正常人尿蛋白质组学研究
正常人尿蛋白质组学研究
各种信息 ， 也可反映机体整体代谢状态 ， 与血清 等其 他 体液样本相 比， 其获 取无创 、 收集便利 ， 且蛋 白组成 并 相对 简单 、 易于分析 。蛋 白质组学 则是诠 释蛋 白所携
１２ １ 样 品 处 理 ．．
收 集 晨 起 清 洁 中段 尿 １０ｍ ， ｈ ０ Ｌ ２
北 京 世 纪坛 医 院 、 京 大 学第 九 临 床 医学 院 、 都 医科 大 学 肿 瘤 学 系 、 北 首 临床 检 验 中心 （ 北京 １０ ３ ） ００ ８
【 摘要 】 目的
异 研 究作 参 考 。方 法
初步建立正常人 尿液蛋白质双 向电泳图谱 ， 分析正 常尿蛋 白基本组成 ， 为疾病 下尿 液蛋 白差
的平 衡 液 。 （ ） Ｄ ３ Ｓ Ｓ—Ｐ Ｇ 垂 直 电 泳 ： 平 衡 后 的 Ａ Ｅ 将 ＩＧ胶 条 移 至 １％ 的凝 胶 上 端 ， 始 电压 为 １０Ｖ， Ｐ ２ 起 ０ 待 样 品 进 入 Ｓ Ｓ胶 浓 缩 成 一 条 线 ，． Ｄ ０ ５ｈ后 加 大 电 压 到 ２０Ｖ。直 至 溴 酚 蓝 到 达 凝 胶底 边 处 停 止 电泳 。 ０
处理 的尿液蛋白质双 向电泳图谱 ， 选择 重复性 好 、 独立
清 晰 的蛋 白质 位 点 进 行 质 谱 鉴 定 ， 点 全 方 位 同 时 分 多
１ ｉ ， ２００ｒｍ ｎ离心 ５ｍｎ 弃上清 ， ５ｍ ｎ １ ０ ｉ ／ ｉ， 将沉 淀溶于
样 品 裂 解 液 （ ＬＬ Ｕ ｅ 、 ％ Ｃ ＡＰ 、 ５ ｍｍｏ Ｌ ９ ｍｏ／ ｒａ ４ Ｈ Ｓ ６ ｌ ｆ
内 ４ １ ０ ｍｎ ℃ ０ｒ ｉ 离心 １ ｉ， ５ ／ ５ｍ ｎ 收集上清液 ， 弃去细胞 碎片和核 ， 上清液在血 细胞计数板观察无细胞或颗粒 ，
尿液蛋白质组学在肾脏病研究中的应用
【 要】 利 用 蛋 白质 组 学 研 究 技 术 检 测 肾病 患 者 尿 液 中 各 种 特 异 性 生 物 学 指 标 ， 现 与 疾 病 相 摘 发 关 的 特 殊 蛋 白质 标 志 分 子 ， 成 为 肾 脏 病 早 期 诊 断 、 理 生 理 研 究 的 前 沿性 手 段 。该 领 域 的 进 一 步 发 已 病 展 将 有 助 于 肾脏 病 的疗 效 观察 、 后 判 断 与 病 理 机 制 研 究 。现 将 国 外 尿 液 蛋 白 质 组 学 在 肾 脏 病 研 究 预 中 的应 用 作 一 介 绍 。
Ｒ ＮＡ 被 翻译成 具有 各种 功能 的蛋 白质 。这 些 功 能 蛋
征兆 。
人 的尿液 是一 种能轻 易 获 得 的生 物 学液 体 ， 重 更 要 的是它 还包 含 有 多种 生 物 标 志 ， 此 ， 用 蛋 白质 因 利 组学 研究 技 术 来 检测 患 者 尿 液 中 的各 种 特 异 性 生 物 学 指标具 有较 强 的可行性 与可 操作 性 ， 也 可 以 给 肾 这 脏疾 病 的早期 诊 断 、 鉴别 诊 断 以及 发 病 机理 的研 究 提 供 了更 多 的研 究依 据 。 利 用该工 具 ， 国外研 究 者 尝试 建 立 了正 常 人 群 的 尿 液蛋 白质 双 向凝胶 电 泳 图谱 ［ ， 且 对 肾脏 病 患者 １并 ］ 的肾脏 组织 、 血清 以及 尿液 的蛋 白质 表 达 差异 也 进行 了有关 分析 与 比对 ， 目的 ： 一 是 为 了发 现 有 助 于 其 第 肾脏疾 病早 期诊 断 的潜 在 性 生物 学 指标 ， 以此 确 立 可 靠 有效 的非 侵 害性 的常规 学 检测 方 法 ； 二探 讨 这些 第 生物学 指 标 是 否 与 疾 病 进 展 、 效 之 间存 在 某 种 关 疗 联 ； 三通 过发 现特 异性 差 异 蛋 白 ， 一 步探 讨 疾病 第 进 的生 理病 理机制 州Ｊ 。 