果酒酵母发酵及菌种保藏
人教版 高中生物选修一默写(含答案)
专题一传统发酵技术的应用课题1 果酒和果醋的制作1．果酒制作的原理（1）人类利用微生物发酵制作果酒，该过程用到的微生物是，它的代谢类型是，其大量繁殖时的方程。
进行发酵的方式式是。
（2）果酒制作条件传统发酵技术所使用的酵母菌的来源是。
酵母菌生长的最适温度是； PH呈；（3）红色葡萄酒呈现颜色的原因是：酒精发酵过程中，随着的提高，红色葡萄皮的进入发酵液，使葡萄酒呈色。
（4）在、的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其它微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。
2．果醋的制作原理（1）果醋发酵菌种是，新陈代谢类型。
（2）当氧气和糖源充足时醋酸菌将糖分解成，当糖源不足时醋酸菌将变为再变成醋酸，其反应式。
3．操作过程应注意的问题（1）为防止发酵液被污染，发酵瓶要用消毒。
（2）葡萄汁装入发酵瓶时，要留出大约的空间，为什么。
（3）制作葡萄酒时将温度严格控制在。
制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在，并注意适时充气，为什么。
4．酒精的检验（1）试剂：。
（2）条件及现象：在条件下，反应呈现。
5.制作果酒、果醋的实验流程挑选葡萄→→→→↓↓果酒果醋6．你认为应该先洗葡萄还是先除去枝梗，为什么？。
7.每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖；制醋时，再将瓶盖打开，盖上一层纱布，进行葡萄醋的发酵，其目的是。
8.排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接，其目的是。
课题2 腐乳的制作1.制作原理（1）．经过微生物的发酵，豆腐中的蛋白质被分解成小分子的和，脂肪被分解成和，因而更利于消化吸收。
（2）．腐乳的制作过程中起主要作用的微生物是。
它是一种丝状。
（3）．现代的腐乳生产是在严格的条件下，将优良菌种直接接种在豆腐上，这样可以避免其他菌种的，保证产品的质量。
2. 腐乳制作的实验流程：让豆腐长出→→→密封腌制。
3.实验注意事项（1）在豆腐上长出毛霉时，温度控制在，自然条件下毛霉的菌种来自空气中的。
（2）将长满毛霉的豆腐块分层加盐，加盐量要随着摆放层数的加高而，近瓶口的表层要。
一种保藏酵母菌的方法发明专利1
一种保藏酵母菌的方法技术领域本发明涉及一种保藏酵母菌的方法，属于酵母菌的保藏技术领域。
背景技术酵母为单细胞真菌，是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称。
酵母无害，容易生长，可将大分子物质分解成细胞新陈代谢易于利用的小分子物质，属于异养生物。
酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物，其既可用于酿造生产，又是遗传工程和细胞周期研究的模式生物，受到广大科研工作者的青睐。
酿酒酵母在分子遗传学方面被人们的认识最早，也是最先作为外源基因表达的酵母宿主，毕赤酵母作为宿主的外源基因表达系统近年来发展迅速，应用也最为广泛，此外，汉逊酵母中较高的目的蛋白表达量使得其也日益应用于大规模生产中。
随着大量新型酵母工程菌株的构建，酵母工程菌的培养与保存成为了影响其蛋白表达的重要因素：菌种保存方法得当，复苏后酵母生长状态良好，目的蛋白表达量高，产量大大提高。
传统的酵母菌保藏方法主要有两种，一，酵母菌保存于含有一定比例甘油的培养基中，于低温或液氮中保存；二，将酵母中加入脱脂奶粉等保护剂，进行冻干保存。
传统的方法，可以使得酵母成功地复苏培养，逐级放大生产，实现目的蛋白的表达与收获。
然而，传统的保藏方式会造成酵母菌的大量死亡，尤其随着保存时间的增加，酵母的活菌率呈现明显的下降趋势，影响了复苏后的酵母扩大培养。
发明内容本发明的目的在于提供一种提高酵母菌复苏时活菌率的保藏酵母菌的方法、利用该方法保藏的酵母工程菌的目的蛋白表达量也能够获得显著提高。
本发明提供的一种保藏酵母菌的方法，是在酵母菌液中加入甘油和琼脂，混匀后迅速置于液氮中冷冻，之后于-20℃以下长期保藏。
