需氧芽孢杆菌

标本采集： 可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露 于空气中，在一定程度都会受到本菌污染， 所以不能分离出该菌就认为是引起食物中 毒的病原菌。
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确诊由该菌引起的食物中毒必须：


从食物中分离出菌数≥105CFU/g，提示本菌活 跃生长，构成潜在危险 从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或) 呕吐物中分离到的菌株属同一血清型
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检验程序
皮毛、腐败脏器等 血液
Ascoli试验
以NG制成悬液 经加温或饱和 尿素处理 BAP或戊 烷脒平板
肉汤增 菌培养
2%兔血清肉汤4-8h
动 力 观 察
生 化 反 应 串 珠 试 验 噬 菌 体 裂 解 荚 膜 肿 胀 试 验
G染色镜检
青 霉 素 抑 制 毒 力 试 验
菌落特征
确定报告
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鉴定试验：
形态和菌落特征 生化试验:表11-1 串珠试验: --接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤 中，37℃ 6h，大而均匀成串的圆球状菌体 --与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 --类炭疽无此现象

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•青霉素抑制试验：
接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，
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检验程序
呕吐物、残留食物等
活菌计数
接种 普通琼脂平板、 BAP 、卵黄平板 37℃18-24h
纯培养
直接涂片染色镜检
动物试验（肠 毒素测定）
生化反应
血清凝集（分型）
报告结果
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•检验方法：
•直接镜检 •分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板 •鉴定与分型： 根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测
需氧芽孢杆菌
1
需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种
与医学有关5个种 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（B.cereus） 蕈状芽胞杆菌（B.mycoides） 巨大芽胞杆菌（B.megaterium） 苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）
2
第一节 炭疽芽胞杆菌 （Bacillus anthracis，B.anthraci )

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•无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基
•污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振
荡10～15min 、静置10min，取悬液65℃水浴30min或
85℃5min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养
•污染杂菌液体标本：离心 ，弃上清液后，加0.5%洗涤
剂振荡10～15min ，离心取沉淀物增菌和分离培养
一、临床意义 炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可 通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等， 并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎
3
致病物质

荚膜：
抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散

炭疽毒素：
保护性抗原、致死因子、水肿因子
4
所致疾病

炭疽病：
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夏、秋季多见 食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮 料等，大多为加热烹调过的熟食 在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起 的食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官 性状正常，应引起注意


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二、微生物特性

形态与染色：
- G+大杆菌 -生长6h后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次末端、不突出菌体 -菌体两端平截，多数呈链状排列 -引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜

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生化反应：
分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖， 有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气 水解淀粉、还原硝酸盐 不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不 分解尿素 在牛乳中生长2～4天牛乳凝固→缓慢胨化 触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）

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抗原构造：

菌体多糖抗原：
--与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍 能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热 沉淀反应）。 --特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型 肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。
小鼠、家兔或豚鼠皮下接种
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•植物凝集素试验：
•Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断
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第二节 蜡样芽胞杆菌 (Bacillus cereus, B. cereus )
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一、临床意义
食物中毒
含菌量达105/g以上
呕吐型——耐热肠毒素 腹泻型——不耐热肠毒素
全眼球炎（外伤后） 心内膜炎、败血症和脑膜炎
37℃24h
生长 受抑制不生长
•串珠和青霉素抑制联合试验：
青霉素纸片
抑菌环
兔血琼脂平板
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• 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 • NaHCO3毒力试验： 接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板， 10%CO2、37℃、24～48h 有毒株形成荚膜—黏液型菌落 无毒株不形成荚膜—粗糙型菌落 • 动物试验：
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•培养特性：
•需氧或兼性厌氧
•营养要求不高
•最适温度30~35℃
•普通琼脂平板：菌落较大，
灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有
蜡样光泽
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BAP —有β溶血 卵黄平板—生长迅速，培养3h后，虽看不 到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色 的混浊环，称乳光反应或卵黄反应
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•生化反应：
•能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊
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•荚膜多肽抗原：
--与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细
菌生长和扩散
--荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义
•芽胞抗原：
有免疫原性和血清学诊断价值
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炭疽毒素：
--保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿 因子（EF）三个组分 --单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性 --具有抗吞噬和免疫原性
传染源：患病食草动物及其制
品或被污染物 传播途径：接触——皮肤炭疽 食用——肠炭疽 吸入——肺炭疽

可并发败血症，死亡率极高
5
•乙类传染病
•发生肺炭疽按甲类处理
病后可获得持久免疫力
6
二、 微生物特性

形态染色:
致病菌中最大的G+杆菌， 两端平切、竹节状 有毒株可有明显荚膜
炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 ×1000
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无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边
缘呈卷发状
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BAP：12～15h不溶血，18～24h轻微溶血 其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速
炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落
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肉汤—絮状沉淀生长 明胶—37℃18～24h表面液化成漏斗状，由于 细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。 NaHCO3BAP： --有毒株—5%CO2、37℃24～48h、产生荚膜 呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) --无毒株—粗糙型菌落
革兰染色 ×1000
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芽胞——椭圆形，小于菌体，位于菌体中央 多在有氧条件下形成，25～30℃，在培养基 中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中， 都易形成芽胞 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸 体严禁解剖

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培养特性：
•需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温
度30～35℃
•普通培养基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、
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抵抗力：
--芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃ 3h才能杀灭 --在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数 十年 --生物武器
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--芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化
剂较敏感，常用以下方法杀菌：
1：2500碘 10min、
3%H2O2肉 汤快速增菌 37℃4h 荚膜肿胀试验 直接涂片
荚膜染色
G染色
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖 涂片G染色、 荚膜染色
初步报告
初步报告
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涂片染色： --G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告 --荚膜荧光抗体染色 核酸检测：核酸杂交 分离培养： --BAP、戊烷脒多粘菌素B平板 --2%兔血清肉汤增菌→分离培养
4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min --对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感
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三、微生物学检验

要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早
期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防
对策
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标本的采集与处理
皮肤炭疽：病灶深部标本 肺炭疽：痰和血液 肠炭疽：粪、呕吐物 脑膜炭疽：CSF、血液 死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消 毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局 限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。
精，产酸不产气
•能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂
酶（+） • 多次传代后生化特性常可改变
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•抵抗力：
耐热，肉汤中细菌需100℃20min才能杀死，
食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30min、
干热120℃60min才能杀死
对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉
素、磺胺、呋喃类耐药
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三、微生物学检验