尿 液蛋 白质组 学在 肾脏病 研 究 中的主要 应用 １ ｇ 肾病 ： 国有研 究报 道利用 蛋 白质 双 向凝 ．ＩＡ 韩 胶 电泳技 术 ， 已建 立 了 ＩＡ 肾病 尿 液 蛋 白质 组 学 图 ｇ 谱， 研究 表 明 ，ｇ 肾病 患 者 的尿 液 蛋 白质 图 谱 存 在 ＩＡ 着 极大 的相 似性 。与 正 常人 相 比 ，ｇ 肾病 患 者 的尿 ＩＡ 液 中分别 有 ８ ２种 特异性 高 表 达 与 １ ４种低 表 达 的蛋 ３ 白质 ， 这 ２ ６种 差异表 达 蛋 白质 点 中 ， ８ 在 １ 有 ４种被 认 为与 ＩＡ 肾病 有 关 。用 基 质 辅 助 激 光 解 吸 电 离 飞行 ｇ 时 间 质 谱 （ｍａｒ －ｓｉ ｅ ａｅ ｅｏｐ ｉｎ ｉｎｚ— ｔｉ ａｓｓ ｄ ｌｓｒｄ ｓｒ ｔ ／ｏ ｉ ｘ ｔ ｏ ａ
尿液蛋白质组学
尿液蛋白质组学简介尿液蛋白质组学是一种研究尿液中蛋白质的组成、结构和功能的方法。
通过对尿液中蛋白质的分析，可以了解人体健康状况、疾病发展过程以及治疗效果等信息。
尿液作为一种非侵入性的样本来源，具有易采集、操作简便等优势，因此在临床诊断和生物医学研究中得到广泛应用。
尿液蛋白质组学的方法尿液样本采集与处理尿液样本采集通常使用无菌容器收集晨尿或随机尿样。
为了避免污染和降解，应及时将样本转移到低温条件下，并加入蛋白酶抑制剂等辅助剂以保护蛋白质完整性。
蛋白质提取与富集从尿液中提取和富集目标蛋白质是进行后续分析的关键步骤。
常用的方法包括有机溶剂沉淀法、超滤法、离心浓缩法和亲和层析法等。
这些方法可以去除干扰物质，提高目标蛋白质的检测灵敏度。
蛋白质分离与鉴定分离和鉴定是尿液蛋白质组学研究的核心环节。
常用的方法包括二维凝胶电泳（2-DE）、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）和免疫沉淀等。
2-DE可以将蛋白质按照等电点和分子量进行分离，LC-MS/MS则可以通过质谱技术鉴定蛋白质的氨基酸序列。
数据分析与生物信息学尿液蛋白质组学数据量庞大，需要进行复杂的数据分析和生物信息学处理。
主要包括差异表达蛋白质的筛选、功能注释、互作网络构建以及通路富集分析等。
这些方法可以帮助研究人员挖掘出与特定疾病相关的生物标志物。
尿液蛋白质组学在临床应用中的意义疾病诊断与预测尿液蛋白质组学可以通过分析尿液中的蛋白质组成，帮助医生进行疾病的早期诊断和预测。
例如，尿液中某些特定蛋白质的表达水平与肾脏疾病、泌尿系统肿瘤等密切相关。
通过检测这些蛋白质的异常表达，可以提前发现潜在的疾病风险。
疾病机制解析与药物靶点发现通过对尿液中蛋白质组成的深入研究，可以揭示特定疾病的发生机制以及相关信号通路。
这有助于寻找新的治疗靶点，并推动药物开发。
同时，尿液蛋白质组学还可以评估药物治疗效果，为个体化治疗提供指导。
健康管理与个体化医学随着健康管理和个体化医学理念的兴起，尿液蛋白质组学在健康监测和预防保健方面也有广泛应用。
蛋白质组学在疾病研究中的应用
蛋白质组学在疾病研究中的应用
随着科学技术的不断进步，蛋白质组学作为生物医学研究中的重要分支，在疾病研究领域发挥着越来越重要的作用。
