算机辅助设计是利用计算机技术和人工智能算法来设计和评估新型药物和疫苗的方法。
这种方法可以在大数据和机器学习技术的帮助下，在短时间内生成大量候选药物和疫苗，从而加速药物研发的进展。
5. 免疫遗传学免疫遗传学是研究遗传变异如何影响免疫系统功能的学科。
通过免疫遗传学，可以了解不同人群对疾病的易感性和治疗的反应，从而个性化制定治疗方案。
例如，针对乙型肝炎病毒药物治疗的不同反应，就与免疫遗传学有关。
6. 免疫生物工程利用生物工程技术来改造和生产免疫蛋白，是免疫生物工程的研究方向之一。
例如，利用重组蛋白技术制备抗体、疫苗等免疫蛋白；利用蛋白合成工程技术设计新型免疫诊断方法等。
通过免疫生物工程的手段，可以生产大规模的、高效的和低成本的免疫蛋白，从而改善人类免疫系统的健康。
免疫学中的新技术和应用
免疫学中的新技术和应用免疫学是研究免疫系统及其功能的学科。
随着科学技术的不断进步，免疫学也在不断发展。
新技术的出现，使得我们能够更加深入地研究免疫系统、免疫疾病及其治疗方法等方面。
本文将探讨免疫学中的新技术和应用。
一、单细胞测序技术单细胞测序技术是指通过对单个细胞的遗传信息进行测序，来了解该细胞的特征和功能。
该技术可以帮助研究人员了解免疫系统中各种免疫细胞的分布、功能和数量，并深入了解各种免疫疾病的发生机理，有助于开发新的治疗方法。
例如，在研究肿瘤免疫治疗的过程中，单细胞测序技术可以帮助研究人员分析不同类型的T细胞，找到活跃的具有杀伤肿瘤细胞功能的T细胞，并了解它们的反应和数量，为个性化抗肿瘤治疗提供理论支持。
二、免疫分子成像技术免疫分子成像技术是一种新型的光学成像技术，可以在体内成像分子的分布和作用。
该技术被广泛用于研究免疫系统中的细胞、分子和信号通路。
例如，在研究免疫细胞在动态进程中的表现和功能时，免疫分子成像技术可以观察炎症细胞或免疫细胞在体内迁移，在不同组织中的定位，以及相对于其他细胞的位置和作用等。
这种技术可以提供更丰富的信息，为疾病的个性化治疗提供重要的参考。
三、基因编辑技术基因编辑技术是一种新兴的生物技术，可以精确地修改细胞或生物体中的基因结构，包括添加、删除或替换DNA序列。
该技术可以被用于研究免疫细胞的功能和特性，开发更有效的疫苗和免疫治疗方法。
例如，在研究免疫细胞与肿瘤的相互作用过程中，基因编辑技术可以将肿瘤细胞上的“遮盖物”撤销，使免疫细胞更有效地攻击肿瘤细胞。
此外，基因编辑技术还可以用于修复免疫系统中的错误或突变的基因，有望为免疫系统疾病的治疗提供新的可能性。
四、人工智能技术人工智能技术是一种新型的计算机科学技术，可以帮助研究人员分析大量的免疫数据和图像，发现其中的模式和规律。
该技术可以用于研究免疫系统中的基因、蛋白质和免疫细胞等方面，提高数据分析的效率和精度。
例如，在研究免疫细胞的功能和特性时，人工智能技术可以识别免疫细胞的表型、功能和受体等特征，预测免疫细胞在不同环境下的响应，并发现免疫细胞的调节机制和信号通路。
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定量分析抗原特异性CTL
• 1996年Altman等首创的可溶性MHC-肽四 聚复合物法
Ø 直接定量检测抗原特异性CTL的比率
• 2000年HLA I 型四聚体合成并投放市场。
原
理
• 多价分子可与多个TCR结合，解离速度减慢 • 借助生物素-亲和素级联放大原理构建了四聚体
Ø 长度为15个氨基酸的BirA底物肽（BSP）与人白细 胞抗原HLA-A2重链的羧基端形成融合蛋白 Ø 按一定比例与β微球蛋白及特异的抗原短肽共孵育， 使其折叠成正确的构象，成为pMHC Ø 使一个标记荧光素的链亲和素与4个生物素标记的 MHC肽复合物结合形成四聚体 Ø 四聚体与抗原特异性CTL上的TCR结合后，即可 以FACS检测
⒈ 应用正选抗体 ⒉ 不需要柱子 ⒊ 高纯度 ⒋ 操作简单快速 ⒌ FACS兼容，磁珠很小不 影响流式分析 ⒍ 采用直接标记法分选人的 细胞，采用间接标记法分选 其它种类动物细胞
v磁珠分离提纯生物大分子的原理
MHC多聚体技术
鉴定抗原特 异性T细胞 特异 高效 直接定量
vTCR与 MHC单体的 亲和力低，解离快，无 法用免疫荧光法标记
Ø 间接法
