尿液蛋白质组学

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正常人尿蛋白质组学研究

正常人尿蛋白质组学研究
1 2 方 法 .
各种信息 , 也可反映机体整体代谢状态 , 与血清 等其 他 体液样本相 比, 其获 取无创 、 收集便利 , 且蛋 白组成 并 相对 简单 、 易于分析 。蛋 白质组学 则是诠 释蛋 白所携
12 1 样 品 处 理 ..
收 集 晨 起 清 洁 中段 尿 10m , h 0 L 2
北 京 世 纪坛 医 院 、 京 大 学第 九 临 床 医学 院 、 都 医科 大 学 肿 瘤 学 系 、 北 首 临床 检 验 中心 ( 北京 10 3 ) 00 8
【 摘要 】 目的
异 研 究作 参 考 。方 法
初步建立正常人 尿液蛋白质双 向电泳图谱 , 分析正 常尿蛋 白基本组成 , 为疾病 下尿 液蛋 白差
的平 衡 液 。 ( ) D 3 S S—P G 垂 直 电 泳 : 平 衡 后 的 A E 将 IG胶 条 移 至 1% 的凝 胶 上 端 , 始 电压 为 10V, P 2 起 0 待 样 品 进 入 S S胶 浓 缩 成 一 条 线 ,. D 0 5h后 加 大 电 压 到 20V。直 至 溴 酚 蓝 到 达 凝 胶底 边 处 停 止 电泳 。 0
处理 的尿液蛋白质双 向电泳图谱 , 选择 重复性 好 、 独立
清 晰 的蛋 白质 位 点 进 行 质 谱 鉴 定 , 点 全 方 位 同 时 分 多
1 i , 200rm n离心 5mn 弃上清 , 5m n 1 0 i / i, 将沉 淀溶于
样 品 裂 解 液 ( LL U e 、 % C AP 、 5 mmo L 9 mo/ ra 4 H S 6 l f
内 4 1 0 mn ℃ 0r i 离心 1 i, 5 / 5m n 收集上清液 , 弃去细胞 碎片和核 , 上清液在血 细胞计数板观察无细胞或颗粒 ,

尿液蛋白质组学在肾脏病研究中的应用

尿液蛋白质组学在肾脏病研究中的应用
章 晓鹰 综述 何 立群 张悦 审校
【 要】 利 用 蛋 白质 组 学 研 究 技 术 检 测 肾病 患 者 尿 液 中 各 种 特 异 性 生 物 学 指 标 , 现 与 疾 病 相 摘 发 关 的 特 殊 蛋 白质 标 志 分 子 , 成 为 肾 脏 病 早 期 诊 断 、 理 生 理 研 究 的 前 沿性 手 段 。该 领 域 的 进 一 步 发 已 病 展 将 有 助 于 肾脏 病 的疗 效 观察 、 后 判 断 与 病 理 机 制 研 究 。现 将 国 外 尿 液 蛋 白 质 组 学 在 肾 脏 病 研 究 预 中 的应 用 作 一 介 绍 。
R NA 被 翻译成 具有 各种 功能 的蛋 白质 。这 些 功 能 蛋
征兆 。
人 的尿液 是一 种能轻 易 获 得 的生 物 学液 体 , 重 更 要 的是它 还包 含 有 多种 生 物 标 志 , 此 , 用 蛋 白质 因 利 组学 研究 技 术 来 检测 患 者 尿 液 中 的各 种 特 异 性 生 物 学 指标具 有较 强 的可行性 与可 操作 性 , 也 可 以 给 肾 这 脏疾 病 的早期 诊 断 、 鉴别 诊 断 以及 发 病 机理 的研 究 提 供 了更 多 的研 究依 据 。 利 用该工 具 , 国外研 究 者 尝试 建 立 了正 常 人 群 的 尿 液蛋 白质 双 向凝胶 电 泳 图谱 [ , 且 对 肾脏 病 患者 1并 ] 的肾脏 组织 、 血清 以及 尿液 的蛋 白质 表 达 差异 也 进行 了有关 分析 与 比对 , 目的 : 一 是 为 了发 现 有 助 于 其 第 肾脏疾 病早 期诊 断 的潜 在 性 生物 学 指标 , 以此 确 立 可 靠 有效 的非 侵 害性 的常规 学 检测 方 法 ; 二探 讨 这些 第 生物学 指 标 是 否 与 疾 病 进 展 、 效 之 间存 在 某 种 关 疗 联 ; 三通 过发 现特 异性 差 异 蛋 白 , 一 步探 讨 疾病 第 进 的生 理病 理机制 州J 。 尿 液蛋 白质组 学在 肾脏病 研 究 中的主要 应用 1 g 肾病 : 国有研 究报 道利用 蛋 白质 双 向凝 .IA 韩 胶 电泳技 术 , 已建 立 了 IA 肾病 尿 液 蛋 白质 组 学 图 g 谱, 研究 表 明 ,g 肾病 患 者 的尿 液 蛋 白质 图 谱 存 在 IA 着 极大 的相 似性 。与 正 常人 相 比 ,g 肾病 患 者 的尿 IA 液 中分别 有 8 2种 特异性 高 表 达 与 1 4种低 表 达 的蛋 3 白质 , 这 2 6种 差异表 达 蛋 白质 点 中 , 8 在 1 有 4种被 认 为与 IA 肾病 有 关 。用 基 质 辅 助 激 光 解 吸 电 离 飞行 g 时 间 质 谱 (mar -si e ae eop in inz— ti ass d lsrd sr t /o i x t o a

