实验室细胞培养基本知识
《细胞培养培训》课件
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。
细胞培养知识
细胞培养基础知识细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
实验室细胞培养基本知识
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。
• 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。 • 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2
环境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。
• 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各 种试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须 用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放置在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。
• 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要 也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质， 还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响HEPA过滤的寿命。
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
细胞培养定义-概述说明以及解释
细胞培养定义-概述说明以及解释1.引言1.1 概述细胞培养是一种重要的科学技术，用于在控制的实验室条件下，培养细胞体外生长和增殖。
通过提供合适的生长环境，包括适当的培养基、细胞状态维持剂和温度、湿度等因素的控制，细胞可以持续生长和繁殖。
细胞培养可以在无菌环境下进行，以保证培养过程中没有污染物的引入。
细胞培养的主要目的是研究细胞的特性和功能。
通过细胞培养，科学家可以观察和研究细胞在不同条件下的行为，进一步了解细胞的基本生理过程、信号转导途径和分化过程。
此外，细胞培养还被广泛应用于药物筛选、生物技术研究、生物工程和医药领域等。
细胞培养的发展历史可以追溯到19世纪末。
当时，人们开始尝试培养动物细胞，最早成功地实现了培养培养出鸟胚细胞。
经过长期的努力和技术改进，细胞培养的技术逐渐成熟，并被广泛应用于各个领域。
综上所述，细胞培养是一种重要的科学技术，通过在受控的实验室条件下培养细胞，可以研究细胞的特性和功能。
随着细胞培养技术的不断发展和完善，它在生物学研究、生物技术和医药领域的应用将会更加广泛。
1.2文章结构1.2 文章结构本文旨在探讨细胞培养的定义、历史、重要性以及应用领域。
为了更好地展示这些内容，本文将按照以下结构进行组织和展示：第一部分是引言部分，引言部分将对细胞培养进行概述。
我们将介绍细胞培养的基本概念，其在生物科学中的重要性以及本文的目的。
第二部分是正文部分，正文部分将分为两个小节。
首先，我们将详细介绍细胞培养的定义。
我们将解释什么是细胞培养，如何进行细胞培养以及细胞培养的目的和意义。
其次，我们将回顾细胞培养的历史，探讨细胞培养技术的发展和重要里程碑，以及这些里程碑对现代细胞培养的影响。
第三部分是结论部分，结论部分将总结细胞培养的重要性和应用领域。
我们将强调细胞培养在生命科学研究中的关键作用，并讨论细胞培养在医学、药物研发、生物工程等领域的广泛应用。
通过以上的文章结构，我们将全面、系统地介绍细胞培养的定义、历史、重要性和应用领域。
细胞培养方法
细胞培养方法
细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，它可以提供大量的细胞用于实验研究。
正确的细胞培养方法对于细胞的生长、增殖和实验结果的准确性都至关重要。
下面将介绍一些常用的细胞培养方法及注意事项。
首先，准备培养基。
培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长因子的混合物。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据不同细胞类型的要求选择适当的培养基。
