抗体库技术
免疫组库实验步骤
免疫组库实验步骤免疫组库实验是一种用于研究免疫系统的实验方法，它可以帮助科学家了解免疫系统的功能、调节机制以及相关疾病的发生机制。
本文将介绍免疫组库实验的步骤。
免疫组库实验步骤：1. 免疫组库的建立免疫组库实验的第一步是建立免疫组库。
这通常涉及到从人体或动物体内获得免疫细胞，如淋巴细胞或单核细胞，然后对这些细胞进行处理和培养，使其产生抗体。
通常使用的方法包括细胞融合和单克隆抗体技术。
2. 抗体筛选在建立免疫组库后，科学家需要对其中的抗体进行筛选，以找到感兴趣的抗体。
这可以通过多种方法来实现，如ELISA（酶联免疫吸附试验）、流式细胞术或Western blot等。
筛选的目的是找到与特定抗原结合能力较强的抗体。
3. 抗体表征在筛选出感兴趣的抗体后，科学家需要对这些抗体进行表征。
这包括确定抗体的亲和力、特异性以及结构等。
亲和力可以通过亲和层析或表面等离子共振等技术来测定。
特异性可以通过Western blot或免疫组化等方法来确定。
4. 抗体应用经过表征的抗体可以用于各种应用中。
在研究方面，抗体可以用来研究免疫系统的功能、疾病的发生机制以及药物的研发等。
在临床方面，抗体可以用于诊断疾病或治疗疾病，如抗体药物治疗肿瘤。
5. 抗体优化在使用抗体的过程中，科学家可能会发现一些问题，如抗体的特异性不够、亲和力不够强等。
为了解决这些问题，科学家可以对抗体进行优化。
这可以通过基因工程技术来实现，如人源化抗体或亲和力成熟化等。
免疫组库实验是一个复杂而严谨的实验过程，需要科学家具备扎实的实验技术和专业的知识。
通过这些实验，科学家可以更好地理解免疫系统的功能和调节机制，为免疫相关疾病的研究和治疗提供重要的依据。
在未来，免疫组库实验将继续发展，为人们的健康做出更大的贡献。
单克隆抗体制备技术的研究现状
单克隆抗体制备技术的研究现状目录1. 单克隆抗体制备技术概述 (2)1.1 单克隆抗体的定义与特点 (3)1.2 单克隆抗体制备技术的意义与应用 (4)2. 单克隆抗体制备技术的研究方法 (5)2.1 细胞融合技术 (6)2.1.1 脂质体介导的细胞融合 (8)2.1.2 电穿孔介导的细胞融合 (9)2.2 动物免疫与杂交瘤技术 (10)2.3 体外细胞培养与筛选 (12)2.3.1 体外细胞培养技术 (13)2.3.2 细胞筛选方法 (14)3. 单克隆抗体制备技术的研究进展 (16)3.1 传统单克隆抗体制备技术的优化 (17)3.1.1 优化免疫动物的选择 (18)3.1.2 改进杂交瘤细胞的培养条件 (20)3.2 新型单克隆抗体制备技术的开发 (21)3.2.1 基于基因工程的制备方法 (23)3.2.2 基于合成生物学的制备方法 (24)4. 单克隆抗体制备技术的应用领域 (26)4.1 诊断领域 (27)4.2 治疗领域 (28)4.3 预防领域 (30)4.4 研究领域 (31)5. 单克隆抗体制备技术面临的挑战与展望 (32)5.1 技术挑战 (34)5.2 应用挑战 (35)5.3 发展前景与趋势 (36)1. 单克隆抗体制备技术概述单克隆抗体制备技术是生物技术领域的一个重要分支，它主要涉及利用杂交瘤细胞技术来生产具有高度特异性的单克隆抗体。
单克隆抗体是由单个B细胞克隆产生的，能够针对特定抗原进行识别和结合。
这种技术自20世纪70年代以来得到了迅速发展，并在医学、生物学和工业等多个领域发挥着重要作用。
免疫原的免疫：首先，通过免疫动物来诱导产生针对特定抗原的B细胞。
细胞的分离与培养：将免疫动物的脾细胞分离出来，并在体外培养，以筛选出能产生特定抗体的B细胞。
融合与选择：将分离出的B细胞与骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。
通过选择性培养，筛选出能够产生抗体的杂交瘤细胞。
抗体克隆化：通过有限稀释等技术，将杂交瘤细胞克隆化，以确保每个克隆细胞都只产生一种特定的抗体。
应用定量免疫印迹技术分析人类自身反应抗体库
［７ Ｋｅ ａ Ｔ Ｎ Ｅ Ｉ ｂ Ａ ｅ ａ．Ｊ ． ａ ｌ ｌ ｏｌ ｎｎｔ １］ ｉ ｉ ． ａ ｌｎ 。 ｋ ｏ ， ｔ １［ ］ Ｃ ｒ ｎ ｍ ｌｎ ｕ ｈ ｕ ｍ ｌ ｏ一
，
１９ ．８ ２—３ ：２．３ ． ９９ ４ （ ） １ １ １ ３
迄今主要应用酶免疫化学方法分析天然及疾病 显色的光密度进行免疫反应的定量。取未与抗体 反 相关 自身抗体 的抗原， 表位特 异性 ， 所用 的抗体来 自 应 的硝酸纤维素膜 ， 用胶体金进行蛋 白染色 ， 并进行 用 校正抗原—抗体 反 血浆 的免疫球蛋 白或杂交瘤细胞产生 的 Ｍ Ａ ， ｃｂ 抗原 光密度测定 ， 以评估转膜效 率 ， 为纯 化 或 重 组 的 自身 抗 原或 相 关 肽 。但 是采 用某 种 应 的光密度 曲线 。用线性 差异分 析 （ Ｄ ） １ ｎ－ ＬＡ 及 Ｖ ｎ Ｉ ａ Ｗｉ ｙ ｈｔ ｍｅ Ｕ检验分析不 同个体组整体 反应模 式之间 单一蛋 白为抗原 的免疫化学方法具有不可避免的缺 陷—— 即把庞 杂 的免 疫体 系看成 是 多种抗原． 抗体 的差异 。并用 Ｆｓ ｒ 检验 比较方差 ， ｉｅ Ｆ ｈ 观察每一组 内 反应 的简单 集合 。 