• 先使特异抗体结合在细胞表面，然后加入预先用抗鼠IgG （二抗）处理的磁性微球。 • 间接与靶细胞结合 • 适应范围广外，还可以使用一组单克隆抗体，因而会获 得更好的细胞清除效果 • 但要经过多次的洗涤步骤，特异性也会有所降低。
正选与负选
• 将不同浓度胃癌MGC-803细胞加入到健康 人外周血中 • 用淋巴细胞分离液收集单核细胞 • 并用种方法处理
免疫学新技术的应用
内容
• • • • 流式细胞仪技术 免疫磁珠分离技术（MACS） MHC多聚体 荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET) • 流式细胞成像技术 • 类流式组织细胞定量分析
FCM 是诸多技术的结晶:
v 激光技术
3 免疫磁性微球的制备、性能与作用原理
• （2）免疫磁性微球的作用原理
Ø 主要用于细胞分离 Ø 可以通过抗原抗体反应选择性地与靶物质结合， 当此化合物通过一个磁场装置时，与免疫磁性微 球结合的靶物质就会被磁场滞留，从而与其他复 杂物质分离开来。
3 免疫磁性微球的制备、性能与作用原理
• （3）免疫磁性微球的性能
v v v v v 电子物理技术 光电测量技术 计算机技术 细胞荧光化学技术 单克隆抗体技术
应用：
◆ 细胞膜：流动性、膜电位、膜通透性。 ◆ 细胞内离子浓度：H+、Na+、K+和Ca2+。 ◆ 细胞周期：全周期分析、S期分析、M期分析。 ◆ 细胞表面蛋白质分析：免疫细胞分型、其它表 面蛋白分析。 ◆ 细胞功能：如凋亡、抗药性。 ◆ 基因表达：内源及外源基因表达。 ◆ 细胞分选： ◆ 细胞克隆
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP) 的应用和改造
• GFP由11个β片层组成桶状构成疏水中心，由α 螺旋包含着的发光基团位于其中。这个发光基团 (chromophore)是由3个氨基酸（Ser65、Tyr66、 Gly67）经过环化、氧化后形成的咪唑环，在钙 离子激发下产生绿色荧光。 • 野生型GFP吸收紫外光和蓝光，发射绿光。 • 通过更换GFP生色团氨基酸、插入内含子、改变 碱基组成等基因工程操作，实现对GFP的改造 • 如增强其荧光强度和热稳定性、促进生色团的折 叠、改善荧光特性等。
荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)
• 检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变 化的有力工具，在生物大分子相互作用分析、细胞 生理研究、免疫分析等方面有着广泛的应用。 • 一些传统的研究方法不断发展，为蛋白质-蛋白质 间相互作用的研究提供了极为有利的条件，但同时 这些研究手段也存在不少缺陷：如酵母双杂交、磷 酸化抗体、免疫荧光、放射性标记等方法应用的前 提都是要破碎细胞或对细胞造成损伤，无法做到在 活细胞生理条件下实时的对细胞内蛋白质-蛋白质 间相互作用进行动态研究。FRET技术的应用结合 基因工程等技术正好弥补了这一缺陷。
FRET应用举例
• 检测酶活性变化 Ø 活细胞内检测蛋白激酶活性 Ø 关于细胞凋亡的研究 • 关于膜蛋白的研究 Ø 受体激活效应在细胞膜上的横向扩散 Ø 膜蛋白的定位修饰 Ø 细胞膜受体之间相互作用 • 细胞内分子之间相互作用
l
活细胞内检测蛋白激酶活性
Ø
检测酶活性变化
zhang等人利用FRET原理设计了一种新的探针（一种融合蛋白）：新探针 包含一个对已知蛋白激酶特异性的底物结构域，一个与磷酸化底物结构域 相结合的磷酸化识别结构域。这个探针蛋白的两端是GFP的衍生物CFP与 YFP，利用FRET原理工作。当底物结构域被磷酸化后，分子内部就会发生 磷酸化识别结构域与其结合而引起的内部折叠，两个荧光蛋白相互靠近就 会发生能量迁移。如果磷酸酶进行作用将其去磷酸化，分子就会发生可逆 性的变化。
Ø 可摄制电镜照片，经图象分析仪测定粒度的 大小与分布 Ø 或用激光粒度测定仪直接测定，可以获得大 小不等的纳米材料，最小可获得平均粒度为 几个纳米的磁性材料，粒度一般呈正态分布 Ø 还可用X衍射测定仪分析磁性纳米材料的结构， 用磁强计测定其磁化强度。
2 用磁性纳米材料制备磁性微球
• 磁性纳米粒和高分子骨架材料
MHC多聚体
链亲和素 藻红蛋白(PE )/别藻蓝蛋白(APC)