其中，酵母菌液中甘油的终浓度为12％-18％，琼脂的终浓度为0.02％-0.1％，所述％为质量百分比。
优选地，酵母菌液中甘油的终浓度为14％-16％，琼脂的终浓度为0.03％-0.07％，所述％为质量百分比。
更优选地，酵母菌液中甘油的终浓度为15％，琼脂的终浓度为0.05％，所述％为质量百分比。
发酵学生产菌种的培养与保藏 PPT
它比石蜡油封藏法的保藏期长,约1～10年。
5、冷冻干燥法
用保护剂(脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等)制备拟保 藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中,再在低温下快速 将含菌样冻结,并减压抽真空,使水升华将样品脱水干燥,形成 完全干燥的固体菌块。并在真空条件下马上融封,造成无氧 真空环境,最后置于低温下,使微生物处于休眠状态,而得以长 期保藏。
注意事项:
原材料需经过化学分析及摇瓶发酵实验 严格控制灭菌后的培养基质量 使用前应在适当温度下放置一定时间 考虑不同代谢类型的菌落对多种氨基酸的选择
(二)培养温度与湿度
菌体的糖代谢与氮代谢的各种酶类,对温度的敏感性 是不同的,培养温度不同,菌体的生理状态也不同。因此,需 要用最适合孢子生长的温度进行培养。
第二节 种子质量控制
一、影响孢子质量的因素及其控制
培养基、培养温度与湿度、培养时间与接种量。
二、影响种子质量的因素及其控制
孢子质量、培养基、培养条件、种龄与接种量。
一、影响孢子质量的因素及其控制
培养基
影响孢子质量
的因素
及控制 培养条件
接种量
(一)培养基
影响因素:原材料;琼脂的牌号不同;水质的影响
(二) 培养条件
(1)温度 (2)通气量: 在种子罐中培养的种子除保证供给易
被利用的培养基外,有足够的通气量能够提高种子 质量。
➢ 例如,青霉素的生产菌种在制备过程中将通气充足与不足 两种情况下得到的种子分别接入发酵罐内,它们的发酵单 位可相差1倍。
➢ 但也有例外,例如土霉素生产菌,一级种子罐的通气量小对 发酵有利。
A ❖ 冷泉港研究室,美国。 ❖ (3) IAM (Institute of Applied
酵母菌的冷冻保藏方法
酵母菌的冷冻保藏方法
酵母菌的冷冻保藏方法可以分为以下几个步骤：
1. 选择合适的培养基：酵母菌的冷冻保存需要使用特定的培养基。
一般常用的培养基有YEPD（yeast extract peptone dextrose），YPD（yeast extract peptone glucose）等。
2. 准备冷冻培养基：根据所使用的培养基配方准备适量的冷冻培养基，并添加适量的甘油（最常用浓度为20%）作为保护剂。
3. 收集酵母菌：从已培养的酵母菌液体培养物或固体培养物中取出适量的酵母菌。
4. 制备冻存管：在已准备好的冷冻培养基中加入酵母菌，混匀后加入冻存管中。
每个冻存管一般加入适量的酵母菌液体培养物（一般为1-2 mL），然后密封。
5. 冷冻：将密封的冻存管放入低温冰箱或液氮罐中冷冻保存。
温度一般可以设置为-80℃或更低的温度。
6. 保存：将冷冻保存的酵母菌定期检查，并在需要时重新接种到新的培养基上进行培养。
需要注意的是，冷冻保存的酵母菌应该尽可能快地进行解冻，并立即接种到适当的培养基上进行培养，以确保存活率。
1.1果酒和果醋的制作-2020-2021学年高二生物人教版选修1
问题1：图1-4a装置每隔一段时间（12h）拧松瓶盖或打
开排气口，其原因是什么？为什么不能打开瓶盖？
在发酵过程中产生CO2 ，防止瓶内气压过高引起爆裂； 防止杂菌和氧气进入
问题2：图1-4a装置发酵产生酒精后，发酵液盖上一层纱
布的目的？
防止发酵液被污染，因为操作的每一步都可能混入杂菌。
2.发酵装置的设计
2018海南卷30．［选修1：生物技术实践］（15分） 葡萄酒是葡萄汁经酵母菌发酵而成的。酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示。
回答下列问题：
ห้องสมุดไป่ตู้
（1）试管中的X溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，用甲装