由法 国 Ｐｓ ｒ 研究 所建 立 的一 进行检验的抗体模式之间的同质程度 。该免疫 印迹 ａｕ ｔｅ 种全面反映抗体对 自身抗原反应特性的定量免疫印 方法的 目的并非研究基于表位特异性 的 自身抗体反 而是通过分析针对一大类 自身抗原 的反应模式 ， 迹 方法 可 以克 服 这一 不 足 。应 用 该 种 定 量 免 疫 印 迹 应 ， 并通过对结果 的多元统计分 析 ， 以通 过混合 抗体 比较 不 同健 康个 体 的 整 体 自身 反 应模 式 。 可 （ 血 清 ） 一 组 自身 抗 原 的 反 应 ， 定 量 展 示 自身 ２ 正 常 人 自身 反应 抗体 库 如 与 来 ２ １ 正 常人 ＩＭ类 自身反 应 库 ． ｇ 抗 体 的 整体 自身 反应 特 性 。
噬菌体展示筛选抗体技术介绍
探索生物医学中的创新应用
目录
01 噬菌体展示筛选抗 体概述
06 噬菌体展示抗体的 发展前景
02 噬菌体展示技术原 理
03 噬菌体展示抗体筛 选流程
0Hale Waihona Puke 噬菌体展示抗体的 应用案例05 噬菌体展示抗体的 优点与缺点
01 噬菌体展示筛选抗体 概述
噬菌体展示筛选抗体概述
1 噬菌体展示筛选抗体技术介绍
疗效果并降低副作用。
05 噬菌体展示抗体的优 点与缺点
噬菌体展示抗体的优点与缺点
噬菌体展示抗体的优 势
噬菌体展示技术能够快速、 高效地筛选出特异性抗体， 大大缩短了实验周期，提高 了研究效率。
噬菌体展示抗体的局 限性
噬菌体展示技术虽然筛选速 度快，但存在假阳性率高的 问题，需要进一步的验证和 优化。
噬菌体展示筛选抗体技术是一种利用噬菌体表面
噬菌体展示筛选抗体的优势 2 展示特定蛋白质，通过生物淘选方法寻找与目标
噬菌体展示筛选抗体技术具有高度灵活性和多样
抗原特异性结合的抗体的方法。
性，能够快速、高效地筛选到具有高亲和力和特
异性的抗体，为免疫学研究和药物开发提供了重
要工具。 3 噬菌体展示筛选抗体的应用前景
噬菌体展示抗体的优 势
噬菌体展示技术具有高度灵 活性和多样性，可以快速、 大量地筛选出特异性强、亲 和力高的抗体，为生物医学 研究和药物开发提供了重要 工具。
噬菌体展示抗体的应 用前景
噬菌体展示抗体技术在肿瘤 治疗、免疫诊断、疫苗研发 等领域具有广泛应用前景， 有望为人类健康事业做出重 要贡献。
谢谢大家
噬菌体展示筛选抗体技术在疾病诊断、治疗和预
防等方面具有广泛的应用前景，包括癌症治疗、
多克隆抗体制备的技术_PPT幻灯片
• 纯化：盐析法
•
凝胶过滤法
•
离子交换层析法
•
亲和层析法
•
电泳分离法
• 浓缩：吸收浓缩
•
蒸发浓缩
•
超滤浓缩
• 研钵乳化法 • 直接在旋涡振荡器上乳化 • 组织捣碎器乳化 • 注射器乳化 • 胶体磨
二、动物免疫
（一）免疫动物的选择
选择动物时应考虑以下因素： ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫 动物种属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越 好，而同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。 ②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的 正常动物（以雄性为佳）；抗体需要量少时，选用 家兔、豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选 用绵羊、山羊、马、驴等大动物。 ③抗原性质与动物种类
•
合成类载体：人工合成的多肽聚合
物
2.连接方法
半抗原与载体的连接有物理法和化学法。
• 物理法 是用物理吸附法将载体与半抗原连 接，其原理是通过电荷和微孔来吸半抗原， 吸附载体主要有PVP和CMC等；
• 化学法 是利用某些功能基团把半抗原连接 到蛋白质类或多肽类聚合物载体上。不同的 半抗原应选用不同的方法进行连接。
（二）免疫方法
• 根据抗原的性质、免疫原性和动物的免疫 反应性来决定免疫途径、免疫次数和间隔 时间等肉注射
•
静脉注射
•
腹腔注射以及淋巴结内注射
• 注射间隔时间：
• 带佐剂的皮内、皮下注射，一般为间隔 2～ 4 周免疫一次。
• 不带佐剂的皮下或肌肉注射，一般为 1～2 周间隔时间；肌肉或静脉免疫的，可 5 天 左右的间隔时间。
抗原的提取与纯化
• 提取：
• 水溶液提取法 • 有机溶剂提取法 • 纯化： • 超滤，盐析，电泳，凝胶过滤，离子交换，
噬菌体抗体淘筛方法
噬菌体抗体淘筛方法一、噬菌体展示技术原理噬菌体展示技术基于噬菌体颗粒表面的基因插入法。
通过将抗体片段的基因插入到噬菌体基因组中，使噬菌体能够在其表面展示抗体。
随后，将含有目标抗原的库经过一系列的筛选步骤，如淘洗、洗涤和分离，以筛选出与目标抗原特异性结合的抗体。
噬菌体核心蛋白质pIII等表面蛋白链通过基因插入的方法与外源基因连接，实现抗原展示。
二、噬菌体抗体淘筛方法的流程1.抗原制备：首先，需要制备目标抗原。
可以通过多种方法制备抗原，如重组蛋白表达系统、细胞和细胞溶解物、组织和分离物等。
2.抗体库构建：构建包含大量抗体片段的抗体库。
