生物制药综合性实验实验报告

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融合生物基因实验报告

一、实验背景随着分子生物学和基因工程技术的不断发展，生物基因融合技术在生物制药、基因治疗、农业改良等领域发挥着越来越重要的作用。

本实验旨在探究生物基因融合技术的可行性，通过将两个不同生物的基因片段进行融合，构建重组基因，并在宿主细胞中表达，以验证融合基因的稳定性和功能。

二、实验目的1. 掌握基因克隆和基因融合的基本技术。

2. 验证融合基因在宿主细胞中的稳定性和表达水平。

3. 分析融合基因表达产物的生物活性。

三、实验材料1. 基因组DNA提取试剂盒2. PCR引物3. DNA连接酶4. 限制性内切酶5. DNA标记物6. 载体质粒7. 宿主细胞（如大肠杆菌、酵母等）8. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机等四、实验方法1. 基因克隆- 提取目的基因和载体质粒的基因组DNA。

- 设计并合成PCR引物，用于扩增目的基因和载体质粒的特定位点。

- 进行PCR扩增，获得目的基因和载体质粒的DNA片段。

- 利用限制性内切酶对目的基因和载体质粒进行切割，获得线性化的DNA片段。

- 将目的基因片段与载体质粒片段进行连接，构建重组质粒。

2. 重组质粒转化- 将构建好的重组质粒转化至宿主细胞中。

- 通过筛选阳性克隆，获得稳定表达融合基因的宿主细胞。

3. 融合基因表达分析- 利用RT-qPCR检测融合基因在宿主细胞中的表达水平。

- 通过Western blotting检测融合蛋白的表达和纯度。

- 利用ELISA或细胞活性实验等方法检测融合蛋白的生物活性。

五、实验结果1. 成功构建了融合基因重组质粒，并转化至宿主细胞中。

2. RT-qPCR结果显示，融合基因在宿主细胞中得到了稳定表达。

3. Western blotting结果显示，融合蛋白在宿主细胞中得到了表达，且纯度较高。

4. 生物活性实验结果显示，融合蛋白具有与预期相符的生物活性。

六、实验讨论1. 本实验成功构建了融合基因重组质粒，并实现了融合基因在宿主细胞中的稳定表达。

实验报告

吲哚美辛栓剂、甘油栓剂及薄荷油滴丸的制备摘要目的：了解各类栓剂基质的特点及适用情况；掌握热熔法制备栓剂的工艺；掌握置换价的测定方法和应用。

通过本实验掌握制备滴丸的基本操作。

方法：采用热熔法制备栓剂；采用滴制法制备滴丸。

结果：吲哚美辛栓剂为淡黄色圆锥形，平均粒重为1.7g，重量差异为±5.9%。

甘油栓剂为透明圆锥形，平均粒重为1.65g，重量差异为±3.03%。

薄荷油滴丸为圆整均匀，半透明色泽一致，无粘连现象，表面无冷凝液黏附，平均丸重为0.0430g，重量差异在±12%之间。

结论：将吲哚美辛栓剂、甘油栓剂分别每粒重量与各自平均粒重相比，均符合药典规定的重量差异限度1.0g以上至3.0g为±7.5%的标准。

薄荷滴剂每丸重量与平均丸重相比较，均符合药典规定的重量差异限度0.03g以上至0.1g为±7.5%的标准。

关键词：栓剂；吲哚美辛；甘油；滴丸栓剂；滴丸；薄荷油；制备Abstract Objective:Keywords：Pill Drip system speed ，Suppository ，Indomethacin emi-synthetic fatty acid esters (Mountain Oil)栓剂是指药物与适宜基质制成的供腔道给药的固体制剂。

其形状和重量根据腔道不同而异。

常用的有肛门栓和阴道栓等。

栓剂中的药物与基质应混合均匀，栓剂有一定的硬度、无刺激性、外型完整光滑，塞入腔道内应能融化，软化或融化并和分泌液混合释放出药物，产生局部或全身作用。

栓剂的治疗作用受基质影响较大。

栓剂的制法有三种：搓捏法、冷压法(挤压法)和热熔法。

此次实验采用热熔法制备。

为保证在栓剂处方的设计和制备中确定基质用量，保证剂量准确，常需预先测定药物置换价。

滴丸剂是将固体或液体药物与基质加热融化混匀后，滴入不相混溶的冷凝液中，收缩冷凝而制成的制剂。

实际上是将固体分散剂制成滴丸的形式，由于药物在基质中成为高度分散的状态，增加了药物的溶解度和溶出速度，可以提高药物的生物利用度，疗效快速，同时能减少剂量而降低毒副作用，还可使液态药物固体化而便于应用。