置酿制葡萄酒的优点是
（答出两点即可）。
不需要开盖放气；避免了因开盖引起的杂菌污染
（2）葡萄汁装入甲装置时，要留有约1/3的空间，这种做法的目的是
氧气、糖源充足时：
C6H12O6＋2O2
酶
→
2CH3COOH＋2CO2＋2H2O；
缺少糖源、氧气充足时：C2H5OH＋O2酶→ CH3COOH＋H2O。
2.温度控制：最适为30～35 ℃ 酒精发酵的最适温度在哪个范围？
3.氧气控制：需要充足氧气
三、实验设计 1.实验流程
挑选葡萄
冲洗
榨汁
酒精发酵
酒精发酵和醋酸发酵比较
思考： 1、酒精发酵过程中发生“先来水后来酒”现象，
其原因是什么？ 酵母菌首先进行有氧呼吸产生了水，
然后进行无氧呼吸才产生酒精。
2、为什么发酵之后的葡萄酒呈现深红色？
红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈红色。
思考： 3、为什么发酵时不需要灭菌？
在缺氧 、呈酸性的发酵液中，酵母菌能生长繁 殖，而绝大多数其他微生物无法生长。故酵母菌制 酒，不需要灭菌。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法
微生物菌种的保藏是非常重要的，因为这些菌种可能用于各种实验和研究中。
以下是一些常见的微生物菌种保藏方法：
1. 冷冻保存：将菌种在液氮或-80的冰箱中冷冻保存。
这是最常见的保藏方法，能够长期保存菌株并保持其遗传稳定性。
2. 干燥保存：将菌种在无菌室中取出，用无菌纸或吸水纸吸干，然后放入无菌瓶中密封保存。
干燥保存适用于某些孢子或芽孢的微生物，比如放线菌、链霉菌等。
3. 明胶斜培养基保存：将菌种接种在含有明胶的固体培养基上，然后密封保存。
这种方法适用于某些菌株，如革兰氏阳性菌和厌氧菌。
4. 低温保存：将菌种保存在4的冰箱中。
这种保存方式可以在短时间内保持菌株的活性，但不能长期保存。
5. 液氮保存：将菌种在锅内预冷冷冻过的无菌玻璃管中加入10%甘油或蔗糖，然后立即在液氮中保存。
这种方法适用于大多数微生物，并且可以长期保存。
关于菌种的保存方法
关于菌种的保存方法导言菌种的保存是保障微生物研究的重要环节。
微生物资源的丧失对生物科技研究以及工业发展都会带来严重的影响。
因此，科学有效地保存菌种对于保护和利用微生物资源至关重要。
本文将介绍常见的菌种保存方法和技术，旨在帮助科学家和研究人员更好地保存和利用菌种资源。
常见菌种保存方法常温冷冻保存法常温冷冻保存是一种方便简单、成本低廉的菌种保存方法。
常见的常温冷冻保存方法有以下几种：1. 菌种液体冷冻保存：将菌种培养物添加到一定浓度的甘油或乙二醇溶液中，并将其储存于-80的冷冻库中。
这种方法可使菌种长期保存，并保持较高的存活率。
2. 菌种冻干保存：将菌种培养物培养到稳定的菌落状态后，直接将其放入真空冷冻干燥机中，去除菌种中的水分，然后存放于常温下。
这种方法适用于一些耐冷冻干燥的菌种。
3. 菌种在琼脂平板上保存：将菌种制备成沉淀后，均匀涂布在琼脂平板上，经过一定的处理后存放于室温下。
这种方法适用于一些菌种，如革兰氏阳性菌。
低温冷冻保存法低温冷冻保存是较为常用的一种菌种保存方法。
常见的低温冷冻保存方法有以下几种：1. 液氮冷冻保存：将菌种培养物中的菌液通过快速冷冻的方法将其冻结成冷冻物，并储存在液氮罐中。
这种保存方式可以确保菌种较好地保存，并且存活率较高。
2. 低温保存箱保存：将菌种培养物制备成菌种沉淀后，将其存放于-20或-80的低温保存箱中。
这种方法适用于一些需要长期保存的菌种。
菌种保存技术无菌操作在菌种保存的过程中，无菌操作是非常重要的。
无菌操作可以有效避免细菌污染，确保保存的菌种的纯度和保存质量。
1. 工作台的消毒：在进行菌种保存操作之前，需要将工作台表面进行消毒处理，如用75%的酒精擦拭表面。
2. 实验器具的灭菌：将实验器具在高温或高压条件下进行灭菌处理，以确保无菌操作的进行。
3. 空气的灭菌：在无菌操作的环境下，可以通过紫外线灭菌等方法来净化空气，避免空气中的微生物污染。
菌种保存记录在菌种保存的过程中，正确记录菌种保存的相关信息非常重要。
食用菌菌种保藏的6种方法
食用菌菌种保藏的6种方法