一般使用转录组或基因组DNA作为起始材料，使用PCR扩增抗体基因片段，并将其插入合适的载体中。
3.噬菌体包装：将构建好的抗体库与噬菌体粒子一起包装成噬菌体颗粒。
4.抗原吸附：将噬菌体抗体库与目标抗原进行反应，使抗体与抗原结合。
5.淘洗分离：用洗涤缓冲液对混合物进行混洗，以除去非特异性结合的噬菌体。
6.噬菌体放大：将经过淘洗分离的噬菌体在培养基中进行放大培养。
7.ELISA筛选：使用ELISA检测噬菌体是否与目标抗原的特异结合。
将阴性和阳性对照样品和待测样品加入到蛋白质包被的酶标板孔中，通过检测酶标物质的生成或反应物颜色的变化，判断噬菌体是否与目标抗原结合。
8.质粒DNA提取和测序：选择特异性结合抗原的噬菌体进行质粒DNA 提取和测序，以获取抗体的DNA序列。
9.后续鉴定和分析：鉴定筛选出的抗体的亲和力、特异性、敏感性等性质，以及进行进一步的功能分析。
三、噬菌体抗体淘筛方法的注意事项1.抗原的选择：选择合适的抗原非常关键，抗原应具有特异性且容易从培养基或生物样品中提取。
2.抗体库的构建：构建抗体库时，要确保插入的抗体片段多样性和覆盖性。
3.抗原吸附条件的优化：抗原吸附条件的优化对淘洗分离步骤的效果具有重要影响。
4.筛选条件的优化：在ELISA筛选过程中，需要对反应温度、时间、缓冲液浓度等条件进行优化，以提高筛选效果。
抗体试剂技术要求
抗体试剂技术要求随着生物医学领域的不断发展，抗体试剂作为一种重要的实验工具，被广泛应用于生物学研究、临床诊断以及药物开发等领域。
抗体试剂技术的要求包括多个方面，下面将从抗体选择、制备与储存、检测与验证等方面进行详细介绍。
抗体的选择是抗体试剂技术的关键步骤之一。
在选择抗体时，需要考虑抗体的特异性、亲和力、稳定性等因素。
特异性是指抗体只能与目标抗原特异性结合，而不与其他非特异性物质结合。
亲和力则是指抗体与抗原结合的强度，亲和力越高，抗体与抗原的结合越紧密。
稳定性是指抗体在不同条件下的保存稳定性，如耐高温、耐酸碱等。
因此，在选择抗体时，需要根据实验需求仔细评估这些因素。
抗体的制备与储存也是抗体试剂技术中不可忽视的环节。
一般来说，抗体的制备包括抗原的制备和免疫动物的免疫过程。
抗原的制备需要注意保持其天然结构和活性，以确保抗体的特异性。
免疫动物的选择则需要考虑其免疫应答能力、抗原的相似性等因素。
制备好的抗体需要正确储存，一般建议在-20℃或更低温度下保存，避免重复冻融。
此外，抗体的储存液应该选择适当的缓冲液，并添加一些保护剂，如蛋白质稳定剂，以增加抗体的稳定性。
抗体试剂技术中的检测与验证也是至关重要的一步。
在使用抗体试剂进行实验前，需要对抗体进行验证，以确保其特异性和敏感性。
常用的验证方法包括免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等。
验证抗体时，应使用已知表达目标抗原的样本进行实验，并与负对照样本进行比较。
如果抗体的特异性和敏感性达到实验要求，则可以进行下一步实验。
除了上述内容，还有一些其他方面的要求需要注意。
例如，在实验中使用抗体试剂时，需要注意正确的稀释倍数和操作条件，避免出现误差。
此外，抗体试剂的交叉反应性也需要进行评估，以避免与其他相关物质发生非特异性结合。
最后，抗体试剂的批次一致性也是重要的要求之一，为了保证实验结果的准确性和可重复性，建议在同一批次中使用同一供应商提供的抗体试剂。
抗体试剂技术的要求包括抗体选择、制备与储存、检测与验证等多个方面。
免疫试题库(附答案)
免疫试题库（附答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、制备抗血清首次与二次之间免疫接种的间隔时间通常为A、10-20dB、5-10dC、15-30dD、40-50dE、3-5d正确答案：A2、用于包被斑点金免疫层析试验载体膜质控条(线)的物质是A、人白蛋白B、胶体金颗粒C、待测抗原标准品D、胶体金标记抗体E、抗免疫金抗体正确答案：E3、噬菌体抗体库技术是利用λ噬菌体载体表达A、FcB、FabC、胸腺嘧啶核苷D、CD分子E、V-D-J正确答案：B4、免疫印迹法常用于A、补体测定B、甲胎蛋白的测定C、免疫球蛋白含量的测定D、抗HIV的确认试验E、细胞因子的测定正确答案：D5、下列细胞因子的英文缩写错误的是A、白细胞介素-ILB、肿瘤坏死因子-TNFC、干扰素-MCFD、集落刺激因子-CSFE、红细胞生成素-EPO正确答案：C6、下列成分有可能与大分子抗原结合而出现肉眼可见反应的是A、Fc段B、Fab段C、F(ab’)2段D、IgG的L链E、IgG的H链正确答案：C7、下列哪种免疫球蛋白在特应性过敏症患者血清中浓度可升高A、IgGB、IgMC、IgDD、IgAE、IgE正确答案：E8、补体不具备下列哪种作用A、溶解细胞作用B、过敏毒素作用C、中和毒素作用D、趋化作用E、调理作用正确答案：C9、慢性排斥反应的主要原因是A、CD4T细胞/巨噬细胞B、抗ABO血型抗体或HLA-Ⅰ类分子抗体C、NK细胞D、抑制细胞的活化E、对HLA抗原的耐受正确答案：A10、玻片法做ABO血型鉴定，属于A、直接凝集反应B、协同凝集反应C、间接血凝反应D、间接凝集抑制反应E、Coombs试验正确答案：A11、1分子亲和素可结合几分子