UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1基因多态性及其与伊立替康化疗不良反应的关系

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１４０２・　中图药物与临床２０１３年１１月第１３卷第１１期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１３，Ｖｏ１．１３，Ｎｏ．１１　
ＵＤＰ．葡萄糖醛酸转移酶１Ａ　１基因多态性　
及其与伊立替康化疗不良反应的关系　

刘晓玲杨牡丹高峻　
【摘要】　目的研究中国进展期胃肠道肿瘤患者ＵＤＰ一葡萄糖醛酸转移酶１Ａ１（ＵＧＴ１Ａ１）的基因多态性　
及其与伊立替康化疗不良反应的发生率和严重程度的关系。方法利用聚合酶链反应一连接酶检测反应（ＰＣＲ—　
ＬＤＲ）等方法对２０２例进展期胃肠道肿瘤患者进行ＵＧＴ１Ａ１基因多态性检测。所有患者均采用含伊立替康方案　
化疗，观察并记录化疗中出现的不良反应情况，比较不同基因型患者使用伊立替康后不良反应发生率的差异。结　
果２０２例患者中ＵＧＴ１Ａ１野生型ＴＡ６／ＴＡ６　１５６例（７７．２％）；杂合突变型ＴＡ６／ＴＡ７　４４例（２１．８％），纯合突变型　
ＴＡ７，ｒＡ７　２例（１．０％）。３－４度不良反应的情况：腹泻２７例（１３．４％）、白细胞减少１９例（９．４％），ＴＡ６ｆｒＡ６与ＴＡ６／　
ＴＡ７基因型患者　现３级以上腹泻、白细胞减少与１－２级之间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＴＡ７厂Ｉ１Ａ７基因型患　
者出现３级以上腹泻１００％，自细胞减少５０％。结论用伊立替康化疗前行ＵＧＴＩＡ１基因多态性检测可以筛查高　
危人群，预测伊立替康的严重不良反应，以指导临床用药　
【关键词】多态性，单核苷酸；抗肿瘤联合化疗方案；不良反应　

Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＵＧＴ１Ａ１　ｇｅｎｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ　ＬＩＵ　Ｘｉａｏ—ｌｉｎｇ，ＹＡ　ＮＧ　Ｍｕ—ｄａｎ，　
Ｇ』４　０　Ｊｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇａｓｔｒｅｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｘ　Ｔｕｍｏｒ　Ｈａｓｐｉｔａ１．Ｔａｉｙｕａｎ　０３００１３．Ｃｈｉｎａ　
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ＵＤＰ—ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒａｓｅ一１　Ａ１（ＵＧＴ１Ａ１）　
ｇｅｎｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｓｅｖｅｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｇａｓ—　
ｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｔｕｍｏｒｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｏｆ　ＵＧＴＩＡ１　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ—ｌｉｇａｔｉｏｎ　ｄｅｔｅｃ—　
ｌｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　２０２　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａ１　ｔｕｍｏｒｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ．Ｔｈｅ　ａｄｖｅｒｓｅ　ｅｖｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　
ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ａｄｖｅ￣ｅ　ｅｖｅｎｔｓ　ａｍｏｎｇ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｗａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｏｆ　ａｌｌ　ｃａｓｅｓ．ｔｈｅ　ｆｒｅ—　
ｑｕｅｎｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗｉｌｄｔｙｐｅ　ＴＡ６／ＴＡ６．ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅ　ｍｕｔａｎｔ　ＴＡ６／ＴＡ７　ａｎｄ　ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ　ｍｕｔａｎｔ　ＴＡ７，ｒＡ７　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｗｅｒｅ　
７７．２％（ｎ＝１５６），２１．８％（ｎ＝４４）ａｎｄ　１．０％（ｎ＝２），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｇｒａｄｅ　３　ａｎｄ　４　ａｄｖｅｒｓｅ　ｅｖｅｎｔｓ　ｉｎｅｌｕｄｅｄ　
ｓｅｖｅｒｅ　ｄｉａｒｒｈｅａ　ｆ１３．４％，２７／２０２１　ａｎｄ　ｓｅｖｅｒｅ　ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ　ｆ９．４％．１９／２０２）．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　
ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｇｒａｄｅ　３　ｏｒ　４　ａｎｄ　ｇｒａｄｅ　１　ｏｒ　２　ｄｉａｒｒｈｅａ　ａｎｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＵＧＴ１Ａ１　ＴＡ６／ＴＡ６　ａｎｄ　ＴＡ６／ＴＡ７　
ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ（ｂｏｔｈ　Ｐ＞０．０５）．Ｓｅｖｅｒｅ　ｄｉａｒｒｈｅａ　ｗａｓ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｉｎ　ｔｗｏ　ｃａｓｅｓ（１　００％）ａｎｄ　ｓｅｖｅｒｅ　ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ　ｉｎ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃａｓｅ　
ｆ５０％）　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｒｒＡ７厂ｆＡ７　ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＵＧＴ１Ａ１　ｇｅｎｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｐｒｉｏｒ　ｔｏ　
ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｗｉｔｈ　ｈｉｎｏｔｅｃａｎ　ｈｅｌｐｓ　ｓｃｒｅｅｎ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｒｉｓｋ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｏｒｅｃａｓｔ　ｔｈｅ　ｓｅｒｉｏｕｓ　ａｄｖｅｒｓｅ　ｅｖｅｎｔｓ，ｔｈｕｓ　ｓｔｅｅｒ—　
ｉｎｇ　ｒａｔｉｏｎａｌ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ．　
【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｓｉｎｇｌｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ；Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓ石ｃ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ；Ｔｏｘｉｃｉｔｙ　