蛋白质组学是研究生物体内所有蛋白质的总体结构、功能和相互作用的科学，通过对蛋白质的组成、表达、修饰等方面的研究，可以深入了解疾病的发病机制、诊断方法及治疗策略。
在疾病研究中，蛋白质组学可以帮助科学家们快速准确地发现潜在的生物标志物，这对于疾病的早期诊断和治疗至关重要。
通过比较健康人群和患病人群的蛋白质组学数据，可以发现特定蛋白质在某种疾病中的表达水平是否异常，从而为疾病的早期诊断提供重要依据。
例如，乳腺癌的早期诊断可通过检测血清中特定蛋白质的表达水平来实现，这为患者尽早接受治疗提供了可能。
蛋白质组学还可以帮助科研人员深入了解疾病的发病机制。
通过研究蛋白质在疾病发生发展过程中的变化，可以揭示疾病发生的生物学基础，为疾病的治疗提供新的思路和方法。
例如，糖尿病的发病机制与蛋白质的糖基化修饰密切相关，通过研究这些修饰对蛋白质功能的影响，可以为糖尿病的治疗提供新的靶点。
蛋白质组学在药物研发领域也发挥着重要作用。
通过研究药物与蛋白质相互作用的机制，可以为新药的开发提供重要信息。
例如，通过蛋白质组学技术可以筛选出与某种药物相互作用的蛋白质，从而
加快新药的研发进程。
总的来说，蛋白质组学在疾病研究中的应用，不仅可以帮助科学家们发现新的生物标志物，提高疾病的诊断准确性，还可以深入了解疾病的发病机制，为疾病的治疗提供新的思路和方法。
随着蛋白质组学技术的不断发展，相信在未来的疾病研究中，蛋白质组学将发挥越来越重要的作用，为人类健康做出更大的贡献。
人尿液蛋白质N-糖肽富集和质谱鉴定的新方法研究
人尿液蛋白质N-糖肽富集和质谱鉴定的新方法研究HUANG Jun-jie;JIAO Feng-long;WANG He-ping;ZHU Li-hua;QIN Wei-jie;QIAN Xiao-hong【摘要】蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生理过程,是研究多种重大疾病诊断标志物的热点.与其他体液活检样本相比,尿液可以无创、大量获取,并且不受稳态调节的影响,能够在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态.因此,人尿液蛋白质N-糖基化的规模化研究对疾病诊断标记物的筛选和治疗靶点的发现均具有重大意义.由于人尿液中的N-糖蛋白含量有限,修饰比例较低,在质谱分析时N-糖肽易被高丰度的非糖肽所掩盖,难以鉴定.因此,发展高效、高选择性的富集材料是实现尿蛋白N-糖基化深度覆盖的必要前提.本研究利用巯基-烯点击化学反应,使用[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基]二甲基(3-硫代丙基)氢氧化铵内盐(SPP)制备了两性离子修饰亲水硅胶材料(SPP-SiO2).该材料成功地应用于标准糖蛋白和健康人尿蛋白N-糖肽的富集和质谱检测,共鉴定了包含1065个位点的633个尿液糖蛋白,比文献报道的鉴定规模提高了12.2％,证明了该亲水材料在尿液糖蛋白质组研究中的应用潜力.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2018(039)002【总页数】9页(P149-157)【关键词】巯基-烯点击化学法;尿蛋白;N-糖肽;富集;质谱鉴定【作者】HUANG Jun-jie;JIAO Feng-long;WANG He-ping;ZHU Li-hua;QIN Wei-jie;QIAN Xiao-hong【作者单位】;;;;;【正文语种】中文【中图分类】O657.63N-糖基化修饰作为一种重要的蛋白质翻译后修饰，在细胞粘附、信号转导、细胞凋亡、免疫应答等生物学过程及生理机能的调节中发挥着关键的作用[1-4]。
