细胞培养手册
hgc27细胞系培养说明书
hgc27细胞系培养说明书HGC27 细胞系培养说明书一、细胞简介HGC27 细胞系是一种人类胃癌细胞系，常用于胃癌相关的研究。
了解其特性和培养要求对于成功进行实验至关重要。
二、培养前准备（一）实验室环境1、细胞培养室应保持清洁、干燥，定期进行消毒和清洁，以减少污染的风险。
2、温度应控制在 37℃左右，相对湿度保持在 95%左右。
（二）仪器设备1、准备 CO₂培养箱，用于提供稳定的温度、CO₂浓度和湿度环境。
2、超净工作台，用于在无菌条件下进行细胞操作。
3、倒置显微镜，用于观察细胞的形态和生长状态。
（三）试剂和耗材1、细胞培养基，如 RPMI 1640 培养基，添加 10%的胎牛血清（FBS）和 1%的双抗（青霉素和链霉素）。
2、无菌 PBS（磷酸盐缓冲液），用于清洗细胞。
3、胰蛋白酶EDTA 消化液，用于细胞的传代。
4、无菌培养瓶、培养皿、移液器、移液管等。
三、细胞复苏1、从液氮罐中取出冻存的 HGC27 细胞，迅速放入 37℃水浴中，轻轻摇动，使其快速融化。
2、待细胞完全融化后，将其转移至无菌离心管中，加入适量的完全培养基，轻轻混匀。
3、以 1000 rpm 的转速离心 5 分钟，弃去上清液。
4、加入新鲜的完全培养基，重悬细胞，将细胞悬液转移至培养瓶中，置于 CO₂培养箱中培养。
四、细胞培养1、将复苏后的细胞置于 37℃、5% CO₂的培养箱中培养。
2、每天观察细胞的生长状态，包括细胞形态、密度等。
3、当细胞密度达到 80% 90%时，需要进行传代培养。
五、细胞传代1、吸出培养瓶中的旧培养基，用无菌 PBS 清洗细胞 2 3 次。
2、加入适量的胰蛋白酶EDTA 消化液，轻轻晃动培养瓶，使消化液均匀覆盖细胞。
3、放入培养箱中孵育 1 2 分钟，直到在显微镜下观察到细胞变圆、开始脱落。
4、加入适量的完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞，使其成为单细胞悬液。
5、将细胞悬液按照适当的比例分装到新的培养瓶中，加入新鲜的完全培养基，继续培养。
细胞培养手册
细胞培养手册1.培养基配制（如200 mL）：①胎牛血清10%（20 mL）②双抗1%（青霉素-链霉素，2 mL）③加入DMEM 至200 mL。
2.细胞复苏：①将冻存于-80℃或液氮中的细胞取出，放在37℃的温水中来回摇晃，使处于冰状的细胞解冻。
②将培养基、PBS提前预热至37℃，可增大细胞复苏成功率。
③将解冻的细胞（含培养基）移至15 mL的离心管中，1000 rpm离心10 min。
④倒掉上清液，向离心管中加入1-3 mL的完全培养基，用移液枪将细胞轻轻吹打，使得细胞均匀地悬浮在培养基中。
⑤将吹散的细胞加到装有培养基的培养皿（或培养瓶）中，再将培养皿（或培养瓶）轻轻摇晃，使细胞均匀地分布在培养基中。
⑥将接种有细胞的培养皿（或培养瓶）放入37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
2.细胞传代①将培养瓶（皿）中的培养液倒出至废液盒中。
②向培养瓶（皿）中加入2 mL胰蛋白酶，消化细胞，让贴壁的细胞分散开来。
③加入胰蛋白酶消化2 min后，向培养瓶（皿）中加入4 mL培养基，同时轻轻吹打培养瓶（皿）壁，将贴壁生长的细胞吹散开。
④将胰蛋白酶消化过的细胞移至15 mL离心管中，1000 rpm离心10 min。
⑤将离心后的上清液倒掉，向离心管中加入4-6 mL的培养基，轻轻地将细胞吹打开，使细胞均匀地悬浮在培养基中。
再将分散好的细胞加入到培养瓶（皿），每个培养皿中加入2 mL细胞悬浮液。
⑥将接种有细胞的培养皿置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
3.细胞冻存将经胰蛋白酶消化后的细胞1000 rpm离心10 min，去掉上清液，再向离心管中加入1-1.5 mL冻存液（冻存液配制：70%DMEM-1050μL、20%FBS-300μL、10%DMSO-150μL），先放在4℃存放1 h，再放在-20℃存放1 h，然后再放在-80℃下过夜，最后放在液氮中长期储存。
4.细胞计算。
GIBCO细胞培养基本知识操作手册(中文版)
目录引言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1手册目的 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1细胞培养简介 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2什么是细胞培养？ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2有限细胞系与连续细胞系 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2培养条件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2冻存 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2培养细胞的形态 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3细胞培养的应用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3细胞培养实验室 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4安全 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4生物安全性等级 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4安全数据表 