环境工程微生物实验指导书-图文
微生物学实验指导书(1-5)
微生物学实验指导书目录实验一实验室环境和人体表面微生物的检查 (2)实验二普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 (5)实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色 (12)实验四放线菌和真菌的制片、染色和形态观察 (16)实验五酵母菌形态观察与死活细胞鉴别及显微镜直接计数法 (20)生命科学学院微生物学教研室编写实验一实验室环境和人体表面微生物的检查微生物以其微小的形体广泛地分布在自然环境的各个角落，包括空气、土壤、水、动植物、人体的体表和某些脏器。
在有人群活动的场所，特别是人口密度相对大的一些地方，如：商场、影剧院、会议室、教室、实验室等都会散落着细菌的营养体、芽孢和霉菌的孢子。
只不过因为它们体积太微小（细菌的大小在1~10μm之间），远远低于人肉眼的分辨极限（人眼的正常分辨能力一般为0.25mm，即250μm），而看不见它们，但它们确实真实存在。
由于空气、器具、器皿、人体体表等处缺乏微生物进行繁衍所需要的足够水分和营养物，它们只是“暂居”于此。
一旦满足它们的营养要求，在适宜的温度条件下，它们将迅速地生长、繁殖，其“子孙后代”将会聚集在一起，形成一个人眼可见的群体——菌落。
不同微生物形成的菌落差异很大，人们可根据菌落的形状、大小、质地、颜色对它们进行表观的判断和认识。
不同环境条件中栖息的微生物有所不同，有些是对人无害的腐生菌，有些是致病菌，有些则是改变条件才可致病的条件致病菌。
本实验是对初学者的入门实验，通过从实验室内空气、实验者的头发、皮肤、手指、钱币等处取样，接种于营养琼脂培养基，37°C培养1~2天，可验证微生物的存在，并观察微生物菌落的形态和数量。
一、实验器材1.培养基肉膏蛋白胨琼脂平板。
2.溶液和试剂无菌水。
3.仪器和其他用品灭菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。
二、目的要求1.通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物。
2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特征。
环境工程微生物学实验
实验器材
（1）活材料：培养18h的大肠杆菌（E. coli）培养液。 （2）培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支 (每支10ml)，浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养基。无菌 酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 （3）器材：1ml无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、 标签等。
实验方法
1、接种：按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2 ml 的大肠杆菌培养液。 2、培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下 振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1.5、3、5、 7、9、12、24和36h后取出，放冰箱中贮存，待测定。 3、比浊：以未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基调零 点，在光电比色计上，选用520～560nm波长进行比浊， 从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。
实验步骤
1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无 菌培养皿内(每皿约10～
15毫升)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。
2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取大肠杆菌和活性污泥 各一环分别在4个平板上各点种4个点。倒置于37℃恒温箱内培 养24～48h。
3．观察结果，取出平板，分别在2个平板内菌落周围滴加碘液， 观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈， 说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝 色，说明该细菌不产生淀粉酶。
实验器材
1．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 2．仪器：电炉、恒温水浴锅．恒温培养箱．放大 镜。 3．试剂：硫代硫酸钠溶液。 4．其他用品：无菌采样瓶，9ml无菌水试管，无菌 培养皿(直径9cm)，无菌移液管等。
实验步骤
1．水样采取 2．细菌总数测定 (1) 水样稀释：根据水样受有机物或粪便污染的程度，可用无