尿液蛋白质组学

尿液蛋白质组学

尿液蛋白质组学简介尿液蛋白质组学是一种研究尿液中蛋白质的组成、结构和功能的方法。

通过对尿液中蛋白质的分析,可以了解人体健康状况、疾病发展过程以及治疗效果等信息。

尿液作为一种非侵入性的样本来源,具有易采集、操作简便等优势,因此在临床诊断和生物医学研究中得到广泛应用。

尿液蛋白质组学的方法尿液样本采集与处理尿液样本采集通常使用无菌容器收集晨尿或随机尿样。

为了避免污染和降解,应及时将样本转移到低温条件下,并加入蛋白酶抑制剂等辅助剂以保护蛋白质完整性。

蛋白质提取与富集从尿液中提取和富集目标蛋白质是进行后续分析的关键步骤。

常用的方法包括有机溶剂沉淀法、超滤法、离心浓缩法和亲和层析法等。

这些方法可以去除干扰物质,提高目标蛋白质的检测灵敏度。

蛋白质分离与鉴定分离和鉴定是尿液蛋白质组学研究的核心环节。

常用的方法包括二维凝胶电泳(2-DE)、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)和免疫沉淀等。

2-DE可以将蛋白质按照等电点和分子量进行分离,LC-MS/MS则可以通过质谱技术鉴定蛋白质的氨基酸序列。

数据分析与生物信息学尿液蛋白质组学数据量庞大,需要进行复杂的数据分析和生物信息学处理。

主要包括差异表达蛋白质的筛选、功能注释、互作网络构建以及通路富集分析等。

这些方法可以帮助研究人员挖掘出与特定疾病相关的生物标志物。

尿液蛋白质组学在临床应用中的意义疾病诊断与预测尿液蛋白质组学可以通过分析尿液中的蛋白质组成,帮助医生进行疾病的早期诊断和预测。

例如,尿液中某些特定蛋白质的表达水平与肾脏疾病、泌尿系统肿瘤等密切相关。

通过检测这些蛋白质的异常表达,可以提前发现潜在的疾病风险。

疾病机制解析与药物靶点发现通过对尿液中蛋白质组成的深入研究,可以揭示特定疾病的发生机制以及相关信号通路。

这有助于寻找新的治疗靶点,并推动药物开发。

同时,尿液蛋白质组学还可以评估药物治疗效果,为个体化治疗提供指导。

健康管理与个体化医学随着健康管理和个体化医学理念的兴起,尿液蛋白质组学在健康监测和预防保健方面也有广泛应用。

蛋白质组学技术在疾病诊断上的意义

蛋白质组学技术在疾病诊断上的意义

蛋白质组学技术在疾病诊断上的意义蛋白质组学技术是研究生物体内所有蛋白质的研究领域。

通过分析和研究生物体内的蛋白质组成、结构和功能,蛋白质组学技术在疾病诊断上发挥着重要的作用。

本文将介绍蛋白质组学技术在疾病诊断上的意义和应用。

蛋白质是生物体内最为重要的功能性分子,参与了细胞结构、代谢调控、信号传导、免疫应答等生理过程。

随着科学技术的进步,蛋白质组学技术的发展为了解蛋白质的组成、结构和功能提供了有效的工具。

疾病的发生发展往往与蛋白质的异常变化或异常表达相关联。

因此,蛋白质组学技术在疾病的早期诊断、预测和治疗监测等方面具有重要的意义。

首先,蛋白质组学技术在疾病的早期诊断中起到了关键的作用。