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5安全设备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5个人防护设备 (PPE) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5实验室安全规范 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5细胞培养设备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6基本设备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6扩增设备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6其他用品 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6细胞培养实验室 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7无菌工作区域 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7细胞培养通风橱 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7细胞培养通风橱布局 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8培养箱 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9储存 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9低温储存 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10细胞计数器 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10无菌技术 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11简介 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11无菌工作区域 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11良好的个人卫生 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11无菌试剂和培养基 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .12无菌操作 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12无菌技术核对表 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13目录生物污染 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14简介 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14细菌 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14酵母 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15霉菌 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15病毒 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16支原体 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16交叉污染 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17抗生素的使用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17细胞培养基本知识 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18细胞系 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18选择合适的细胞系 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18获取细胞系 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18培养环境 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19贴壁培养与悬浮培养 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19培养基 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20 pH 值 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21二氧化碳 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21温度 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21细胞形态 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22哺乳动物细胞 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22哺乳动物细胞形态差异 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .22 293 细胞的形态 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23昆虫细胞 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24Sf21 细胞的形态 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24 Sf9 细胞的形态 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25方法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26细胞培养维持指导原则 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26什么是传代？ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26何时传代？ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27常用细胞系推荐使用培养基 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28贴壁细胞的解离 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 TrypLE™ 解离酶 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30贴壁细胞的传代 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31所需材料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31贴壁细胞传代流程 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31贴壁昆虫细胞传代的注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32目录悬浮细胞的传代 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33悬浮细胞的传代 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33悬浮培养容器 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33所需材料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34悬浮细胞传代流程 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34悬浮昆虫细胞传代的注意事项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36细胞的冷冻 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37冻存 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37细胞冻存指导原则 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37冻存培养基 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38所需材料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38培养细胞冻存方案 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39冷冻细胞的解冻 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40细胞解冻指导原则 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40所需材料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40冷冻细胞解冻方案 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .40支持技术方案 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41利用血球计数器进行细胞计数 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41台盼蓝拒染法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .42浓缩细胞 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43疑难解析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43细胞培养产品 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44细胞系 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .44哺乳动物细胞培养基 