芦丁制药综合实验研究

ｒｅｐａｔｅａｄｐｏｅｔｅｏｓａｉｒｏｐｅｅｓｅｅｐｒｅｔｏｓｕｔｎｉｒｉｎｒｊｃｄｍｎｔｔｎｆｍｒｈｎｉｘｅｉｎｃｎｔｃｏ．ｖｃｃｒｏｏｃｖｍｒｉ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｔｎ；ｐｒｃｕｉｈａｍａｙ；ｃｍｐｅｎｓｖｘｒｍｅｔｘｅｍｅｔｌｔａｈｎｅｏｍｏｒｈｅｉｅｅｐｅｉｎ；ｅｐｒｉｎａｅｃｉｇｒｆｒ
ｅｈｎｔｅｖｕｆｅｐｒｎｔｅｆｍｅｅｙＴｅｒｔｈｒｃｏｒｈｎｉｅｅｐｒｍｅｔｉａｅｎｔｅａｐｎｉｅｐｒｍｅｔｏｒｔａｈａｅｏｘｅｉｌｍｅｔｉｌｓｒｌ．ｈｕｉｐａｍａｙｃｍｐｅｅｓｖｘｅｉｎｓｂｓｄｏｈｐｅｄｘｘｅｎｉｎｆｔｅｒｕｅｌｍｎｖｌｅｆｍｔＣｎｅｔｏｈｓｅｐｒｍｅｔｉｂｅｔｉｉｅｎｏｔｒｅｍｏｕｅｎｓｍｍａｙ，ｒｓｅｔｅｙｘｈｏｙｃ￣ｉｕｕａｄｅｏｖｒｏｉ．ｏｔｎｆｔｉｘｅｉｎｓａｌｏｄｖｄｄｉｔｈｅｄｌｓｉｕｒｅｐｃｉｌ，ｅ・ｖｔａｔｒｐｒｔｎｎｎｙｉ．Ｓｕｅｔｓｌｃｗｎｅｐｒｎａｋｎｅｃｄｌｎｎｓｅｉｄｐｎｅｔ，ｗｈｃｓｇｉｅｒｃ，ｐｅａａｉ，ａｄａａｓｓｔｄｎｓｅｅｔｏｘｅｍｅｔｓｓｉａｈｍｏｕｅａｄｆｉｈｔｍｅｅｄｎｌｏｌｉｔｉｈｎｙｉｈｉｕｄｄｔｒｕｈｕｙｒｓｕｃｅｅｏｍｅｔａｋ．Ｔｅｓｒｕｈｎｒｅｃｅｖｕｔｅｐｏｅｓｏｅｅｐｒｎｒｕｈｔｅｗｙｔａｈｏｇｏｔｅｏｒｅｄｖｌｐｎｓｓｈｅｉｓｉｇｆａｈｒｓｔｅａａｅｔｒｃｓｆｔｘｅｍｅｔｈｏｇｈａｔｂｔｏｔｏｔｉｏｌｈｈｉｔｈｔｅｅａｕｂｅｅｔａｃｎｘｔｏａｈｍｏｕｅｃｎｂｃｉｖｄｈｏｒｈｎｉｅｅｐｒｍｅｔｎｔｎｙｍａｅｈｓｆｈｄａｔ — ｈｖａｌｎｒｎｅａｄｅｉｆｅｃｄｌａｅａｈｅｅ．Ｔｅｃｍｐｅｅｓｖｘｅｌｉｎｏｌｋｓｔｅｒｅｏｅａｖｎａｏｉｔｇｓｏｒｄｔｎｌｅｐｒｎ，ｂｔＳａｅｈｈｒｃｅｓｏｏｒｈｎｉｅｅｐｒｍｅｔｉｔｃｎｉｅａｉｎｅｆａｉｏａｘｅｍｅｔｕＯｔｋｓｔｅｃａａｔｒｆｍｐｅｅｓｖｘｅｉｎｏｏｓｄｒｔ．Ｈｅｃｔｉｉｌａｃｎｏｎｅ，ｉｃｎｂｎｅｆｃｔａｅａｆ — ｅ

