成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养
原代心肌细胞培养技巧【转】
原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型，被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试，摸索出了一些行之有效的方法，并积累了一些经验，现总结如下：1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力，成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞，不再具有分裂增殖能力.因此，大鼠出生时间越短，其心肌细胞分离后成活率越高，越容易贴壁生长.大量观测表明，选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.2消化酶的选择及使用新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法，前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种：胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强，容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓和，能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞，对细胞损伤小，且在新生大鼠心肌组织，以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.3消化程度的把握新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力；消化不足，细胞聚集成团，无法分清细胞边界，难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散，使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时，应停止消化.4接种的细胞密度心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触，进而影响细胞对肥大刺激的反应，而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言，应根据实验的观测目的决定单位面积上的细胞数量.例如，如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个；若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测，则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.5细胞的分散度与接种的均匀性分离出的心肌细胞，在溶液中Ca2+作用下较容易出现集聚现象.因此，在进行差速贴壁前后，均应反复多次地轻柔吹打使心肌细胞成单个分散状态.接种后，应小心使心肌细胞均匀地分布于培养板上,避免细胞向培养孔的中央集聚.此外，可将培养板放入孵箱后用滴管轻轻吹打各孔中央部位2~3次，但应格外注意避免污染.6对成纤维细胞的抑制与血清种类的选择成纤维细胞较心肌细胞更容易贴壁且具有分裂增殖能力，经差速贴壁后仍有少量成纤维细胞混杂于心肌细胞之中，若处理不当，很容易生长成优势细胞.溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)可干扰细胞的有丝分裂，故常规使用BrdU抑制成纤维细胞的生长.但是，如果使用胎牛血清培养细胞，由于胎牛血清所含的促细胞有丝分裂的因子较多，BrdU 很难完全抑制成纤维细胞的生长.改用小牛血清则可克服这种现象的出现，获得高达90％以上的心肌细胞.7换液时间进行心肌细胞形态学观测时，接种密度较低，贴壁的心肌细胞数量减少，为避免成活心肌细胞随换液而被丢弃，应在接种48 h后换液.这样不仅使贴壁的心肌细胞数量明显增加，而且BrdU作用时间较长，对成纤维细胞的抑制作用更确实.此外，去血清后可用ITS和0.1 g ・L1BSA对心肌细胞进行营养支持，对心肌细胞贴壁率与凋亡率均不产生明显影响.8抗污染措施除应注意无菌操作等常规技术方法外，还应特别注意以下几点：(1)获取心脏时避免剪破消化道.比较稳妥的办法是在剑突上一肋处入剪，这样做不涉及腹腔，也就减少了污染机会.(2)如条件允许，应避免乳鼠心肌细胞与其他细胞在同一孵箱内共同培养，以防止发生交叉污染.(3)对于培养心肌细胞的观察、照相每次时间不可过长，否则既会导致培养液pH改变，又能增加污染机率.9培养液pH值适宜的pH范围在7.2~7.4之间，配制及使用培养液时应注意：(1) pH值会在过滤后上升0.1~0.3.(2)培养液中加入血清后pH值会有降低，降低程度与血清品质和含量有关.(3)应及时换液.(4)配制好的培养液不宜长时间贮存在4℃.这是因为培养液中的CO2会溢出，使培养液pH 上升.每次配好的培养液尽量在2 wk内用完，否则应部分置于－20℃保存，使用前应补充谷氨酰胺和NaHCO3，再次过滤后方可使用.。
成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)解读
