二氢杨梅素分离纯化的研究进展
实验一
实验一：藤茶中二氢杨梅素（DMY）的提取、纯化与检测Ⅰ二氢杨梅素的提取与预纯化实验原理黄酮类化合物单体多为晶体，少数（如黄酮苷类）为无定型粉末。
黄酮的聚集状态很大程度上是由其纯度决定的，纯度越高，越呈现晶体状态。
植物中提取的黄酮多为总黄酮混合物，会掺杂黄酮苷等不易分离的物质，故纯度不高，为粉末晶体混杂状态，常显黄色。
二氢杨梅素（(2R,3R)-3,5,7-三羟基-2-(3,4,5-三羟基苯基)苯并二氢吡喃-4-酮，Dihydromyricetin，DMY）（图1）具有六个羟基，其中有五个为酚羟基，易溶于丙酮、甲醇、乙醇、热水等极性溶剂，不溶于石油醚等非极性溶剂。
图1：二氢杨梅素结构示意图二氢杨梅素对水温具有溶解依赖性，DMY在45℃以下溶解度很低，70℃左右溶解度增加较快，至95℃变化则不明显。
故可用结晶法对其进行初步纯化。
生产和研究中采用的重结晶方法可制取较高纯度的黄酮化合物，此法对藤茶中富含的二氢杨梅素的纯化更为有效，一般经过三次重结晶就可获得90%以上纯度的二氢杨梅素。
一、实验器材与试剂40目样品筛、粉碎机、分析天平、平底烧瓶、恒温水浴锅、布氏漏斗、吸滤瓶、循环水式真空泵、滤纸、冰箱、烧杯和量筒、蒸馏水二氢杨梅素提取工艺流程二、样品预处理藤茶叶于干燥箱中50℃烘干，取30.0g干样，粉碎25s，过40目（0.42mm）筛。
三、提取精确称取样品10.0g于平底烧瓶中，加入蒸馏水150mL，煮沸30min。
取藤茶成品10.0g，加入蒸馏水150mL，煮沸30min。
四、结晶趁热（90℃最好）抽滤得提取液，静置冷却或流水冷却（可选），放冰箱过夜。
第二天进行抽滤，得结晶，50℃干燥，得DMY晶体。
Ⅱ双水相萃取法纯化DMY实验原理传统的分离技术获得的产品收率小，纯度低，成本高，在一定程度上阻碍了产品的工业化发展。
双水相体系具有分相快，使用温度低，易于操作等特点。
随着双水相技术研究的不断深入，新的双水相体系，如表面活性剂-表面活性剂体系、普通有机物-无机盐体系、双水相胶束体系等相继出现，其中普通有机物型双水相体系最大的优点是价廉、低毒、溶剂的回收利用及后续处理工作简单，且由于组成体系成分的极性较大，尤其适用于极性物质的提取和分离。
二氢杨梅素的分离及药理作用
二氢杨梅素的分离及药理作用严赞开1朱慧玲2胡春菊3黄先菊2(1. 韩山师范学院化学系, 广东潮州 521041; 2. 长江大学医学院, 湖北荆州434000;3. 韩山师范学院医务所, 广东潮州 521041)摘要探讨了二氢杨梅素的最佳提取、分离工艺及药理作用。
(1) 最佳提取工艺为: 以50 %乙醇为提取剂, 按45倍蛇葡萄干叶的量加入50 %乙醇, 保温回流2 h, 提取效率为17.8 %。
(2) 最佳分离工艺为: 采用二氯甲烷除色素, 乙醇-水重结晶, 并以硅胶G为固定相, 乙酸乙酯: 石油醚=2: 1（v/v）为流动相, 分离得到白色针状晶体(Rf=0.33), 经UV、IR及Rf证实为二氢杨梅素。
(3) 研究了二氢杨梅素对多种物质诱导的子宫平滑肌收缩的抑制作用, 结果表明其对家兔离体子宫平滑肌有较好的松弛作用。
关键词二氢杨梅素, 分离, 药理试验藤茶, 又名甜茶藤，系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的嫩茎叶, 主要分布于广东、广西、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区[1]。
我国广西、湖南等省区壮族和瑶族人民常用其茎叶作饮料[2]。
现代药理研究表明, 蛇葡萄该属植物具有明显降脂、降胆固醇、保肝利胆、抗癌、抗炎等作用[3]。