异常的糖基化修饰与人类多种重大疾病，如肿瘤、炎症以及神经退行性疾病等密切相关[5]。
尿蛋白检查的临床意义
汇报人：
202X-01-06
目录
尿蛋白检查的基本知识尿蛋白检查在肾脏疾病中的应用尿蛋白检查在其他疾病中的应用尿蛋白检查的临床意义及局限性
01
CHAPTER
尿蛋白检查的基本知识
01
02
尿蛋白是肾脏疾病的重要标志，也是肾脏损伤和肾功能减退的早期预警信号。
尿蛋白是指在尿液中出现蛋白质的现象，正常尿液中含有微量蛋白质，当尿中蛋白质含量超查在其他疾病中的应用
总结词
尿蛋白检查是糖尿病肾病的重要诊断依据，通过检测尿液中的蛋白质含量，有助于判断肾脏损伤程度。
详细描述
糖尿病肾病是糖尿病的常见并发症之一，长期高血糖状态导致肾脏微血管病变，进而引起肾功能损害。尿蛋白检查可以检测尿液中的白蛋白、转铁蛋白等蛋白质含量，当出现持续性蛋白尿时，提示肾脏受损。
通过定期检测尿液中的蛋白质含量，可以了解肾脏病变的进展情况，及时调整治疗方案，延缓疾病进展。
急性肾损伤是一种紧急情况，可能导致肾功能衰竭和死亡。尿蛋白检查可以预测急性肾损伤的发生风险和严重程度。
高浓度的尿蛋白是急性肾损伤的预测因子之一，通过检测尿液中的蛋白质含量，可以及早发现急性肾损伤，及时采取治疗措施，降低风险。
04
CHAPTER
尿蛋白检查的临床意义及局限性
尿蛋白检查是诊断肾脏疾病的重要手段之一，通过检测尿液中蛋白质的含量，可以判断肾脏功能是否受损。
诊断肾脏疾病
对于已经确诊肾脏疾病的患者，定期进行尿蛋白检查可以评估治疗效果，指导治疗方案调整。
评估治疗效果
尿蛋白水平的变化可以预测肾脏疾病的进展情况，有助于及时采取干预措施，延缓病情恶化。
正常尿蛋白值
正常尿液中蛋白质含量极微，通常不超过150mg/24h。
尿液蛋白质组 实验流程
尿液蛋白质组实验流程一、实验准备样本收集选择清洁无菌的尿液收集容器，避免样本被污染。
采集早晨第一次尿液样本，因其含有的蛋白质浓度较高，能更好地代表体内状态。
标记样本，记录收集时间和其他相关信息。
样本处理收集的尿液样本应立即处理，以防蛋白质降解。
样本处理步骤如下：将尿液样本离心，去除沉淀物和细胞碎片。
将上清液转移至干净的离心管中，进行冷冻保存。
保存温度通常为80℃。
处理样本时，应穿戴适当的防护装备，并在无菌条件下操作。
二、蛋白质提取样本解冻取出冷冻的尿液样本，放置于4℃冰箱中解冻。
解冻过程应缓慢进行，以避免蛋白质变性。
蛋白质沉淀通过加入适当的沉淀剂（如三氯乙酸、冰醋酸等），使尿液中的蛋白质沉淀。
常见的沉淀方法包括：加入沉淀剂后，充分混匀样本，通常在室温下静置一定时间。
通过离心分离沉淀的蛋白质，弃去上清液。
用适当的缓冲液洗涤沉淀物，以去除多余的沉淀剂。
蛋白质溶解将洗涤后的沉淀物重新溶解在适当的缓冲液中，通常使用含有去垢剂（如尿素、硫脲）的溶液，以帮助溶解蛋白质。
三、蛋白质定量与分离蛋白质定量使用比色法（如BCA法、Bradford法）测定蛋白质浓度。
定量方法的选择应根据实验需求和样本特性来决定。
蛋白质分离常用的蛋白质分离方法包括：SDSPAGE：用于初步分离蛋白质，评估样本中蛋白质的分子量范围。