3．高倍镜观察
环境工程微生物学实验
间歇灭菌法：
即常压灭菌，用于一些受高温而破坏的培养基的灭 菌。 操作方法： a. 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1 次，每次在100℃煮沸30～60min，连续3d重复进 行。 b. 在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在 37℃恒温条件下培养24h，这样可以使每次蒸煮后 未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时 杀灭。 c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要 放在 37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
注意：a. 前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分 b. 蛋白胨、肉膏可加热促进溶解 c. 加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当补充 因蒸发而损失的水量。
3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.2~7.4，用精密pH试纸对 照。
4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁 热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可 省略。
显微镜的使用
二、对光
3．转动转换器，使低倍物 镜对准通光孔(物镜的前端 与载物台要保持5厘米的距 离 )。
显微镜的使用
三、观察
5．把所要观察的玻片 标本放在 载物台上，用 压片夹压住，标本要正 对通光孔的中心。
显微镜的使用
6．转动粗准焦螺旋，使 镜筒缓缓下降，直到物镜 接近玻片标本为止（眼 睛看着物镜，以免物镜碰 到玻片标本）。 7．向目镜内看，同时反 方向转动粗准焦螺旋，使 镜筒缓缓上升，直到看清 物像为止。再略微转动细 准焦螺旋，使看到的物像 更加清晰。
环境工程微生物学实验
实验一
一、显微镜的结构
机械部分
显微镜
镜座、镜柱、镜臂、 镜筒
倾斜关节、转换器
载物台 目镜、物镜
光学部分
成信工环境工程微生物学实验指导02微生物的染色技术
实验二微生物的染色技术一、实验目的（一）了解微生物的染色原理。
（二）学习微生物涂片染色操作技术。
（三）掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。
二、染色原理微生物（尤其是细菌）的机体是无色透明的，在显微镜下，由于光源是自然光，使微生物体与其背景反差小，不易看清微生物的形态和结构，若增加其反差，微生物的形态就可看得清楚。
通常用染料将菌体染上颜色以增加反差，便于观察。
革兰氏染色法（复染色法或鉴别染色法）用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。
主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。
抗酸性染色法多在医学上采用。
此处介绍革兰氏染色法。
革兰氏染色法是细菌学中很重要的一种鉴别染色法，它可将细菌区别为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
革兰染色结果是由细菌的细胞壁决定的。
革兰阳性细菌的细胞壁肽聚糖含量高且呈网状结构，细胞壁较厚，类脂质含量低；革兰阴性细菌的细胞壁肽聚糖含量低，细胞壁薄，类脂质含量高。
前者用酒精脱色时，细胞壁因脱水肽聚糖层网孔变小，其通透性降低，使结晶紫-碘的复合物不易被抽取而继续留在细胞内，经脱色和复染后仍保留着初染剂结晶紫的颜色（紫色）；后者用酒精脱色时，类脂质被酒精溶解，细胞壁通透性增大，使结晶紫-碘的复合物易被抽取出来，紫色褪去，用复染剂复染后，细胞的颜色即呈复剂的颜色（红色）。
革兰染色最关键的步骤是酒精脱色。
事实上，用结晶紫进行初染时所有的细菌都被染成紫色。
碘是一种媒染剂，能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，以增强染料与细菌的结合力。
只有经过酒精处理，再经复染，不同的细菌才会显现出不同的染色结果。
三、实验仪器、材料（一）显微镜、香柏油（或液体石蜡）、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯（或煤气灯）。
（二）石炭酸复红（品红）染液、草酸铵结晶紫染液、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液1（三）菌种：枯草杆菌、大肠杆菌、活性污泥等四、实验内容和步骤革兰氏染色步骤（图4）1．取大肠杆菌和枯草杆菌（均以无菌操作）分别做涂片、干燥、固定。
环境工程微生物学实验讲解
环境工程微生物学实验讲义实验一光学显微镜的使用一、目的要求1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。