许多疾病在早期并没有明显的症状,而蛋白质组学技术可以通过对血液、尿液、组织等样本中蛋白质组成的研究,发现与疾病相关的蛋白质标志物。

这些蛋白质标志物的检测可以帮助医生早期发现疾病,从而有助于进行早期干预和治疗。

例如,血浆中的PSA (前列腺特异性抗原)是前列腺癌的标志物,其浓度的变化可以提示前列腺癌的发生和发展,通过检测PSA可以帮助医生及早诊断前列腺癌。

其次,蛋白质组学技术在疾病的预测和评估中也发挥着重要的作用。

通过对蛋白质组的分析,可以发现某些蛋白质的异常表达与疾病的相关性。

这些蛋白质的异常表达可以作为预测疾病发生的潜在标志物。

例如,乳腺癌患者的血浆中常常出现人乳头瘤病毒(HER2)的高表达,这可以被用作乳腺癌发生的风险评估指标,通过蛋白质组学技术的应用,可以对乳腺癌的早期发生进行预测和评估。

此外,蛋白质组学技术还可以为疾病的治疗监测提供有力的支持。

在治疗过程中,蛋白质组学技术可以监测特定蛋白质的表达情况,以评估治疗的有效性和进展。

例如,在肿瘤治疗过程中,可以通过分析血浆中肿瘤相关蛋白质的表达水平,以评估治疗的效果和预测患者的预后。

蛋白质组学技术对于监测疾病的治疗反应及时调整治疗方案非常重要,从而提高患者的治疗效果和生存率。

尿蛋白检查的临床意义

尿蛋白检查的临床意义
尿蛋白检查的临床意义
汇报人:
202X-01-06
目录
尿蛋白检查的基本知识尿蛋白检查在肾脏疾病中的应用尿蛋白检查在其他疾病中的应用尿蛋白检查的临床意义及局限性
01
CHAPTER
尿蛋白检查的基本知识
01
02
尿蛋白是肾脏疾病的重要标志,也是肾脏损伤和肾功能减退的早期预警信号。
尿蛋白是指在尿液中出现蛋白质的现象,正常尿液中含有微量蛋白质,当尿中蛋白质含量超查在其他疾病中的应用
总结词
尿蛋白检查是糖尿病肾病的重要诊断依据,通过检测尿液中的蛋白质含量,有助于判断肾脏损伤程度。
详细描述
糖尿病肾病是糖尿病的常见并发症之一,长期高血糖状态导致肾脏微血管病变,进而引起肾功能损害。尿蛋白检查可以检测尿液中的白蛋白、转铁蛋白等蛋白质含量,当出现持续性蛋白尿时,提示肾脏受损。
通过定期检测尿液中的蛋白质含量,可以了解肾脏病变的进展情况,及时调整治疗方案,延缓疾病进展。
急性肾损伤是一种紧急情况,可能导致肾功能衰竭和死亡。尿蛋白检查可以预测急性肾损伤的发生风险和严重程度。
高浓度的尿蛋白是急性肾损伤的预测因子之一,通过检测尿液中的蛋白质含量,可以及早发现急性肾损伤,及时采取治疗措施,降低风险。
04
CHAPTER
尿蛋白检查的临床意义及局限性
尿蛋白检查是诊断肾脏疾病的重要手段之一,通过检测尿液中蛋白质的含量,可以判断肾脏功能是否受损。
诊断肾脏疾病
对于已经确诊肾脏疾病的患者,定期进行尿蛋白检查可以评估治疗效果,指导治疗方案调整。
评估治疗效果
尿蛋白水平的变化可以预测肾脏疾病的进展情况,有助于及时采取干预措施,延缓病情恶化。
正常尿蛋白值
正常尿液中蛋白质含量极微,通常不超过150mg/24h。