生物素A、2分子B、1分子C、8分子D、3分子E、4分子正确答案：E12、能特异性刺激粒细胞集落形成单位生长的是A、EPOB、G-CSFC、M-CSFD、GM-CSFE、TPO正确答案：B13、在临床检验室内质量控制中，如果质控结果出现失控信号，下列做法正确的是A、增加质控规则，提高误差检出B、发出患者结果，不寻找原因C、增加质控的个数，提高误差检出D、寻找失控的原因，并采取一定的措施加以纠正，然后重新测定，再决定是否发出报告E、先发出患者结果，然后寻找原因正确答案：D14、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原体是A、HBVB、HCVC、HIVD、HPVE、HSV正确答案：C15、初次应答时，产生的抗体具有哪种特点A、抗体维持时间较长B、IgG与IgM几乎同时产生C、为低亲和性抗体D、抗体含量较高E、以IgG为主正确答案：A16、特异性体液免疫应答的介导细胞主要是A、T淋巴细胞B、B淋巴细胞C、巨噬细胞D、郎罕细胞E、TH1细胞正确答案：B17、ELISA双抗原夹心法检测抗体时，固相载体包被物是A、未标记的已知抗原B、未标记的已知抗体C、未标记的抗抗体D、酶标记的抗原E、酶标记的抗体正确答案：A18、类风湿性关节炎患者滑膜液中常检出的类风湿因子是A、同IgG轻链发生反应的IgMB、同IgG重链发生反应的IgMC、同细菌抗原发生反应的IgED、同胶原蛋白发生反应的IgE、同DNA发生反应的IgG正确答案：B19、不属于细胞因子生物学活性的是A、增强抗感染和细胞杀伤效应B、促进靶细胞的增殖和分化C、促进炎症过程，影响细胞代谢D、促进或抑制其他细胞因子和膜表面分子的表达E、中和及溶解病毒作用正确答案：E20、检测抗血细胞抗体主要用于检测超敏反应的类型是A、Ⅱ型B、Ⅳ型C、Ⅴ型D、Ⅰ型E、Ⅲ型正确答案：A21、关于抗核抗体下列选项中正确的是A、抗核抗体有器官特异性B、抗核抗体有种属特异性C、是以自身抗原作为靶抗原的一组自身抗体的总称D、抗核抗体泛指各种核成分的抗体E、抗核抗体只能与人的细胞核起反应正确答案：D22、人T细胞可根据下列哪个特征区别于B细胞及其它细胞A、形态B、Fc受体的存在C、胞浆颗粒的是否存在D、CD2E、Ig表面标志正确答案：D23、完全抗原的特征是A、有免疫原性，无反应原性B、无免疫原性和反应原性C、必须与载体结合才具有免疫原性D、有反应原性，无免疫原性E、有免疫原性和反应原性正确答案：E24、直接法荧光抗体技术检查抗原是将荧光素标记在A、特异性抗体B、抗补体抗体C、抗原D、抗人IgGE、补体正确答案：A25、下列免疫学测定方法中敏感性最高的是A、沉淀反应B、凝集反应C、ELISAD、放射免疫测定E、补体结合试验正确答案：D26、巨噬细胞产生的主要细胞因子是A、IL-5B、IL-1C、IL-4D、IL-10E、IL-2正确答案：B27、Percoll分离液的主要成分是A、聚蔗糖B、聚乙二醇C、聚乙烯吡咯烷酮D、经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒E、泛影葡胺正确答案：D28、下列哪一项不属于粘附分子的功能A、参与体液免疫应答B、在肿瘤转移过程中发挥重要作用C、参与细胞的生长与分化D、参与细胞的信号转导E、参与细胞的伸展与移动正确答案：A29、将外毒素转变为类毒素A、可减弱毒素的毒性B、可增强毒素的免疫原性C、可增强吞噬细胞的吞噬活性D、可降低毒素的免疫原性E、可增强毒素的毒性正确答案：A30、CD4的功能是A、诱导B细胞参与免疫应答B、起正调节作用C、是HIVgp120受体D、抑制T细胞活化E、构成BCR-IgαIgβ复合体正确答案：C31、膜载体的酶免疫测定最常用的载体为A、硝酸纤维素膜B、华特曼滤纸C、分子筛D、醋酸纤维膜E、聚丙烯酰胺正确答案：A32、抗原抗体反应的特点是A、抗原抗体结合是不可逆的B、抗原抗体结合后仍可与其他抗原结合C、解离后抗体不能再与抗原结合D、解离后抗体活性和特异性不变E、解离后抗原抗体结构活性改变正确答案：D33、属于肿瘤主动生物治疗方法的是A、LAK细胞治疗B、化疗C、TIL治疗法D、接种肿瘤疫苗E、放射性核素标记mAb正确答案：D34、用针对哪一种抗原的单克隆抗体可鉴定人的Tc细胞A、CD8B、CD4C、CD3D、gh-2E、Lyt-1正确答案：A35、较长时间(4-5年)保存抗体，最好采用A、-30℃保存B、-10℃保存C、-20℃保存D、4℃保存E、真空干燥保存正确答案：E36、抗原抗体反应特点不包括A、电离性B、特异性C、比例性D、阶段性E、可逆性正确答案：A37、能帮助T细胞将TCR与抗原肽结合的信息传入细胞内的分子是A、CD2B、CD3C、CD4D、CD21E、CD19正确答案：B38、终点法散射比浊分析应保证A、抗体过量B、抗原过量C、抗原：抗体为2:1D、抗原:抗体为1：2E、抗体抗原处于最适比正确答案：A39、初次免疫应答时产生抗体的特点是A、为高亲和性抗体B、抗体效价高C、IgG为主D、以IgM为主E、持续时间长正确答案：D40、载体至少连接多少数目以上的半抗原才能有效地产生抗体A、30B、10C、50D、40E、20正确答案：E41、甲、乙两