微生物综合实验报告酸奶的制备

微⽣物综合实验报告酸奶的制备微⽣物综合实验报告姓名：邢其劝学号：0903*******班级：⽣化制药0931分组：第六组指导教师：谢光杰陈振兴康熙实验时间：2010.12.06~2010.12.17⼀、前⾔概述近年来，我国发酵⼯程技术不断发展，在⾷品⼯业上的应⽤：主要有三⼤类产品，⼀是⽣产传统的发酵产品，如啤酒、果酒、⾷醋等；⼆是⽣产⾷品添加剂；三是帮助解决粮⾷问题。

学校为了让学⽣注重理论与实践相结合，增强学⽣的动脑、动⼿能⼒训练，对发酵技术有⼀定的了解。

按我们学校的教学计划安排，本学期（2010.12.06—2010.12.17）为我们⽣化制药0931班综合实验教学课程，主要的任务是制备酸奶。

在学校的组织下，由谢光杰、康熙和陈振兴三位⽼师带领我们班41名学⽣在学校实验室进⾏乳酸发酵测定与乳酸饮料的制作。

⼀⽅⾯是为了加深和巩固所学的理论知识，提⾼分析、解决问题能⼒，另⼀⽅⾯是为了培养我们有良好的职业道德，严格认真、实事求是的严谨科学态度和⼯作作风，为以后的⼯作打下良好的基础。

因此，全班同学对这次综合实验热情都很⾼，都下决⼼要好好利⽤这次机会充实⾃⼰！⼆、乳酸的简介乳酸纯品为⽆⾊液体，⼯业品为⽆⾊到浅黄⾊液体，具有吸湿性。

乳酸有很多衍⽣物，包括其盐和酯，盐类溶解度都较⾼，是很好的矿物元素补充剂，也是很多药物的成分之⼀，其酯类由于具有天然降解的优势，⼴泛⽤于各种⼯业技术和⽇常⽣活中。

乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的⼀类⽆芽孢、⾰兰⽒染⾊阳性细菌的总称。

凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产⽣乳酸的细菌统称为乳酸菌。

乳酸菌可⽤于制酸奶；酸奶的好处有：⼀是能将⽜奶中的乳糖和蛋⽩质分解，使⼈体更易消化和吸收；⼆是酸奶有促进胃液分泌、提⾼⾷欲、加强消化的功效；三是乳酸菌能减少某些致癌物质的产⽣，因⽽有防癌作⽤；四是能抑制肠道内腐败菌的繁殖，并减弱腐败菌在肠道内产⽣的毒素；五是有降低胆固醇的作⽤，特别适宜⾼⾎脂的⼈饮⽤。

