如何提高细胞转染效率(Entranster)？
细胞转染经验
转染注意因素有血清时的转染血清一度曾被认为会降低转染效率，但只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。
转染过程在两步中需要使用培养基做为稀释液：在DNA-阳离子脂质体复合物准备过程以及复合物同细胞接触过程。
在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。
但在复合物形成后，在加入细胞中前可以加入血清。
阳离子脂质体和DNA 的最佳量在使用血清时会有所不同，因此如果你想在转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。
大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。
对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用OPTI-MEMⅠ培养基，一种营养丰富的无血清培养基，或者在转染培养基中使用血清。
对于对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。
培养基中的抗生素抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。
这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。
这降低了细胞的活性，导致转染效率低。
所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。
这样，在转染前也不必润洗细胞。
对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。
另外，为了保证无血清培养基中细胞的健康生长，使用比含血清培养基更少的抗生素量。
细胞维护和培养的演变可以通过常规的次培养步骤保持转染铺板前的细胞健康。
每周传代一到两次，稀释程度使得下次传代前细胞几乎融合。
不要使细胞保持融合超过24小时。
大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。
细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。
这会导致和转染相关的细胞行为的变化。
如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。
细胞培养转染技术的使用注意事项
细胞培养转染技术的使用注意事项细胞培养转染技术是生物学、医学研究中常用的一种技术手段，它通过引入外源DNA或RNA分子到目标细胞中，实现对细胞功能的改变和基因表达的调控。
在进行细胞培养转染技术时，需要注意以下几个方面的事项，以确保实验结果的准确性和可重复性。
1.选择合适的细胞株和培养条件在进行细胞培养转染技术之前，需要选择适合的细胞株和培养条件。
不同细胞株对转染方法的适用性有差异，因此要根据实验目的选择合适的细胞株。
此外，要做好细胞的预处理工作，保证细胞的健康状况和培养环境的稳定性。
2.选择合适的转染试剂和方法在细胞培养转染技术中，选择合适的转染试剂和方法是非常重要的。
常见的转染试剂包括化学试剂、病毒载体和电穿孔等，每种方法都有其优缺点和适用范围。
在选择转染试剂时，要考虑到实验目的、细胞类型，以及试剂对细胞的毒性影响等因素。
同时，要根据实验需要选择合适的转染方法，如瞄准细胞核或质粒转染等。
3.优化转染条件转染过程中的能量和试剂浓度等条件对转染效率有重要影响。
因此，需要进行一系列的优化实验，以确定最佳的转染条件。
可以尝试不同的试剂浓度、转染时间和培养温度等参数，以提高转染效率并减少毒性和非特异性效应。
4.合理设计实验对照组在进行细胞培养转染技术时，应合理设计对照组。
对照组是用来验证实验结果的重要组成部分，它通常包括阴性对照组和阳性对照组。
阴性对照组是指未转染或使用空载体转染的细胞，用以排除实验结果中的背景噪音和非特异性效应。
阳性对照组是指已知有效的转染试剂或方法，用来验证实验的可行性和准确性。
5.合理设计实验时间和重复次数在进行细胞培养转染实验时，需要合理安排实验时间和重复次数。
通常情况下，要在不同时间点收集样本并进行分析，以确定转染效果的持久性和稳定性。
此外，为了提高实验结果的准确性和可靠性，建议进行适当的重复实验，统计分析结果的差异性。
6.正确选择检测方法和时间在转染后，需要通过合适的方法检测目标基因或蛋白的表达情况。
细胞转染的原理
细胞转染的原理一、细胞转染的基本概念细胞转染是指将外源性DNA或RNA等物质导入到细胞内，以达到改变细胞基因表达或功能的目的。
它是生物学研究中常用的技术手段之一，广泛应用于基因治疗、药物筛选和基因功能研究等领域。
二、细胞转染的方法1. 化学法：通过化学试剂（如聚乙烯醇、离子脂质体等）将DNA或RNA导入到细胞内。
这种方法简单易行，但毒性较大且效率不高。
2. 物理法：通过机械冲击（如电穿孔）、高压注射、微注射等方式将DNA或RNA直接注入到细胞内。
这种方法效率较高，但操作复杂且对细胞有一定伤害。
3. 病毒载体法：利用病毒作为载体将DNA或RNA导入到细胞内。
这种方法效率高，但存在安全隐患和限制性较大。
三、化学法转染原理1. 离子脂质体介导转染离子脂质体是由阳离子表面活性剂和阴离子脂质组成的复合物，具有良好的生物相容性和可生物降解性。
在转染过程中，DNA或RNA与离子脂质体形成复合物，通过静电作用与细胞膜结合并进入细胞内。