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应，这两种抗原相互称为A、半抗原B、完全抗原C、TD-AgD、TI-AgE、共同抗原正确答案：E42、荧光素发射荧光属于A、电化学发光B、偏振光C、化学发光D、生物发光E、光照发光正确答案：E43、辅助性T细胞表达的CD抗原是A、CD4B、CD8C、CD19D、CD35E、CD40正确答案：A44、下列为NK细胞特有表面抗原的是A、CD2B、CD16C、CD56D、CD39E、无特异表面抗原正确答案：C45、TCR、BCR可变区基因重排的机制是A、7-12-9与7-12-9环出B、7-23-9与7-23-9环出C、7-12-9与7-23-9环出D、7-12-9与9-23-7环出E、内含子之间环出正确答案：C46、沉淀反应中如抗体过量将出现A、沉淀物增多B、后带现象C、等价带现象D、前带现象E、假阳性正确答案：D47、HLA分子中与移植免疫的关系最为重要的是A、HLA-AB、HLA-BC、HLA-CD、HLA-DRE、HLA-DP正确答案：D48、参与免疫溶血反应的成分是A、红细胞、补体B、红细胞、抗红细胞抗体、补体C、白细胞、抗白细胞抗体、补体D、红细胞、抗红细胞抗体E、抗红细胞抗体、补体正确答案：B49、肿瘤免疫学检验试图通过免疫学方法检测的物质是A、补体B、细胞因子受体C、细胞因子D、肿瘤标志物E、免疫球蛋白正确答案：D50、CD8的配体是A、MHCII类分子B、MHCI类分子C、B7D、CD28E、CD40正确答案：B51、T细胞表面不表达的分子是A、CD2B、CD3C、CD28D、CD80(B7)E、TCR正确答案：D52、HLA-I类抗原A、主要存在于B细胞、单核巨噬细胞和部分活化T细胞表面B、只能用混合淋巴细胞培养法检测，故又称LD抗原C、其重链由第6号染色体上HLA-I类基因编码D、由α和β两条糖肽链借非共价键连接组成E、为TH细胞活化的协同刺激分子正确答案：C53、常用于诊断小细胞肺癌的酶类肿瘤标志物是A、碱性磷酸酶B、乳酸脱氢酶C、神经元特异性烯醇化酶D、谷胱甘肽-S-转移酶E、酸性磷酸酶正确答案：C54、关于NK细胞错误的是A、来源于骨髓B、CP16、CD56是其特有标志C、表达TCR-CD3复合物D、大多数为CD4-CD8-E、识别CD1分子提呈的脂类或糖类抗原正确答案：B55、最先被用作免疫标记技术的标记物是A、酶B、放射性核素C、荧光素D、激素E、生物素正确答案：C56、抗原抗体反应中，何种条件形成肉眼可见的免疫复合物A、抗体显著多于抗原B、抗原略多于抗体C、抗原抗体比例适当D、抗原显著多于抗体E、抗体略多于抗原正确答案：C57、作为荧光显微镜光源不可能是A、高压汞灯B、紫外线C、氙灯D、卤素灯E、氚灯正确答案：B58、参与体液免疫应答的主要免疫细胞是A、淋巴细胞B、T细胞C、B细胞D、吞噬细胞E、粒细胞正确答案：C59、哪项不是初次应答的规律A、抗体亲和力高B、潜伏期长C、抗体水平低D、产生的抗体以IgM为主E、抗体维持时间短正确答案：A60、有关BCR和抗体描述正确的是A、1个B细胞的BCR和分泌的抗体特异性不同B、二者编码的基因相同C、不具有类别转换D、基因重排发生于免疫应答阶段E、二者可变区不同正确答案：B61、将人IgG给家兔免疫后可得到A、抗γ链抗体B、抗κ链抗体C、抗λ链抗体D、抗Fc段抗体E、以上均可正确答案：E62、艾滋病免疫学检查一般包括A、人类免疫缺陷病毒抗体和B细胞B、T细胞和B细胞C、人类免疫缺陷病毒和其他病毒抗体D、人类免疫缺陷病毒抗体和T细胞E、细菌和真菌正确答案：D63、属于被动免疫治疗的是A、TILB、应用短小棒状杆菌疫苗C、接种狂犬疫苗D、接种肿瘤疫苗E、使用卡介苗正确答案：A64、关于化学发光酶免疫分析不正确的是A、以过氧化物酶为标记酶B、加入发光剂提高敏感度和稳定性C、以邻苯二胺为底物D、化学发光剂作为酶反应底物E、是将发光系统与免疫反应相结合的技术正确答案：C65、关于特异性抗体的鉴定叙述正确的是A、抗体特异性鉴定常采用凝集反应B、抗体效价鉴定常采用单向琼脂扩散试验C、抗体效价鉴定常采用酶联免疫法D、抗体纯度鉴定常采用双向免疫扩散法E、抗体纯度鉴定常采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法正确答案：E66、酶免疫分析技术中常用于标记的酶有A、辣根过氧化物酶和过氧化氢酶B、碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶C、β半乳糖苷酶D、过氧化氢酶E、B和C正确答案：E67、IgE分子的哪个部位与肥大细胞膜上的相应受体结合A、Fab段B、CH2C、H链可变区D、H链恒定区E、Fc段正确答案：E68、AIDS患者的T细胞亚群检测一般会出现A、CD4↓CD4/CD8↓B、CD8↓CD4/CD8↑C、CD4↑CD4/CD8↑D、CD8↑CD4/CD8↓E、CD3↑CD4/CD8↑正确答案：A69、导致慢性移植排斥反应的主要原因是A、微生物感染B、再灌注损伤C、迟发型超敏反应D、抑制剂的应用E、局部缺血正确答案：C70、GVHR的中文全称为A、移植物抗宿主反应B、荧光偏振免疫分析C、补体依赖的细胞毒作用D、宿主抗移植物反应E、人