几种不同样本的DNA提取方法
dna的提取方法与步骤
dna的提取方法与步骤DNA的提取方法与步骤DNA提取是分子生物学中的重要实验步骤，它可以从细胞中分离出DNA，为后续的实验研究提供基础。
本文将介绍DNA的提取方法与步骤。
一、材料准备1. 细胞样本：可以是动物组织、植物组织或微生物培养物等。
2. 细胞裂解缓冲液：常用的裂解缓冲液包括Tris-HCl缓冲液和EDTA缓冲液。
3. 蛋白酶K：用于降解蛋白质。
4. 盐溶液：如NaCl溶液，用于沉淀DNA。
5. 异丙醇：用于沉淀DNA。
6. 酚-氯仿混合液：用于分离DNA。
二、DNA提取步骤1. 细胞裂解：将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中，使用均质器或超声波仪器对细胞进行裂解，使细胞壁破裂释放出细胞内的DNA。
2. 蛋白酶处理：加入适量的蛋白酶K，将蛋白质降解，使DNA从蛋白质中解离出来。
3. 盐沉淀：加入盐溶液，通过离心将DNA沉淀下来。
盐溶液中的离子会中和DNA分子上的电荷，使其变得不溶于水，从而沉淀下来。
4. DNA纯化：将DNA沉淀物用异丙醇洗涤，去除杂质。
然后使用乙酸溶解DNA沉淀物，使其变为可溶于水的形式。
5. DNA分离：将DNA溶液与酚-氯仿混合液混合，酚层中的蛋白质和DNA杂质会与酚结合，而DNA会在水相中。
通过离心分离酚相和水相，得到纯净的DNA溶液。
6. DNA沉淀：将DNA溶液加入异丙醇中，通过离心使DNA沉淀下来。
7. DNA溶解：将DNA沉淀物用适量的缓冲液溶解，获得最终的DNA溶液。
三、实验注意事项1. 实验操作要严格遵守无菌技术，避免DNA的污染。
2. 实验过程中要注意温度的控制，避免DNA的降解。
3. 实验器材要干净，以免杂质对DNA提取的影响。
4. 实验过程中要轻柔操作，避免DNA的断裂。
四、常见问题及解决方案1. DNA溶解不完全：可以加热溶解，或者使用酶切酶处理。
2. DNA沉淀量低：可以增加盐溶液的浓度，或者加入载体DNA增加DNA的沉淀量。
3. DNA质量差：可以使用纯化试剂盒进行纯化处理，或者使用Phenol-Chloroform-Isoamyl Alcohol（PCI）进行提取。
ctab法提取dna流程
CTAB法提取DNA流程引言DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础实验之一，它可以用于从各种生物样品中纯化DNA，并用于进一步的分析和研究。
CTAB法是一种常用的DNA提取方法之一，其在提取DNA时使用了CTAB作为离子相互作用剂，能够有效地纯化DNA。
本文将详细介绍CTAB法提取DNA的流程。
实验材料与设备•样本：细菌、植物或动物组织样本•CTAB提取缓冲液：含有CTAB、EDTA和TRIS的缓冲液•醇类溶液：包括乙醇和异丙醇•氯仿•甲醇•高盐溶液：含有NaCl和CTAB的溶液•TE缓冲液：含有TRIS和EDTA的缓冲液•离心管•离心机•热平台实验步骤1. 样本处理1.将样本收集或制备成细胞输液。
2.使用离心机将细胞输液离心，分离得到细胞沉淀。
2. 细胞裂解1.向细胞沉淀中加入适量的CTAB提取缓冲液，并充分混匀。
2.放置于热平台上，在适当的温度下，通常为60°C-65°C，孵育一段时间，使细胞充分裂解。
3. 蛋白质沉淀1.将蛋白质沉淀剂（氯仿）加入到裂解液中，充分混匀。
2.离心管盖住盖子，以高转速离心，使裂解液分为上清液和沉淀两部分。
4. DNA沉淀1.将上清液转移到新的离心管中。
2.加入等体积的醇类溶液，充分混匀。
3.放置于冰箱中，使DNA在醇类溶液中沉淀。
5. DNA洗涤1.使用离心机将DNA沉淀离心，将上清液倒出，注意不要破坏DNA沉淀。
2.加入预冷的85%乙醇，使DNA沉淀溶解。
3.放置于冰箱中，使DNA在乙醇中沉淀。
4.重复以上步骤，直至DNA沉淀洗涤干净。
6. DNA溶解1.使用离心机将DNA沉淀离心，将上清液倒出。
2.加入适量的TE缓冲液，使DNA沉淀溶解。
结果与讨论通过CTAB法提取DNA的流程，我们可以成功地从细菌、植物或动物组织样本中获得高质量的DNA。