此外，离子脂质体还能促进细胞内吞作用和溶酶体逃逸，提高转染效率。
2. 聚乙烯醇介导转染聚乙烯醇（PEI）是一种阳离子聚合物，在水中能形成稳定的颗粒。
在转染过程中，PEI与DNA或RNA形成复合物，通过静电作用与细胞膜结合并进入细胞内。
PEI不仅能促进细胞内吞作用和溶酶体逃逸，还能与核糖体结合并促进基因表达。
四、化学法转染优缺点1. 优点：简单易行、操作方便、不需要专门设备。
2. 缺点：毒性较大、效率低、对不同类型的细胞有一定限制。
五、物理法转染原理1. 电穿孔法电穿孔法利用电场作用使细胞膜通透，形成微小孔道，从而将DNA或RNA导入到细胞内。
电穿孔法的优点是操作简单、效率高，但缺点是对细胞有一定伤害。
2. 高压注射法高压注射法是通过高压气流将DNA或RNA直接注入到细胞内。
这种方法效率高，但对细胞有较大的伤害。
3. 微注射法微注射法是在显微镜下使用微针将DNA或RNA直接注入到单个细胞内。
sirna转染实验步骤及实验要点
sirna转染实验步骤及实验要点siRNA转染实验步骤如下：1.细胞接种：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度在30%左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。
2.转染过程：•取0.67μg (50pmol) 的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。
注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。
•取1μl的EntransterTM-R4000，然后加入24μl无血清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25μl。
室温静置5分钟。
•将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。
转染复合物制备完成。
•将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。
注意：对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。
•转染后6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。
3.观察和检测：根据具体实验需求，可以在转染后的不同时间点观察细胞状态、检测基因表达、蛋白质表达等。
实验要点：1.细胞接种密度要适宜，一般在30%左右汇合度较好。
2.无血清稀释液的选择对于siRNA的稳定性和转染效率至关重要。
建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640等品牌。
3.在制备转染复合物时，要保证各个步骤的混合均匀，避免产生气泡。
4.在将转染复合物加入细胞时，要保证细胞的生存环境，避免对细胞造成损伤。
5.在转染后的观察和检测中，要注意保证实验结果的准确性和可靠性。
以上信息仅供参考，建议查阅专业文献获取更准确的信息。
如何进行动物基因过表达实验（Entranster-invivo）
动物体内DNA转染试剂Entranster-in vivo DNA，轻松进行DNA体内转染，实现基因过表达，蛋白功能检测等的实验，3天可得出结果，下面以12.5μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积100μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。
局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。
1. 核酸的稀释。
将12.5μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl(如核酸原液浓度小，注射体积会增大)，加入12.5ul的水，再加入10%葡萄糖溶液(w/v)25μl，终体积50μl，充分混匀。
2. 转染试剂的稀释。
取25μl的Entranster TM-in vivo试剂用25μl 的10%葡萄糖溶液稀释，终体积为50μl，充分混匀。
3. 转染复合物形成。
立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中，充分混匀。
4. 室温静置15分钟。
配制好的转染复合物请即配即用，不宜长期存放。
5. 动物注射。
说明：1).尾静脉注射时请掌握注射技巧，一般选用远端1/3处静脉注射，如感觉到较强阻力，请停止注射，重新寻找静脉进行操作，不要强力推注，否则容易将药液注射在尾部，导致尾部溃烂。
注射完成后移去针头，按压针孔10秒以上，防止药液流出。
2). 0.625mg/kg的给药剂量是起始给药剂量，如果动物可以耐受，可以按比例增加剂量；如果动物不能耐受，可以适当同比例减少剂量。
3).局部注射，尽可能多注射药液，有利于提高转染效果。
6. 基因表达检测。
一般来说，根据注射方法和靶器官的差异，12-48小时后基因表达效果较好。
7. 长期给药。
一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。
如果需要维持长期效果，可以采用多次注射的方法，注射频度一般为每间隔2-3天一次，也可以根据实验情况适当延长至每7天一次。
动物体内转染(Entranster)答疑
动物体转染答疑----用RNA或DNA直接注射动物完成干扰和表达动物体转染，简单地说，就是用RNA和DNA直接打动物完成干扰和表达。