类白细胞抗原正确答案：A71、细胞毒性T细胞的主要功能是A、辅助B细胞分化成抗体产生细胞B、放大细胞免疫应答C、促进杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞D、特异性溶解靶细胞E、与NK细胞协同反应正确答案：D72、检测浆膜腔积液何种肿瘤标志物有助于胰腺癌的诊断A、CEAB、AFPC、HCGD、CA199E、CA724正确答案：D73、CD8抗原存在于A、辅助性T淋巴细胞表面B、细胞毒性T淋巴细胞表面C、吞噬细胞表面D、所有成熟的T淋巴细胞表面E、B淋巴细胞表面正确答案：B74、不属于Ⅱ型变态反应的是A、新生儿溶血症B、特发性血小板减少性紫癜C、自身免疫性溶血性贫血D、输血反应E、过敏性休克正确答案：E75、关于小分子抗体的叙述，错误的是A、采用干细胞技术B、不能通过胎盘C、属基因工程抗体D、易于穿透血管和组织E、不含Fc段正确答案：A76、CD3主要分布在A、DCB、APCC、胸腺细胞D、浆细胞E、成熟T细胸正确答案：E77、属于肿瘤糖链抗原的是A、AFPB、PSAC、CEAD、CA19-9E、APT正确答案：D78、“新生儿溶血症”多发生于A、Rh+的胎儿+Rh+的母体B、Rh-的母体+Rh+的胎儿C、Rh-的胎儿+Rh+的母体D、Rh+的母体E、Rh-的母体正确答案：B79、制备单克隆抗体最常用的细胞融合剂为A、HATB、8-AGC、PEGD、PHAE、BSA正确答案：C80、补体系统被激活后形成的膜攻击复合物是A、C1-C9B、C3bBbC、C5b6789D、C4b2bE、C4b2b3b正确答案：C81、关于IRMA的说法正确的是A、反应中加入过量的标记抗原B、反应中加入定量的标记抗原C、反应中加入过量抗体D、反应中加入过量的标记抗体E、反应中加入定量的标记抗体正确答案：D82、下列哪一个HLA功能区在人类中具有相同的抗原性A、胞浆区B、HLA穿膜区C、肽结合区D、Ig样区E、以上均不是正确答案：D83、关于淋巴细胞分离的描述错误的是A、Ficoll分离液法是一种单次差速密度梯度离心的分离法B、温度可影响Ficoll分离的细胞收率C、为获得较纯的单个核细胞，需根据待分离细胞的比重调整分离液的比重D、采用贴壁黏附法分离到的淋巴细胞群中不会损失B细胞E、Percoll分离是一种连续密度梯度离心分离法，是纯化单核细胞和淋巴细胞的一种较好的方法正确答案：D84、与抗体产生有关的细胞是A、粒细胞B、NK细胞C、巨噬细胞D、Tc细胞E、红细胞正确答案：C85、不属于杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理的是A、采用转基因技术B、利用代谢缺陷补救机制筛选出杂交瘤细胞C、杂交瘤保持双方秦代细胞的特性D、杂交瘤细胞可以无限增殖E、淋巴细胞产生抗体的克隆选择学说正确答案：A86、在电场作用下的加速度的单向扩散试验是A、火箭电泳B、对流免疫电泳C、免疫电泳D、免疫固定电泳E、区带电泳正确答案：A87、制作荧光抗体染色标本最关键的是A、力求保持抗原的完整性B、切片尽量薄些C、采用石蜡切片或冷冻切片法D、材料要新鲜并立即处理及时冷藏E、标本需要固定正确答案：A88、当怀疑患有性联丙种球蛋白缺乏症时应首先考虑进行A、SmIg的检测B、CD的测定C、同种血型凝集素测定D、Ig浓度测定E、特异性抗体产生能力的测定正确答案：D89、少量多次的抗毒素脱敏疗法的基本原理是A、稳定肥大细胞膜，阻止其脱颗粒B、逐步消耗肥大细胞上的IgEC、舒张平滑肌D、中和IgDE、以上都是正确答案：B90、对死疫苗叙述错误的是A、需多次接种B、注射的局部和全身反应较重C、能诱导细胞免疫形成和特异性抗体产生D、用免疫原性强的病原体灭活制成E、保存比活疫苗方便正确答案：C91、参与Ⅱ型超敏反应的细胞是A、嗜碱性粒细胞、NK细胞B、肥大细胞、巨噬细胞C、NK细胞、巨噬细胞D、嗜碱性粒细胞、巨噬细胞E、肥大细胞、NK细胞正确答案：C92、牛痘苗的发明者是A、德国BehringB、法国PasteurC、德国KochD、澳大利亚BurnetE、英国Jenner正确答案：E93、免疫对机体是A、有利也有害B、正常条件下有利，异常条件下有害C、有利的D、有利无害E、有害的正确答案：B94、乳糜泻病人与下列哪种HLA抗原呈关联A、HLA-B17B、HLA-B8C、HLA-DR2D、HLA-DR3E、HLA-B35正确答案：D95、自身抗体检测对某些自身免疫病诊断的价值正确的是A、敏感性低，特异性低B、敏感性低，特异性强C、相关性不明显D、敏感性高，特异性强E、敏感性高，特异性较低正确答案：E96、在荧光抗体技术中，常用的荧光素为A、FITCB、RB200C、TRITCD、PEE、R-RE正确答案：A97、抗原的特异性取决于A、抗原结构的复杂性B、抗原的化学组成C、抗原分子量的大小D、抗原决定簇的性质、数目及空间构型E、抗原表位的数量正确答案：D98、Ficoll 淋巴细胞分离法是一种A、连续密度梯度离心法B、差速密度梯度离心法C、离子交换层析法D、自然沉降法E、亲和层析法正确答案：B99、抗CD4单克隆抗体不可检出下列哪些细胞A、TH0B、TH1C、TcD、TDTHE、TH2正确答案：C100、ELISA操作过程中导致空白对照孔显色加深的主要原因是A、加样不准B、保温时间不准C、洗涤不彻底D、酶标抗体变性，酶脱落E、照射时间长正确答案：C。