菌种保藏的目的是通过降低菌种的代谢活力，使其处于休眠状态，减缓衰亡速度，保持菌种原有优良性状，防止杂菌污染；当恢复生活条件时，菌种能在很短时间内恢复生机，迅速生长繁殖。
母种的保藏有如下方法：
1.斜面冰箱保藏法：把生长丰满健壮的斜面母种，把棉塞在管口剪平，用蜜蜡封口或换用胶塞，存放于摄氏4度冰箱内保存。
高温菌在16摄氏度为宜。
有效期3—6个月。
2.石蜡油保藏法：斜面母种注入经二次灭菌后，在摄氏40度温箱2天蒸发水分而冷却了的石蜡油至斜面顶尖1—1.5厘米处，再用蜜蜡封管口或换用胶塞，直立于摄氏4度冰箱或室温存放。
保存期可1—2年。
3.孢子保藏法：用2×0.5×0.8厘米经灭菌的滤纸条吸附上孢子，可参考孢子分离法，然后把带孢子的纸条放入无菌试管内，置干燥器内2—3天吸干水分，再改用胶塞。
在冰箱或室温内可保存多年。
4.菌丝球保藏法：常用经灭菌的生理盐水、无菌水、蒸馏水、营养液等装入试管约5毫升作媒介，把经过液体培养至对数生长期的菌丝球4—5个，移入媒介内，用胶塞封口，冰箱摄氏4度或室温可保存1—2年。
5.液氮保藏法：常用经灭菌10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水为保护剂，注入斜面母种管，刮下菌丝体成悬浮液或孢子液，吸取菌液0.5—0.8毫升注入已灭菌安瓿管，
熔封管口，置液氮冷冻器内，每分钟降摄氏1度，1小时内使其温度降至摄氏负35度，其后迅速降至气相摄氏负150度，液相摄氏负196度保存。
保存期可超过10年。
6.自然基质保藏法：此法多用于原种保藏。
在一些欠设备的地区，也可作母种保藏法。
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果酒酵母发酵及菌种保藏选取1-2 种酿酒酵母进行小型酿酒实验，在品尝合格并符合规定的感官及理化指标后，选用常用菌种保藏方法对有价值的菌种进行保藏。
1.实验目的和内容1）掌握果酒酿造的原理并对筛选果酒酵母菌种进行发酵性能测定（起酵时间、产酒精度、耐受性能）。
2）用选育果酒酵母进行小型酿酒实验，掌握果酒酿造一般工艺流程。
3）了解并掌握菌种保藏的常用方法及其优缺点。
4）学习几种常用菌种保藏方法：斜面传代保藏方法、液体石蜡保藏方法、沙土管保藏方法、冷冻干燥保藏方法。
2.实验原理果酒发酵：果浆或果汁中的葡萄糖和果糖在酵母菌的作用下，最后生成酒精和二氧化碳。
可用以下反应式来说明：果酒发酵是一个极其复杂的生物化学现象。
在每一步反应过程中都有酶的参与，除了最后生成酒精、二氧化碳和少量的甘油、高级醇类、醛类物质之外，还会生成二磷酸己糖、磷酸甘油醛、丙酮酸、乙醛等许多中间产物。
果酒的发酵分主发酵和后发酵两个阶段，主发酵是将发酵液的糖分变成酒精，后发酵是继续分解残糖为酒精，加速酒的转化，使酒更加稳定。
用人工培养的酵母发酵的称为人工发酵，利用天然酵母发酵的称为自然发酵。
按照工艺的不同又可分为渣汁混合发酵和渣汁分离发酵两种形式。
微生物具有容易变异的特性，因此经过分离纯化选育的酿酒酵母要经历长期的保存必须要用实验方法对其保藏，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种：1）传代培养保藏法又称斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6C冰箱内保存。
2）液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3）载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4）寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5）冷冻保藏法可分低温冰箱（-20至-30C , -50至-80C）、干冰酒精快速冻结（约- 70C ）和液氮（-196C ）等保藏法。
6）x x 保藏法先使微生物在极低温度（-70 C左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。
保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。