再通俗地说，用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA)，就可以完成以前的动物转基因或者基因敲除的实验，无需再用病毒或者基因敲除动物。
实验周期可以缩短为几天，花费几千元即可进行实验。
动物体转染技术的出现，让广大生物医学研究者，轻松进行动物的基因干扰、导入等操作。
尤其是临床医学工作者，可以在很少工作量较少经费的情况下，直接针对研究的疾病进行动物实验，发表高水平文章。
比如在英格恩客户已发表的文章中，有尾静脉注射DNA研究治疗病毒性心肌炎，有皮下肿瘤注射miRNA研究治疗结肠癌，有脑室注射siRNA研究脑缺血机理，有皮肤涂抹siRNA治疗皮肤瘢痕等。
这些研究都非常有临床和现实意义。
由于动物体转染技术应用的时间不长，对这种崭新的技术人们还不太了解。
此次受丁香园邀请，特开此动物体转染相关实验技术答疑专帖。
对站友们提出的问题给予解答，希望能够和大家相互学习，共同进步。
任何与动物体转染有关的问题（包括实验设计、产品、实验过程、结果分析、文献等问题），大家尽管提出，我们会尽力解答，也欢迎站友们参加讨论。
技术资料目录：1.体转染试剂的原理和方法1).动物体转染技术可以做什么？2).体转染的原理3).体转染的过程4).体转染需要的实验条件5).体转染适合进行怎样的实验6).体转染可以在哪些组织器官进行7).应用体转染试剂发表的部分文献8).动物体转染和病毒感染的比较9).动物体转染和基因敲除的比较2.体转染实验的设计1).需要的材料2).需要的时间3).需要的费用4).常见的结果检测方法3.体转染过程相关问题及解答1).体转染试剂对动物有什么影响？2).注射后，试剂是如何在体分布的，有靶向性吗？3).转染试剂和核酸需要使用多少？提问与解答：1、如何技术上解决（排除）RNAi的非特异性？是否需要复原实验（Rescue Experiment）。
细胞转染技术的使用教程
细胞转染技术的使用教程细胞转染技术是生物学研究和生物医学领域中一项重要的实验技术，它能够将外源基因或其他生物分子导入到目标细胞，从而改变细胞的性状和功能。
本篇文章将介绍细胞转染技术的基本原理、常用的转染方法以及技术操作的注意事项。
一、细胞转染技术的原理细胞转染技术通过物理、化学和生物学方法将外源基因或其他生物分子导入到目标细胞中。
常见的转染方式包括病毒介导转染、化学物质介导转染、电穿孔等。
病毒介导转染是利用病毒作为基因载体，通过病毒的复制和传播机制将外源基因导入目标细胞。
化学物质介导转染则是利用化学物质改变细胞膜的通透性，使外源基因进入细胞。
电穿孔则是利用高压电脉冲破坏细胞膜的完整性，使外源基因进入细胞。
二、常用的转染方法1. 病毒介导转染病毒介导转染是细胞转染中最常用的方法之一，常见的病毒载体包括腺病毒（Adenovirus）、慢病毒（Lentivirus）和腺相关病毒（Adeno-Associated Virus，AAV）等。
病毒载体能够高效地将外源基因导入目标细胞，并在细胞内稳定表达。
病毒介导转染具有转染效率高、表达时间长等优点，但也存在一些限制，如细胞感染范围狭窄、潜在的免疫反应等。
2. 化学物质介导转染化学物质介导转染常用的试剂有磷脂体（Liposome）和聚乙烯亚胺（Polyethyleneimine，PEI）等。
这些试剂能够与外源基因形成复合物，通过与细胞膜结合而进入细胞。
化学物质介导转染方法具有转染效率高、适用于多种细胞类型等优点，但也存在一些缺点，如细胞毒性、细胞内溶酪斑形成等。
3. 电穿孔电穿孔是一种利用高压电脉冲破坏细胞膜的完整性，使外源基因进入细胞的方法。
通过施加电场，电穿孔能够短暂地增加细胞膜的通透性，使外源基因能够进入细胞质。
电穿孔方法具有转染效率高、适用于多种细胞类型等优点，但操作相对复杂，需要专业的设备和技术支持。
三、技术操作的注意事项1. 细胞的选择和培养在进行细胞转染实验之前，需要选择适宜的细胞系进行培养。
细胞转染的方法有哪些？
细胞转染的方法有哪些？
1. 脂质体法。
中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。
带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。
脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。
阳离子脂质体细胞毒性相对较高，对不同的细胞可能会干扰细胞的代谢。
2. 电穿孔法。
通过短暂的高电场电脉冲处理细胞，沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。
DNA被认为是穿过孔扩散到细胞内的。
电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。
理论上说电穿孔法可用于各种细胞，且不需要另外采购特殊试剂，但需要昂贵的电转仪。
此法每次转染需要更多的细胞和DNA，因为细胞的死亡率高。
每种细胞电转的条件都需要进行多次优化。
3. 病毒介导的感染。
感染需要将目的基因克隆到特定的病毒体系中，经过包装细胞的包装得到改造后的病毒，再进行感染。
优点是转染效率特别高，尤其是难以转染的原代细胞、活体细胞。
缺点是构建病毒周期长，环节多，易出错，费用也高。
4，非脂质体转染。
最新的纳米聚合物转染试剂，如Entranster 试剂，纳米材料，细胞毒性小，转染效率高，渐渐成为各大实验室的首选转染试剂。
简析细胞转染
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。