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一、选择性感染噬菌体展示 SIP技术的原理 294页
gIII蛋白
N1结构域 N2结构域 CT结构域
将筛选配体与N1、N2复合物化学偶联作为接头，与gIII融合蛋白特异 性结合，重组噬菌体恢复感染大肠杆菌的能力
a体内SIP
第三节 选择性感染噬菌体 展示抗体库技术
选择性感染噬菌体展示(selectively infective phage display)技术即SIP技 术,是在噬菌体展示技术的基础上发展起 来的。该技术通过将候选蛋白与配体之 间的结合反应与噬菌体感染和扩增直接 联系起来,不必经过亲和筛选与洗脱,直 接获得特异性候选蛋白基因。
用固相化抗原经“亲和结合一洗脱一扩增”数个循环直接、 方便、简捷、高效地筛选出表达特异性好、亲和力强的抗 体噬菌体库。 筛选到的噬菌体再将基因g3或g8切除后，转入大肠杆菌， 使翻译出的抗体分泌到细菌的质周腔内，形成游离的抗体 片段，经过纯化即可获得目的抗体。
首先提取细胞的总RNA ,经过RTPCR 扩增可变区基因
四、噬菌体抗体库的应用
研制疫苗和诊断试剂 有学者用乙肝病人的 阳性血清中的抗体从噬菌体随机肽库中分离 到乙肝病毒特异性的噬菌体模拟肽；Lundin 等对HIV-1 病毒也做了相应的研究,从噬菌体 抗体库中分离到能够诱发针对HIV-1 的免疫 反应的噬菌体肽。
表位研究 确定核酸结合蛋白 通过构建锌指的随 机肽库,采用核酸作为靶分子进行筛选,可 以得到其相应的结合蛋白。 药物开发 利用噬菌体肽库的多样性,筛 选出能同受体特异结合的重组噬菌体多 肽，可作为受体的激动剂或拮抗剂。
英国剑桥的Ward等最早尝试了抗体库的构建， 他们用PCR从溶菌酶免疫后的小鼠脾细胞DNA扩 增出VH基因,测序证实了其多样性,在大肠杆菌 表达出VH段(单区抗体),检测2000个克隆得到 21个可以与溶菌酶特异结合的克隆。 这一工作未构建完整的抗原结合部位(无轻链), 也未提出有效的筛选方法,但它表明了抗体库 技术的可行性。
杂交瘤细胞 体外免疫的细胞 致敏及非致敏的B 淋巴细胞(骨髓、外周血) 病灶局部引流淋巴结 扁桃体或经过免疫的小鼠脾脏等 其中以淋巴结的B 淋巴细胞较好
单链抗体(ScFv) 细胞中PCR扩增抗体因 g3或 g8 的先导系列的紧靠下游 外源基因表达多肽以融合蛋白形式展示在外壳蛋白N端
Phage display vector & Library Generation
The population of antibody scFv genes are cloned in a phage display vector to create a fusion with the phage coat protein. In this way a "library" is created in bacteria
概念
所谓抗体库(antibody library)技术,就是 用基因克隆技术克隆全套抗体重链和轻 链可变区基因,然后重组到特定的原核表 达载体中,再转化大肠杆菌以表达有功能 的抗体分子片段,并通过亲和筛选获得特 异性抗体可变区基因的技术。
抗体库技术经历了组合抗体库、噬 菌体抗体库、核糖体展示(ribosome display)抗体库3个发展阶段。
噬菌体抗体库技术(phage display antibody library techniques) 是指用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction ,PCR) 扩增抗体的 全套可变区基因,通过噬菌体表面展示技术,把 Fab 段或单链抗体(ScFv) 表达在噬菌体的表面, 经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异 性抗体。 构建Fab抗体库和ScFv抗体库的差别２８５页
经典的筛选方法有两种290页
一是将纯抗原包被在固相介质上,如酶标 板、免疫试管或亲和层析柱,然后加入待 筛选的噬菌体,洗去非亲和性的噬菌体,回 收高亲和性的噬菌体。（固相筛选） 二是将抗原与生物素基团相连,再将其固 定在包被有链霉蛋白抗生素的顺磁珠上 对噬菌体进行筛选。（液相筛选）
三、噬菌体抗体库技术优势
酶切轻链PCR 产物和表达载体
二者连接，转入感受态细胞中扩增 重链的PCR产物 酶切 酶切 二者按照一定比例连接 转化入感受态细胞 加入噬菌体 收集噬菌体颗粒 噬菌体总抗体库 成为轻链库
表达载体
噬菌体抗体库的表达载体可分为λ 噬菌体 (phageλ ) 、单链丝状噬菌体(filamentous phage) 及噬菌粒(phagemid) 三种系统 噬菌粒是应用最多的表达载体,也是简便高 效模拟B 细胞产生抗体的原核表达系统。
噬菌体展示技术最关键的优势有三：
• 第一：淘选的高效率使得在极低的存在