如何设计和进行生物制药技术实验

如何设计和进行生物制药技术实验生物制药技术实验的设计和进行是非常关键的步骤，它们对于研发和生产高质量的药物非常重要。

在设计和进行生物制药技术实验时，需要考虑实验的目的、步骤、所需的设备和试剂以及实验的安全性。

接下来，我将详细介绍如何设计和进行生物制药技术实验。

首先，为了确保实验的准确性和可重复性，需要明确实验的目的和假设。

实验目的是定义你想要解决的问题或验证的假设。

这可以帮助确定实验过程中所需的步骤和数据收集方法。

例如，如果你想测试一种新的生物药物的活性，你的目的可能是确定药物对目标分子的抑制活性。

其次，实验设计需要明确实验步骤和所需的设备和试剂。

实验步骤应该按照逻辑顺序排列，并提供足够的细节，以便其他科学家能够复制你的实验。

同时，确保所需的设备和试剂的可靠性和质量。

例如，在生物制药实验中，可能需要采用细胞培养、酶反应或DNA合成等多种技术。

确保实验过程中使用的培养基、酶底物和引物等试剂的纯度和质量良好。

另外，实验安全性是非常重要的一环。

在设计和进行生物制药实验时，确保遵循实验室的安全规定和操作程序。

使用实验室必需的个人防护装备，如实验手套、实验服和安全眼镜。

此外，确保正确处理和处置实验废弃物，以保护实验人员和环境的安全。

在实验进行中，需要进行数据收集和分析。

数据收集的方法应该与实验目的和假设相匹配。

确保记录实验过程中的关键数据和观察结果，并使用适当的统计方法进行数据分析。

这可以帮助你确定实验结果的可靠性和显著性。

如果可能，还可以运用其他技术手段，如光谱分析、实时荧光定量PCR或质谱分析等，来验证实验结果。

最后，及时总结和分享实验结果是非常重要的。

通过撰写实验报告或发布研究论文，将实验结果与其他科学家共享，可以促进科学交流和知识的进一步推进。

实验报告中应包括实验目的、步骤、数据分析和结论等重要信息，以便其他人能够理解和复制你的实验。

总结起来，设计和进行生物制药技术实验需要明确实验目的、步骤和所需的设备和试剂。

仿制药实验报告

一、实验目的本研究旨在评估某仿制药与原研药在人体内的生物等效性，即两种药物在相同剂量下，在相同的给药条件下，对人体产生相似的药效。

通过本实验，为仿制药上市提供科学依据。

二、实验原理生物等效性是指两种药物在相同剂量、相同给药途径、相同给药时间下，在相同受试者体内产生的药代动力学参数（如AUC、Cmax）无统计学差异。

本研究采用交叉设计，分别对仿制药和原研药进行单次给药，通过比较两组受试者的药代动力学参数，评估仿制药的生物等效性。

三、实验材料1. 受试者：选择20名健康志愿者，男女各10名，年龄在18-45岁之间，体重在50-70kg之间，无药物过敏史。

2. 药品：原研药和仿制药均为某抗高血压药物，规格为100mg/片。

3. 器材：电子秤、电子体温计、血压计、静脉注射器、微量注射泵、血样采集装置、离心机、高效液相色谱仪等。

4. 试剂：抗高血压药物的标准品、内标、流动相、洗脱剂等。

四、实验方法1. 受试者筛选：按照实验要求，筛选符合条件20名健康志愿者。

2. 分组：将受试者随机分为两组，每组10名，分别接受仿制药和原研药。

3. 给药：受试者在空腹状态下，分别口服仿制药和原研药，剂量为100mg。

4. 血样采集：分别在给药前、给药后0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时采集静脉血样。

5. 血浆样品处理：将采集到的血样进行离心，分离出血浆，采用高效液相色谱法测定药物浓度。

6. 数据分析：采用统计软件对两组受试者的药代动力学参数进行统计分析，包括AUC（血药浓度-时间曲线下面积）、Cmax（血药浓度峰值）等。

五、实验结果1. 受试者基本情况：两组受试者年龄、体重、性别等基本情况无统计学差异。

2. 药代动力学参数：仿制药和原研药的AUC、Cmax等药代动力学参数无统计学差异。

3. 安全性评价：两组受试者在实验过程中均未出现明显的不良反应。

六、结论根据实验结果，仿制药与原研药在人体内的生物等效性良好，两种药物在相同剂量、相同给药途径、相同给药时间下，在相同受试者体内产生的药代动力学参数无统计学差异。

药理实验报告

药理学实验报告学校：学院：班级：学号：姓名：指导老师：元胡止痛片对小鼠镇痛抗炎镇痛活性研究组员：指导老师:摘要：目的：研究元胡止痛片是否具有镇痛抗炎的效果。

方法：使用小鼠热板法、醋酸扭体法、耳肿胀法，并分别建立小鼠的镇痛抗炎模型，观察元胡止痛片对小鼠的镇痛抗炎作用的影响。

结果：1.热板法：元胡止痛片对小鼠热板法实验中给药60分钟后有显著性差异，阳性药阿司匹林与生理盐水组相比有明显的痛阈降低，低浓度与生理盐水组相比有痛阈降低。

2. 醋酸扭体法：实验结果有显著差异，阿司匹林阳性药与高浓度元胡溶液相比有显著性差异，阳性药有明显的镇痛作用。

而阿司匹林组与生理盐水，低浓度与生理盐水组没有出现显著性差异。

3. 热肿胀法：结果显示无显著性差异，阳性药阿司匹林没有明显的抗炎活性。

结论：阿司匹林阳性药有抗炎镇痛作用，元胡止痛片无抗炎镇痛作用。

关键词：元胡止痛片；镇痛；抗炎；热板法；醋酸扭体法；耳肿胀法元胡止痛片为中药复方制剂，由延胡索(醋制)、白芷等中药组成，延胡索(醋制)具辛、苦、温，归肝脾经，由活血、理气、止痛等功效；白芷辛温，归胃、大肠、肺经，其功能与主治为散风除湿、通窍止痛、消肿排脓。