液相色谱：例如反相色谱（RPHPLC）和离子交换色谱（IEC），用于进一步分离和纯化蛋白质。
四、蛋白质鉴定与分析蛋白质酶解将分离纯化后的蛋白质进行酶解，常用的酶有胰蛋白酶。
酶解过程如下：根据蛋白质的性质选择合适的酶解条件。
在适宜的温度和pH条件下进行酶解，通常在37℃的水浴中进行。
酶解完成后，将消化液进行冷冻保存，或立即进行下一步的分析。
质谱分析采用质谱（MS）技术进行蛋白质鉴定和定量。
常见的质谱方法包括：MALDITOF MS：用于蛋白质的质谱分析，适用于大分子蛋白质。
LCMS/MS：液相色谱联用质谱技术，适用于复杂样本的详细分析。
尿液蛋白质组学
尿液蛋白质组学
尿液蛋白质组学指以尿液为样本进行蛋白质组学研究，尿液是临床蛋白质组学研究的主要样本之一，可用于疾病的机制研究和生物标志物的发现。
百泰派克生物科技提供基于质谱的尿液蛋白质组学分析服务。
尿液蛋白质组学
尿液蛋白质组学指利用蛋白质组学技术在整体水平上系统性地分析尿液中的蛋白质组成及其生物学功能。
尿液易于通过无创程序大量重复收集，是临床蛋白质组学研究的一个较好的资源。
与在取样期间和取样后容易发生蛋白质水解降解的血浆或血清等其他生物体液相比，尿液的蛋白质组成相对稳定。
虽然正常尿液中的蛋白质总量远小于血浆，但是超过数千个蛋白质已经在尿液中被发现。
由于70％的尿蛋白来自肾脏和泌尿道，而30％的尿蛋白来自分泌到血液循环中的其他器官，因此尿液蛋白质可以被用于研究全身性和肾脏疾病的病理过程，以及发现新的生物标志物等。
随着技术的发展，尿液蛋白质组学已成为最为普遍的生物标志物发现研究领域之一。
尿液蛋白质组学。
尿液蛋白质组检测
尿液蛋白质组学分析主要包括鉴定不同疾病或治疗阶段的尿排泄蛋白和多肽，并确定其数量、功能和相互作用等。
常见的尿液蛋白质组检测方法包括二维凝胶电泳结
合质谱技术、液相色谱与质谱联用技术、毛细管电泳与质谱联用技术，以及蛋白质微阵列等。
其中，质谱技术是蛋白质组鉴定和定量分析的一个主要技术。
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２．２质谱分析从左到右ｐＨ值为３—１０，从上到下 分子量递减。选取图中表达点分子量约１８—９４ ｋＤ， ｐＨ值在３一１０范围内重复性好、染色清晰、界限明显 的３０个蛋白位点进行质谱分析，位点位置见图２。
圈ｌ正常人尿蛋白电泳图谱
圈２正常人尿蛋白龟泳 图谱取点后
２．３正常３０个尿液蛋白匹配结果将每个切取蛋白 点做质谱，质谱结果进行生物信息学分析，每个点取最 高分值对应的蛋白质作为匹配结果，共有２８个点获得 有效匹配，其中编号１８与２０的两个点未得到有效匹 配。见表１。
·３００·
广东医学２０１０年２月第３ｌ卷第３期
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｆｅｂ．２０１０，Ｖ０１．３１．Ｎｏ．３
正常人尿蛋白质组学研究
雷婷，赵旭宏，张曼△ 北京世纪坛医院、北京大学第九临床医学院、首都医科大学肿瘤学系、临床检验中心（北京１０００３８）