在制备培养基时，需要注意无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
其次，处理细胞。
从细胞库中取出细胞后，需要进行细胞的处理和传代。
处理细胞时，要注意细胞的密度和活性，避免细胞凝集和死亡。
传代时，要根据细胞的生长状态和密度进行适当的稀释，以保证细胞的健康生长。
接着，进行细胞的接种和培养。
将处理好的细胞按照一定的比例接种到预先涂有培养基的培养皿中，然后将培养皿放入培养箱中进行培养。
在培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态，及时更换培养基，避免细胞过度生长或死亡。
最后，进行实验。
当细胞达到所需的数量和状态后，就可以进行相关的实验。
在实验过程中，需要注意培养皿的无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
同时，要注意细胞的处理和操作方法，避免对细胞造成损伤。
总之，正确的细胞培养方法对于细胞的生长和实验结果至关重要。
只有严格遵守操作规程，做好无菌操作，才能得到可靠的实验结果。
希望本文介绍的细胞培养方法能够对大家有所帮助。
细胞培养技术 第一章 绪论和基本理论
第二节 生存环境、条件
一、无污染环境：首要条件
二、温度 36.5℃±0.5℃（36℃~37℃）
三、气体环境和氢离子溶度
95 % 空气+5 % CO2 四、生存所需基本物质
pH值为7.2~7.4
（一）糖；（二）氨基酸； （三）促生长因 子；（四）其它物质
五、渗透压：260 ~320 mOsm/kg （等渗）
和庆大霉素
第四章 清洗与消毒
一、玻璃器皿的清洗 （一）浸泡 （二）刷洗 （三）浸酸 : 24h
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不同的强度清洗液
类 型 重铬酸钾 （g ）
强 液 63 次强液 120 弱 液 100
浓硫酸 （ml） 1000 200 100
蒸馏水 （ml）
200 1000 100
（四）冲洗
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二、胶塞的清洗
三、塑料器皿的清洗
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（二）培养液的种类
生长培养液 维持液
基本培养基 80~90 % 95 %
血清 10~20 %
2~5 %
第四节 其它溶液
一、消化液 ：胰蛋白酶溶液 0.25%或 0.125%； 0.02% EDTA（Versene）溶液
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二、pH调整液 1.NaCO3液：7.4%、5.6%、3.7% 2.HEPES（分子量238.31）液 三、抗生素液：青霉素、链霉素、卡那霉素
4. 病毒污染：
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参考文献
1．薛庆善 主编.体外培养的原理与 技术.北京：科学出版社，2001.2
2．鄂征. 主编.组织培养和分子细胞 学技术. 北京：北京出版社， 1994.12
3．司徒镇强.细胞培养.西安：世界 图书出版社公司西安分公司.1996.
细胞培养基本技术
医学实验中心 闾宏伟
主要内容
细胞培养的基本概念 细胞培养的基本条件 细胞培养用液的配制 细胞培养的基本方法 培养细胞活力测定 细胞冻存和复苏 细胞培养的污染和检测
一、基本概念
细胞培养(cell culture)：在体外条件下，模 拟体内的生理环境，用培养液维持细胞生 长与增殖的技术。 组织培养 (Tissue culture)：把活体的一小 片组织（O.5～1立方毫米）置于底物上孵 育，细胞自其周围移出并生长。 器官培养 (Organ culture)：将活体中整个 器官或一部分器官取出，置于体外生存、 生长并同时保持其一定的结构和功能特征。
血清解冻步骤
逐步解冻法
–20℃ 或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室 温下全溶后再分装，一般用50 ml无菌离心管可 分装40～45 ml。
勿直接由–20℃至37℃解冻，因温度改变 太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