该制剂为中国药典方，临床上用于气滞血淤的胃痛、胁痛、头痛及月经痛等。

由于直肠给药50％以上的药物可以不通过肝脏而直接进入血液作用于全身，可避免口服引起的胃肠道刺激，同时减少。

胃液和肝脏对药物的破坏和降解，从而提高药效减轻药物的不良反应。

另外，直肠给药药物吸收缓慢，可使药效维持较长的时间。

本实验旨在对元胡止痛栓的镇痛抗炎作用的研究。

1 材料与方法1.1 动物健康昆明种小白鼠，体重25±8g，雌性32只，雄性32只。

健康昆明种小白鼠，体重40±10g，雄性，32只。

1.2 药品与试剂元胡止痛片，广西半宙天龙制药有限公司，批号130807；0.9%氯化钠注射液，新疆华世丹药业股份有限公司，批号214070702；阿司匹林肠溶片，临汾宝珠制药有限公司，批号140401；二甲苯，天津市富宇精细化工有限公司，批号120411；冰乙酸，天津市光复科技发展有限公司，批号090527。

生物技术综合实验报告

一、实验目的1. 熟悉生物技术的基本原理和方法。

2. 学习并掌握PCR技术、基因克隆、蛋白质表达等生物技术操作。

3. 培养学生严谨的实验态度和团队合作精神。

二、实验原理1. PCR技术：聚合酶链反应（PCR）是一种在体外条件下，通过DNA模板、引物和DNA聚合酶等反应体系，在短时间内扩增特定DNA片段的方法。

2. 基因克隆：基因克隆是指将目的基因片段插入载体，使其在宿主细胞中稳定存在和表达的过程。

3. 蛋白质表达：蛋白质表达是指将目的基因导入宿主细胞，使其在宿主细胞中合成并分泌蛋白质的过程。

三、实验材料1. 实验仪器：PCR仪、凝胶成像系统、离心机、超净工作台、恒温培养箱等。

2. 实验试剂：DNA模板、引物、PCR反应试剂、载体、连接酶、DNA聚合酶、抗生素等。

3. 实验材料：大肠杆菌、质粒、琼脂糖、电泳缓冲液、核酸染料等。

四、实验步骤1. 设计并合成引物：根据目的基因序列，设计特异性引物。

2. PCR扩增：将DNA模板、引物、PCR反应试剂混合，进行PCR扩增。

3. 基因克隆：将PCR产物与载体连接，转化大肠杆菌，筛选阳性克隆。

4. 蛋白质表达：将阳性克隆转化宿主细胞，诱导表达目的蛋白。

5. 蛋白质纯化：通过层析等方法，对表达蛋白进行纯化。

6. Western blot检测：将纯化蛋白进行Western blot检测，验证目的蛋白的表达。

五、实验结果与分析1. PCR扩增：通过PCR扩增，成功得到目的基因片段。

2. 基因克隆：通过基因克隆，成功构建了含有目的基因的重组质粒。

3. 蛋白质表达：通过诱导表达，成功在宿主细胞中合成目的蛋白。

4. 蛋白质纯化：通过层析等方法，成功纯化目的蛋白。

5. Western blot检测：通过Western blot检测，成功验证了目的蛋白的表达。

六、实验讨论1. 实验过程中，PCR扩增过程中应注意引物设计、模板浓度、PCR循环条件等因素，以确保扩增效果。

2. 基因克隆过程中，应注意载体与目的基因片段的连接、转化、筛选等步骤，以提高克隆成功率。

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广东药学院基因工程（跨课程）综合性实验论文姓名班级学号指导教师广东药学院生命科学与生物制药学院生物制药研究所目录摘要 (2)前言 (3)一、材料与方法 (3)1.1 材料 (3)1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料 (3)1.1.2重组DNA药物单元的实验材料 (3)1.2 方法 (4)1.2.1 重组蛋白质药物单元 (4)1.2.1.1 工程菌构建（已由老师完成） (4)1.2.1.2 工程菌表达筛选 (6)1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种 (8)1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析 (8)1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验 (8)1.2.1.6 表达进程分析 (9)1.2.1.7 凝胶扫描分析 (9)1.2.1.8 发酵工艺（观摩） (9)1.2.2 重组DNA药物单元 (9)1.2.2.1 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备 (9)1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析 (10)1.2.2.3 TCR体外转染活性检测 (11)1.2.2.4 TCR转染体内试验 (12)二、结果与讨论 (12)2.1 重组蛋白质单元结果与讨论 (12)2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE (12)2.1.2 GST工程菌生长曲线分析 (14)2.1.3表达影响因素试验 (15)2.1.4 表达进程试验 (16)2.2 重组DNA药物单元结果与讨论 (18)2.2.1质粒阴离子交换层析纯化 (18)2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析 (19)2.2.3 质粒-脂质体复合物制备 (20)2.2.4 TCR转染基因表达荧光检测 (20)2.2.5 TCR体外转染活性检测 (21)2.2.6 TCR转染体内试验 (23)三、小结 (25)致谢 (25)摘要：本综合性实验分为“重组蛋白质类药物”和“重组DNA类药物”二个单元。

重组蛋白质药物以hIL-18的大肠杆菌表达系统为例，全面介绍工程菌构建、表达筛选、甘油种制备、生长与表达分析、发酵工艺单元操作和表达产物分离纯化等基因工程药物研发与生产实践中最常用的技术与工艺过程。

“重组DNA药物”单元以质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP为例，介绍质粒DNA大规模制备、阳离子脂质体与质粒DNA复合物制备、T细胞体外转染、转染T细胞目的基因表达和体外活性检测、体内给药试验等。

关键词重组蛋白药物; hIL-18 ; 重组DNA药物 ; 阳离子脂质体与质粒DNA复合物Abtract：The comprehensive experiments are divided into two units ,which is " Recombinant Protein Drugs" and "Recombinant DNA Drugs". The unit ,Recombinant protein drugs ,takes example for hIL-18 in E. coli expression system.It comprehensively introducted the most usual technology and process of R & D and production practice of the genetic engineering drugs , such as the construction of engineering bacteria, expression screening, glycerol kind of preparation, growth and Expression Analysis, fermentation process unit operation and the purification of expression product.The unit of "Recombinant DNA drug" taked plasmid TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP as example.It introducted the large-scale preparation of plasmid DNA, Preparation of cationic liposomes- plasmid DNA complex, in vitro Transfection of T cells, expression and in vitro activity assaying of the target gene of transfected T cells and undertaking the test in vivo.Key words Recombinant Protein drugs ; hIL-18 ; Recombinant DNA drugs ; cationic liposomes-plasmid DNA complex前言生命科学与生物技术的最主要任务之一是利用其理论与技术研究成果为人类的健康服务，生物技术制药则是其最主要的应用领域，且在重大传染性疾病、恶性肿瘤及其它疑难杂症防治方面具有巨大的潜力。