尿液蛋白质组 实验流程

尿液蛋白质组 实验流程

尿液蛋白质组实验流程一、实验准备样本收集选择清洁无菌的尿液收集容器,避免样本被污染。

采集早晨第一次尿液样本,因其含有的蛋白质浓度较高,能更好地代表体内状态。

标记样本,记录收集时间和其他相关信息。

样本处理收集的尿液样本应立即处理,以防蛋白质降解。

样本处理步骤如下:将尿液样本离心,去除沉淀物和细胞碎片。

将上清液转移至干净的离心管中,进行冷冻保存。

保存温度通常为80℃。

处理样本时,应穿戴适当的防护装备,并在无菌条件下操作。

二、蛋白质提取样本解冻取出冷冻的尿液样本,放置于4℃冰箱中解冻。

解冻过程应缓慢进行,以避免蛋白质变性。

蛋白质沉淀通过加入适当的沉淀剂(如三氯乙酸、冰醋酸等),使尿液中的蛋白质沉淀。

常见的沉淀方法包括:加入沉淀剂后,充分混匀样本,通常在室温下静置一定时间。

通过离心分离沉淀的蛋白质,弃去上清液。

用适当的缓冲液洗涤沉淀物,以去除多余的沉淀剂。

蛋白质溶解将洗涤后的沉淀物重新溶解在适当的缓冲液中,通常使用含有去垢剂(如尿素、硫脲)的溶液,以帮助溶解蛋白质。

三、蛋白质定量与分离蛋白质定量使用比色法(如BCA法、Bradford法)测定蛋白质浓度。

定量方法的选择应根据实验需求和样本特性来决定。

蛋白质分离常用的蛋白质分离方法包括:SDSPAGE:用于初步分离蛋白质,评估样本中蛋白质的分子量范围。

液相色谱:例如反相色谱(RPHPLC)和离子交换色谱(IEC),用于进一步分离和纯化蛋白质。

四、蛋白质鉴定与分析蛋白质酶解将分离纯化后的蛋白质进行酶解,常用的酶有胰蛋白酶。

酶解过程如下:根据蛋白质的性质选择合适的酶解条件。

在适宜的温度和pH条件下进行酶解,通常在37℃的水浴中进行。

酶解完成后,将消化液进行冷冻保存,或立即进行下一步的分析。

质谱分析采用质谱(MS)技术进行蛋白质鉴定和定量。

常见的质谱方法包括:MALDITOF MS:用于蛋白质的质谱分析,适用于大分子蛋白质。

LCMS/MS:液相色谱联用质谱技术,适用于复杂样本的详细分析。

尿液蛋白质组学

尿液蛋白质组学

尿液蛋白质组学
尿液蛋白质组学指以尿液为样本进行蛋白质组学研究,尿液是临床蛋白质组学研究的主要样本之一,可用于疾病的机制研究和生物标志物的发现。

百泰派克生物科技提供基于质谱的尿液蛋白质组学分析服务。

尿液蛋白质组学
尿液蛋白质组学指利用蛋白质组学技术在整体水平上系统性地分析尿液中的蛋白质组成及其生物学功能。

尿液易于通过无创程序大量重复收集,是临床蛋白质组学研究的一个较好的资源。

与在取样期间和取样后容易发生蛋白质水解降解的血浆或血清等其他生物体液相比,尿液的蛋白质组成相对稳定。

虽然正常尿液中的蛋白质总量远小于血浆,但是超过数千个蛋白质已经在尿液中被发现。

由于70%的尿蛋白来自肾脏和泌尿道,而30%的尿蛋白来自分泌到血液循环中的其他器官,因此尿液蛋白质可以被用于研究全身性和肾脏疾病的病理过程,以及发现新的生物标志物等。