近年来，国内许多学者对蛇葡萄进行了化学研究，探明其主要活性成分为二氢杨梅素[4~7], 并对二氢杨梅素的提取方法进行了深入研究[8~12]。
本文在前人研究的基础上，系统地探讨了以湖北省恩施地区生产的藤茶为原料，从中提取、精制和分离二氢杨梅素的工艺流程；并讨论了二氢杨梅素对多种物质诱导的子宫平滑肌收缩的抑制作用，为生产和应用二氢杨梅素提供科学依据。
1实验部分1.1仪器和材料TU-1900型双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；WQF-510型FTIR 傅立叶变换红外光谱仪，北京瑞科仪器分析公司；501系列超级恒温槽，上海恒平科学仪器有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循环水式多用真空泵，河南省巩义市英峪予华仪器厂；LMS-2B型二道生理记录仪，成都仪器厂; 肌张力换能器，贝科测控设备有限公司。
二氢杨梅素的分离纯化及其细胞内抗氧化和体外结合胆酸盐能力的研究
盐)、hydrocortisone、青霉素、链霉素，牛磺胆酸钠 空白孔和对照孔分别加入含 DCFH-DA 的抗氧化培养
（STC）、考来烯胺（消胆胺），美国 Sigma 公司； 基，继续培养 1 h 后取出 96 孔板，用 100 μL PBS 清
WME 培养基、Hank 平衡盐溶液（HBSS），美国 Gibco 洗后，空白孔加入 100 μL 氧化培养基（10 mM
评价分析，并通过体外实验，以降血脂药物的主要成 活性炭，加热搅拌煮沸 5~10 min 后趁热过滤。滤液静
分考来烯胺作为对照，研究了二氢杨梅素对胆酸钠 置 1~2 h 冷却后，于 4 ℃的冰箱静置过夜使其析出结
(SC)、甘氨胆酸钠(SGC)和牛磺胆酸钠(STC)的结合作 晶，次日过滤，弃滤液、留滤渣，真空干燥。重复上
氧化能力评价法（cellular antioxidant activity assay，CAA）对二氢杨梅素的细胞内抗氧化能力（CAA）进行研究，同时在体外模拟人
体胃肠消化环境，测定了二氢杨梅素体外结合胆酸盐的能力。结果表明：利用多次重结晶法对二氢杨梅素进行分离纯化，可得到高纯
度的二氢杨梅素样品，得率为 43%。细胞内抗氧化试验中二氢杨梅素的 EC50 值为 6.17±0.08 μmol/L，CAA 值为 74.90±0.90 µmol QE/100 μmol，表明其具有很强的细胞内抗氧化能力。二氢杨梅素对胆酸钠（SC），甘氨胆酸钠（SGC），牛磺胆酸钠（STC）都有较强的结
比其他提取黄酮的方法，采用水加热重结晶提纯法避
收稿日期：2014-06-12
基金项目：十二五科技支撑计划子课题(2012BAD33B11)；中央高校基本科研
业务费专项资金资助项目(2014ZZ0063)
二氢杨梅素的分离研究进展
责任 编 辑
李玮
责任 校 对
张 士敏
二 氢杨 梅 素 的 分 离 研 究 进 展
严赞开 韩 师 学 化 系广 潮 ５ ４ （山 范 院 学 ，东 州２ １ ｌ） ｏ
１ 提 取 方 法
杨梅素 ， 过先单 因素 分析 ． 通 后正交设计试 验 ， 了最 佳提 确定
取 工艺条件为 ： 按蛇 葡萄干叶 ８ 的量加入 ９ ％乙醇 ， 浸 倍 ５ 冷 １ 后 ， ５ｈ 再加入固样量 ２ ０倍的沸水 ， 保温 回流 ３ ｉ， 氢杨 ０ｍ ｎ二 梅素的提取率为 ３ ． ％ ” ４２ ３ ７
回流 ２次 ， 次 ６ ｉ， 取效率 为 ８ ９ ％ 。笔 者等 比较 每 ０ｒｎ 提 ａ ．８ 了水 、 同浓度 乙醇 、 不 氢氧化 钙饱和溶 液等浸 提剂 的提取效