2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。
3、学习生物图的绘制方法二、实验内容学习普通光学显微镜的使用方法，学会判断是否需要使用油镜，学习理解，学习怎样使用和利用光圈，反光镜，调整反差，使视野达到最好的观察效果。
学习使用油镜观察微生物标本示范片。
观察的示范片有，细菌三型涂片、葡萄球菌涂片、枯草芽孢杆菌涂片、褐球固氮菌涂片、八叠球菌涂片、猪链球菌涂片，青霉、曲霉示范片等。
三、实验器材显微镜、各种示范片、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。
四、方法步骤1 用低倍镜对（调）光，使视野明亮。
2 选择要观察的标本片，首先在低倍镜观察（寻找观察目标）。
3 高倍镜观察（选取理想的观察目标）。
4 油镜观察：高倍镜观察后――上升镜筒（或者是下调载物台）――油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴香柏油――小心地下降镜筒使镜头浸在油里――用粗螺旋将镜筒（载物台）缓慢上升，寻找目标（物象）――用细螺旋调节，使物象清晰――观察记录。
5 观察完毕。
上升镜筒（或者是下调载物台），转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。
用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。
6 将显微镜各部分还原至进实验室时模样。
五 结果与思考1 绘图记录观察结果（以细菌三型为例）细菌三型涂片观察放大倍数 目×10 物×100_细菌三型涂片观察放大倍数目×10 物×1002 油镜完毕后，镜头应如何处理?六、讲解时的注意事项：1、本次实验为学生第一次进入微生物实验室，因此在开始实验时必须向学生交代实验室的一些规章制度及注意事项。
2、对显微镜的介绍从原理到各部件到使用都务必详细，包括使用过程中应该注意的事项，尽量减少学生用坏仪器的几率。
3、一定要详细讲解观察时视野内的反差调节，提高学生的实验效率。
微生物实验指导书
微生物实验指导书实验一普通光学显微镜的使用维护一、实验目的：1、掌握显微镜的构造原理及性能。
2、纯熟掌握显微镜的操作方法3、初步了解血球计数板的使用方法。
二、实验原理：1、显微镜的实验原理：普通光学显微镜运用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这重要有如下二方面的因素：①增长照明亮度②增长显微镜的分辨率。
2、血球计数板的构造原理：血球计数板是一块特制的厚的载玻片，其上由四条竖槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短的横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格为计数室。
计数室的刻度有两种规格即16×25或25×16的。
现在常用25×16的，即计数室（一个大方格）提成25个中方格，每个中方格由分为16个小方格。
1、仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、血球计数板2、材料：擦镜纸、元葱四、实验环节：（一）显微镜练习：1、制片：用牙签挑少许元葱表皮放在载玻片上，然后加盖盖玻片。
2、观测：低倍镜高倍镜（二）血球计数板的练习：先用低倍镜查找中方格，再用高倍镜查找小方格，按照左上、左下、右上、右下、中心格练习。
实验二革兰氏染色法一、目的规定了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。
二、基本原理革兰氏染色反映是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创建的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观测到细菌的形态并且还可将所有细菌区分为两大类：染色反映呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表达；染色反映呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表达。
基础科学环境微生物实验指导书叶劲松
《环境微生物学》实验指导书叶劲松编合肥学院生物与环境工程系2010年8月目录实验室规则1实验一空玻璃器皿的洗涤、包装和灭菌，无菌水的制备2实验二培养基的制备和灭菌6实验三微生物计数、分离培养9实验四光学显微镜使用、微生物形态观察和染色技术16实验五环境表面卫生学指标的测定和特定功能微生物的筛选20实验室规则1)实验室是办学的基本条件之一，是师生进行科学实验、开展教研科技活动，培养实验能力的重要场所。
进入实验室要自觉遵守纪律不得喧哗吵闹，保持肃静，有秩序地入座。
2)实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3)实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4)实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品（尤其是NaOH）洒落在天平、实验台面和地上。
毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5)配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。
6)配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必须严密封口。
7)配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缶或冲稀后排放。
电泳后的凝胶和各种废物不得倒入水池，只能倒入废物桶。
8)使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。
使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。
仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。
9)实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。
易燃液体不得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进行。
环境生物学实验指导书
实验一普通光学显微镜的使用及其对微生物一般形态的观察一、实验目的1．了解普通光学显微镜的构造及其各部分的作用。
2．掌握普通光学显微镜的正确使用和维护方法。
3．通过低倍镜、高倍镜观察藻类、酵母培养液和新鲜活性污泥中微生物的一般形态。
二、实验原理普通光学显微镜由机械部分和光学部分组成。
图1-1 双目生物显微镜1．机械部分：（1）镜筒：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。
镜筒的上端可插入目镜，下面与转换器相连。
（2）转换器：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。
有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的物镜。
（3）载物台：载物台是放置标本的方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。
（4）调焦手轮：包括粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下升降，调节物镜和标本之间的距离。
2．光学部分：（1）目镜：放在镜筒上，配有10倍（10×）、16倍（16×）两种。
（2）物镜：装在转换器的孔上，有低倍镜（4、10）、高倍镜（40）和油镜（100），是N ）及所要求盖玻片显微镜中最主要的部分。
各种镜头上都刻有放大倍数和数值孔径（A厚度等主要参数。
物镜的性能由数值孔径决定，并且还依赖于物镜的分辨率。
（3）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。
聚光镜的作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。
孔径光阑是用来调节对比度的，使物镜和聚光器的数值孔径相符合。
当孔径光阑开启到物镜出瞳的70~80%时，就可以得到足够对比度的良好图象。
如果开得太大，超过物镜的数值孔径，就会产生光斑；如果开得太小，则分辨率下降，降低物像的清晰度。
（4）电光源：在显微镜的下部，提供观察标本时所用光源。
三、实验器材1．普通光学显微镜（双目生物显微镜）2．载玻片、盖玻片若干3．玻璃棒、滴管4．滤纸、擦镜纸5．藻类、酵母培养液，新鲜活性污泥四、实验方法１．低倍镜的操作（１）首先把目镜放入镜筒上，将物镜（4、10、40、100）旋紧在转换器上。
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环境工程微生物实验指导书-图文实验一光学显微镜的操作及细菌形态观察1.1实验目的(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。
(2)观察几种典型细菌的形态与构造，学会绘制微生物图。
1.2实验器材显微镜、二甲苯、香柏油、载玻片、盖玻片、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、球衣菌、假单胞菌、固氮菌标本片。
1.3显微镜的结构及其操作方法1.3.1普通光学显微镜(LightMicrocope)1.3.1.1光学显微镜的结构和各部件作用观察、检验微生物通常用光学生物显微镜（见图1-1），显微镜分机械装置和光学系统两部分。
一机械装置(1)镜筒：镜筒长度一般是160cm。
它的上端装目镜，下端装物镜回转板。
回转板上一般有三个物镜。
(2)转换器：位于镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个孔或5个孔。
不同规格的物镜分别安装在各孔上。
(3)载物台：载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。