【摘要ｌ 目的初步建立正常人尿液蛋白质双向电泳图谱，分析正常尿蛋白基本组成，为疾病下尿液蛋白差 异研究作参考。方法用丙酮沉淀法对４例正常人尿液中蛋白质进行浓缩，用固相ｐＨ梯度双向凝胶电泳技术分 离蛋白样品。凝胶考马斯亮蓝染色，ＧＳ一８００ Ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ凝胶成像系统获取图像，ＰＤＱｕｅｓｔ２Ｄ分析软件 对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性的系统分析，寻找表达蛋白。应用基质辅助激光解析电离 飞行时间质谱（ＭＡＵＤＩ—ＴＯＦ）得到相应的肽指纹图谱，搜索相关数据库对蛋白质点进行鉴定。结果对染色明 显且独立的３０个蛋白斑点进行鉴定，并对结果进行数据库检索，共有２８个点获得有效匹配，包括各种血清白蛋 白、免疫分子以及补体分子、载脂与转运蛋白、肤酶Ｓｌ家族、细胞结构蛋白、蛋白酶抑制因子等，鉴定出的蛋白质 大部分ＰＩ在４—７之间。结论应用蛋白质组学方法分析正常人尿液蛋白质组成成分可行，初步建立了正常人尿 液２８个蛋白质图谱，为分析疾病状态下尿液蛋白质成分的改变提供了基础资料。
５．９３ ５．５２
一 甲状腺素结合蛋白
５．６１ ５．５６
甘露聚糖结合凝集索丝氨酸蛋白酶２ 载脂蛋白Ａｌ
６．３３
一
５．９３
一
６．８１
血清转铁蛋白；转铁蛋白；Ｂ—ｌ铁结合球蛋白
６．４３ ６·２ｌ
ｔｔＭｔｔ黼１２０ 间一ｎ一胰蛋白酶抑制剂重链１１４蛋白
问一ａ一胰蛋白酶抑制剂重链Ｈ４；血浆激肽释
¨－芝二：瓣≯笔嚣：㈨黼解
日立７０８０２ＩＳＥ生化分析仪购自日本；ＰＲＯＴＥＡＮ ＩＥＦ Ｃｅｌｌ等电聚焦仪购自于ＢＩＯＲＡＤ公司；ＰＲＯＴＥＡＮ Ⅱ】【ｉ ２一Ｄ Ｃｅｌｌ垂直电泳槽，ＧＳ一８００ Ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ Ｄｅｎｓｉ．
·国家高技术研究发展计划（编号：２００６ＡＡ０２０９），北京市优秀人 才培养Ｄ类专项基金资助项目（编号：２００４／Ｄ０３０３１５４）
△通信作者ｏ Ｅ—ｍａｉｌ：ｍｚｈａａ９６２＠ｙａｈｏｏ．ｃ响．ｃｎ
ｔｏｍｅｔｅｒ凝胶成像系统获取图像，用ＰＤＱｕｅｓｔ２Ｄ分析软 件对图像进行凝胶图像分析。 １．２ 方法
１．２．１样品处理 收集晨起清洁中段尿１００ ｍＬ，２ ｈ 内４℃ｌ ５００ ｒ／ｒｅ．ｉｎ离心１５ ｍｉｎ，收集上清液，弃去细胞 碎片和核，上清液在血细胞计数板观察无细胞或颗粒， 取上清液与一２０℃预冷纯丙酮１：１混匀，４℃静置 １５ ｍｉｎ，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ，弃上清，将沉淀溶于 样品裂解液（９ ｍｏｌ／Ｌ Ｕｒｅａ、４％ＣＨＡＰＳ、６５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＴｒ、０．５％两性电解质）中，超声ｌＯ Ｈｚ、１０ ｓ冷却５０ ８ 重复６次，４℃１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取上清，过除 盐柱除盐，蛋白质千粉溶于裂解液中，日立７０８０一ＩＳＥ 生化分析仪检测总蛋白浓度。分装，一８０℃冻存备用。 １．２．２ 双向凝胶电泳 （１）固相等电聚焦：参照ＢＩＯ —ＲＡＤ公司操作指南进行，电泳上样总体积约４５０ ｔｒＬ （约ｌ ５００ ＩＬｇ总蛋白），一向条件为：５０ Ｖ低压水化 １６ ｈ，然后进行等电聚焦，总电压时间为６０ ０００ Ｖｉａ。 （２）平衡：等电聚焦后，迅速取出ＩＰＧ胶条分别于第一 步和第二步平衡液中振摇１５ ｍｉｎ，用滤纸条吸取多余 的平衡液。（３）ＳＤＳ—ＰＡＧＥ垂直电泳：将平衡后的 ＩＰＧ胶条移至１２％的凝胶上端，起始电压为１００ Ｖ，待 样品进入ＳＤＳ胶浓缩成一条线，０．