视 。随着二氢杨梅素研究工作 的不断深入 ， 显著 的药 其
理 活性 及抗 氧化活性已成为黄酮类化 合物的研究热 Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃ Ｏｌ ｈ ｅ ｈ ｄ ｆＩｏ ａ ｉ ｎ ｏ ｉ ｅ Ｍ ｔ ｏ ｓｏ ｓ ｌ ｔ ｆＤｉ ｙ ｒ ｍｙ ｉｅ ｉ ！ｔ ｏ ｈ ｄ ｏ ｒ ｃ ｔｎ
Ｙ Ｎ ａ －ａ （ ｅａｔ ｎ ｏ ｈ ｎ ｓ ，ｌ ｓａ ｏｍ ｌＣ ｌ ｇ ， ｈｏ ｈ ｕ Ｇ ｍ ｇｏ ｇ５ １４ ） Ａ Ｚ ｎ ｋ ｉ Ｄ ｐｒ ｍｅ ｔ ｆ ｅｆ ￣－ －ｎ ｈ ｎ Ｎ ｒ ａ ｏ ｅ ｅ Ｃ ａ ｚｏ ， ｕ ｌ ｎ ２ ０ １ Ｃ ｉ Ｉ ａ ｌ ｄ
黄酮类化合物 的提取 工艺 ， 要包括 有机 溶剂 提取 、 主 热
二氢杨梅素的检测、药效及药代学研究进展
收稿日期：2019-05-14 基金项目：国家自然科学基金资助项目(21706037)；广东工业大学青年百人引进人才资助项目(220413127) 作者简介：罗俊(1996–)，女，硕士研究生，主要研究方向为天然产物研究与开发 通信作者：刘丹(1981–)，女，副教授，博士，研究生导师，主要研究方向为天然产物研究与开发，E-mail：dana0816@
Luo Jun, Liu Dan, Ding Li-jun (School of Chemical Engineering and Light Industry, Guangdong
University of Technology, Guangzhou 510006, China)
Abstract: Dihydromyricetin (DMY) is an important active substance in rattan tea, with antioxidant, antibacterial, anti-tumor, anti-fatigue, anti-inflammatory, anti-alcohol, liver protection and other bioactive effects, which is widely used in the food and pharmaceutical industry. In this study, the structure identification, content determination, efficacy and pharmacokinetics of DMY were reviewed, so as to provide theoretical basis for the indepth research and further development and utilization of DMY. Key words: dihydromyricetin; structure; efficacy; pharmacokinetics
二氢杨梅素分离纯化的研究进展
二氢杨梅素分离纯化的研究进展二氢杨梅素分离纯化的研究进展摘要：二氢杨梅素是黄酮类化合物中重要的一员，具有消炎、止咳、祛疚、镇痛、抑菌、抗高血压、消脂以及解乙醇中毒等药理作用；本文将对二氢杨梅素的理化性质及其分离纯化进行阐述。