这种方法利用CTAB作为离子相互作用剂，能够有效地去除细胞的蛋白质和其他杂质，从而纯化DNA。
在DNA溶解的步骤中，使用TE缓冲液可以保护DNA的稳定性并提高其质量。
ffpe样本dna快速提取的方法
ffpe样本dna快速提取的方法在分子生物学研究中，大量的核酸样本提取是研究的基础，DNA提取是基因组学研究最重要的环节，样本DNA的提取方法具有重要的意义。
随着多维度细胞及分子系统生物学等研究成果的发现，对有限组织样本提取DNA的要求越来越高。
Formalin-fixed,paraffin-embedded(FFPE)是一种常见的组织制备方法，具有高度保存结构，广泛应用于组织病理学，肿瘤学等。
FFPE样本DNA提取包括细胞破碎、样本剥离、DNA提取等步骤，其中DNA提取是一个很重要的环节，其成功的进行取决于多种参数的考量，如提取化学品的种类、比例等，以及提取步骤和提取条件的选择，FFPE样本DNA的提取，是基因组学研究的重中之重。
各种提取法通常都包括以下部分：细胞破碎、样本剥离、核酸提取和试剂清洗。
FFPE样本DNA提取方法一般采用现代试剂配方，同时兼顾效率、成功率和提取质量。
FFPE样本DNA提取首先要有一个优质的核酸提取试剂，它能让DNA在最佳条件下，以最简单、最完整的方式进行提取。
提取试剂一般由聚乙二醇(PEG)、抗原抗体和荧光染料组成，PEG能加快核酸提取过程，抗体可提高样本DNA的提取率，而荧光染料可以加速和控制提取过程，更容易观察样本DNA提取情况。
FFPE样本DNA提取有几种方法，主要有机械法、破碎力学法、染料法、超声法、热力学法和膜法等，它们分别有不同的特点。
机械法是典型的组织样品提取方法，它采用机械的手段直接破碎样品，以实现DNA的提取，这种方法所耗费的时间短，而且不需要过多的试剂，但细胞破碎程度较低，提取效率不高。
破碎力学法采用的是物理力学的原理，利用振动施加到组织样本上，以达到破碎样本细胞的效果，提取效率较高，但可能出现组织细胞损伤，无法完全提取DNA。
染料法则采用特定染料将DNA与细胞分离，在配合其他试剂的作用下，使得DNA能够完整提取，这种方法简单、快捷，可以得到高质量的DNA，被广泛应用于组织样本的提取。
DNA提取原理和方法
DNA提取原理和方法样本处理是DNA提取的第一步，主要目的是将样本处理成适合提取DNA的形式。
不同的样本需要不同的处理方法。
例如，从动物组织中提取DNA时，可能需要粉碎组织样本，使得细胞更容易破碎，从而释放DNA。
而从细菌培养液中提取DNA时，则需要先离心去除其他细胞组分，然后使用溶解酶破坏细胞壁。
细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一、细胞破碎的目的是释放DNA分子，使其能够在后续步骤中被分离和纯化。
常见的细胞破碎方法包括机械破碎、化学破碎和酶解破碎。
机械破碎是使用物理力量（例如，搅拌、磨碎、超声波等）来破坏细胞壁，从而释放细胞内的DNA。
化学破碎是使用化学物质（例如，洗涤剂、酸、碱等）来破坏细胞壁和细胞膜，从而释放DNA。
酶解破碎是使用特定酶（例如，蛋白酶、胰酶等）来降解蛋白质和核酸，从而破碎细胞。
核酸纯化是DNA提取的核心步骤，其目的是将DNA与其他细胞组分（如蛋白质、RNA、杂质等）分离。
核酸纯化的方法有很多种，常见的包括酚-氯仿提取法、离心柱纯化法和磁珠纯化法。
酚-氯仿提取法是最常用的DNA纯化方法之一、该方法先使用酚提取样品中的核酸，然后使用氯仿去除蛋白质。
离心柱纯化法是使用离心管柱进行分离和纯化，其中DNA结合到离心柱上的固相载体上，而其他细胞组分则被洗脱。
磁珠纯化法是使用表面被修饰的磁珠与DNA结合，并使用磁场来分离和纯化DNA。
DNA提取完成后，需要对提取得到的DNA进行测量。
DNA的浓度和纯度测量是判断DNA质量的重要指标。
常用的测量方法包括比色法、荧光分光光度法和凝胶电泳法。
比色法是使用特定的染料与DNA结合，并通过比色读数来测量DNA的浓度。
荧光分光光度法是使用荧光分光光度计来测量DNA与DNA结合染料的荧光强度，进而计算DNA浓度。