伊立替康（ＣＰＴ．１１）系喜树碱半人工合成物，进　
人体内可经羧酸酯酶作用转化为活性形式７一乙基一　１０一羟基喜树碱（ＳＮ一３８），ＳＮ．３８为强力拓扑异构酶　Ｉ抑制剂，可干扰ＤＮＡ复制和转录，发挥细胞毒效　应，具有较强杀伤肿瘤活性…。然而约有２０％的患　者，采用以ＣＰＴ．１１为基础的联合化疗方案，能导致　严重的３～４级中性粒细胞减少及腹泻，从而限制了　其在临床的应用。ＵＤＰ．葡萄糖醛酸转移酶１ＡＩ　ＤＯＩ：１０．１１６５５／ｚｇｙｗｙｌｃ２０１３．１　１．００５　基金项目：山西省卫生厅科技攻关项目（２００９４３）　作者单位：０３００１３太原川ｊ西省肿瘤医院消化二科　通信作者：高峻，Ｅｉｎａｉｌ：ｇ酬ｕｎ８８８２００８＠１６３．ＣＯｎ／　（ＵＧＴ１Ａ１）基因多态性的分布存在明显的种族差　异。ＵＧＴ１Ａ１的纯合突变型ＴＡ７／ＴＡ７在非洲人和高　
加索人中分别为１２％～２７％和１０％～１５％Ⅲ２＿，而在亚　
洲人中仅为０－５％Ｅ，川。本研究通过检测晚期胃肠道　
肿瘤患者的ＵＧＴ１Ａ１基因多态性，探讨ＵＧＴ１Ａ１基　
因多态性在中国人群中的分布．并探讨ＵＧＴ１Ａ１基　
因多态性与伊立替康化疗不良反应的关系。　
１资料与方法　
１．１临床资料　
本研究所收集的病例均为２００９年３月至２０１２　
年ｌ２月在我科接受ＦＯＬＦＩＲＩ　亚叶酸钙（ｃＦ）、氟尿　
嘧啶（５．Ｆｕ）、ＣＶＩ＇．１　１］方案化疗的晚期胃肠道肿瘤患　
中国药物与ｌ临床２０１３年１１月第１３卷第１１塑　ｈｊ　！堕　ｅｓ　！　塑　！！！　竺　！　！　：！　：　：！　
者。共２０２例，其中胃癌７３例，均为二、三线治疗；结　
直肠癌１２９例，一线治疗的５１例，二线治疗的７８　
例。２０２例患者中男性１３４例，女性６８例，年龄２５－　
７５岁，中位年龄５６岁。所有患者均有明确的病理诊　
断，ＥＣＯＧ评分０～１分，无重要器官严重受损，血常　规、肝肾功能在正常范围内。　化疗方案：所有患者均接受２个周期以上的　ＦＯＬＦＩＲＩ方案化疗，观察并详细记录患者在化疗中　出现的不良反应。具体方案如下：ＣＰＴ一１１　１８０　ｍｇ／ｍ　静脉输注９０　ｍｉｎ，第１天；ＣＦ　２００　ｍｇ／ｍ　静脉输注２　ｈ，第１、２天：５．Ｆｕ　４００　ｍｇ／ｍ　静脉推注，第１、２天，　５一Ｆｕ　６００　ｍｇ／ｍ２持续静脉滴注２２　ｈ，第１、２天。每２　周重复１次。　不良反应评定：依据美国国立癌症研究所（Ｎａ—　ｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。ＮＣＩ）提出的ＮＣＩ—ＣＴＣ　３．０对　药物的毒性进行评价和分级。　１．２主要仪器及试剂：基因组ＤＮＡ抽提试剂盒（美　国Ａｘｙｇｅｎｅ公司），热启动Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶（德国　ＱＩＡｇｅｎ公司），ＴａｑＤＮＡ连接酶（美国Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ公司）。９６００　ＧｅｎｅＡｍｐ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ（美国　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ公司）。ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ　３７７　ＤＮＡ测序　仪（美国Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ公司）。　１．３标本采集：所有患者均在化疗前采取静脉血２　ｍｌ置人乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）抗凝管中。分装后　置一８Ｏ℃冰箱保存备用。　１．４检测方法：按Ａｘｙｇｅｎｅ全血基因组ＤＮＡ抽提　试剂盒说明书抽提基因组ＤＮＡ。聚合酶链反应　（ＰＣＲ）扩增ＵＧＴ１Ａ１基因的相应片段，引物序列为：　上游ＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＡＡＣＡＴＦＡＡＣＴＦＧＧＴＧＴＡＴＣＴ．　下游ＣＡＧＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＡＧＴＧＧＧＣＧＴＣＣＧ。配制　１５　ｌ多重ＰＣＲ体系：含５０　ｎｇ基因组ＤＮＡ　１　１、　１０￣ＰＣＲ缓冲液１．５　ｉｘｌ、０．２　ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰｓ　２　ｌ、引　物各０．１３　Ｉｘｍｏｌ、热启动Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶０．２５　Ｉｘｌ、　Ｈ２０　７．５　ｌ。将１５　ｌ多重ＰＣＲ体系上样于ＡＢＩ　９６００　ＰＣＲ仪进行ＰＣＲ扩增。扩增参数：９４℃２　ｍｉｎ，９４℃１０　Ｓ，５６℃２０　Ｓ，７２℃４０　Ｓ，３５个循环；７２　℃延伸７　ｍｉｎ。配制１０　ｌｘｌ连接酸检测反应（ＬＤＲ）体　系：１０￣连接酶缓冲液１　ｔｘｌ、ＰＣＲ产物２　Ｉｘｌ、分型探　针和通用探针各０．０２　ｔｘｍｏｌ／Ｌ、５　Ｕ　ＴａｑＤＮＡ连接　酶、Ｈ２Ｏ　６　ｔｘｌ。反应程序：９４℃３０　Ｓ、５５℃４　ｒａｉｎ。２５　个循环。取ＬＤＲ产物１　ｔｘｌ，加１　ｌ　ＲＯＸ和１　ｌ测　序胶上样缓冲液混合，上样于ＡＢＩ　３７７测序仪进行　电泳，由于４种碱基用不同的荧光进行标记，不同长　度的ＤＮＡ片段上的４种荧光基团被激光激发，发出　不同颜色的荧光，被ＣＣＤ检测系统识别，以荧光吸　收峰图的形式输出信号，从而达到检测ＤＮＡ的目　的。　１．５统计学处理：应用ＳＰＳＳ　１７．０软件对所有数据　
进行统计分析。基因型与ＦＯＬＦＩＲＩ方案不良反应的　
关系采用　检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　
２结　果　
２．１　ＵＧＴ１Ａ１基因多态性分布情况：本组２０２例患　
者中，ＵＧＴ１Ａ１野生型ＴＡ６／ＴＡ６　１５６例（７７．２％）；杂　
合突变型ＴＡ６／ＴＡ７　４４例（２１．８％），纯合突变型ＴＡ７／　
ＴＡ７　２例（１．０％）（见图１）。　
哑盈暖翟殛蕊圈嬲疆强盈圈蟹曩蕊癌蕊圈　