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45昆虫细胞培养基 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46细胞培养用血清产品 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46细胞培养用实验试剂 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47抗生素和抗真菌剂 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48细胞培养用辅助产品 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49生长因子和纯化蛋白 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49转染和选择 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50转染试剂 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51其他资源 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52哺乳动物细胞和昆虫细胞培养 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52细胞与组织分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52转染选择工具 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52安全数据表 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52分析证书 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52技术支持 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .53引言手册目的细胞培养基本知识随身手册是对细胞培养基本知识教学视频 (www .invitrogen .com/cellculturebasics) 的补充。
昆虫细胞培养手册
昆虫细胞系的生长和维持细胞系简介：本手册包括Sf9、Sf21和H5昆虫细胞以及提供相关昆虫细胞生长和维持的一般信息。
Sf9、Sf21和H5细胞系适于用杆状病毒或其他昆虫表达系统表达重组蛋白。
运输与储存：运输：置于干冰上。
储存和传代：置于液氮储存。
收到细胞即可开始，详见14页。
细胞系比较：下面的表格总结了Invitrogen细胞系一般特征。
订购信息见下页。
细胞 倍增时间 细胞外观 初始培养基Sf9 72h 规则的带有颗粒球形。
贴壁紧。
TNM-FHSf21 24h 不同大小带有颗粒球形。
贴壁紧。
TNM-FHH5 18h 不同大小带有颗粒球形。
贴壁松。
Express Five SFM重要事项：Invitrogen（生命技术部分）通过RT-PCR证实H5细胞藏匿有内生的野田病毒。
在一定条件下，H5产生野田病毒粒子。
如此产生的病毒粒子未表现出对内原蛋白表达的不利的影响，或着在限制使用证书66号下已延伸和提供对H5细胞其它研究应用（见35页）。
更多信息请联系技术支持。
用途：仅供研究使用。
禁止用于动物或人的疾病治疗和诊断。
Sf9和Sf21细胞系：来源：Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。
此细胞系适用于InsectSelect系统。
这两株细胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。
特征：Sf9和Sf21有下列共同特征：易于形成单层和悬浮培养、适用无血清培养基。
大小不同：Sf9细胞系克隆分离于IPLBSF21-AE(Sf21)。
体积较小大小规则的使其易于形成单层和铺培养板。
Sf21在大小和形成单层以及铺板规则上有一些不同。
用途：两者都适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。
如果你是第一次使用杆状病毒，你会发现Sf9细胞易于从斑块中分离。
在一些结构上Sf21细胞可能比Sf9细胞表达蛋白量高。
造 血祖细胞培养技术实验手册
造血祖细胞培养技术实验手册造血祖细胞是一种具有潜在造血能力的干细胞，在医学和科学研究中具有重要的应用前景。
本实验手册将介绍一种常用的造血祖细胞培养技术，旨在帮助研究人员更好地了解和应用该技术。
一、实验前准备1.1 器材准备- 培养箱和培养皿- 显微镜和玻片- 无菌离心管和移液管- 离心机和摇床- 安装有CO2气体剂量控制的培养箱1.2 试剂准备- 培养基：将DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）加入含10%胎牛血清的离心管中，并通过0.22μm的滤器灭菌。
- 培养因子：包括SCF（Stem Cell Factor）、TPO（Thrombopoietin）、Flt3-L（Fms-like Tyrosine Kinase 3 Ligand）和IL-3（Interleukin-3），按照生产商说明制备。
二、实验步骤2.1 抽取造血祖细胞- 用无菌针头针刺拟鼠尾静脉，并收集尾血到无菌离心管中。
注意避免受到外界污染。
- 将含有2ml PBS（磷酸盐缓冲液）的离心管加入正确的转速离心机中，离心10分钟。
将上清液中的红细胞抛弃，保留上清液。
2.2 培养造血祖细胞- 将步骤2.1得到的上清液分装到多个培养皿（每个皿中含有3x10^6 造血祖细胞），并加入制备好的培养基和培养因子。
- 将培养皿放入预先调节好的CO2培养箱中，保持37°C和5% CO2浓度的条件下培养。