关键字：二氢杨梅素；理化性质；分离；纯化The progress of dihydromyricetin separateand purifyAbstract：Dihydromyricetin one of the important flavonoids，and have pharmacological effects of anti-inflammatory, cough, dispel remorse, analgesic, antibacterial, antihypertensive, Cellulite solution of ethanol poisoning; This paper will dihydromyricetinphysical and chemical properties and its purification described. Keywords：Dihydromyriceti n·Chemical properties·Separate·Purification0、前言二氢杨梅素(3，5，7，3 7，4’，5’一六羟基2，3-双氢黄酮醇，DMY)又名双氢杨梅树皮素、福建茶素、蛇葡萄素等，是黄酮类化合物的重要一员。
该化合物首次由Kotake和Kubota于1940从葡萄科蛇葡萄属植物福建茶即楝叶玉葡萄A.Meliaefolia的叶中分离到，命名为蛇葡萄素[1]。
DMY广泛存在于松柏类植物和木材中，如松属(pinus)和雪松属(cedrus)树皮中，也存在于木本被子植物，如杜娟花科植物饼砂杜娟(Rhodendron cinnnbariuunm)叶、连香树科植物连香树(Cercidiphyllum japonicus)木材中，是一种很好的抗氧化剂。
本科毕业论文(设计)杨梅素和二氢杨梅素的高效分离纯化
杨梅素和二氢杨梅素的高效分离纯化大摘要本研究以藤茶（显齿蛇葡萄）为原料致力于易于工业化生产的二氢杨梅素、杨梅素的分离纯化条件研究。
建立和优化了二氢杨梅素的结晶重结晶条件，获得了较高纯度的二氢杨梅素和杨梅素。
在此基础上，建立了高效液相色谱法测定杨梅素、二氢杨梅素的操作条件和藤茶总黄酮的测定方法。
藤茶是一种非常古老的中草药资源、类茶植物资源和药食两用植物资源，其原植物为葡萄科蛇葡萄属的显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz) W.T.Wang）。
其性凉，具利尿，消炎，清热解毒，散瘀破结,祛风除湿等功效，能医治肺痈、肠、瘰病、痈症肿痛、跌打、风湿、烫伤、肝炎、慢性肾炎、小便涩痛等疾病，并可治感冒、咽喉肿痛、胃热呕吐等症。
藤茶主要成分为二氢杨梅素和杨梅素等黄酮成分。
二氢杨梅素基本性质为白色针状结晶，mp: 245～246℃,易溶于热水、热乙醇、丙酮、甲醇，微溶于水、醋酸乙酯，难溶于氯仿、石油醚。
显色反应为盐酸-镁粉反应呈玫瑰红色，三氯化铁反应呈紫黑色，与三氯化铝反应呈强黄绿色荧光；α-萘酚反应阴性；与锆盐-柠檬酸反应鲜黄色不褪。
杨梅素基本性质为黄色结晶，mp：324～326℃，溶于甲醇、乙醇、热水，微溶于水，难溶于氯仿、丙酮、石油醚。
显色反应为盐酸-镁粉反应呈玫瑰红色，与FeCl3乙醇液反应呈墨绿色，与AlCl3反应呈强黄绿色荧光，α-萘酚反应呈阴性，与NaOH 反应呈黑绿色，UV(MeOH)：375.0nm，255.0nm。
贵州藤茶黄酮含量可高达40%以上，藤茶黄酮的主要成分为二氢杨梅素（Dihydromyricetin，DMY）和杨梅素（Myricetin, MYR），美国FDA已将杨梅素广泛应用于医药、食品、保健品和化妆品；而二氢杨梅素具有清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎等多种功效，广泛应用于治疗呼吸道感染、酒精中毒的中成药制剂并已在制备抗白血病及鼻咽癌药物的应用领域取得了发明专利；是保肝护肝，解酒醒酒的良品，主要作为医药原料药并做为一类新药准备进入临床试验。
藤茶中二氢杨梅素的提取纯化工艺研究