两旁有弹簧夹，用以固定标本或载破片。
有的载物台上装有自动推物器。
(4)调节器：镜筒旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒，调节物镜与被观察物体之间的距离。
二光学光学系统（1）目镜：一般使用的显微镜具有2—3个目镜，其上刻有“5某”、“10某”、“15某”(或“16某”)等数字及符号，意即放大5倍、10倍、15倍(16倍)。
这三种透镜的焦距分别为50mm、25nn、16mm，线视场分别为20mm、14mm、10mm。
（2）物镜：物镜装在回转板上，可分为低倍物镜、高倍物镜和油镜三种。
相应的放大倍数是10某（5某）、40某（50某）、100某（90某），相应的工作距离是7.63mm、0.5mm、0.198mm，物镜上常标注数值孔径（N.A）。
使用低倍镜和高倍镜时，一般做活体观察，不进行染色。
在观察原生动物时，低倍镜主要用来观察全部原生动物的种类和观察它的活动状态，而高倍镜则可以看清楚微生物的结构特征。
油镜在大多数情况下是用来观察染色的涂片。
（3）集光器集光器在载物台的下面，用来集合反光镜反射来的光线。
集光器可以上下调整，中央装有光圈，可以调整光线的强弱。
当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。
（4）反光镜反光镜装在显微镜的最下方，有平凹面反光镜。
1.3.1.2光学显微镜的分辨率与放大倍数显微镜的分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。
光学显微镜的分辨2率受光干涉现象的限制。
分辨率（最小可分辨距离）=1/2光波波长/数值孔径（1-1）D=λ/2n·in(α/2)（1-2）N.A.=nSin(α/2)（1-3）式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。
N.A：数值孔径。
λ：可见光的波长（平均0.55mm）。
n：物镜和被检标本间介质的折射率。
a：镜口角（即入射角），该角度决定于物镜的直径和焦距见图（1-2）。
例如：最大入射角为120°，其半角的正弦为in60=0.87，以空气为介质时，N.A=1某0.87=0.87；以水为介质时，N.A.=1.33某0.87=1.15；以香柏油为介质时，N.A.=1.52某0.87=1.31，见图（1-3）。
肉眼所能感受光波的波长从200mm（紫光）到700nm（红光）。
设感受光波的平均长度为550nm（0.55um），N.A.=1.25，则分辨率=1/2某0.55/1.25=0.22um，而细菌大小从0.5～2um，故正好看到细菌。
用紫光光源效果更好。
显微镜的总放大倍数等于物镜与目镜放大倍数的乘积。
即：显微镜的放大倍数=接物镜放大倍数某接目镜放大倍数观察微生物时，常用放大10倍或15倍的目镜。
目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察，主要是指使用不同物镜而言。
例如使用10某目镜和40某物镜（高倍镜）所得物象的放大倍数是400倍。
油镜的放大倍数是最大的（90`或100倍）。
放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，从标本片透过来的光线，因介质密度不同（从标本片进入空气，再进入油镜），有些光线因折射或全反射，不能进入镜头，致使进入的光线较少，物象显相不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，须在物镜和标本片中间加入与玻璃折射率（n=1.52）相仿的油（香柏油，n=1.55）。
因为这种物镜使用时须加香柏油，所以我们称它为油镜。
一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油，所以也称干镜。
31.3.1.3光学显微镜的使用与保管一低倍镜的使用方法（1）置显微镜于固定的桌上，窗外不宜有障碍视线之物：（2）拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒连接而直对；（4）把载玻片放在裁物台上，要观察的标本放在圆孔的正中央；（5）将粗调节器向下旋转，同时眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰。
当物镜的下端距离载玻片约0.5cm时即停止旋转；（6）把粗调节器向上旋转，同时左眼向目镜里观察，如标本片现出不清楚，可用细调节器调至标本片完全清楚为止；（7）假如因调节器旋转太快，超过聚焦点，以至标本不出现时，不应在眼睛注视目镜的情况下向下旋转粗调节器，必须从第(5)步做起，以防物镜与载玻片接触，损坏物镜；（8）在观察时最好练习两眼同时睁开，用左眼看显微镜，右眼看桌上的纸，便于一面看一面画出所观察的物象。
二高倍镜的使用方法(1)使用高倍镜前，先用低倍镜观察，要把观察的标本放到视野中央；(2)拨动回转板使高倍镜和低倍两镜镜头互相对换，当高倍镜移向载玻片上方时必须4注意是否因高倍镜靠近的缘故而使载玻片也随着移动，如有移动现象，应立即停止推动回转板，把高倍竟退回原处，按照使用低倍镜的方法，校正标本的位置，然后旋转调节器，使镜筒稍微向上，再把高倍镜推至镜筒下；(3)当高倍镜己被推到镜筒下面时，向镜内观察所显现的物象往往不清晰，这时可旋转细调节器至清楚为止。