- 每隔48小时，用显微镜观察细胞扩增情况，并记录细胞数目和形态。
2.3 细胞检测- 通过流式细胞术或染色法检测细胞分化和表型。
- 进一步检测是否形成了造血单元，例如通过CFU-GM（Granulocyte-Macrophage Colony Forming Unit）的检测。
2.4 细胞存储- 当细胞数量充足时，用低温保存液将细胞冷冻存储以备后续实验。
三、注意事项3.1 严格遵守无菌操作- 所有实验器材和试剂都需经过严格的无菌处理，避免细菌和其他污染物的干扰。
细胞培养操作指南
细胞培养操作指南细胞培养操作指南1，原代细胞培养原代培养需要严格要求：（1）取材时需要去除脂肪和坏死的组织(2)为减少对组织的损伤，需用锋利的器具(3)适度离心以去除用于解离的酶（4）由于原代培养组织细胞的存活率很低，故用于原代培养的细胞的密度应高于正常的传代培养的细胞密度。
（5）营养丰富的培养基比单一的培养基更可取，如果要添加血清，胎牛血清比牛马的血清更好。
(6)对于取材部位易于感染（如皮肤）应先用70%乙醇消毒，在无菌条件下切除组织，尽快转移入BSS或培养基中。
不要再培养室取材，因为动物可引入微生物污染。
若必须推迟，可保存在4℃，72h。
1. 剪切组织先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除粘附的结缔组织等非培养所需组织。
再次清洗后，用手术剪将组织剪成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。
静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。
2. 消化分离消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。
3. 培养细胞悬液用计数板进行细胞计数，用培养液将细胞数调整为2～5×105 cells／m1，或实验所需密度。
分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。
置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。
一般3～5d，原代培养细胞可以粘附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3 d后换液，一般7～14 d可以长满瓶壁，进行传代。
注意事项：1. 无菌操作细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强各个环节的无菌操作观念，以预防为主，一旦污染，一般是很难消除。
2. 培养液所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。
由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养液的要求有一定的差异，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。
细胞培养手册
TM细胞培养基手册MEDIUM HANDBOOK（2007）生物秀北京清大天一生物技术有限公司BEIJING TSINGHUA SKYWING BIO TECH Co.，LTD绪论现代生物制药技术快速发展，采用动物细胞大规模培养生产抗体药物、基因工程药物、人用以及兽用疫苗等生物制品日益增长。
据IMS Health的统计数据，2004年全球生物制药产业（基因重组产品）的市场已达450亿美元，其中哺乳动物细胞表达的产品销售额占70％。
这些生物制品生产的核心技术之一——动物细胞大规模培养技术也在快速发展，近20多年的发展焦点主要集中在细胞系、细胞培养基和细胞生物反应器等三个方面的突破。
其中，关于细胞培养基的重要作用，瑞士联邦科技学会（洛桑）生物工艺学教授Florian Wurm博士曾撰文强调：“培养基并不是细胞培养中唯一一种重要因素，但确实是最重要的一种。
”细胞是病毒、蛋白的表达载体，细胞培养的质量直接影响蛋白表达量或病毒生产效率。
所以，通过筛选、驯化等方法，获得优质的宿主细胞株是整个生产工艺的基础，而好的细胞培养基则是筛选、驯化出优质细胞的重要基础。
同样，生物反应器的不断发展也离不开细胞培养基，以转瓶、反应器为主要细胞生产设备，配合微载体培养、悬浮培养等高密度培养技术，均需要相适应的细胞培养基才能充分发挥作用。
细胞培养基实际上就是生物技术产业的一个“菜篮子"工程，它的用途是给细胞提供营养物质使细胞健康快速的成长，因此只要用到细胞的生物技术产品就必须要用到细胞培养基。
在将来细胞培养产率提高的日子里，细胞培养基将会扮演越来越重要的角色，一些国际细胞培养技术专家指出：“许多细胞的培养产率可能就是通过培养基和培养策略的最优化而得到提高的。
因此不管培养基是不是最要紧的因素，它都应引起我们足够的重视。
”细胞培养基从1903年开始发展到现在，技术革新进展非常迅猛，从199、MEM、DMEM、RPMI1640等基础细胞培养基，发展到当今的无血清细胞培养基。
人胚胎干细胞培养手册范本
干细胞之家操作指南运输和保存：人胚胎干细胞〔hESCs和PMEFi被装在含90％FCS和10％二甲基亚砜的冻存管中,hESCs4×105/管,可接种一个3.5cm培养皿〔或六孔板的一个孔,PMEFi4×106/管,可接种一块六孔板。
冻存管用干冰运输,收到后,hESCs投入液氮,PMEFi放入－80℃保存。
培养条件：温度：37±0.5℃CO2浓度：5.1±0.6％相对湿度：85-100%主要技术：1．细胞培养：当进行hESC培养时,总的培养原则必需遵守,所有的操作都应该在相应的细胞培养间和超净台内按无菌技术进行。
此外,通过安装空气处理和过滤设备减少空气颗粒制造一个相对洁净的空间。
当接触和细胞有关的一切试剂和材料时,应该带手套〔包括开冰箱门。
工作间在使用前后要用70％的异丙醇彻底消毒。
