大肠杆菌的培养
(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告
实验目的：研究大肠杆菌的生长规律和影响因素。
实验原理：
大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、水体和动物的消化道中。
大肠杆菌是一种强大的生物工程工具，被广泛用于基因克隆、蛋白表达和生物制药等领域。
大肠杆菌的生长主要受到以下因素的影响：
1. 温度：大肠杆菌的适宜生长温度一般为37℃。
过高或过低
的温度都会抑制细菌的生长。
2. pH值：大肠杆菌对酸碱度有一定的耐受能力，适宜生长的pH范围为6.5-7.5。
3. 氧气含量：大肠杆菌是一种厌氧菌，但也可以在氧气存在的条件下进行生长。
4. 营养物质：大肠杆菌需要碳源、氮源、磷源等营养物质来进行生长。
实验步骤：
1. 准备培养基：将大肠杆菌营养琼脂混合溶解，并进行高温高压灭菌处理。
2. 用无菌移液管取一小滴大肠杆菌液，滴入含有营养琼脂的平板培养基上，轻轻摇晃平板，使细菌均匀分布于培养基上。
3. 将培养基置于恒温培养箱中，调节温度为37℃，培养一定
时间，观察菌落的形成和生长情况。
4. 在不同温度、pH值、氧气含量和营养物质条件下，重复步
骤2和3。
实验结果：
根据实验观察，大肠杆菌在37℃左右的温度下生长最好，pH 值在6.5-7.5之间时生长最快，适宜的氧气含量是气体和液体的界面。
实验结论：
大肠杆菌的生长受到温度、pH值、氧气含量和营养物质的影响。
掌握这些影响因素，能够更好地培养和利用大肠杆菌进行实验和工程应用。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
大肠杆菌培养实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌实验报告大肠杆菌紫外线诱变及抗药性菌株筛选0740063阿噟兰1.前言抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。
但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。
在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。
当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。
如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。
DnA对紫外线（uV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。
紫外线引起DnA结构变化的形式有DnA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。
因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。
一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265nm。
选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。
本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。
若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。
在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。
2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10gnacl5g琼脂20g蒸馏水1000mlph7.0按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。
大肠杆菌培养和分离
大肠杆菌培养和分离超净台实验准备工作2灭菌和消毒无菌操作目的：为了避免被杂菌污染。
1对实验操作空间：超净台：紫外线灭菌，过滤风桌面：酒精擦拭，酒精灯外焰附近操作2.操作者衣服和手进行：清洁和消毒，70%酒精3.避免已灭菌处理的材料用具和周围物品的接触消毒的方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气、高锰酸钾消毒……（1）消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。
消毒与灭菌的区别（2）灭菌：灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。
实验1大肠杆菌的培养和分离超净台上紫外灯和过滤风实验过程：准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒操作阶段：1倒平板：分装固体培养基倒平板：将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过程。
分装培养基：1倒平板：将灭菌后的固体培养基倒入培养皿培养基冷却到60度时倒入2培养基的分装（试管，三角瓶，培养皿）倒入三角瓶和试管（漏斗法）1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
朊病毒就是蛋白质病毒，是只有蛋白质而没有核酸的病毒。
1997年诺贝尔医学/生理学奖的获得者美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳(S.B.Prusiner)就是由于研究朊病毒作出卓越贡献而获此殊荣的。
细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，它使得这层壁坚韧并富有弹性。
一旦失去细胞壁，所有的细菌都将变成球形。
细菌细胞壁的主要功能是保护细胞、维持细胞形状、协助鞭毛运动等，而且还与细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的敏感性有关。
大肠杆菌如何培养
大肠杆菌如何培养
一、大肠杆菌如何培养1. 大肠杆菌如何培养2. 大肠杆菌的保存方法 3. 大肠杆菌菌种的复苏二、大肠杆菌对人体益处和危害三、什么是大肠杆菌
大肠杆菌如何培养
1、大肠杆菌如何培养1.1、称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