随着技术的发展,尿液蛋白质组学已成为最为普遍的生物标志物发现研究领域之一。

尿液蛋白质组学。

尿液蛋白质组检测
尿液蛋白质组学分析主要包括鉴定不同疾病或治疗阶段的尿排泄蛋白和多肽,并确定其数量、功能和相互作用等。

常见的尿液蛋白质组检测方法包括二维凝胶电泳结
合质谱技术、液相色谱与质谱联用技术、毛细管电泳与质谱联用技术,以及蛋白质微阵列等。

其中,质谱技术是蛋白质组鉴定和定量分析的一个主要技术。

处理蛋白质组学样品

处理蛋白质组学样品

处理蛋白质组学样品蛋白质组学是研究细胞、组织或生物体内所有蛋白质的组成、结构和功能的一门学科。

在进行蛋白质组学研究时,处理样品是非常重要的一个环节。

下面介绍一些处理蛋白质组学样品的常见方法。

1. 样品收集在进行蛋白质组学研究前,首先需要收集样品。

样品可以是细胞、组织、血清、尿液等。

对不同的样品,收集方法也有所不同。

2. 常规处理对于细胞和组织样品,一般需要进行离心、洗涤、裂解等常规处理。

其中,离心可以将细胞和组织分离出来,洗涤可以去除细胞和组织表面的污染物,裂解则是将细胞和组织释放出蛋白质。

对于血清和尿液样品,一般需要进行离心、超滤等处理方法。

3. 蛋白质提取蛋白质提取是将样品中的蛋白质提取出来的过程。

常用的提取方法包括直接提取法、异相分配法、有机溶剂法等。

其中直接提取法是最常用的方法,其步骤包括样品加入裂解缓冲液、裂解、去除杂质、离心等。

4. 蛋白质定量在蛋白质组学研究中,需要对提取出的蛋白质进行定量。

常用的方法包括BCA法、Lowry法、Bradford法等。

5. 蛋白质分离蛋白质组学研究中,需要对蛋白质进行分离。

常用的方法包括SDS-PAGE、2D-PAGE等。

其中SDS-PAGE是最常用的蛋白质分离方法之一,可以将蛋白质按照分子量大小进行分离。

6. 质谱分析蛋白质组学研究中,需要对分离出的蛋白质进行质谱分析。

常用的方法包括MALDI-TOF、ESI-MS等。

其中MALDI-TOF是最常用的质谱分析方法之一,可以对蛋白质进行快速准确的分析。

综上所述,处理蛋白质组学样品是进行蛋白质组学研究的重要环节之一。

通过合理的处理方法,可以获得高质量的样品,从而保证后续研究的准确性和可靠性。

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常的 尿液蛋 白质组 学研 究发展 历程 , 生理 情 况下的 尿液 蛋 白质 组 学研 究进展 及 在 尿 液 中 已检 测 到疾 病 相 关 蛋 白标记 物 的研 究, 列举 了一 些收 集和整 合尿 液蛋 白质 组数据 的共 享平 台。 目前 , 正 常尿液 中的大 多数 蛋 白 种 类 已近被 发 现 , 建立基 本 的尿液蛋 白质 数据 库非 常 必要 的 ; 病理 状 态生物标 记物 的检 测 已进 入 临床 应 用阶
动 物 医学进 展 , 2 0 1 3 , 3 4 ( 2 ) : 1 0 4 — 1 0 8
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尿 液 蛋 白质 组 学
赵 国顺 , 赵 兴 绪 , 张 勇 , 武 小虎 , 刘姗 姗 。 , 陶金 忠
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O r b i t r a p ) 技 术从正 常人 的尿样 中鉴定 出 1 5 3 4种 蛋 白, 其 中大 多数 是 膜 蛋 白 。2 0 0 9年 , Al e x K 等 通
( 1 . 甘肃农业大学动物医学院 , 甘肃 兰州 7 3 0 0 7 0 ; 2 . 甘肃 农 业 大学 生命 科学 技 术 学 院 , 甘肃兰州 7 3 0 0 7 0
3 . 宁夏 大学 农 学 院 , 宁夏银川 7 5 0 0 2 1 )
摘 要 : 随着新技 术的 出现 与 多种技 术之 间的交 叉融合 , 尿液蛋 白质组 学研 究发展 迅速 。论 文概述 了正