无机盐
CaCl2 、KCl 、MgSO4、 NaCl 、 NaHCO3 、NaH2PO4 对调节细胞渗透压、某些酶的活性 及溶液的酸碱度都是必须的。
酶液等均采用滤过法除菌。
安装滤膜时注意：滤膜光滑一面是正面，要朝
上，否则起不到过滤的作用。
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2 使用CO2培养箱应注意的问题：
。
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，
以保证通气。 ②保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。 ③箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000 毫升，以保持箱内湿度。
抗生素溶液
通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗 溶液”。
细胞培养基础知识
细胞培养基础知识细胞培养呀，就像是在一个小小的世界里创造生命的奇迹！咱就说，细胞可是生命的基本单位呢，培养它们就像是在照顾一群娇贵的小宝贝。
想象一下，你要有一个超级干净的“家”给它们住，这个“家”就是培养皿啦。
培养皿得干净得像刚洗过的脸一样，不能有一点儿脏东西，不然细胞宝宝们可不高兴啦。
然后呢，你得给它们准备好吃的，这就是培养液啦。
培养液就像是细胞的大餐，里面有它们需要的各种营养成分。
就好比咱人得吃米饭、蔬菜、肉一样，细胞也需要它们特定的营养来茁壮成长呀。
温度也很重要哦！不能太冷也不能太热，得刚刚好，就像咱们睡觉要盖合适的被子一样。
要是温度不合适，细胞可就不开心啦，可能就长不好咯。
还有哦，你得时刻关注它们的成长情况。
这就像家长关注孩子的成长一样，看看它们有没有长大呀，有没有生病呀。
要是发现有不对劲的地方，就得赶紧想办法解决。
培养细胞也得有耐心呀！不能着急，得慢慢等它们长大。
有时候可能等了好几天也看不到明显的变化，但别灰心，说不定它们正在偷偷努力呢。
而且呀，培养细胞可不能粗心大意。
就像你照顾小婴儿，一点小疏忽都可能带来大问题。
比如说不小心污染了培养皿，那可就糟糕啦，细胞可能就全军覆没了。
你说这细胞培养神奇不神奇？通过我们的努力，能让这些小小的细胞在我们的眼皮子底下成长、分裂，就好像看着一个小生命在慢慢绽放。
这感觉，真的很奇妙呀！培养细胞的过程中也会遇到各种挑战呢。
有时候细胞就是不长，你就得绞尽脑汁想办法，是培养液有问题？还是温度不合适？或者是其他什么原因。
这就像是解一道难题，得不断尝试、探索，直到找到答案。
细胞培养可不只是在实验室里玩玩哦，它对医学、生物学等好多领域都有着非常重要的意义呢。
通过培养细胞，我们可以研究疾病的发生机制，可以测试药物的效果，还可以为再生医学提供帮助呢。
总之呢，细胞培养是一件既有趣又有意义的事情。
虽然有时候会遇到困难，但只要我们有耐心、细心，就一定能让这些小细胞在我们的手中绽放出绚丽的光彩！难道不是吗？原创不易，请尊重原创，谢谢!。
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• 不耐热液体：过滤除菌；
• 不耐热物品：射线灭菌30min，70%乙醇擦拭。
灭菌方式的选择
项目 玻璃器皿 金属制品 带螺口盖的玻璃品 玻璃移液管 枪头 消毒方式 干热 干热 高压灭菌，将盖悬 松 干热 高压灭菌 高压灭菌 琼脂 蛋白胨 EDTA 甘油 过滤 氨基酸 抗生素 牛血清白蛋白 胶原酶
HEPES 甲基纤维素
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。
• 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
明确地选择出来，就成为一个细胞株。
细胞培养基本概念
• 有限细胞系与连续细胞系：正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后 就会丧失增殖的能力，这是一个由遗传决定的事件，被称为衰老；这 种只能分裂有限的次数的细胞系被称为有限细胞系。但是，一些细胞 系会通过“转化”的过程变为永生性细胞系，这一过程可自然发生， 也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力 后，就成为连续细胞系。 • 培养条件：细胞培养的人工环境必须包括合适的容器，容器中含有一 定的基质或介质，为细胞提供必需的营养素 (氨基酸、碳水化合物、 维生素、矿物质 )、生长因子、激素和气体 (O2、CO2)，并可调节其 物理化学环境 (pH、渗透压、温度)。