成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)【摘要】目的探索成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养方法。
方法取成年Wistar大鼠的后肢肌肉,利用组织块法培养成肌细胞。
并对培养细胞进行形态学研究和细胞鉴定。
结果采用组织块培养成肌细胞的密度可达118/ml, 成肌细胞的分化鉴定显示94%以上的细胞呈骨骼肌特异的肌细胞。
结论利用组织块法成功培养成年大鼠原代骨骼肌成肌细胞,该方法实用性强,所得成肌细胞纯度高,为深入研究心力衰竭骨骼肌成肌细胞自体移植奠定了基础。
【关键词】骨骼肌成肌细胞原代培养大鼠成年【Abstract】 Objective： To explorean experimental method for primary culture of adult rat skeletalmuscle sarcoblast Methods: Muscle of posterior limb from wistar rat were cultured by tissue culture method. The cells were counted and observed by light microscopy combined with identification. Results:The number of skeletalmuscle sarcoblast118per millilitre. skeletalmuscle sarcoblast cell differentiation accredit showed that over 94% cells were stained positive for myogenin.Conclusions: Tissue culture method conveniently permits the purification and Proliferation of myoblast. These esults provide the basis for future studies to assess the ability of the cells to repair heart failure.【Key words】skeletalmuscle sarcoblast primaryculture rat adult心肌细胞是终末化组织，不能再生。
大鼠骨骼肌细胞培养实验指导
大鼠骨骼肌细胞培养骨骼肌是一种横纹肌，通常是通过肌腱固定到骨骼上，其伸缩可以带动骨骼的移动，促进机体运动。
肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。
肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维，每一肌原纤维都有相间排列的粗肌丝及细肌丝。
肌纤维收缩并不是肌纤维中肌丝本身的缩短或卷曲，而是细肌丝在粗肌丝之间滑行的结果，肌丝滑行使肌节长度缩短，肌原纤维缩短表现为肌纤维收缩。
体外培养大鼠骨骼肌细胞，为临床肌肉损伤的治疗提供理论依据.一、实验前准备实验开始前，将眼科剪刀、眼科镊子、培养皿，15ml离心管、移液管、移液枪、枪头等放入无菌超净工作台，以紫外线照射30min。
按照含0.2%的XI胶原酶、0.2%的中性蛋白酶、0.1%的胶原酶进行配制消化液，用0.22微米的PES微孔滤膜进行过滤除菌，置于50毫升离心管中，可直接用于组织消化。
瓶口消毒后室温待用。
取出无菌培养皿，分别作好标记，吸取适量PBS置于相应标记的培养皿中。
无菌条件下，准备好各种大小的眼科剪刀、止血钳、眼科镊子和手术刀。
将断颈处死后浸泡于体积分数为 75%乙醇的SD大鼠仰卧在超净台内的干净培养皿上。
二、骨骼肌提取眼科剪刀剪开大鼠后肢皮肤，暴露腿部肌肉，用手术刀小心割取后肢大腿肌肉，同样方法分离另一后肢大腿肌肉。
小心剪取表面无附着膜和脂肪组织的肌肉，置于装有PBS的无菌培养皿中。
吸取适量消化液于相应标记的培养皿中。
将剪取的骨骼肌在无菌PBS浸泡清洗，去除脂肪组织后放置于含消化液的培养皿中，采用眼科剪刀剪碎骨骼肌组织，成1平方毫米不规则碎片。
轻轻摇匀，室温静置消化30分钟收集组织悬液于50毫升离心管中，用消化液反复冲洗培养皿，直至将全部组织块收集到离心管内。
轻轻吹打混匀组织块悬浮液。
配平离心：每分钟1000转，室温离心十分钟。
三、骨骼肌悬液制备及培养离心后小心去除上清，不要吸到底部的组织块沉淀，用含20%胎牛血清的DMEM培养基重悬，轻轻吹打混匀，制成悬液，均匀转移至六孔板中，轻轻摇匀，标记时间后放于37 ℃、体积分数为 5%的CO2饱和湿度培养箱中培养。
成年大鼠骨骼肌卫星细胞原代培养及鉴定
成年大鼠骨骼肌卫星细胞原代培养及鉴定
王邦茂;陈鑫;张文治;苏心
【期刊名称】《天津医科大学学报》
【年(卷),期】2002(008)004
【摘要】目的:探讨骨骼肌卫星细胞体外培养、鉴定的方法.方法:采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法分离大鼠骨骼肌卫星细胞,经差速贴壁法纯化后,在培养液中进行培养,观察不同血清浓度下,卫星细胞生长融合的情况.倒置显微镜观察细胞形态,利用结蛋白免疫细胞化学染色方法鉴定肌卫星细胞.结果:细胞经过两步消化和差速贴壁后,纯度在90%以上,在生长培基中,细胞分裂增生;在融合培基中,细胞发生融合,形成肌管.结论:成年大鼠肌卫星细胞在不同的培养条件下可增生或分化.结蛋白免疫细胞化学染色可以早期鉴定骨骼肌卫星细胞.