等L 5 应用 一 维 凝 胶 电 泳 与 液 相 色 谱 配 合 线 性 离 子 阱一 傅 立 叶变换 离 子 回旋 共 振 质 谱 ( 1 i n e a r i o n t r a p —
F o u r i e r t r a n s f o r m ma s s s p e c t r o me t e r , L TQ — F T) 技
1 正 常 尿 液 蛋 白质 组 学 研 究 的 发 展 历 程 与 术和 L T Q— Or b i t r a p电场轨 道 阱 回旋 共 振 组合 质 谱
现 状
1 9 9 6年 , Ma r s h a l l T 等口 ] 首 次 运 用 双 向 电 泳 ( t wo — d i me n s i o n a l e l e c t r o p h o r e s i s , 2 D E) 技术 分离 尿 液 中蛋 白质 , 建立 了正 常人 尿液 蛋 白质 组 2 D E 图谱 并提 出了“ 尿 蛋 白质组学 ” ( u r i n a r y p r o t e o mi c s ) 的概 念, 即利用 蛋 白质组 学 技术高通 量 、 系统性 地 分 析和 鉴定 尿 液 中的 所 有 蛋 白质 分 子 并 研 究 其 生 物 学 功
1 9 2 7 年, 人们 就利 用从 孕 妇 尿液 中发 现 的 B人 绒 毛
膜促 性腺 激 素 ( h u ma n c h o r i o n i c g o n a d o t r o p i n ,
h C G) 发 明 了早孕测 试 纸 , 这 是 人类 对尿 液 蛋 白质 的 早期 利用 。随 着蛋 白质 组 学 研 究 的 发 展 , 尿液蛋 白 质组 学也 得到 了迅 速 的发 展 , 这 让 尿 液 蛋 白质 的检
亲和扣除 色谱 技术 ( i mmu n o a f f i n i t y s u b t r a c t i o n
c h r o ma t o g r a p h y ) 去 除尿液 中高 丰 度 蛋 白 , 用 双 向 电 泳 分离 出约 1 4 0 0个 蛋 白点 , 用 质 谱 技 术 检 测 其 中
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测, 尤其 是尿 液 中生 物 标 记 物 的检 测 成 为尿 液 蛋 白
质组 的研 究热 点 。一 般 来 说 , 生物 标 记 物 是 指 可 以 在活 体 中检测 到 的具 有特 征性 的 可 以指示 生 理功 能 或结 构 改变 的生物 分子 , 蛋 白质也 是其 中 的一种 。
过超 速离 心 、 凝胶电泳、 离 子 交换 、 反 相 色 谱 等 方 法
分级分 离 与提取 尿液 中的蛋 白质 , 用 I . TQ - Or b i t r a p
质谱 与液 相 色谱一 串联 质谱 ( 1 i q u i d c h r o ma t o g r a p h y —
段, 然 而一种 生物标记 分 子往往 不 能特异 性 的标记 一种 疾病 或一 个生理 变化 , 可 能需要 多个相 关学科 的整 合
协调 。尿 液蛋 白质 组学研 究还 面 临着许 多困难 , 仍 有许 多工作 需要 去做 。
关键 词 : 尿液蛋 白质组 学 ; 生理 ; 病 理
中图分类号 : Q5 1 文献标识码 : A 文章 编 号 : 1 0 0 7 ~ 5 0 3 8 ( 2 0 1 3 ) 0 2 — 0 1 0 4 — 0 5

由于 尿液具 有 收集简 单 、 非 侵 入性 等 特点 , 早 在
中的 6 7种蛋 白质及 其 亚 型 。但 由于 尿 液含 有 大量 的高丰 度蛋 白, 这 在 很 大 程 度 上 影 响 了尿液 蛋 白 质 组 的进 一 步 研究 。2 0 0 4年 , P i e p e r R等 采 用 免疫
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