湿热灭菌121℃，20min（高速离心管尤其注意灭菌时要直立放
臵）； • 自然冷却后臵于烘箱中烘干。
水的制备和灭菌
• 细胞培养需要用超纯水（UPW）； • 第一：反向渗透或蒸馏；第二：碳过滤去除有机或无机胶 体（总有机碳TOC ≤10ug/L）；第三：去离子（电阻 ≥10MΩ/cm）； • 高压灭菌121℃，20min，自然冷却。
配置完全培养基
• 烧杯中加入1L灭菌超纯水，臵于磁力搅拌器上，设定200r/min，边搅 拌边加入1袋DMEM或DMEM/F12干粉（已含L-谷氨酰胺和丙酮酸钠）； • 用注射器吸取超纯水，将包装袋内残留培养基洗下； • 干粉溶解后加入2.438g NaHCO3，搅拌至完全溶解； • 用HCl和NaOH调节PH为7.2，过滤除菌后（PH接近7.4）4℃保存； • 商业胎牛血清一般是热灭活的，可以直接使用，如果需要过滤，先用 0.22μm滤器过滤后，再用 0.1μm滤器低压过滤才能保证无菌、无支 原体。 • 双抗：称取氨苄青霉素 0.625g ，链霉素 1g ， PBS 定容至 100ml ， 4℃过 夜，过滤除菌分装。 • 使用时如需配臵 200ml 完全培养基，需加入 180ml DMEM/F12 ，加入 20ml胎牛血清 ，再加入2ml双抗即可。 • 使用时再加入血清的好处是DMEM/F12培养基可以4℃保存6~9个月，而 加入血清后只能保存2~3周。
PBS的制备
• 烧杯中加入1L灭菌超纯水； • 放在磁力搅拌器上，设定转速200r/min； • 打开PBS干粉（1L装）加入烧杯中； • 搅拌至完全溶解； • PH计检测PH为7.4，变化＜0.1； • 分装至灭菌的储液瓶中，盖子只轻旋一圈，放入灭菌锅中湿热灭菌；
• 自然容器或无菌吸管的上方往来。
• 倒出液体：任何时候都不要从试剂瓶或培养瓶中直接倾倒培养 基和试剂。
小结
• 保持一个干净有调理的工作空间，并仅在需要的时候才在 其中工作。 • 尽可能的预先准备好再开始操作，使培养物在培养箱外停 留最短的时间，而且要做到各种操作快速、简便和顺利。 • 保持能看到操作面上的每样东西，时时警惕无菌面和非无
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放臵在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。 • 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要
也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质，
还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响 HEPA过滤的寿命。 • 试剂瓶和培养瓶的操作：在洁净台内可以使试剂瓶口敞开直立，
•
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌： 160 ℃， 1h； • 热稳定的液体：水、盐溶液和适度热稳定的塑料制品：硅 树脂、尼龙、聚丙烯、聚碳酸酯用湿热灭菌： 121 ℃， 20min；
• 使用前24~48h，放入干热灭菌箱中，160℃灭菌1h，自然冷却后
使用； • 100目和600目的筛网需要超声清洗。
塑料制品的清洗和灭菌
• 将塑料制品放入含有消毒剂（次氯酸钠）和清洁剂（Decon）的 洗液中浸泡30min，自来水冲洗干净； • 臵于超声清洗器中清洗30min； • 用自来水充分清洗后用去离子水清洗（塑料制品要用专用的刷 子或者将自来水连上胶管伸进塑料管内部冲洗）； • 将离心管的盖子和管体分开用图纸包起来，直立放入灭菌锅中
酵母：培养物被酵母污染后 也会变得浑浊， 但pH 值变化 极小，污染严重时 pH 值才会 升高。在显微镜下，酵母呈 单个卵圆形或球形颗粒，有 些会芽生出较小的颗粒。图 为293细胞被酵母污染。
霉菌：是真菌界的一种真核微生物，以被称为菌丝的多细胞丝状体形式生长。 在显微镜下，菌丝体通常呈细束状纤维，有时呈较为密集的孢子团块。 病毒：是一种微观感染性物质，利用宿主细胞结构进行复制。病毒体积极小， 因而要检测培养物中有无病毒以及将其从细胞培养实验室所用试剂中去除都 十分困难。使用病毒感染的细胞培养物时却会对实验室工作人员造成严重的 健康威胁，特别是当实验室培养的是人或灵长类动物细胞时。