2．培养液和材料所有的培养液和试剂在使用前都要用0.2µm的滤膜过滤；培养瓶和TC材料在拿进培养间之前都应该用70％异丙醇消毒。
3．细胞处理为了便于操作,最好不要同时处理两个以上的标本。
操作时,在室温和低CO2的时间不要太长。
所有的细胞离心：室温,500－600g,5分钟。
干细胞之家培养液准备：MEF和hESCs培养液在无菌条件下进行,完成后用0.2µm的滤膜过滤。
当准备hESCs培养液时,保持一致性很重要。
如有可能,尽量使用相同的试剂。
使用满足于附录提供的血清替代品尤为重要。
生长因子应该最后添加,需要强调的是bFGF进行重悬时需要蛋白载体,在少量培养液中不要试图重悬它。
MEF培养液：hESCs培养液：冷冻培养液：90％FCS+10%二甲基亚砜, 0.2µm的滤膜过滤,4℃保存。
明胶准备：用超纯水配制0.1％明胶溶液,加热确保明胶完全溶解,使用前高压或0.2µm 的滤膜过滤。
明胶包被：干细胞之家://stemcell8接种细胞前,用0.1％明胶溶液包被培养皿,37℃至少30分钟,分别用1.5或4ml包被35mm或10cm培养皿。
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6.6)溶液应在2℃-8℃下避光保存。
5.3.4 SAF-CHO-G-004培养基不同NaHCO3加量的pH、渗透压参考对照表
5.4 CHO细胞无血清驯化
在含血清培养基中生长的CHO细胞可经过一定的细胞驯化过程，适应SAF-CHO-G-004细胞培养基，进行细胞的无血清培养。已经适应无血清培养的CHO细胞可直接在SAF-CHO-G-004中实现无血清培养培养，建议前二代的细胞密度不低于4×105cells/ml。
SAF-CHO-G-004（代码：SAF108）是北京清大天一生物技术有限公司开发的新一代CHO细胞无血清无动物组分细胞培养基，能支持多种CHO细胞的生长维持，可广泛应用于CHO细胞的无血清悬浮培养及抗体、重组蛋白的生产过程。细胞培养基产品的生产、检验严格执行GMP管理和ISO9001管理体系，符合生物制药原辅料要求，质量稳定可靠。
(4)化学组分限定培养基，此类培养基是目前最安全、最为理想的培养基，首先可以保证培养基批次间的一致性，其中所添加的少量动物来源的蛋白水解物、蛋白都是成分明确的组份。其特点是培养基的性质明确，有利于进行细胞培养的代谢研究，同时分离纯化也比较方便。
研究者对CHO细胞无血清培养基的开发比较深入，目前有多种用于CHO细胞无血清培养的培养基面世，形成了很多固定的商业配方，这些配方有的是专利保护的，有的是商业秘密。国外有部分优秀的无血清培养基，但价格昂贵。
氨基酸
L-盐酸精氨酸、L-胱氨酸盐酸盐、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-盐酸组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-盐酸赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-丙氨酸、L-天门冬酰胺、L-天门冬氨酸、L-盐酸半胱氨酸、L-谷氨酸、L-脯氨酸等
维生素
维生素B1、维生素B2、维生素B12、维生素C、维生素H、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆醛、肌醇、叶酸等
图1.CHO细胞生长曲线
图2. CHO细胞批培养葡萄糖和乳酸代谢情况
图3 培养96hr的台盼蓝染色的CHO细胞
图4 培养第96hr的CHO悬浮细胞
5.3 CHO细胞无血清无动物组分细胞培养基使用说明
5.3.1成分
无机盐
氯化钙、五水硫酸铜、七水合硫酸亚铁、氯化钾、六水合氯化镁、五水硫酸镁、氯化钠、无水磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠、七水合硫酸锌等
北京清大天一生物技术有限公司依托于在细胞培养基研发和动物细胞大规模培养方面具有丰富经验的研发团队，潜心研究，开发研制了多种个性化培养基，通过在生产实践中的应用已取得可喜的成果，如CHO细胞无血清无动物组分细胞培养基（SAF-CHO-G-004）就是其中之一。
5.1 CHO细胞无血清无动物组分培养基（SAF-CHO-G-004）的特点
4无血清细胞培养基
无血清培养基的出现是培养基发展历程上的一个里程碑，其一般是在合成培养基的基础上，引入成分完全明确的或部分明确的血清替代成分，使培养基能满足动物细胞培养的要求，又可有效的克服因使用血清所引发的问题。进入20世纪80年代后，新的无血清培养基不断问世，人们经过研究发现，只要在培养基中增加某些适于细胞生长的成分，如纤连蛋白（fibronectin）、转铁蛋白（Transferrin, TRF）、胰岛素（Insulin）和表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）等，不少细胞即能在无血清供应的情况下生长，尤其是CHO、杂交瘤、骨髓瘤细胞以及BHK21细胞等。某些细胞在无血清的条件下，其生长和抗体的产量甚至较有血清培养时高出数倍。
CHO细胞无血清培养基技术手册
1 CHO细胞
CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得，为上皮贴壁型细胞，是目前生物工程上广泛使用的细胞系。工业生产上应用较多的是CHO-K1细胞，为转化细胞系，细胞染色体分布频率是2n＝22，系亚二倍体细胞。ATCC保存CHO-K1细胞株，编号为CCL-61，被广泛地用于重组DNA蛋白的表达。由于该细胞存在遗传缺陷，无脯氨酸合成基因，不能将谷氨酸转变为谷氨酸-γ-半醛，培养过程中需在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。并且由于该细胞已经霍乱毒素适应，形态学有所改变。最初细胞为贴壁型细胞，经多次传代筛选后，也可悬浮生长。