５ ｈ后加大电压到 ２００ Ｖ。直至溴酚蓝到达凝胶底边处停止电泳。 １．２．３考马斯亮蓝染色凝胶固定液（４０％乙醇，１０％ 乙酸）固定３０ ｍｉｎ后，双蒸水冲洗５ ｍｉｎ ３次，考马斯亮 蓝Ｇ２５０染液（０．１２％考马斯亮蓝Ｇ２５０，１０％硫酸铵， １０％磷酸，２０％甲醇）染色过夜，脱色液（４０％甲醇，１０％ 乙酸，双蒸水至１００％）进行褪色直至背景清晰。 １．２．４ 图像分析利用ＧＳ一８００ Ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ Ｄｅｎｓｉｔｏｍ－
本实验室在蛋白质组学方面有着独特优势，靳胜 等№１利用２Ｄ—ＰＡＧＥ结合ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ技术研究分 析膀胱癌组织与正常组织之间的固定差异表达蛋白 质，赵旭宏等一。对前列腺增生的尿液蛋白质学进行了 研究，建立了成熟而稳定的技术平台，在此平台的基础 上本实验选择了正常人的尿液为研究对象，初步建立 正常人尿蛋白图谱，多点全方位同时分析正常尿蛋白 基本组成，为疾病的比较做正常参照体系，利于与不同 疾病状态下的尿蛋白图谱进行鉴定、分析。
带信息的最有效方法，为建立适合常规检验人群尿样
处理的尿液蛋白质双向电泳图谱，选择重复性好、独立
清晰的蛋白质位点进行质谱鉴定，多点全方位同时分
析正常尿蛋白基本组成，为疾病的比较做正常参照体
系，我们挑选了一定蛋白含量、一定清晰度、适合目前
检验方法最小检测限之上的３０个点进行分析，为分析
泌尿系统疾病的尿液差异性改变提供对比资料。
甲状腺紊结合蛋白 甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶２亚型
１５ ８７７ ２０ ６１５．９
载脂蛋白Ａｌ 尚有争议的不具白蛋白特征的假定白蛋白 白蛋白２３ ｋＤａ片段 血清转铁蛋白
３０ ７５８ ７１ ６５７ ２２ ８４４ ７６ ９９９
间一ａ一胰蛋白酶抑制剂重链１－１４（ＩＴＩＨ４）
１０３ ８１６．２２２问一ａ一胰蛋白酶抑制剂重链１－１４亚型２
２２ ８４４ ３２ ０９７ ６９ ３２１．５ ６９ ３２１．５
白蛋白４５ １３０．４
ｅＤＮＡ ＦＬｌ５０８３０，ＡＭＢＰ高度相似蛋白
５９ ５３５．Ｉ
血清白蛋白亚型１
６９ ３２１．５
人补体片段４ｂ
１９２ ６２７．５
ｅＤＮＡ ＦＬＪ５０８３０，高度类似白蛋白 自蛋白２３ ｋＤａ片段
５９ ５３５．１ ２２ ８４４
·
１材料与方法
１．１材料 １．１．１标本来源 收集我院２００９年３月体检中心４ 例正常人的清洁中段尿，男女各２例，平均年龄为３５．５ 岁，均为体检健康的志愿者。 １．１．２ 实验试剂 二硫苏糖醇（ＤＴＴ）、碘乙酰胺 （ＩＸａ）和考马斯亮蓝购自于美国Ｓｉｇｍａ公司；固相ＰＨ 梯度干胶条（ＩＰＧ，Ｓｔｒｉｐ３—１０，１７ ｃｍ）、两性电解质 （Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ，ＰＨ３—１０）、覆盖液、低分子量标准蛋白 质、尿素、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、ＳＤＳ、Ｔｒｉｓ —ＨＣＬ和ＣＨＡＰＳ购自于美国ＢＩＯ—ＢＡＤ公司；其余试 剂均为国产分析纯。
裹１正常３０个尿液蛋白匹配结果
编号
Ｏｌ ０２ ０３ ０４ ０５
嘶 ０７ ０８ ∞ ｌＯ