菌面的偶然接触。
• 实验完毕后，保持工作区的干净整洁。
污染
• 化学污染：培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂 和去污剂； • 生物污染：细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细 胞系的交叉污染。
细菌：通常被细菌污染的培养物呈云雾状 (即：浑浊状)，有时表面会覆盖一层 薄膜。另外，经常还会发现培养基的 pH 值突然降低。在低倍显微镜下可见， 细菌为细胞之间移动的微小颗粒，在高倍显微镜下观察可以分辨出各个细菌的 形状，有球状、杆状和螺旋状等。图为被大肠杆菌污染的293细胞
• 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2环
境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• • 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各种 试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养实验室
隔间 走廊
二更 一间 二间 三间
一更 准备室
细胞培养设备
• 基本设备： • 细胞培养通风橱 (即：层 流通风橱或生物安全柜) • 培养箱 (推荐使用湿式二 氧化碳培养箱) • 水浴锅 • 离心机 • 冰箱和冰柜 (–20°C) • 细胞计数器 (例如： Countess® 自动细胞计数 器或血球计数器) • 倒置显微镜 • 液氮 (N2) 冷冻柜或冻存 容器 • 灭菌器 (即：高压灭菌器) • 扩增设备： • 抽吸泵 (蠕动泵或真空泵) • pH 计 • 共聚焦显微镜 • 流式细胞仪 其他用品： • 细胞培养容器 (例如：培 养瓶、培养皿、滚瓶、 多孔板) • 吸管和移液器 • 注射器和针头 • 废物容器 • 培养基、血清和试剂 • 细胞系
流）； 随时移走不再需要的物品； 要在视野范围内操作； 如有任何溢出物需随时擦去，并用70%乙醇擦洗； 实验完毕要移走洁净台里的所有物品（什么都没有） ，并用70%乙醇彻底擦洗工 作面，然后紫外灭菌30min；
• • • • •
在通风橱中部开阔区域放臵细胞培养容器 移液器臵于右前方易于取用的地方 试剂和培养基臵于右后方，便于吸取 试管架臵于中后部，用于固定其他试剂 小型容器臵于左后部，用于盛放废液
细胞培养基本知识
细胞培养基本概念
• 细胞培养：从动物或植物中取出细胞，使其在合适的人工环境中生长。
• 细胞来源：细胞可直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离，
也可来自已经建立的细胞系或细胞株。 • 原代培养：是指将细胞从组织中分离后，使其在合适的条件下增殖， 直到占据所有可用基质(即：汇合) 的培养阶段。 • 传代培养：在细胞生长至汇合，必须将细胞转移到新的容器中并更换
• 自己配臵的所有试剂、培养基和溶液必须采用适当的灭菌方法
(例如：高压蒸汽、无菌过滤) 进行灭菌。 • 引进的培养物（如购买的细胞系）是高危污染源，要先经过检 疫，并坚持用不含抗生素的培养基培养直至证明没有污染。
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。 • 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。
•
移液：使用无菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液体；每支吸
管只能使用一次，以免交叉污染。使用时方可打开无菌吸管的包装。吸 管应始终位于工作区域内。
•
一般移液操作用移液管和电动移液器，微量移液操作（1ml及以下）用移
液器，一次为多个器皿分装液体用注射器，只有灭菌的部分（移液管、 枪头、 注射器）可以伸进无菌容器内（储液瓶、细胞培养瓶），移液时 避免使吸管尖端触碰到任何非灭菌物品包括瓶口螺纹的外缘。
酚红 盐溶液 水
药物 谷氨酸盐
生长因子 HCL NaHCO3 NaOH 血清 丙酮酸钠 胰蛋白酶
离心管(5ml，15ml， 高压灭菌，直立放 50ml) 置 EP管(1.5ml，2ml， 5ml，10ml) 试管 高压灭菌 干热
艾本德移液器（新） 高压灭菌，整支