研 究 表 明 ， 茶 及其 提 取 物具 有抑 菌 、 藤 降血 脂 、 降血 压 、 抗 粗提 物 。 到高 纯度 的二氢 杨梅 素 产 品 。产 品具有 安 全 、 得
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二氢杨梅素分离纯化的研究进展摘要：二氢杨梅素是黄酮类化合物中重要的一员，具有消炎、止咳、祛疚、镇痛、抑菌、抗高血压、消脂以及解乙醇中毒等药理作用；本文将对二氢杨梅素的理化性质及其分离纯化进行阐述。
关键字：二氢杨梅素；理化性质；分离；纯化The progress of dihydromyricetin separateand purifyAbstract：Dihydromyricetin one of the important flavonoids，and have pharmacological effects of anti-inflammatory, cough, dispel remorse, analgesic, antibacterial, antihypertensive, Cellulite solution of ethanol poisoning; This paper will dihydromyricetinphysical and chemical properties and its purification described. Keywords：Dihydromyriceti n·Chemical properties·Separate·Purification0、前言二氢杨梅素(3，5，7，3 7，4’，5’一六羟基2，3-双氢黄酮醇，DMY)又名双氢杨梅树皮素、福建茶素、蛇葡萄素等，是黄酮类化合物的重要一员。
该化合物首次由Kotake和Kubota于1940从葡萄科蛇葡萄属植物福建茶即楝叶玉葡萄A.Meliaefolia的叶中分离到，命名为蛇葡萄素[1]。
DMY广泛存在于松柏类植物和木材中，如松属(pinus)和雪松属(cedrus)树皮中，也存在于木本被子植物，如杜娟花科植物饼砂杜娟(Rhodendron cinnnbariuunm)叶、连香树科植物连香树(Cercidiphyllum japonicus)木材中，是一种很好的抗氧化剂。
该植物存在于杨梅科、杜娟科、藤黄科、大戟科等植物中，有抗癌、利胆和抗炎作用。
近十年来，随着黄酮类化合物成为天然植物活性成分的研究热点后，DMY也受到人们的重视和关注，但由于在以上植物中存在含量不高的因素，一直无法进行大规模的应用和实验，直到在蛇葡萄科中发现并提取之后才引起人们极大的关注和重视。
从目前研究情况表明，DMY大量存在于葡萄科植物中，尤其是在蛇葡萄属植物中更是大量存在。
有研究表明，藤茶幼嫩茎叶中含量达27％28％，最高部位可达40％以上；粤蛇葡萄中幼嫩茎叶中含量可达25％以上[2]。
DMY作为黄酮类成分中的重要一员，在天然植物中单体含量如此之高，实属罕见。
1、二氢杨梅素的理化性质DMY的分子中含有6个酚羟基，具有弱酸性，等电点在pH=5左右，因此其在酸性溶液中构型稳定，在中性和碱性溶液中酚羟基易发生解离。
尤其是在强碱性条件下由于酚羟基大量的解离，改变了分子上的电子云分布，从而使分子发生了彻底的构型转换，在C环的氧原子处发生解环，生成了A环上的一个羟基，变成类似于查尔酮的结构[3]。
1.1、二氢杨梅素良好的热稳定性林淑英等[4]研究发现，DMY在水相中的热稳定性与时间关系密切，100"C 下加热30 rain DMY在水中仍能保持稳定的构型，加热时间更长以后DMY发生氧化，变成亚醌式结构，C环发生断裂。