凝胶电泳法是将DNA经过电泳分离，然后使用负载荧光染料或核酸染料在凝胶中可视化DNA，从而判断其浓度和纯度。
总之，DNA提取是从生物样本中分离和纯化DNA的重要步骤。
DNA提取方法和试剂作用详解
1试剂的作用氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。
（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
2 DNA提取分为三个基本步骤每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。
.细胞的破碎细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。
方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。
利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。
加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA 结合的组蛋白。
将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。
另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA 的商业化试剂盒。
DNA提取的几种方法(1).浓盐法A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳抽提,得到的DNA粘液与含有少量蛋白质氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNA,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。
核酸提取经典方法
核酸提取经典方法核酸提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，用于从生物样本中提取DNA或RNA。
以下是一些经典的核酸提取方法：1. 酚-氯仿法：这是最常用的核酸提取方法之一。
它通过酚的溶解和蛋白质的沉淀来分离DNA或RNA。
该方法适用于从细菌、真菌、植物和动物等不同来源的样本中提取核酸。
2. 硅胶柱法：这是一种基于硅胶柱的核酸提取方法。
样本先经过细胞裂解，然后通过硅胶柱进行吸附和洗脱，最终得到纯净的DNA 或RNA。
硅胶柱法具有高效、快速和高纯度的特点。
3. 盐析法：盐析法利用核酸和盐的相互作用来分离DNA或RNA。
通过调节盐浓度，可以使核酸从溶液中沉淀下来。
该方法适用于大规模提取核酸的情况，例如从细菌培养物中提取大量的DNA。
4. 磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的核酸提取方法。
样本中的核酸先与磁珠结合，然后通过磁力将磁珠和核酸一起分离出来。
该方法具有高效、快速和易自动化的特点，适用于高通量的核酸提取。
5. 高盐法：高盐法利用高盐浓度来沉淀DNA或RNA。
通过加入高盐缓冲液，可以使核酸结合起来形成沉淀物。
该方法适用于从血液等样本中提取核酸。
6. 隔离法：隔离法是一种通过细胞壁溶解和蛋白质去除来提取核酸的方法。
该方法适用于从真菌和植物等样本中提取核酸。
7. 酚氯仿异硫氰酸胍法：该方法是酚-氯仿法的改进版，通过加入异硫氰酸胍来进一步去除蛋白质。
该方法适用于从细胞培养物或组织样本中提取核酸。
8. 碱裂解法：碱裂解法利用高碱性溶液来裂解细胞，并中和后沉淀核酸。
该方法适用于从血液、组织或细菌培养物中提取核酸。
9. 酶裂解法：酶裂解法利用酶来降解蛋白质和核酸之间的连接，从而分离核酸。
该方法适用于从酶可溶化的样本中提取核酸。
10. 玻璃纤维柱法：玻璃纤维柱法利用玻璃纤维柱进行核酸吸附和洗脱。
样本先经过细胞裂解，然后通过玻璃纤维柱进行纯化。
该方法适用于从血液或组织样本中提取核酸。