人 MHC-I类分子 有HLA-A0201,A0203, A1101, A2402, B0702,B0801 和 B2705 小鼠 MHC-I 类分子 有 H-2K b 和 H-2D d
MHC Class II Ultimers™ for detecting single antigen-specific CD4+ cells NEW DR2 and DR3 alleles available
3 免疫磁性微球的制备、性能与作用原理
• 微球与抗体的连接
Ø 吸附结合
• 依靠微球表面对抗体的非特异吸附力 • 只有在微球具有非常大的表面积时才有可能比较牢固 • 通过对其表面进行处理来提高它的抗体结合力，以保 证IMMS表面有足够的抗体
Ø 共价结合
• 共价结合依靠微球表面的活性基团与抗体共价反应 • 如果微球表面有活性基团，就会通过较慢的化学反应 共价结合在磁性微球的表面。
Ø 化学性能稳定，不产生凝聚 Ø 不与细胞发生非特异性的结合 Ø 磁性微球与抗体的结合牢固 Ø 磁性微球的大小均匀，磁响应性好，磁性纳米材 料的含量均匀一致 Ø 磁性微球大小适当，不易被细胞所吞噬。
3 免疫磁性微球的制备、性能与作用原理
• （4）免疫磁性微球与细胞的结合方法 Ø 直接法
• 抗体直接连在磁性微球上，然后与靶细胞结合 • 可以减少洗涤和培养步骤，但对IgM单抗很少能使用。
FRET对
• 青色荧光蛋白 • 黄色荧光蛋白
cyan fluorescent protein, CFP
• yellow fluorescent protein, YFP
• 目前蛋白-蛋白相互作用 研究中最广泛应用
• CFP的发射光谱与YFP 的吸收光谱相重叠。
v将供体蛋白CFG和受体蛋 白YFG分别与两种目的蛋白 融合表达。 v当两个融合蛋白之间的距 离在5-10nm的范围内，则供 体CFP发出的荧光可被YFP 吸收，并激发YFP发出黄色 荧光 v此时通过测量CFP荧光强 度的损失量来确定这两个蛋 白是否相互作用。 v两个蛋白距离越近，CFP 所发出的荧光被YFP接收的 量就越多
vHLA-DR2 (DRA1*0101, DRB1*1501) vHLA-DR3 (DRA1*0101, DRB1*0301) vHLA-DR1 (DRA1*0101, DRB1*0101) vHLA-DR4 (DRA1*0101, DRB1*0401)
(1) DRB1*0101-restricted tetramer containing peptide derived from Influenza hemagluttinin (DR1/HA 306-318) was tested on a T cell clone specific for this epitope. (2) The same test was carried out with the ProImmune DR1/HA-restricted Class II Ultimer™. (3) The same test with a DR4/HA negative control.
Ø 高分子材料 • 聚苯乙烯、硅烷、聚一烯、聚丙烯酸、淀粉、 葡聚糖、明胶、白蛋白、乙基纤维素等。 • 有天然的也有合成 • 可以单独应用也可以合用 • 这些骨架材料应该性质稳定、强度较高、无 毒副作用。
聚苯乙烯磁性微球
2 用磁性纳米材料制备磁性微球
• 可分为一步法和二步法：
Ø 一步法是在成球前即加入磁性纳米材料，成 球时聚合物将其包裹于其中； Ø 二步法是先制备非磁性小球，然后通过处理 使磁性材料进入其中，最后磁性纳米粒以分 散的形式存在微球的骨架材料中。
免疫磁珠分离技术（MACS）
• 磁性微球 • 免疫磁性微球 • 磁性纳米材料
1 磁性纳米材料的制备与性能
• 常用的磁性材料
Ø 三氧化二铁、四氧化三铁、铁钴合金等 Ø 较好的磁响应性 Ø 采用适当的方式可以得到纳米磁性材料
• 取一定量的磁性材料分别溶于适量的蒸馏水中，过 滤后混合，加入一定量蒸馏水稀释，搅拌均匀，加 入适当的表面活性剂作为分散剂。放置于磁铁上， 使氧化铁颗粒沉降，除去上层清液，再加入分散剂 的水溶液适量，用超声波分散，过滤，即得氧化铁 磁性纳米粒的色胶体溶液。
Ø A方法，用CD45磁珠去除白细胞；负选 Ø B方法，用Ber-EP4磁珠富集癌细胞；正选