DMY的DSC稳定性分析发现其熔点为245℃左右。
1.2、二氢杨梅素的生理作用[5]1.2.1、抗菌作用药理实验表明，二氢杨梅素对枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、大肠埃希菌、产气杆菌、啤酒酵母、黏红酵母、青霉、黑曲霉、黄曲霉、毛霉及根霉均有抑菌作用, 尤其对革兰阳性、革兰阴性球菌或杆菌作用明显。
1.2.2、对血糖、血脂的调节作用小鼠灌胃药理实验表明二氢杨梅素能明显抑制由四氧嘧啶、肾上腺素、链脲霉素等诱导的小鼠血糖升高，同时升高血清胰岛素水平, 胰腺组织中淋巴细胞浸润明显减少、炎症反应明显减轻, 胰岛数目明显增加。
二氢杨梅素对链脲霉素诱导的高血糖大鼠血清三酰甘油( TG) 含量有降低作用, 对血清总胆固醇( TC) 、高密度脂蛋白胆固醇( HDL2C) 含量无明显影响。
1.2.3、护肝作用二氢杨梅素对体外培养的大鼠肝细胞四氯化碳中毒性损伤、D2半乳糖胺和脂多糖诱导的小鼠肝损伤有显著的保护作用。
二氢杨梅素可以保护肝脏，加速乙醇代谢产物乙醛迅速分解，变成无毒物质，降低对肝细胞的损害。
此外，二氢杨梅素能够改善肝细胞损伤引起的血清乳酸脱氢酶活力增加，抑制肝性M细胞胶原纤维的形成，从而起到保肝护肝的作用，大幅度降低乙醇对肝脏的损伤，使肝脏正常状态迅速得到恢复。
Microherb试验证明，二氢杨梅素可以保护肝脏，加速乙醇代谢产物乙醛迅速分解，变成无毒物质，降低对肝细胞的损害。
二氢杨梅素起效迅速，并且作用持久，是保肝护肝，解酒醒酒的良品。
1.2.4、抗氧化作用纯度为98%的二氢杨梅素, 能明显抑制大鼠心肌、肝和脑组织匀浆中丙二醛(MDA)的生成, 并随二氢杨梅素浓度增加而抑制MDA生成的作用增加，含量99 %的二氢杨梅素对试验系统中二苯三硝基苯肼(DPPH) 自由基的清除率。
二氢杨梅素能明显抑制油脂中MDA的生成, 随二氢杨梅素纯度(60 %～90 %) 增加抗氧化作用增强; 对动物油和植物油均有很强的抗氧化作用。
1.2.5、抗肿瘤作用近年的抗肿瘤药效学研究发现其活性成分之一，蛇葡萄素小分子化合物具有较强的抗癌作用。
体外内抗肿瘤作用研究发现该化合物可以通过抑制肿瘤血管生长、调节增强细胞免疫功能等作用达到提高肿瘤治疗效果和改善病人生命体症的目的，在白血病和鼻咽癌等肿瘤模型试验研究中都显示有明显的抑瘤作用。
1.3、二氢杨梅素的合成反应分子中的酚羟基还能和一些酸、脂肪酰卤、糖等反应生成新的化合物，这些性质为DMY提供了更广阔的应用潜力。
如李卫等[6]用月桂酰氯对DMY的羟基进行酯化，合成了DMY月桂酸酯。
通过对DMY及DMY月桂酸酯在猪油中抗氧化性能的比较试验，证实DMY月桂酸酯能够持久、稳定地在猪油中发挥抗氧化作用，而且抗氧化能力比DMY还要强。
Matsumo等[7]在实验中发现，从lix sachalinensis提取的DMY对Cladosporium herbarum真菌具极强的抑制作用，但DMY甲酯的抑菌能力为DMY的4倍。
宁正祥[8]采用黄酮糖苷酶催化合成了DMY 葡萄糖苷。
通过对158例糖尿病患者为期9个月的治疗发现，DMY葡萄糖苷能使其血糖代谢基本回归到正常水平。
2、二氢杨梅素的分离纯化方法2.1、吸附法通常利用吸附法除去体系的杂质如色素等，也可以用吸附剂吸附有效成分。
常用的吸附剂有氧化铝、活性炭、多孔树脂，分子筛等。
Yoo等[9]报道了利用萃取吸附技术从Hovenia dulcis中提取纯化DMY的方法。
将提取液经活性粘土P-1吸附过滤，再经硅藻土过滤吸附，甲醇洗提，洗液过硅胶柱后乙醚洗提，洗液经浓缩蒸发可得到纯度达50％的DMY粗品。