1.2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。
1.3、调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。
若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
1.4、过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基,这步可省略。
1.5、分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
2、大肠杆菌的保存方法
2.1、常用的长期保存法有:液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜(DMSD)等保护剂。
纯化大肠杆菌的方法
纯化大肠杆菌的方法
首先，准备工作是非常重要的。
在进行大肠杆菌的纯化前，需要准备好所需的实验器材和试剂，包括培养基、离心管、离心机、超声波破碎机等。
同时，要确保实验室环境的清洁和无菌操作。
其次，进行大肠杆菌的培养和收获。
首先将大肠杆菌接种到含有适当抗生素的培养基中，进行培养。
培养时间和条件根据具体实验而定，一般需要在37摄氏度下培养12-16小时。
培养后，使用离心机将培养液进行离心，收集细菌沉淀。
接下来是大肠杆菌的破碎和裂解。
将收集到的细菌沉淀用适当的缓冲液进行悬浮，然后使用超声波破碎机进行破碎和裂解。
这一步是为了破坏细菌细胞壁，释放细胞内的目标蛋白。
然后进行蛋白的纯化和分离。
通过离心、过滤、层析等方法，将目标蛋白从混合物中分离出来，得到较纯的蛋白样品。
这一步需要根据目标蛋白的特性选择合适的纯化方法，如亲和层析、离子交换层析等。
最后是对纯化后的蛋白进行检测和分析。
使用SDS-PAGE凝胶电
泳、Western blotting等方法对纯化后的蛋白进行检测和鉴定，确
保蛋白的纯度和活性。
通过以上步骤，可以得到较为纯净和活性较高的大肠杆菌蛋白
样品。
这种方法不仅适用于纯化大肠杆菌蛋白，也可以根据具体情
况进行相应的改进和优化，以满足不同实验的需求。
总之，纯化大肠杆菌的方法是一个复杂而又重要的过程，需要
仔细操作和科学设计。
只有通过严格的实验操作和精准的技术手段，才能得到理想的纯化效果。
希望本文介绍的方法对您有所帮助，谢
谢阅读。
实验一大肠杆菌的培养与分离(最新)
恒温培养箱
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床
摇床
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床 7、酒精灯和超净台
1-1什么是生物技术
• 生物技术=生物工程
应用自然科学及工程学原理，以微生 物体、动物体、植物体或其组成部分作为 生物反应器将物料进行加工，以提供产品 来为社会服务的技术。
1-2 传统生物技术
• 传统生物技术指主要通过微生物 的发酵来生产商品.如:酱、醋、 酒、面包、奶酪、酸奶等
1-3 现代生物技术
②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进人细胞； ④使细胞具有致病性及对 噬菌体的敏感性。
伤 寒 杆 菌 细 胞 壁 中 含 毒 素
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
特点：结构简单，形体微小，通常要用光学显微镜或 电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。 用途：90%以上的微生物是对人类有利的。如抗生素 多数来源放线菌和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳 由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物也能消除环境污染， 在新能源领域将发挥巨大作用。
1）放线菌
1、结构： 单细胞原核 分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
分离后,一个菌体 便会形成一个菌 落,这是消除污染 杂菌的通用方法, 也是用于筛选高 表达量菌株的最 简便方法之一
大肠杆菌培养方法
大肠杆菌培养方法 大肠菌群测定的操作细则 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(mpn)表示。1设备和材料1.1温箱：36±1℃。1.2冰箱:0～4℃。
1.3恒温水浴:44.5±0.5℃。1.4天平。1.5显微镜。1.6均质器或乳钵。1.7平皿:直径为90mm。1.8试管。1.9液体。
1.10广口瓶或三角烧瓶:容量为500ml。1.11玻璃珠:直径约5mm。1.12载玻片。1.13酒精灯。1.14试管架。2培养基和试剂
2.1乳糖胆盐蒸煮管:按gb4789.28中4.9规定。2.2伊红美绿琼脂平板:按gb4789.28中4.25规定。
2.3乳糖发酵管:按gb4789.28中4.10规定。2.4ec肉汤:按gb4789.28中4.11规定。 2.5磷酸盐缓冲器稀释液:按gb4789.28中3.22规定。2.6生理盐水。 2.7革兰氏染色液:按gb4789.28中2.2规定。3操作步骤3.1检样稀释 3.1.1以无菌操作将检样25ml(或g)置于存有225ml杀菌生理盐水或其他稀释液的杀菌玻璃瓶内(瓶内予置适度数量的玻璃珠)或杀菌乳钵内,经充份振摇或研磨制成1:10的光滑稀释液。固健康检查样最出色用均质器,以8000-10000r/min的速度处置1min,制成1:10的光滑稀释液。
3.1.2用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3另挑1ml杀菌液体,按上条操作方式依次搞10倍递减稀释液,每递减吸收一次,改用1两支1ml杀菌液体。
3.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。3.2乳糖发酵试验
大肠杆菌操作规程(3篇)
第1篇一、目的为确保大肠杆菌培养过程的准确性和安全性，防止污染和交叉感染，特制定本操作规程。
二、适用范围本规程适用于实验室大肠杆菌的培养、传代、保存及相关实验操作。
三、操作步骤1. 准备工作（1）实验环境：实验室应保持清洁、通风，操作台面、仪器设备等应定期消毒。