三油镜的使用方法(1)一般油镜头上有一白圈或红圈，有时标有“OI”（OilImmerion）或(HI)字样。
先用粗调节器将镜筒提起约2cm，在载波片上加一滴香柏油，拨动回转板使油镜在镜筒下方，然后小心的降下镜筒，使镜头尖端和油接触。
注意镜头不能压在载玻片上，更不能用力过猛，否则会压碎载玻片或损坏镜头；(2)向目镜内观察，若图象不清晰，可稍微调节细调节器。
若光线过暗，可调节反光镜。
(3)油镜使用完毕，必须用指定的长纤维脱脂棉或擦镜纸将油镜及载玻片所粘着的油擦净。
必要时可蘸少许乙醇—乙醚混合液擦拭镜头，最后用擦镜纸或软绸擦试干净。
四显微镜的保养（1）显微镜应避免直接在阳光下曝晒，因透镜与透镜之间，透镜与金属之间都是用树脂或亚麻仁油粘合起来的。
金属和透镜的膨胀系数不同，透镜可能脱落或破裂。
树脂受高热可能熔化，透镜也会脱落；（2）显微镜应避免和挥发性药品或腐蚀性酸类放在一起，如碘片、酒精、醋酸、硫酸等。
这些物品对显微镜的金属部分和光学部分都是有害的；（3）显微镜镜头沾污后，要用擦镜纸或软绸擦试。
用有机溶剂擦试油镜镜头，用量不宜过多，时间不宜过长，以免粘合透镜的树脂融化。
切不可用手摸透镜。
沾染有机物的镜头影响观察，日久还要长霉菌；（4）显微镜不能随意拆卸，尤其是镜筒。
因为拆卸后空气中的灰尘和有机物落入里面，容易生霉。
机械部分要经常加润滑油，以减少磨损；（5）显微镜用毕把目镜和物镜卸下放好，镜架应放入镜箱内，并加罩防尘。
箱内应存放硅胶，以免受潮生霉。
1.3.1.4目测微尺和物测微尺及其使用方法一目测微尺5目测微尺是一圆形玻璃片，其中央刻有精确的刻度，刻度有尺形和网形两种。
每个刻度所代表的距离随使用的目镜和物镜的放大倍数以及镜筒的长度改变而改变。
使用前应先利用物测微尺进行标定。
二物测微尺物测微尺是一厚玻璃片，中央有一圆形盖玻片。
盖玻片中央的小圆内有一百等分刻度，每等份的长度为1/100即10um（注意物测微尺的标记）。
使用时，先将目测微尺装入目镜的隔板上，使刻度朝下。
把物测微尺放在载物台上按平常观察标本的方法，先找到物测微尺载玻片上的圆圈（如无圆圈就直接找刻度），然后就很容易找到物测微尺的刻度。
移动物测微尺与目测微尺使两者的第一线相重合，然后计算物测微尺的每一格内包含目测微尺的小格数，算出目测微尺每小格长度。
1.3.2欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜OLYMPUS生物显微镜是由日本进口的一种双筒光学显微镜，它使用方便，分辨率高，并且有立体感。
是目前研究微生物的良好工具。
显微镜的结构见图（1-4）和（1-5）61.3.2.1欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜的使用方法1.接通电源。
2.打开主开关。
3.移动电压调整旋，使亮度适中。
4.把标本固定在载物台上。
5.放松粗调锁挡。
6.用低倍物镜，旋转粗调和微控制钮来进行对焦。
7.调节双目镜筒间距和视度差。
8.再适当调节照明度。
使焦点正确地对准标本。
锁紧粗调锁挡。
11.调节孔径光栏。
12.依次用低、中、高倍镜观察。
13.油镜观察：与普通光学显微镜方法一致。
714.观察完毕，复原：先将电压调节旋钮复原，关闭主开关，切断电源，放开粗调锁挡。
油镜的处理与普通光学显微镜方法一致。
1.4微生物的形态观察1.4.1．球菌与杆菌的观察分别取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌标本片置于显微镜载物台上，用低倍镜、高倍镜和油镜观察(具体步骤见普通光学显微镜说明)，可看到细菌的杆状和球状形态，用铅笔绘出其形态图。
1.4.2．芽胞的观察取枯草杆菌标本片用上述方法进行观察，可看到链状排列的菌提及芽胞。
枯草杆菌是需氧芽胞杆菌，杆状，可单个存在或呈链状排列，培养12小时后出现芽孢。
1.4.3．鞭毛和荚膜的观察取假单胞菌标本片置油镜下观察、可清晰地看到杆状细菌的鞭毛及其着生方式。
取因氮菌标本片观察，可看到细菌的夹膜。
1.4.4．球衣菌的观察球衣菌是一种丝状细菌，在显微镜下可看到由单个圆柱形细胞组成的丝状体，并能看到它典型的假分枝形态。
1.4.5．牙垢细菌的观察口腔中常见的细菌有白色葡萄球菌、绿色链球菌、乳酸杆菌、梭性杆菌、卡他双球菌、螺旋体等。
用牙签从牙缝中挑取牙垢少许，在载玻片一侧与水混匀，然后沾取浑浊。
液至载玻片中央，用盖玻片轻轻盖上，在显微镜的低倍镜和高倍镜下观察，可以看到牙垢细菌的各种形态，有球状、杆状、弧状及螺旋体等。
思考题1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？2使用油镜时，为什么必须用镜头油？3镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？8实验二细菌的单染色和革兰氏染色2.1实验目的学习微生物涂片染色的基本技术，掌握细菌菌体单染色法和革兰氏染色法，以及无菌操作技术。
2.2微生物染色的基本原理细菌体积小，基本上是无色透明的，不经染色很不易观察，经染色可使菌体着色，与背景形成鲜明的对照，易在显微镜下观察。