2.2、结晶法结晶法是分离和纯化固体成分的重要方法之一，是利用混合物中各成分在溶剂中的溶解度不同来达到分离的方法。
结晶时应选择合适的溶剂、合适的温度和时间等；结晶法手所用的度依样品必须是具有一定纯度的样品才能采用此法纯化，如果粗液部分的纯度很差，则很难得到结晶，或者结晶后的纯然较低。
对提取出的粗黄酮进行预处理后再进行重结晶可得到较高纯度产品。
采用“增温溶解，保温过柱，温水解吸"法从显齿蛇葡萄中提纯DMY，经此法后再重结晶的DMY 可达到较高纯度要求。
高建华[10]对显齿蛇葡萄黄酮提取物DMY的提纯及结晶态进行了初步探讨。
表明：以水作为结晶溶剂进行多次重结晶，可有效去除植物黄酮提取物的杂质，总黄酮含量又原来的86％提高至96．5％。
DMY在水相中的结晶态多为针状结晶，水相保温结晶呈放射性棒状结晶。
在pH4．5的条件下，其溶解度最低可获得较高的回收率。
2.3、大孔树脂吸附法大孔吸附树脂具有物化稳定性高、比表面积大、吸附选择性好、不受无机物存在的影响、再生处理方便、吸附解吸条件温和、使用周期长、节省费用等优点，广泛应用于物质的分离纯化。
由于吸附树脂理化性质不同，不同型号的树脂对黄酮的精制效果有较大的差异。
陆志科等选用6种不同型号的树脂对竹叶黄酮的吸附特性进行比较研究，弱极性的AB一8树脂适宜竹叶黄酮的提取。
分离纯化枸杞叶总黄酮时用HPDl00型大孔树脂效果较好。
银杏叶黄酮的分离纯化采用DM 一130型树脂具有较好的效果。
除树脂的类型外，溶剂的种类及浓度对纯化的效果也具有很大的影响，有研究表明，D．204、XDA．2树脂吸附银杏叶黄酮后，用80％乙醇洗脱效果最好，而D一254、D．113则以95％乙醇洗脱效果最好。
2.4、聚酰胺凝胶柱法对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较理想的吸附剂。
其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。
柱层析分离黄酮类物质样品容量大、可逆、分离效果好，可使性质极相似的类似物得到分离。
苷元相同，洗脱先后顺序一般是三糖苷、双糖苷、糖苷、苷元。
大多数黄酮苷在10％一40％的乙醇液中就可以洗脱下来，而苷元在50—95％的乙醇液中才能洗脱下来。
由于纯聚酰胺用于柱层析固定相存在滤水性差、单位质量吸附量小、有小分子夹带的问题。
王怡红等对聚酰胺柱进行了改进，将聚酰胺涂装在硅藻土上，制成的改性聚酰胺柱，改善了滤水性，提高了单位质量聚酰胺的吸附量，消除Yd,分子夹带问题。
此外，王怡红等通过实验还得出聚酰胺在该层析柱上的吸附为单分子层吸附的结论。
郑国华等用聚酰胺柱层析法从藤茶的乙酸乙酯萃取部位分离得到3个化合物等。
经过理化常数测定和光谱分析，确定为蛇葡萄素，杨梅素和杨梅苷。
其中杨梅素和杨梅苷是首次从该植物中分得[11]。
2.5、超临界CO2萃取法超临界CO2萃取作为一种有效的化上分离手段，集精馏(物质挥发度的差异) 和液一液萃取(物质溶解度的差异)特点于一体，由于溶剂回收不需要潜热，因此比传统的方法能更有效地节省能量，由于超临界CO2，具有气体和液体之间的性质，所以提取分离的速度远比液体溶剂快，以进行高效分离。
在黄酮类化合物的提取，黄酮类化合物广泛存在于植物中，主要存在于芸香科、唇型科、豆科、伞型科、银杏科与菌科等。
该类化合物不但分布范围广，种类多，而且生物活性广泛，毒性小，因此很多制剂可长期使用，如水飞蓟有保肝作用，葛根素有明显的扩冠作用，已用于临床。
超临界CO2萃取对于黄酮类化合物是一种非常有效的提取方法，与传统的溶剂法相比，其流程短，萃取分离一步完成，萃取得率高，而操作时间比传统方法大大缩短。