【总页数】3页(P463-465)
【作者】王邦茂;陈鑫;张文治;苏心
【作者单位】天津医科大学总医院消化科,天津,300052;天津医科大学总医院消化科,天津,300052;天津环湖医院细胞室;天津环湖医院细胞室
【正文语种】中文
【中图分类】Q813.1+1
【相关文献】
1.胎鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化与鉴定 [J], 余慕雪;戴杰民;郭楚怡;卢珍通;杨佩军;庄思齐
2.小鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养和鉴定 [J], 汪茜;王明新;蒲传强
3.壁虎骨骼肌卫星细胞的原代培养与鉴定 [J], 徐青;徐敏;张加吉;李冬辉;刘炎
4.成年大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养、鉴定及体外增殖 [J], 李映川;丁强;方祖军
5.新生大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养和鉴定 [J], 邵素霞;张雷;马洪骏
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大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养生长和成肌特性[1]
![大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养生长和成肌特性[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/da9f5e78168884868762d68d.png)
上海交通大学学报(医学版)Vol .28No .7Jul .2008Journal of Shanghai J iaotong University (Medical Science )基金项目:上海市科委基金(044119605)(Shanghai Science and Technol ogy Comm ittee Foundati on,044119605)。
作者简介:徐 可(1975-),男,上海人,主治医师,博士;电子信箱:huashanxuke @medmail 。
通讯作者:方祖军,电子信箱:huashanfangzujun @ 。
文章编号: 0258-5898(2008)07-0775-04・论 著・大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养生长和成肌特性徐 可, 方祖军, 李映川, 郑 捷, 丁 强(复旦大学 华山医院泌尿外科,上海 200040)摘 要:目的建立大鼠骨骼肌卫星细胞分离和纯化方法,并观察骨骼肌卫星细胞的体外增殖和成肌特性。
方法采用改良两步酶消化法结合差速贴壁技术,获得高纯度的骨骼肌卫星细胞。
免疫组化染色鉴定体外培养的骨骼肌卫星细胞;MTT 法检测体外培养骨骼肌卫星细胞的生长情况;倒置显微镜观察不同培养条件下骨骼肌卫星细胞的分化特性。
结果获取的骨骼肌卫星细胞纯度高,细胞中肌源性标志中间丝蛋白des m in 呈强阳性表达。
体外培养时,骨骼肌卫星细胞有1～2d 的潜伏期,5～6d 进入平台期。
细胞汇合至60%～70%或降低培养基血清浓度时,开始相互融合形成肌管细胞。
结论酶两步消化法和差速贴壁技术是一种简便易行、获得较高纯度的骨骼肌卫星细胞的方法。
骨骼肌卫星细胞体外培养时无需特殊诱导即可相互融合,形成具有骨骼肌收缩特性的肌管细胞。
关键词:骨骼肌卫星细胞; 培养; 增殖; 分化中图分类号:Q 813.11 文献标志码:ACharacter isti cs of proli fera ti on and m yotube cell forma ti on of ra t skelet a l m uscle s a tellite cells cultured in vitroXU Ke,FANG Zu 2jun,L I Ying 2chuan,ZHENG Jie,D I N G Q iang(D epart m ent of U rology,Huashan Hospital,Fudan U niversity,Shanghai 200040,China )Abstract: O bjective To establish a method of is olation and purificati on of rat skeletal muscle satellite cells,and observe the characteristics of p r oliferati on and my otube cell for mati on of skeletal muscle satellite cells cultured in vitro . M ethods Purified skeletal muscle satellite cells were obtained by i mp r oved t wo 2step enzy matic digesti on method and p re 2p lating technique .I m munohistochem ical staining was emp l oyed t o identify the skeletal muscle satellite cells cultured in vitro .The gr owth of skeletal muscle satellite cells cultured in vitro was exam ined by MTT assay .The