（2）人员要求：操作人员应熟悉大肠杆菌培养知识，遵守无菌操作原则。
（3）材料与设备：大肠杆菌菌株、无菌水、LB培养基、琼脂糖、接种环、移液器、无菌试管、无菌培养皿、恒温培养箱、酒精灯、高压灭菌器等。
2. 大肠杆菌培养（1）制备LB培养基：按照说明书配制LB培养基，高压灭菌后备用。
（2）接种：将保存的大肠杆菌菌株接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养过夜。
（3）传代：次日取培养过夜的大肠杆菌菌液，用无菌水稀释至适宜浓度，涂布于LB琼脂平板上，37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
3. 大肠杆菌分离纯化（1）挑取单菌落：用无菌接种环挑取平板上的单菌落，接种于LB培养基中，37℃恒温培养箱中培养过夜。
（2）验证：次日观察菌液是否澄清，若澄清，则证明分离纯化成功。
4. 大肠杆菌保存（1）保存液：配制含有20%甘油的大肠杆菌保存液。
（2）操作：将培养过夜的大肠杆菌菌液转移至无菌离心管中，加入等体积的保存液，混匀后转移至无菌冻存管中，置于-80℃冰箱中保存。
5. 无菌操作（1）操作前，操作人员应穿戴无菌手套、口罩、帽子等防护用品。
（2）操作过程中，避免触碰无菌区域，确保操作台面、仪器设备等无菌。
（3）接种、传代等操作应在无菌操作台（超净工作台）进行。
四、注意事项1. 操作过程中，严格遵循无菌操作原则，防止污染。
2. 试剂、耗材等应定期检查，确保质量。
3. 操作过程中，如发现污染现象，应立即停止操作，对污染区域进行消毒处理。
4. 实验室应定期进行无菌检查，确保实验室环境、操作人员、仪器设备等符合无菌要求。
五、应急处理1. 如发生污染，应立即停止操作，对污染区域进行消毒处理。
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大肠杆菌种子液的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的配方：
液体培养基
牛肉膏 3.0g
蛋白胨 10.0g
氯化钠 5.0g
水 1000ml
pH 7.4-7.6
固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂
1 试管斜面与平板的制备
（1） 称量 按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放
入烧杯中。
（2） 熔化 在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉
网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。将称量好的
1.8％琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。
（3） 调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，
用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用PH试纸测
基PH直到PH达到7.4-7.6。反之用1mol/L HCl进行调节。
（4） 分装 将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。其试管装量不超过管高的
1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞 培养基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶
口上塞上棉塞。
（5） 包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用
一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期。
（6） 灭菌 将上述培养基以0.1Mpa,121℃,15min高压蒸气灭菌。
（7） 倒平板 ，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒
制三个平板培养基，冷却。
（8） 搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，
搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
2 接种大肠杆菌斜面种子
(1) 取实验室储备的大肠杆菌BL21种子， 在酒精灯附近，用接种环在已制备好
的斜面上接种上大肠杆菌。
(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h。
3 制备平板种子
(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下
来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍，10倍，100倍和1000倍，用移液
枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液
100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。
（12） 次日，挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新鲜灭菌的牛肉膏蛋白
胨液体培养基中37℃，170r/min恒温振荡培养18h作种子培养液。
其后的实验中，每次实验前从种子培养液中吸取2ml菌液接种于新鲜灭菌的液体培养基中，
37℃，170r/min恒温振荡培养
使用牛肉膏蛋白胨培养基
组成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl 5g,琼脂 15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。
具体配置步骤：
1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表
面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与
称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.
