细菌分离培养及鉴定pt课件
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细菌的分离、培养和鉴定
3）细菌分离
► 工具：接种环（接种前后都要严格过火灭菌） ► 接种环境：无菌操作台 ► 接种方法：平板划线
* 以左手持平板，中指、无名指和小指托着平板底,拇指和食指打开上盖，使 以左手持平板，中指、无名指和小指托着平板底, 盖与底成30º 盖与底成30º角，以便划线。 * 右手握接种环，先灭菌铂丝部分，待丝烧红后，再于火焰上灭菌金属棒部 分。把接种环上的病料涂在培养基一侧，一般作5 分。把接种环上的病料涂在培养基一侧，一般作5-8次划线。将环上的多余细 菌材料烧掉后，从第1次划线引出第2次划线；再从第2次划线引出第3 菌材料烧掉后，从第1次划线引出第2次划线；再从第2次划线引出第3次划线， 如此反复3 如此反复3-4次划线后，即可把整个平板表面划满，注意每一次划线只能与上 一次划线重叠，这样就可在最后的1 一次划线重叠，这样就可在最后的1-2次划线上出现多量的单个菌落，以便进 行纯培养。
鱼的解剖结构：
2）无菌操作
无菌操作是指在环境中一切有生命活动的微生物的 营养细胞及其芽孢或孢子都不存在的状态。微生物 研究过程中，既要避免各种外界的微生物进入操作 对象又要杜绝操作对象污染周围环境的操作技术。 无菌操作是对微生物学工作者最基本的要求，必须 经过严格训练才能形成无菌操作素养。不论何种情 况下，头脑中都应该有这个概念。 无菌操作贯穿于整个分离过程，例如：病料的采集、 器材的准备、具体的操作。所用器械及物品均应事 先灭菌备用，金属器具包装后高压灭菌或煮沸 30min，玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌，胶皮 30min，玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌，胶皮 塞、培养基等则要高压灭菌。
具体操作： 具体操作：
• 取病料，将体表的泥沙等杂物用清水冲洗干净 取病料， • 取干净托盘，将病料置于托盘中 取干净托盘， • 托盘置于工作台上，接种前准备好酒精灯、接种 托盘置于工作台上，接种前准备好酒精灯、
细菌的培养和分离99页PPT
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
பைடு நூலகம்
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
细菌的培养和分离
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
பைடு நூலகம்
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
细菌的培养和分离
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
淋球菌培养及鉴定ppt课件
叏尿道口脓性分泌物培养基预温立即接种最好床边接种合适的培养基co2培养14淋球菌鉴定分泌物直接涂片染色分离培养可疑菌落涂片染色生化反应初步报告生长特性15平板生长特性经24h48h的培养后可形成圆形凸起湿润光滑半透明或灰白色菌落似露水珠易乳化直径为05mm10mm16平板生长形态17镜检形态从菌落上叏材作涂片革兰染色后可见到菌的大小及染色的深度有差异排列也丌一致呈典型革兰阴性双球菌
淋球菌培养
淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊 淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的 金标准） 淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌 能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。
淋球菌培养条件
淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养 基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的 各种因子。目前国内常用的是血液琼脂 或巧克力琼脂。 国外常用的培养基有Thayer-Martin(TM)培养基、NewYork City(NYC)培养基 和Martin-Lewis(ML)培养基等。
淋球菌感染
淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系 统感染。 不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿 道炎，还可经血行播散引起菌血症。 临床表现因感染的人群不同，部位不同 而有差别
实验室鉴别淋球菌
直接涂片：取尿道或宫颈脓性分泌物涂 片，作革兰染色，镜下可见大量多形核 白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴 性双球菌。涂片对女性检出率低，有假 阴性，必要时应作培养。 细菌培养：标本在选择性培养基上培养 ，可出现典型菌落，氧化酶试验阳性， 镜检可见到革兰阴性双球菌， 还可用检测淋球菌DNA，直接免疫荧光 试验协助确诊。
淋球菌培养关键
取材部位准确 女性病人标本：取宫颈内膜分泌物 男性病人标本：取尿道口脓性分泌物 培养基预温 立即接种 最好床边接种 合适的培养基 CO2培养
淋球菌培养
淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊 淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的 金标准） 淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌 能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。
淋球菌培养条件
淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养 基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的 各种因子。目前国内常用的是血液琼脂 或巧克力琼脂。 国外常用的培养基有Thayer-Martin(TM)培养基、NewYork City(NYC)培养基 和Martin-Lewis(ML)培养基等。
淋球菌感染
淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系 统感染。 不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿 道炎，还可经血行播散引起菌血症。 临床表现因感染的人群不同，部位不同 而有差别
实验室鉴别淋球菌
直接涂片：取尿道或宫颈脓性分泌物涂 片，作革兰染色，镜下可见大量多形核 白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴 性双球菌。涂片对女性检出率低，有假 阴性，必要时应作培养。 细菌培养：标本在选择性培养基上培养 ，可出现典型菌落，氧化酶试验阳性， 镜检可见到革兰阴性双球菌， 还可用检测淋球菌DNA，直接免疫荧光 试验协助确诊。
淋球菌培养关键
取材部位准确 女性病人标本：取宫颈内膜分泌物 男性病人标本：取尿道口脓性分泌物 培养基预温 立即接种 最好床边接种 合适的培养基 CO2培养
大肠杆菌的分离鉴定PPT课件02
结果判定
鲜桃红色或微红色，菌 落中心呈深桃红色
圆形，扁平，边缘整齐， 表面光滑，湿润
二、药敏试验
方法：取一菌种，用灭 菌的接种环致密划线 于琼脂表面（可重复 来回划线），用无菌 镊子，将各种抗菌药 物圆纸片，分别贴于 培养基表面。各片距 离相等，370C，24h 后，观察结果。
药敏结果判定
结果：培养液不变色----无变化（—）
培养液变为黄色----产 酸（+） 培养液变黄并有气泡----产酸产气（+）
2 硫化氢试验
原理：某些细菌能分离蛋白质中的含硫氨基酸， 生成硫化氢，遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑 色的沉淀物。
方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在 硫化氢培养基中，370C温箱内培养24h
目的要求
熟悉鉴别培养基的原理 了解大肠杆菌的主要生理生化特性
一、鉴别培养
菌种 培养基类别 麦康凯培养基
大肠杆菌
红色菌落
沙门氏杆菌
无色或浅黄色菌落
SS琼脂培养基
红色菌落浅黄色菌落来自伊红美兰琼脂培养基三塘铁培养基
紫红色或紫黑色并带有金 粉红色菌落 属光泽菌落
斜面和深层均为红色
斜面为红色；深层为黄色； 若产生H2S，为黑色
分离鉴定---麦康凯培养基
原理：在培养基中含有胆盐，可抑制大部分革兰氏阳性菌 的生长，培养基含乳糖，大肠杆菌能分离乳糖，使pH下 降（中性指示剂5.5--7.5，红--黄）形成红色菌落，而沙 门氏菌和志贺氏菌，不能分解乳糖，菌落小且为无色
术式
两试管斜面移植时，左手斜持菌种管 和被接种管，管口相齐，管底放在拇指和食 指间，松动两管棉塞，将管口进行火焰灭菌， 使其靠近火焰，将接种环深入管内，先在无 菌生长的培养基上接触使之冷却，再挑取少 量的细菌后，拉出接种环，立即伸入另一管 斜面培养基上，勿碰到斜面和管壁，直达斜 面底部，从底部开始划曲线，向上到斜面顶 端，管口火焰灭菌，塞好棉塞，接种完毕。 接种环火焰灭菌后，放下接种棒最后在斜面 管壁上注明日期、接种者。置370C，温箱培 养
细菌的分离与鉴定
合成脲酶的微生物才能分解尿素，以 尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由 于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长 发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养 基就能够选择出分解尿素的微生物。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属 于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.
• 抑制非目的微生物生长
• 从混杂微生物中分离目的微生物
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分 肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、 葡聚糖组成
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属 于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.
• 抑制非目的微生物生长
• 从混杂微生物中分离目的微生物
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分 肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、 葡聚糖组成
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。