药品的研究开发是一项庞大的系统工程，实验室研究发现的任何候选药物要开发成新药都需要经过生产工艺和质量控制研究、有效性评价和安全性评价等过程。

需要特别指出的是，生产工艺和质量控制研究的内容和任务还会始终贯穿于产品投产上市的过程中，相应的技术手段也是作为企业生产或质量控制人员必备的技能。

因此，作为生命科学与生物制药学院的本科生，了解生物技术药物研究、开发和生产的过程、掌握与生产工艺和质量控制研究密切相关的技术手段是非常必要的。

以蛋白质为基础的基因工程药物和基因工程抗体是当今最主要的生物技术药物形式，以DNA为基础的基因治疗制剂和DNA疫苗是未来生物制药的主要发展方向之一。

一、材料与方法1.1 材料1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料1.1.1.1 仪器超净工作台、移液枪（量程：10—100，0—1000）、灭菌枪头、标记笔、无菌牙签、带塞试管、恒温摇床、恒温培养箱、带塞三角瓶（500mL）、EP管(1.5mL)、可见分光光度计、电泳仪、垂直电泳装置、水浴锅、离心机、台式高速离心机、培养皿、冰箱（-20℃，-80℃，4℃）、烧杯、凝胶成像系统1.1.1.2 试剂氨苄青霉素、LB培养基、pBV220—hIL-18转化平板、GST工程菌平板、2×上样缓冲液、10×电泳缓冲液、10%APS、30%胶母液、10%SDS、TEMED、分离胶缓冲液（pH8.8）、浓缩胶缓冲液（pH6.8）、考马斯亮蓝染色液、脱色液、10%甘油、去离子水、IPTG1.1.2重组DNA药物单元的实验材料1.1.2.1 仪器高速冷冻离心机、台式高速离心机、离心机、离心杯、离心管、水浴锅、4℃冰箱、超净工作台、移液枪、灭菌枪头、500mL 三角瓶、常压层析系统、烧杯、水平电泳装置、电泳仪、紫外检测仪、凝胶成像系统、紫外分光光度计、1.5mLEP 管、恒温培养箱、灭菌玻璃滴管、12孔培养板、细胞计数板、电子显微镜、培养瓶、荧光显微镜、一次性1mL 注射器、冰盒1.1.2.2 试剂STE 、碱裂解溶液Ⅰ（（高压灭菌）：50mmol/L 葡萄糖、 25mmol/L Tris －Cl （pH8.0））、碱裂解溶液Ⅱ（0.2M NaOH 、 1％（m/V ）SDS （高压灭菌））、碱裂解溶液Ⅲ（5 mol/L 乙酸钾、冰乙酸、H 2O ）、异丙醇、70%乙醇、TE 、0.02MNaCl 的TE 溶液、0.3M NaCl的TE 溶液、1.0M NaCl 的TE 溶液、0.5M NaOH 、RNA 酶、双蒸水、生理盐水、1.0MnaCl 、20%乙醇、琼脂糖、TAE 、EB 、电泳缓冲液、Marker 、Buffer 、质粒TCRV α12.2-V β7.1-EYFP 、脂质体、肿瘤细胞BEL-7402、胰酶、完全培养基、4%苯酚溶液、1640培养基、胎牛血清、IL-2、双抗（青霉素、链霉素）1.2 方法1.2.1 重组蛋白质药物单元1.2.1.1 工程菌构建（已由老师完成）（1）pBV220-hIL-18表达载体和工程菌构建在本综合性实验中目的基因的表达载体为pBV220，该载体的物理图谱见图1。

该载体有一个氨苄青霉素抗性基因，在多克隆位点的上游为λ噬菌体的P L 和P R 启动子，P L 和P R 启动子受λ噬菌体CI 基因的负调控。

CI 阻遏蛋白是温度敏感蛋白，在28-37℃培养时，CI 产生抑制作用，在温度升至42℃时，CI 被破坏，这样就解除了对启动子的封闭，使P L 和P R 启动子开始下游基因转录。

目的基因为hIL-18的编码序列（cDNA ），采用RT-PCR 技术从外周血细胞中获得。

首先据Genebank 报道序列设计引物，并在引物的5’端引入EcoR I 位点和启始密码子ATG ，在3’端引入Hind Ⅲ位点。

IL-18基因的RT-PCR 扩增产物经EcoR I 和Hind Ⅲ双酶切插入表达载体pBV220的相同位点即得hIL-18的表达载体pBV220-hIL-18。

构建的表达载体pBV220-hIL-18按常规方法转化大肠杆菌DH5α株后即得“重组hIL-18”的工程菌。

图 1 pBV220物理图谱（2）pGEX-GST表达载体和工程菌构建pGEX-GST为商品化融合表达载体，主要用于外源基因的可溶性融合表达。

GST （谷胱甘肽转移酶）为大肠杆菌宿主细胞的天然高效、可溶性表达的蛋白。

以其作为融合表达“标签”有二点优势：a) GST可以促进二硫键的形成，使目的基因融合表达产物能正确折叠，因而常以可溶的表达产物存在；b)GST属于大肠杆菌高效表达的天然产物，其mRNA的5‘端具有最适的结构，有利于融合基因mRNA的翻译，因此可大大提高融合基因表达水平。

在pGEX-GST中，GST处于复合启动子Tac的控制之下，因此可采用IPTG诱导。

其载体如图2所示，图中所示载体中还有一个特殊设计，即GST与目的蛋白的融合位点位PreScission蛋白酶识别位点，融合蛋白可在4℃下进行酶切反应，可避免其它蛋白酶类37℃那样的高温条件对目的产物的破坏。

本综合实验中采取的是无外源基因的载体，即只表达GST，主要用于给同学们展示与pVB220-hIL-18不同的另一种启动子和表达诱导方式（PL/PR vs Tac；温控vs IPTG诱导），并便于“表达进程分析”。