在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
转染方式有瞬时转染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。
）和稳定转染： (外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。
)主要方法如下：
影响转染效率的因素有很多，具体如下：
1.转染试剂
要选择高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。
2.细胞状态
一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。
最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞。
3.细胞密度
细胞密度对转染效率有一定的影响。
不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同。
4.血清
血清的存在会影响DNA-转染复合物的形成，但只要在复合物形成时用无血清培养基或PBS来稀释DNA和转染试剂就可以了。
5.DNA质量
DNA质量对转染效率影响非常大。
一般的转染技术基于电荷吸引原理，如果DNA不纯，如带少量的盐离子，蛋白，代谢物污染都会影响转染复合物的形成及转染的进行。
转染效率低的原因
转染效率低的原因
转染效率低的原因可能有很多，以下是一些可能的原因：
1.细胞状态不佳：如果细胞处于不良状态，例如在生长期末期或过于密集，转染的效率可能会受到影响。
2.转染剂浓度过高或过低：如果转染剂的浓度过高或过低，都可能影响转染效率。
过高的浓度可能会导致细胞死亡，过低的浓度可能会导致转染效率低。
3.转染剂和DNA的配比不合适：如果转染剂和DNA的配比不合适，也可能导致转染效率低。
4.DNA质量不好：如果DNA质量不好，例如存在RNA酶污染、受损或纯度过低，也可能影响转染效率。
5.细胞类型不同：不同的细胞类型可能对不同的转染方法和条件有不同的响应。
6.转染时间和处理温度不合适：转染时间和处理温度可能也会影响转染效率，不同的细胞类型可能需要不同的时间和温度来最大化转染效率。
综上所述，要提高转染效率，我们需要仔细调整各种条件，找到最适合的转染方法和条件，并且不断测试和改进，以提高转染效率。
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1．选择合适的转染试剂
不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需
要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转
染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最
适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试
剂。如英格恩的纳米材料的Entranster试剂。
2．保持最佳的细胞状态
一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。最适合转染的细胞是
经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。细胞培养
在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演
化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。也就是说同一种系的细胞株，在各
实验室不同培养条件下，其生物学性状发生不同程度的改变，导致其转染特性也
发生变化。因此，如果发现转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复
最佳结果。
3．选择高效的转染方法
不同转染试剂有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具
体转染试剂推荐的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒
定量差异，操作手法上的差异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条
件来确定最佳转染条件。
4．确保所构建载体的质量。
转染载体的构建（病毒载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）
也影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高，但不同病毒载体有其
特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细
胞，此外还需考虑一些安全问题（如基因污染）。除载体构建外，载体的形态及
大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定
转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成
或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构
建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。