2.加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待
药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品
中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.
3. 调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检
测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.
应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.
4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是
供一般使用的培养基,这步可省略.
5.分装 按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养
基沾在管口或瓶口上而造成污染.
分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的
一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧
度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长
约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成
通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.
7.包扎 加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若
培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记
号笔注明,培养基名称,组别,日期.
8.灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故入冰箱
内暂存.
9.无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱
或清洁的橱内,备用.
大肠杆菌的培养：
37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2
天外才能长出明显的菌落。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。
大肠杆菌 / 大肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、
冰激凌和肉制品中大肠杆菌和大肠菌群的快速检测。大肠杆菌显蓝色至紫色，大肠菌群显红
色。
成份 (g/L)
特殊营养物质
28.19
混合显色剂
0.31
琼脂
13.0
pH 6.8 ± 0.2 25 ℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 41.5g 加入 1000ml 蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过 1 分钟。取 1ml
制备好的样品液加入直径为 9cm 无菌平皿中心，倾入冷却至 45-50 ℃培养基约 15ml ，
混匀，凝固后，再加入一层培养基进行履盖。或冷却至 45-50 ℃时，倾入无菌平皿，琼脂
完全凝固后，在 37 ℃的培养箱中倒置放置 1-2 小时，加入适当稀释度的样品液 1ml ，涂
布于培养基上， 36 ± 1 ℃培养 18 ～ 24h 。
贮存
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处， 保存
温度 2-8 ℃，注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1 、按国家标准、 SN 标准、 FDA 标准或其它方法制备样品液
2 、取样品液 1ml 加入 冷却至 45-50 ℃显色培养基中混匀或 涂布于平板上
3 、 36 ± 1 ℃培养 18 ～ 24h ，选用有 30 ～ 200 个菌落的平板，计数平板上出现的
典型大肠菌群和大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，
其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠菌群 = 蓝色菌落 + 紫色菌落 + 粉红色菌落
大肠杆菌 = 蓝色菌落 + 紫色菌落
4 、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上， 36 ± 1 ℃培养 12-16 小时，挑
取单菌落做大肠杆菌全套生化试验 ( 本公司有生化鉴定管套装 20 支 x3 种 )
质量控制
1 、外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈淡红色。制备好的平板呈透明粉红色固体
培养基。
2 、微生物试验
在 36 ± 1 ℃培养 18 ～ 24h 小时：
质控菌株
ATCC
生长情况
菌落颜色
单增李氏菌
27853
-/+
无色
金黄色葡萄球菌
25923
-/+
无色
大肠杆菌
25922
+++
蓝色
沙门氏菌
+++
无色
大肠菌群
+++
粉红色
方法的局限性
本培养基鉴定 大肠菌群 / 大肠杆菌，少数情况下可能会出现假阳性，但不会出现假阴性，
有时可能需做其它补充试验。
典型特征
大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，其它细菌为无色菌落。