水平下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能； • 第二：所挑选到的噬菌体可在微量存在的情况 下，通过感染细菌得到富集； • 第三：展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌体 内部的基因密码的连接，使得结合肽或蛋白质 的序列分析既快速又简便。
二、噬菌体抗体库的构建
组合抗体库的表达载体
A：重链载体 B：轻链载体 C：组合后的Fab段表达载体
抗体库技术较细胞融合杂交瘤技术 制备单抗有着明显的优越性：
1.抗体库技术省去了细胞融合的步骤,省时省力,避免了 因杂交瘤不稳定而需要反复亚克隆的繁琐程序。 2.扩大了筛选容量,用杂交瘤技术一般筛选能力在上千 个克隆以内,而抗体库可筛选106以上个克隆。 3.抗体库技术直接得到抗体的基因,既无杂交瘤丢失之 虞,又便于进一步构建各种基因工程抗体。 4.抗体库技术得到的抗体可以在大肠杆菌表达,可利用 原核表达系统的优势。 5.一些难于制备的抗体,如针对弱免疫原、毒性抗原的 抗体,以及人源抗体的制备可以得到解决。
（一）能模拟天然抗体库,不需要免疫人和动物 在噬菌体抗体库中, 含有人抗体各种基因信息 的全部mRNA ,为全套抗体基因的获得提供了 良好材料。 构建噬菌体抗体库时,抗体重链基因和轻链基因 在体外的重组,造成重、轻链间的配对具有很大 的随机性, 一般认为,107个特异性抗体分子就 能识别全部抗原决定簇的99 %。因此,构建一 个库容量为108的组合噬菌体抗体库,理论上认 为基本上包括了所有的抗体分子。
Random Library of DNA Sequences + Gene 3 Fusions Gene 3 or 8
Translated from DNA to Peptide in E. coli
Each Phage Displays One Peptide Sequence
非展示系统
展示系统
Antibody d
单克隆抗体的制备
基因工程抗体技术
20世纪80年代, DNA重组技术发展使制备 部分或全部人源化的基因工程抗体成为 可能，因此产生了基因工程抗体技术。
第一节 抗体库技术
进入20世纪90年代，组合化学技术与基因工程 抗体技术相互结合产生了抗体库技术。从此抗 体工程技术进入了一个新的发展阶段。 抗体库技术的产生基于两项关键技术的突破： ①PCR技术的出现和发展使人们能够使用一套 引物扩增出全套免疫球蛋白可变区基因;②利 用大肠杆菌成功表达出具有抗原结合功能的抗 体分子片段。
基因治疗 有学者将呼吸道内皮细胞暴 露于随机肽库中,筛选出与之相结合的高 亲和力的肽分子,分离相应基因,以重组腺 病毒作为载体将外源基因导入呼吸道内 皮细胞内,使外源基因得到高效表达,治疗 效果明显。
单克隆抗体 杂交瘤技术
宿主细胞: 筛选范围 : 时间: 操作: 免疫: 人源抗体: 费用: 生产量: 基因获取: 杂交瘤 ~103 几个月 繁杂 必须 高 有限 再克隆
（二）适应于大规模工业化生产
DNA 操作是在细菌中增殖,比杂交瘤技术 简单快速,制备单抗从取脾细胞到稳定的 克隆株至少需要数月,而噬菌体抗体库技 术最短只需几周的时间。
（三）可获得不同亲和力的抗体
在构建噬菌体抗体库时,抗体重链与轻链 基因的重组,就模拟了机体内抗体亲和力 的成熟过程。在噬菌体抗体库中,抗体重 链与轻链间的配对存在着很大的随意性, 这往往能改变B 细胞中原有的抗体重、 轻链间的配对方式,产生出不同亲和力的 抗体。
2个月之后，Science上发表了美国 Scripps研究所Huse等的完整的抗体库工 作,他们用逆转录-PCR技术从淋巴细胞克 隆出抗体轻链基因repertoire和重链Fd 段基因repertoire,将两者分别组建到噬 菌体表达载体中（如下图）。
Fab=VL+CL (L) VH+CH1(Fd) Fab片段结合抗原 Fc=CH2+CH3
Antibody IgG structure
VL
Fab
C VH CH1
L
(Fab’)2 Hinge
Fc
CH2 CH3
Membrane Extension
Fv
VH
VL C
L
CH1
CH2 C
H3
VL
VL
Fv
scFv
VH VH
Single Chain Fragment variable
免疫球蛋白基因可来源
Antibody Gene Isolation
Antibody binding specificities are defined by the variable regions of the heavy (VH) and light chains (VL). The DNA encoding the VH and VL genes are amplified by PCR from human B lymphocytes and are joined together by DNA encoding a flexible peptide linker. This combinatorial assembly creates a whole repertoire of antibody genes encoding many different antibody fragments in the form of single chain Fvs (scFvs).