differentiati on of skeletal muscle satellite cells was observed by inverted m icr oscopy . Resu lts The skeletal muscle satellite cells with higher purity were obtained and confir med by the high exp ressi on of des m in .W hen cultured in vitro ,the latent phase of skeletal muscle satellite cells was the first t o the second day,and the p latfor m phase was the fifth t o the sixth day .My otube cells gradually for med when cell confluence was more than 60%t o 70%or differential medium with l ower fetal bovine serum was used .Conclusion The co mbinati on of i mp r oved t wo 2step enzy matic digesti on method and p re 2p lating technique serve as an easyand p ractical way to obtain skeletal muscle satellite cells with higher purity .Skeletal muscle satellite cells can for m myotube cells with contraction characteristics without any s pecial induction .Key words: skeletal muscle satellite cell; culture; p r oliferation; differentiation 骨骼肌卫星细胞是存在于骨骼肌肌膜和基底膜之间的一些单个核细胞,被认为是一种具有一定自我更新能力[1]及已发生某种程度定向分化的成体组织内的专能干细胞[2],因此在组织工程和基因治疗领域有着良好的应用前景。
原代细胞分离培养鉴定2(SD 大鼠心肌细胞、心肌成纤维细胞)
原代细胞分离培养鉴定（SD 大鼠心肌细胞、心肌成纤维细胞）目录 3 原代分离——SD 大鼠心肌细胞的分离4 原代分离——SD 大鼠心肌成纤维细胞的分离SD 大鼠心肌细胞、心肌成纤维的分离目的与意义（心肌细胞）心肌细胞体外培养可以为心肌细胞生理、药理及心血管相关研究提供有效、稳定的实验模型，在医学领域有着广泛的应用前景。
体外培养的心肌细胞可保存其形态结构和功能上的某些特点，同时去除了体内外各种限制因素的影响 , 具有精确和重复性好等优点, 可广泛用于心肌结构、病理生理、电生理、药理及毒理、受体及作用机制、心室肌细胞损伤模型及药物保护等的研究。
其次，大鼠动物模型广泛用于心血管系统疾病的基础研究。
目的与意义（心肌成纤维细胞）心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成。
非心肌细胞占细胞总数的 70%，其中 90%以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。
近年来，人们逐渐了解到非心肌细胞不仅对心肌细胞具有结构上的支持、保护作用，而且还具有自分泌和旁分泌功能，影响心肌细胞的结构和生理功能，与风湿性心脏病、心肌炎、心肌肥厚、慢性心肌缺血、心肌梗死、炎症等病理状态均密切相关，因此 ,对心肌成纤维细胞的生理学研究成为现代心血管领域研究的一个重点。
心脏 大鼠的心脏位于胸腔内，两侧隔心包与左、右肺紧邻，背侧有气管、支气管和食管。
腹侧借较宽的胸心包韧带和胸骨相连，腹前方与胸腺相贴，后面靠近膈。
C腹侧面B A心肌细胞根据组织学特点、电生理特性分为两类：工作细胞：普通心肌细胞：如心房肌细胞、心室肌细胞，无自律性，主要执行收缩功能；自律细胞：特殊分化的心肌细胞，组成心脏特殊传导系统，如窦房结细胞，收缩功能基本丧失；DESD Rat心脏HE染色F7心肌成纤维细胞 1、 心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts ，CFS)遍布于心肌组织，包绕心肌细胞并连接心肌细 胞间质。
CFS 参与细胞外基质的合成和沉积，与心脏发育、结构、细胞信号系统、物质代 谢等密切相关；它还可与心肌细胞、其它CFS 甚至内皮细胞之间相互接触，影响电机械功 能、细胞因子分泌和血管生成。
成人骨骼肌细胞原代培养
成人骨骼肌细胞原代培养
吕捷;赵春礼;李玉成;张进禄;徐群渊
【期刊名称】《神经解剖学杂志》
【年(卷),期】2001(17)1
【摘要】本研究以获取基因治疗自体移植的载体为目的 ,观察了生长因子对成人骨骼肌卫星细胞增殖的影响。
用手术中取得的成人骨骼肌进行体外组织块培养及酶消化培养 ,用成纤维细胞生长因子及表皮生长因子进行处理 ,作动态观察。
结果证明 ,消化分离出的肌卫星细胞数量极少 ,培养不能成活 ;组织块培养肌卫星细胞的增殖与生长因子的作用有关 ,成纤维细胞生长因子及表皮生长因子处理组的增殖细胞数显著高于对照组。
提示 ,生长因子可促进成年人骨骼肌卫星细胞增殖 ,但与其年龄及部位有一定关系。
【总页数】3页(P75-76)
【关键词】成纤维细胞生长因子;表皮生长因子;卫星细胞;骨骼肌;成人;细胞培养【作者】吕捷;赵春礼;李玉成;张进禄;徐群渊
【作者单位】首都医科大学北京神经科学研究所;北京积水潭医院手外科
【正文语种】中文