(2)无动物来源培养基，许多商业公司开发的无动物来源培养基是基于生产重组药物的安全考虑，培养基中的添加组分无动物来源，需要的蛋白来源于重组蛋白或者蛋白水解物，这些组分可以保障细胞生长及增殖的需要。
(3)无动物蛋白培养基，培养基完全不用动物来源的蛋白，但仍有部分添加物是来源于植物蛋白的水解片段或合成多肽片段等其他衍生物。此类培养基组分相对稳定，但必须添加类固醇激素和脂类前体，并且对培养的细胞是高度特异性的。
3 CHO细胞在生物制药中的应用
目前已有多种外源基因如人组织性纤溶酶原激活剂（tPA）、人促红细胞生成素（EPO）、乙肝表面抗原（HBsAg）、干扰素γ（IFNγ）、干扰素β（IFNβ）、白细胞介素2（IL2）、凝血因子Ⅷ等在CHO细胞中得到表达。在美国已注册的大约73种蛋白药物生产中，应用哺乳动物细胞培养的有35种，CHO细胞培养的就占27种，其中包括10种单克隆抗体。下表是以CHO细胞培养为基质生产的重组制品。
ATCC提供的CHO/dhfr-细胞照片
2 CHO细胞表达系统的优势与特点
由于哺乳动物细胞结构、功能和基因表达调控的复杂性，外源基因在哺乳动物细胞中的表达与在原核生物中的表达存在较大差异，因而外源基因在哺乳动物细胞中高效表达所需的元件也不同于在原核生物细胞中的表达所需的元件。外源基因在哺乳动物细胞中的表达包括基因的转录、mRNA翻译及翻译后蛋白质的加工等过程，如蛋白质的糖基化、磷酸化、寡聚体的形成以及蛋白质分子内或分子间二硫键的形成等比较复杂，要表达具有生物学功能的蛋白质如膜蛋白、抗体和具有特异性催化功能的酶需要在哺乳动物细胞中进行。
ATCC提供的CHO-K1细胞照片
CHO细胞容易发生基因突变，也较易进行基因转染，是良好的哺乳动物基因表达宿主细胞，代表性细胞有二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase）营养缺陷型突变细胞株（CHO/dhfr-）、转染谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase,GS）基因的GS-CHO细胞。
1）SAF-CHO-G-004细胞培养基系无血清无动物组分培养基，不含有血清替代物、动物来源蛋白等动物来源组分，化学成分明确，保证了细胞培养中原辅料的使用安全性；
2）SAF-CHO-G-004细胞培养基能支持多种CHO细胞的生长、维持，具有较为广泛的适用性；
3）适用于实验研究和大规模培养应用；
4）根据用户的不同使用，可定制SAF-CHO-G-004培养基，以满足CHO/dhfr-、GS-CHO等不同系统的应用需求；
CHO-GS细胞是用含单抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因标记的表达载体，转染宿主细胞CHO，再通过L-氨基亚砜蛋氨酸(methionine sulphoximine，MSX)等化合物选择加压促使GS基因和目的蛋白基因扩增，筛选获得重组细胞株，可在不含谷氨酰胺培养基中生长、增殖，可避免或减少细胞代谢过程中谷氨酰胺降解积累的氨对细胞的损伤、抑制作用。
4）细胞可进行贴壁培养也可进行悬浮培养，且具有较高的耐受剪切力和渗透压能力；
5）可进行高密度大量培养，进行较大规模生产时其培养量可放大到20000L以上，是目前应用最广泛的哺乳动物基因表达受体细胞之一。
另有研究者尝试将类胰岛素生长因子IGF基因和转铁蛋白基因转入CHO细胞获得能自身分泌必需蛋白的“超级CHO”，无需在培养基中转铁蛋白和胰岛素，细胞可在无血清培养基（SFM）中生长良好。
二氢叶酸还原酶是真核细胞核苷酸生物合成过程中起着重要作用的一种酶，是常用的遗传选择标记之一，它可催化二氢叶酸还原成四氢叶酸。对于dhfr突变体细胞而言，由于不能够合成四氢叶酸，阻断了正常核酸代谢途径，因此不能在常规培养基上生长，但若在培养基中加入次黄嘌呤（hypoxanthine）和胸苷（thymidine），则突变体细胞可以借助核苷酸的补救合成途径维持生长。利用dhfr基因进行筛选时，首先将重组DNA分子导入dhfr-表型的受体细胞，然后撤除原培养基中的的次黄嘌呤和胸苷，即可获得dhfr+并能表达外源基因的克隆细胞系。因此在挑选表达外源基因的阳性克隆细胞时需选用不含次黄嘌呤和胸苷的培养基。另外，氨甲喋呤（MTX）选择压力可使CHO/dhfr-细胞的外源基因的拷贝数扩增并得到较高水平的表达。
其它
无水葡萄糖、HEPES、丙酮酸钠、亚油酸、硫辛酸、胰岛素、亚硒酸钠、植物蛋白等
SAF-CHO-G-004细胞培养基毎升标示量27.80g，含L-谷氨酰胺、次黄嘌呤和胸苷，可根据客户使用需求定制不含谷氨酰胺或次黄嘌呤、胸苷的无血清培养基，具体的成分、标示量等详见对应产品的说明书。
5.3.2贮存
2℃－8℃冷藏，干燥、密封、避光贮藏。【贮存期限】：暂定一年。
CHO细胞存在多种克隆细胞系，仅ATCC保存的CHO细胞就多达38种，再加上各公司或研究单位构建的细胞，其克隆细胞数量远不止这些。对于CHO细胞无血清培养而言，由于构建的各种高性能CHO细胞系不同，不同克隆细胞的营养要求也都非常的不同，对营养要求往往是个性化的。另外，CHO细胞培养过程的不同培养阶段、重组CHO细胞构建的各个阶段，细胞代谢所需的营养或限制因素也是不同的，即同一细胞系在整个培养过程也需要使用不同的培养基，需要与之相对应的个性化培养基（Customed Cell Culture Medium）。
目前，无血清培养基的研究有两个方向：一是培养基中不含有任何动物来源的添加组分；二是培养基中不含有不明确的添加组分。依此可以将当前应用较多的无血清培养基归纳为以下四种：
(1)无血清培养基，为一般意义上无血清培养基，用各类可替代血清功能的生物材料配制细胞培养基，如牛血清白蛋白(BSA)、转铁蛋白、胰岛素等生物大分子物质，以及从血清中提取的去除蛋白质的混合脂类以及水解蛋白等。其特点是培养基中的蛋白含量较高,添加物质的化学成分不明确，其中含有大量的动物来源蛋白。