以上是一些常用的核酸提取方法，每种方法都有其适用的样本类型和优缺点。
DNA提取
二氧化硅（硅胶膜）法
二氧化硅（SiO2）可以特异性吸附DNA，与 DNA结构及片段大小无关。在高盐以及低pH值 溶液中，二氧化硅可以吸附DNA；在低盐高pH 值溶液中可把DNA洗脱下来，从而达到提取纯 化的目的。
OMEGA公司：E.Z.N.A.® Forensic DNA Kit
优点：提取的DNA纯度高，不涉及使用有毒 试剂。 缺点：操作中需要多次离心，使得操作繁琐， 很难实现DNA的自动化提取。
H6.8)，50 mmol/L EDTA，1% β-巯基乙醇；
4 mol/L异硫氰酸胍，0.5%十二烷基肌氨酸钠，0.1 mmol/L β-巯基乙醇，25 mmol/L柠檬酸钠；
◆
苯酚：蛋白变性剂，同时抑制DNase的降解作用。 用苯酚处理匀浆液时，破坏蛋白质胶体溶液的稳定 性，使蛋白质变性沉淀。离心后，有机溶剂于试管 底层(有机相)，DNA存在于上层水相，蛋白质沉淀 存在于两相之间。 氯仿：加速有机相与液相分层，去除水相中的迹量 酚（酚易溶于氯仿中）。
Chelex-100法
Chelex-100是一种化学鳌合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯 共聚体组成。含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，鳌合 多价金属离子，尤其是选择性整合二价离子，防止 DNA降解。
在高温低离子强度下可催化DNA释放，并能结合许多 可能影响PCR反应的抑制剂和杂质。 通过离心除去Chelex-100颗粒，使这些与Chelex-100结 合的物质与DNA分离。
提取过程复杂，耗时，多管，检材易污染 及有机试剂污染环境、伤害人体。
盐析法
不适宜提取微量检材。
法医DNA提取纯化技术发展趋势和方向
快速和简单化，减少交叉污染； 高效； 环保； 自动化； 解决微量、疑难生物检材DNA的提取和富集
小白鼠6种组织部位总DNA不同提取方法的比较
小白鼠6种组织部位总DNA不同提取方法的比较DNA是生物体的基本遗传物质。
基因组DNA的提取是分子生物学的基础试验操作，其提取效率和质量的好坏直接决定了后面一系列基因工程试验的成败，如基因分离、AFLP、RAPD、SSR等。
因此•学习、掌握DNA提取方法并对其迸行比较、总结，有利于后续试验的顺利开展。
国内外研究人员已经发现并使用了许多种DNA提取方法［2-7］，并且针对不同生物体的具体特点，对许多方法逬行了改良，摸索出适用于具体物种的高效方法［8-15］。
目前，传统的SDS法和CTAB 法由于其成本低廉、提取的DNA质量相对较好，在实际应用中仍占有主要地位。
随着生物技术的普及和应用，使用试剂盒提取基因组DNA逐渐增多［16-19］。
基因组提取试剂盒具有操作简便、节省时间等独特优势，但是对于一般的实验室、特别是普通高等学校来说，由于价格较为昂贵，在很大程度上限制了其使用范围；尤其对刚接触分子生物学试验的初学者，只知道按照说明书流程操作，不了解试剂的化学成分、具体配制方法及作用，不利于理解、掌握试验的基本原理，动手能力差、试验技能得不到提高，最终出现一旦离开试剂盒，什么试验也不会做的情况。
本试验以普通试验动物小白鼠作为提取基因组DNA的材料，选取小白鼠的6个组织部位，分别是肝、脾、肾、尾、肺和心脏，采用提取基因组DNA的经典方法SDS法和CTAB法，提取小白鼠的基因组DNA，并对其质量、浓度、纯度进行检测，从中筛选出经济、简便、易于操作、质量良好的基因组DNA，这对于今后的试验教学和科研工作具有重要的指导作用。
1材料和方法1.1材料1.1.1试验材料小白鼠购自沈阳医学院实验中心。
1.1.2试剂dNTP 'DNA Marker 高保真酶均购自宝生物工程（大连）有限公司‘引物于Invitrogen北京分公司合成» CTAB和SDS法提取液配制所需药品购自Sigma，其余所用的化学试剂（氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇等）均为国产分析纯试剂。