【中图分类】R329.2;Q954.6－33
【相关文献】
1.大鼠骨骼肌细胞的原代培养及鉴定 [J], 侯士方;孟馨;相泓冰;王涤非
2.原代培养骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型的建立 [J], 穆颖;季爱玲;刘寒强;许朝晖;王
枫
3.pCDNA3-AADC真核表达载体的构建及其在原代培养骨骼肌细胞中的表达 [J], 刘军;肖颂华;陶恩祥;梁秀龄;邢诒刚
4.成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养 [J], 徐丰
5.原代培养的成人心肌细胞及非肌细胞中心体的免疫荧光染色观察 [J], 易铁敏;陈享
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一种新的成年大鼠成肌细胞体外批量扩增培养方法
一种新的成年大鼠成肌细胞体外批量扩增培养方法刘淑红;吴海涛;陈晓萍;范明【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2009(020)001【摘要】目的:建立快速高效的成年大鼠成肌细胞分离、体外批量扩增培养的实验方法.方法:通过混合酶一步消化法从少量成年骨骼肌样品中分离成肌细胞;采用差速贴壁筛选法纯化分离并批量扩增成肌细胞.结果:混合酶一步消化法需要的时间为2.1±0.52 h,较之于传统方法所需要的6.8±0.67 h,分离细胞所需时阃显著缩短(P＜0.01);采用差速贴壁筛选法纯化分离的成肌细胞myf5/desmin阳性率＞97%,同传统分离扩增方法相比,体外批量扩增培养的这些成肌细胞具有典型的成肌细胞生长特性,在生长液中具有更好的增殖潜能,而在分化液中分化为肌营的特性无显著性差异(P＞0.05).结论:通过采用新建立的成年成肌细胞分离培养和批量扩增的方法,能够快速高效地获取高纯度的成肌细胞.【总页数】3页(P75-77)【作者】刘淑红;吴海涛;陈晓萍;范明【作者单位】军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850;中国航天员科研训练中心,北京,100193;军事医学科学院,基础医学研究所,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】Q813.11【相关文献】1.一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法 [J], 冉竞超;曹文广;孙红艳;王令;辛颖;张智英2.成年犬骨骼肌成肌细胞培养方法改良及生长特性研究 [J], 窦克非;杨跃进;阮英茆;王清峙;陈曦;陈纪林;高润霖;陈在嘉3.一种适合膜片钳记录的成年大鼠背根神经节细胞培养方法 [J], 刘晓红;曾俊伟;赵延东;阮怀珍4.成年大鼠骨骼肌成肌细胞的培养和鉴定 [J], 杨奕5.一种新的等温体外DNA扩增方法——链替代扩增 [J], 林峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养
发表时间：2010-05-14T14:28:07.827Z 来源：《中外健康文摘》2009年第36期供稿作者：徐丰
[导读] 心肌细胞是终末化组织，不能再生。
心梗后坏死的心肌必然被纤维组织代替。
徐丰 (黑龙江省第五医院 161000）
【中图分类号】R 714 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)36-0161-02
【摘要】目的探索成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养方法。
方法取成年Wistar大鼠的后肢肌肉,利用组织块法培养成肌细胞。
并对培养细胞进行形态学研究和细胞鉴定。
结果采用组织块培养成肌细胞的密度可达118/ml, 成肌细胞的分化鉴定显示94%以上的细胞呈骨骼肌特异的肌细胞。
结论利用组织块法成功培养成年大鼠原代骨骼肌成肌细胞,该方法实用性强,所得成肌细胞纯度高,为深入研究心力衰竭骨骼肌成肌细胞自体移植奠定了基础。
【关键词】骨骼肌成肌细胞原代培养大鼠成年
【Abstract】 Objective： To explorean experimental method for primary culture of adult rat skeletalmuscle sarcoblast Methods: Muscle of posterior limb from wistar rat were cultured by tissue culture method. The cells were counted and observed by light microscopy combined with identification. Results:The number of skeletalmuscle sarcoblast 118per millilitre. skeletalmuscle sarcoblast cell differentiation accredit showed that over 94% cells were stained positive for myogenin.Conclusions: Tissue culture method conveniently permits the purification and Proliferation of myoblast. These esults provide the basis for future studies to assess the ability of the cells to repair heart failure.