囤　囤　园　
图１　ＵＧＴ基因型　
２．２基因型与药物不良反应的关系：２０２例患者行　
ＦＯＬＦＩＲＩ方案化疗后出现的不良反应主要为腹泻及　
中性粒细胞减少，多为１－２级，对症治疗后好转。无　
相关死亡事件发生。３～４级不良反应的情况：腹泻　
２７例（１３．４％）、白细胞减少１９例（９．４％）。ＴＡ６／ＴＡ６　
与ＴＡ６／ＴＡ７基因型患者出现３级以上腹泻、白细胞　
减少与１－２级之间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。２　
例ＴＡ７／ＴＡ７基因型患者出现３、４级腹泻各１例，３　
级白细胞减少１例。血小板减少２２例。均为１～２　
级，其中ＴＡ６／ＴＡ６基因型ｌ６例（１０．３％），ＴＡ６／ＴＡ７　
基因型６例（１３．６％），两者之间差异无统计学意义　

＝
０．４００，Ｐ＝０．５２７）。无３级以上血小板减少。　
ＵＧＴ１Ａ１基因型与药物不良反应的关系见表１。　
３讨　论　
ＩＲＩ是拓扑异构酶Ｉ的抑制剂，并通过抑制　
ＤＮＡ的复制而发挥其细胞毒性。ＩＲＩ的主要毒性如　
腹泻和白细胞减少都与ＩＲＩ的活化代谢产物ＳＮ一３８　
的水平增加有关，葡萄糖醛基化灭活ＳＮ．３８，葡萄　
糖醛基化由肝脏ＵＧＴ１Ａ１调节。ＵＧＴ１Ａ１可催化　
ｓＮ一３８、胆红素等发生醛酸化反应，使ＳＮ．３８转变为　
非活性形式ＳＮ一３８Ｇ。研究发现．人群中存在　
ＵＧＴ１Ａ１启动子的多态性，其中５－８个ＴＡ重复序　
列变化不等。野生型６个ＴＡ重复（ＵＧＴＩＡ１　１）的等