四种方法检测糖化血红蛋白的干扰性能评价

四种方法检测糖化血红蛋白的干扰性能评价

陈颖;温冬梅;张秀明;索明环;王伟佳;陈亚琼;徐全中;吴剑杨;李曼

【摘要】目的探讨亲和层析法、高效液相色谱法(HPLC)、免疫比浊法和酶法检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)对游离胆红素(F-Bil)、结合胆红素(C-Bil)、血红蛋白(Hb)和乳糜微粒(CM)的抗干扰能力.方法收集EDTA-K2抗凝新鲜血,制备

HbA1c10.4％和6.2％的高、低浓度标本,对4种方法检测HbA1c进行干扰实验.结果 4种干扰物对亲和层析法、HPLC法检测HbA1c无干扰.CM≥15 000FTU时,免疫比浊法测定HbA1c有干扰.F-Bil、C-Bil≥121.3 μmol/L时,酶法检测高浓度HbA1c有干扰;F-Bil≥196.8 μmol/L、C-Bil≥121.3 μmol/L时,酶法检测低浓度HbA1c有干扰.结论酶法检测HbA1c抗胆红素干扰能力有待改进,应剔除黄疸标本.免疫比浊法则应避免高CM标本.

【期刊名称】《临床检验杂志》

【年(卷),期】2013(031)010

【总页数】2页(P786-787)

【关键词】糖化血红蛋白;亲和层析法;高效液相色谱法;免疫比浊法;酶法;干扰

【作者】陈颖;温冬梅;张秀明;索明环;王伟佳;陈亚琼;徐全中;吴剑杨;李曼

【作者单位】中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中

山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403;中山大学附属中山医院检验医学中心,广东中山528403

【正文语种】中文

【中图分类】R446.1

临床上溶血、黄疸和脂血标本较常见，游离血红蛋白(Hb)、胆红素、脂质等可能干扰糖化血红蛋白A1c(glycosylated hemoglobin A1c，HbA1c)的检测结果。本研究参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP7-A2文件[1]及相关文献[2]，评价游离胆红素(F-Bil)、结合胆红素(C-Bil)、Hb和乳糜微粒(CM)是否干扰亲和层析法、高效液相色谱法(HPLC)、免疫比浊法和酶法检测HbA1c。

1 资料与方法

1.1 标本来源实验当日收集本院门诊、住院患者及健康体检者EDTA-K2抗凝新鲜血标本，外观清亮无浑浊、溶血、黄疸、脂血。选择HbA1c浓度范围分别为9.5%～11.5%、5.5%～6.5%的高、低浓度标本，分别混合，用亲和层析法测定HbA1c浓度分别为10.4%和6.2%，作为基础标本。

1.2 仪器与试剂 PDQ Plus糖化血红蛋白分析仪及其配套试剂(亲和层析法)、校准品、质控品(美国Primus公司)；Variant Ⅱ糖化血红蛋白分析仪及其配套试剂(HPLC)、校准品、质控品(美国Bio-Rad公司)；Modular P800全自动生化分析仪及其配套试剂(免疫比浊法)、校准品、质控品(Roche公司)；ADVIA 2400全自动生化分析仪(德国Siemens公司)，HbA1c试剂盒(酶法)、质控品及校准品(北京利德曼公司)；干扰试剂盒(批号JISK0101，F-Bil、C-Bil、Hb和CM干扰物、空白对照冻干粉各1瓶)(日本Sysmex公司)，F-Bil、C-Bil、Hb及CM靶值分别为328.0、328.0、49.6 μmol/L及15 000 FTU。

1.3 溶液配制按干扰试剂盒说明书将各干扰物和空白对照冻干粉用2 mL蒸馏水复溶，充分溶解，配制干扰物和空白对照溶液。分别将1.0 mL F-Bil、C-Bil、Hb和CM干扰物溶液和空白液与9.0 mL高、低浓度HbA1c全血混合，分别标记为

A(含干扰物)、B(空白对照)。将标本A、B分别按0 mL/1.0 mL、0.2 mL/0.8 mL、0.4 mL/0.6 mL、0.6 mL/0.4 mL、0.8 mL/0.2 mL、1.0 mL/0 mL混合，分别制

备成5种不同浓度干扰物(F-Bil：65.6、121.2、196.8、262.4、328.0 μmol/L；

C-Bil：65.6、121.2、196.8、262.4、328.0 μmol/L；Hb：9.9、19.8、29.8、39.7、49.6 μmol/L；CM：3 000、6 000、9 000、12 000、15 000 FTU)标本

和空白对照标本。

1.4 干扰实验分别用4种方法检测HbA1c，空白对照管重复测定10次，5个系

列浓度标本分别按升序、降序、升序检测3次。

1.5 统计学方法用Microsoft Excel及SPSS 11.2软件进行。干扰率=(含干扰物组HbA1c均值-空白对照组HbA1c均值)/空白对照组HbA1c均值。干扰率≥±5%

判定为有干扰作用[1-2]。

2 结果

见表1。4种干扰物对亲和层析法、HPLC法检测HbA1c无干扰。CM≥15 000 FTU时，免疫比浊法测定HbA1c有干扰。F-Bil、C-Bil≥121.3 μmol/L时，酶法

检测高浓度HbA1c有干扰；F-Bil≥196.8 μmol/L、C-Bil≥121.3 μmol/L时，酶

法检测低浓度HbA1c有干扰。

表1 不同浓度干扰物对4种方法检测低、高浓度HbA1c的干扰率(%)参数亲和层

析法低浓度高浓度HPLC低浓度高浓度免疫比浊法低浓度高浓度酶法低浓度高浓

度F⁃Bil(μmol/L)65．61．08-0．64-0．96-1．99-1．49-0．652．000．97121．30．54-1．270．00-0．99-1．93-1．29-4．35-5．81∗196．81．61-0．96-0．96-1．99-3．63-2．02-8．15∗-