【Key words】skeletalmuscle sarcoblast primaryculture rat adult
心肌细胞是终末化组织，不能再生。
心梗后坏死的心肌必然被纤维组织代替。
当前内外科的治疗均不能修复及逆转已经坏死的心肌，坏死的部分经过心脏重构，最终发展为缺血性心力衰竭，其5年生存率不到50％，缺血性心衰的病理生理有多种因素参与，但丧失心肌细胞是主要原因。
如何攻克缺血性心力衰竭已成为本世纪的最大课题。
目前治疗终末期心力衰竭的唯一有效方法是心脏移植，而心脏移植受到器官来源、经费、免疫排斥反应方面的限制，能够接受心脏移植手术的病人目前每年只能达到近百例，目前细胞移植已经成为治疗缺血性心衰最有前景的方法之一。
心肌细胞移植是向心肌梗死疤痕区注入某些肌源性未成熟或未分化的细胞成分，这些细胞在心肌的微环境下能够成熟，向心肌细胞转化，改善心功能。
骨骼肌成肌细胞是首先应用于临床试验、并在临床试验中研究最多的移植细胞。
越来越多的证据表明，相比较间质干细胞而言，骨骼肌成肌细胞可能是更为理想的干细胞移植对象，其原因有以下几点：①骨骼肌成肌细胞对缺血、缺氧的环境更为耐受；②骨骼肌成肌细胞可以确定的转化成横纹肌特性的肌细胞；③骨骼肌成肌细胞容易提取、分立、培养和增殖[1,2]。
1 材料与方法
选用成年Wistar大鼠购于哈医大实验中心，低糖DMEM培养基、ham，sF-10培养液、低糖DMEM培养基、小牛血清gaba公司产品骨骼肌成肌细胞获取、分离、培养及标记选用成年Wistar大鼠,麻醉下切取胫前肌1g,研磨肌肉组织,酶解15分钟(胶原酶IA，1.5mg/ml,37'C)，继之放PBS—EDTA(0.25％)中37℃下20分钟，置入100一um细胞过滤器中，过滤后离心,细胞置于F-10培养液中,1％青链霉素(10000单位/ml)，放入细胞培养箱中培养(37℃,5％co2)。
3d换液一次,待细胞长满瓶底即可传代。
2 结果
成肌细胞的培养采用组织块培养法贴块2d后即可见有细胞从肌小粒边缘爬出,细胞呈梭形,胞浆透明。
1周后细胞可长满瓶底的60%～70%,其数目可达105,此时细胞可呈多角形,充分伸展,部分细胞密集区可见细胞呈向心性生长,相互间排列整齐,类似骨骼肌的纵切面。
成肌细胞的分化鉴定换用诱导分化液后细胞可在3d内分化,融合交织形成肌纤维,可观察到收缩现象;并且部分细胞分化形成细长的肌管,高倍镜下可见多个核及核分裂象。
这些现象为成肌细胞所特有,可以作为简便的鉴定方法。
3 讨论
目前最大的动物和临床研究资料是使用骨骼肌成肌细胞，它存在于成人骨骼肌中，在创伤后可增生，重构肌肉。
近10年来有诸多关于在鼠与绵羊将骨骼肌成肌细胞成功移植到心肌的研究报告。
它们显示可将自体骨骼肌成肌细胞注射到受损心肌内，形成横纹肌。
2000年6月15日成肌细胞移植首先应用于临床[3]。
1期临床试验的成功证实了此方法的可行性[4]。
然而在试验中唯一不利的事件是移植后心律失常的发生。
然而在试验中唯一不利的事件是移植后心律失常的发生，在早期（术后3周内）发生在4例患者中，除一例患者耐受。
发生原因可能由于骨骼肌成肌细胞不能形成心肌细胞间的间隙连结，它们不能与心肌本身的细胞等速进行电传导，从而易导致恶性心律失常。
但FormigliL等的研究表明，骨骼肌成肌细胞缺血心肌移植后骨骼肌成肌细胞可以和心肌细胞之间形成通道连接，松弛素可以增强这种细胞间连接[5]。
我们采用组织块法成功培养了成年大鼠的成肌细胞,组织块培养法实用、可行,耗材少、成本低,可获得含量超过90%以上的成肌细胞。
采用此方法培养成肌细胞,短期内获得大量成肌细胞成为可能,也为我们进一步开展成肌细胞心肌内自体移植创造了条件。
我们的研究结果意图在于贴近临床,为心力衰竭患者采用自体成肌细胞治疗提供实验依据,也为心脏疾病的基因治疗奠定基础。
参考文献
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Homologous mustle ace]1Ular matriK seeded withautologous myoblasts aS a tissue—engineering approach to abdominal wall—defectrepair．Biomaterials．2005 May：26(15)：2567—74．
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