保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
3.实验材料和用具样品：xx水果及压榨汁。
试剂：亚硫酸钠、乙醇、无菌水、化学纯液体石蜡、五氧化二磷、脱脂奶粉、10%HC、l 干冰、95%乙醇、食盐、无水氯化钙、河沙、瘦黄土（有机物含量少的黄土）或者红土；器皿：三角烧瓶（250 mL）无菌试管、无菌吸管（1 mL及5 mL）、无菌滴管、接种环、40目及100目筛子、干燥器、安瓿管、冰箱、冷冻真空干燥装置、酒精喷灯、滤纸条（0.5 X1.2 cm）冰箱，低温冰箱（-30C），液氮冷冻保藏器，玻璃涂棒，血细胞计数板，显微镜，紫外线等（15W），磁力搅拌器，台式离心机，震荡混合器4.操作步骤4.1 自选酵母发酵性性能的检测试验：用选育菌种发酵果酒4. 1 . 1果酒酿造的工艺流程鲜果T分选T破碎、除梗T果浆T分离取汁T澄清T清汁T发酵T倒桶T贮酒T过滤T冷处理T调配T过滤T成品4.1.2 工艺简述1）发酵前的处理前处理包括水果的选别、破碎、压榨、果汁的澄清，果汁的改良等。
①破碎、除梗：破碎要求每粒种子破裂，但不能将种子和果梗破碎，否则种子内的油酯、糖苷类物质及果梗内的一些物质会增加酒的苦味。
破碎后的果浆立即将果浆与果梗分离，防止果梗中的青草味和苦涩物质溶出。
破碎机有双辊压破机、鼓形刮板式破碎机、离心式破碎机、锤片式破碎机等。
②二氧化硫处理：二氧化硫在果酒中的作用有杀菌、澄清、抗氧化、增酸、使色素和单宁物质溶出、还原作用、使酒的风味变好等。
使用二氧化硫有气体二氧化硫及亚硫酸盐，前者可用管道直接通入，后者则需溶于水后加入。
发酵基质中二氧化硫浓度为60-100mg/L。
此外，尚需考虑下述因素：原料含糖高时，二氧化硫结合机会增加，用量略增；原料含酸量高时，活性二氧化硫含量高，用量略减；温度高，易被结合且易挥发，用量略减；微生物含量和活性越高、越杂，用量越高；霉变严重，用量增加。
2）果汁的调整①糖的调整：酿造酒精含量为10%-12%勺酒，果汁的糖度需17-20 °x。
如果糖度达不到要求则需加糖，实际加工中常用蔗糖或浓缩汁。
②酸的调整：酸可抑制细菌繁殖，使发酵顺利进行；使红葡萄酒颜色鲜明；使酒味清爽，并具有柔软感；与醇生成酯，增加酒的芳香；增加酒的贮藏性和稳定性。
干酒易在0.6%-0.8%，甜酒0.8%-1%一般pH 大于3.6 或可滴定酸低于0.65%时应该对果汁加酸。
3）酒精发酵发酵分主（前）发酵和后发酵，主发酵时，将果汁到入容器内，装入量为容器容积的，然后加入3%-5%的勺酵母，搅拌均匀，温度控制在20-28C，发酵时间随酵母的活性和发酵温度而变化，一般约为3-12天。
残糖降为0.4%以下时主发酵结束。
然后应进行后发酵，即将酒容器密闭并移至酒窑，在12-28 C下放置1个月左右。
发酵结束后要进行澄清，澄清的方法和果汁相同。
4）成品调配果酒的调配主要有勾兑和调整。
勾兑即原酒的选择与适当比例的混合；调整即根据产品质量标准对勾兑酒的某些成分进行调整。
勾兑，一般先选一种质量接近标准的原酒作基础原酒，据其缺点选一种或几种另外的酒作勾兑酒，加入一定的比例后进行感官和化学分析，从而确定比例。
调整，主要有酒精含量、糖、酸等指标。
酒精含量的调整最好用同品种酒精含量高的酒进行调配，也可加蒸馏酒或酒精；甜酒若含糖不足，用同品种的浓缩汁效果最好，也可用砂糖，视产品的质量而定；酸分不足可用柠檬酸。
5）过滤、杀菌、装瓶过滤有硅藻土过滤、薄板过滤、微孔薄膜过滤等。
果酒常用玻璃瓶包装。
装瓶时，空瓶用2-4%的碱液在50C以上温度浸泡后，清洗干净，沥干水后杀菌。
果酒可先经巴氏杀菌再进行热装瓶或冷装瓶，含酒精低的果酒，装瓶后还应进行杀菌。
4.1.3 发酵性能测定测定一个发酵周期内酒精度及含糖量变化，绘制发酵曲线，并对自制果酒进行感官评定，分析测定理化指标（糖度、酒度、酸度）。
还原糖、总糖的测定：直接滴定法。
总酸的测定：中和滴定法。
酒度的测定：蒸馏法。
5.菌种保藏（下列各法可根据实验室具体条件与需要选做）见实验十二。
6.实验结果分析1）绘制发酵周期糖度及酒精度变化曲线。
2）对酒样作感官品评，并作理化分析，测定葡萄酒的酒精、残糖、总酸。