１１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １９ ２ｌ
搜索匹配结果 ｅＤＮＡ ＦＬＪ５１４４５，ＡＭＢＰ高度相似蛋白 ＡＭＢＰ蛋白（人口ｌ微球蛋白／ｂｉｋｕｎｉｎ前体）
分子鼍 ２９ ７５９．４ ３８ ９７４
白蛋白２３ ｋＤａ片段 ＩＧＫＣ蛋白（免疫球蛋白Ｋ恒定区） 血清白蛋白噩型ｌ 血清白蛋白亚型ｌ
２４
ＩＧＨＶ４—３１抗ＲｈＤ单克隆Ｔ１２５ １重链前体
５２ ３２９．３
２５
肌动蛋白Ａ２（主动脉平滑肌）４１ ９８１．８
２６
血清转铁蛋白
７６ ９９９．６
２７
ｅＤＮＡ ＦＵ５０８３０，高度类似血清白蛋白
５９ ５３５．１
２８
ＳＥＲＰＩＮＡＩ ＰＲ０２２７５
１３ ０８８．９
２９
载脂蛋白＾一Ｉ
３０ ７５８．９
１２ ：旦璺垒兰堂２１：！：壹鏖耋型查塑皂垩自
主竺！堑
８．６４ ５．２３ ６．８１ ６．８８ ８．９３ ５．５６
曼：！！
抗ＲｈＤ单克隆Ｔ１２５＿ｒ重链前体 肌动蛋白Ａ２ 血清转铁蛋白 未命名蛋白产物 ＰＲ０２２７５
载脂蛋白Ａ—Ｉ
查鱼鱼堡鱼主丝
３讨论 自从提出“尿蛋白组学”（ｕｒｉｎａｒｙ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ）概念
【关键词】 双向凝胶电泳；尿液；蛋白质组；肽指纹图谱
尿液是血液经肾小球滤过、肾小管和集合管重吸 收、排泄及分泌产生的终末代谢产物，其组成、数量与 性状的变化携带有泌尿系统疾病发生、发展及预后的 各种信息，也可反映机体整体代谢状态，与血清等其他 体液样本相比，其获取无创、收集便利，并且蛋白组成 相对简单、易于分析。蛋白质组学则是诠释蛋白所携
以来，利用蛋白质组学技术对尿液蛋白质进行高通量、 系统性地分析和鉴定得到快速发展，并用于解释生理
万方数据
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广东医学２０１０年２月第３１卷第３期
ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｆｅｂ．２０１０，Ｖ０１．３１，Ｎｏ．３
学代谢、毒理及许多疾病的进程，尤其泌尿系统疾病中 蛋白质的改变可直接经尿道分泌到尿液中，因此研究 尿液中蛋白质改变可以帮助理解疾病发病机制、寻找 早期诊断的生物学标记。尽管尿液的成分非常复杂， 但由于尿液易获取无创伤，国内外学者目前热衷于对 生理和疾病状态下的尿液进行蛋白质组学分析，获得 了正常尿液标准蛋白图谱¨以１、并研究疾病状态下尿 蛋白的变化ｐ。１。
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尿液蛋白图谱上蛋白重复性好、表达清晰、界限较明显 的蛋白斑点，送中国科学院生物物理研究所基质辅助 激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ）进行肽指 纹图谱鉴定。 １．２．６蛋白质序列数据库检索将质谱结果放人互 联网上用ＭＡＳＣＯＴ软件在相关数据库进行肽指纹图谱 检索分析，网址为：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｔｒｉｘｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｗ．／，其 参数设定如下：Ｄａｔａｂａｓｅ：ＭＳＤＢ；Ｅｎｚｙｍｅ：ｔｒｙｐｓｉｎ；Ｐｅｐｔｉｄｅ