7.问题和讨论1）菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？2）经常使用的细菌菌株，使用那种保藏方法比较好？3）简述果酒发酵主要影响因素。
附：总糖和还原糖的测定（一） -- 试剂比色法1.实验目的掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
2.实验原理斐林氏溶液与还原糖共沸，其中斐林氏溶液中的Cu2+被还原糖还原为Cu20 （砖红色）时，反应达到终点，过量的还原糖使次甲基蓝指示剂蓝色褪去，显露出Cu2O的红色即为终点。
3.实验材料和用具1）试剂xx 甲液：称取68.29g硫酸铜（CuS04?5H2O，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。
xx 乙液：称取346g酒石酸钾钠及100g NaOH溶于蒸馏水中，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.25％葡萄糖标准溶液：准确称取2.500g经98-105C干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml 容量瓶中，加入5ml浓HCI （防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。
2）器具电热恒温水浴锅，调温电炉，250ml 锥形瓶，滴定管4.操作步骤1）标定预备试验：吸取费林溶液A、B各5.00 mL于250 mL三角瓶中，加50 mL水，摇匀，在电炉上加热至沸，在沸腾状态下用制备好的葡萄糖标准溶液滴定，当溶液的蓝色将消失呈红色时，加2 滴次甲基蓝指示液，继续滴至蓝色消失，记录消耗的葡萄糖标准溶液的体积。
2）标定正式试验：戏取费林溶液A、B各5.00 mL于250 mL三角瓶中，加50 mL水和比预备试验少1 mL的葡萄糖标准溶液，加热至沸，并保持2 min，加2滴次甲基蓝指示液，在沸腾状态下于1min 内用葡萄糖标准溶液滴至终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液的总体积。
计算式中：F――费林溶液A、B各5 mL相当于葡萄糖的克数，g;m --- 称取葡萄糖的质量，g；V――消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL。
3）葡萄酒样品还原糖测定：准确吸取一定量的样品（V1 ）于100 mL容量瓶中，使之所含还原糖量为0.2〜0.4g,加水定容至刻度。
吸取费林溶液A、B各5.00 mL于250 mL三角瓶中，加50 mL水和一定量的试样（试样所含还原糖量为0.2-0.4g）,加热至沸，并保持2 min,加2滴次甲基蓝指示液，在沸腾状态下于1min 内用葡萄糖标准溶液滴至终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液的总体积。
按式（4）计算。
4）葡萄酒样品总糖测定：准确吸取一定量的样品（V1）于100mL容量瓶中，使之所含总糖量为0.2〜0.4 g,力口5 mL盐酸溶液，加水至20 mL,摇匀。
于68±!C水浴上水解15min，取出，冷却。
用200 g/L氢氧化钠溶液中和至中性，（加入2滴酚酞，用NaOH 溶液滴定至微红色）。
调温至20C，加水定容至刻度（V2）。
吸取费林溶液A、B各5.00 mL于250 mL三角瓶中，加50 mL水和一定量的试样（试样所含总糖量为0.2-0.4g）,加热至沸，并保持2min，加2滴次甲基蓝指示液，在沸腾状态下于1 min 内用葡萄糖标准溶液滴至终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液的总体积。
按下式计算。
式中：X 总糖或还原糖的含量，g/ L;F 费林溶液I、H各5 mL相当于葡萄糖的克数，g;V1 吸取的样品体积，mL;V2 --- 样品稀释后或水解定容的体积，mL;V3 --- 消耗试样的体积，mL;G――葡萄糖标准溶液的准确浓度，g/mL;V――消耗葡萄糖标准溶液的体积，mL。