化学发光ppt课件
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化学发光原理及检测项目PPT课件
triglycerides2
The Intestines Constipation4 Decreased GI motility4
泛的影响
The Brain
Depression1 Decreased concentration1 General lack of interest1 Impaired fetal intellectual
The Kidneys Decreased function5 Fluid retention and edema5
1. Nemeroff CB. Clinical significance of psychoneuroendocrinology in psychiatry: focus on the thyroid and adrenal. J Clin Psychiatry. 1989;50(suppl):13-20. 2. Klausen IC, Nielsen FE, Hegedüs L, Gerdes LU, Charles P, Faergeman O.Treatment of hypothyroidism reduces low-density lipoproteins but not lipoprotein (a) Metabolism. 1992;41:911-914. 3. Polikar R, Burger AG, Scherrer U, Nicod P. The thyroid and the heart. Circulation. 1993;87:1435-1441. 4. Vassilopoulou-Sellin R, Sellin JH. The gastrointestinal tract and liver in hypothyroidism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:816-820. 5. Moses AM, Scheinman SJ. The kidneys and electrolyte metabolism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:812-815. 6. Emerson CH.Thyroid function and disease in the female. In: Gold JJ, Josimovich JB, eds. Gynecologic Endocrinology. 4th ed. New York, NY:Plenum Publishing Corp; 1987:109-133. 7. Haddow JE, Palomaki GE, Allan WC, et al. Maternal thyroid deficiency during pregnancy and subsequent neuropsychological development of the child. N Engl J Med. 1999;341:549-555.
The Intestines Constipation4 Decreased GI motility4
泛的影响
The Brain
Depression1 Decreased concentration1 General lack of interest1 Impaired fetal intellectual
The Kidneys Decreased function5 Fluid retention and edema5
1. Nemeroff CB. Clinical significance of psychoneuroendocrinology in psychiatry: focus on the thyroid and adrenal. J Clin Psychiatry. 1989;50(suppl):13-20. 2. Klausen IC, Nielsen FE, Hegedüs L, Gerdes LU, Charles P, Faergeman O.Treatment of hypothyroidism reduces low-density lipoproteins but not lipoprotein (a) Metabolism. 1992;41:911-914. 3. Polikar R, Burger AG, Scherrer U, Nicod P. The thyroid and the heart. Circulation. 1993;87:1435-1441. 4. Vassilopoulou-Sellin R, Sellin JH. The gastrointestinal tract and liver in hypothyroidism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:816-820. 5. Moses AM, Scheinman SJ. The kidneys and electrolyte metabolism. In:Braverman LE, Utiger RD, eds. Werner and Ingbar’s The Thyroid. 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott-Raven Publishers; 1996:812-815. 6. Emerson CH.Thyroid function and disease in the female. In: Gold JJ, Josimovich JB, eds. Gynecologic Endocrinology. 4th ed. New York, NY:Plenum Publishing Corp; 1987:109-133. 7. Haddow JE, Palomaki GE, Allan WC, et al. Maternal thyroid deficiency during pregnancy and subsequent neuropsychological development of the child. N Engl J Med. 1999;341:549-555.
化学发光竞争法原理ppt课件下载
分离技术
1.磁颗粒分离法：用抗原或抗体包被磁颗粒,与标 本中相应抗原或抗体和酶标的抗体或抗原通过 一定模式的免疫学反应后,最终通过磁场将结合 酶标记物IC和游离酶标记物进行分离的技术。
2.微粒子捕获法：所用颗粒是无磁性微粒子作为 抗体或抗原的包被载体, 然后用纤维膜柱子进 行酶标记物的结合状态和游离状态的分离。
1.3 AMPPD
OO
OCH 3
AP /OH —
光
O-
HPO4 2—
4-MUP
• 4-MUP被AP催化生成4-甲基伞形酮，在360nm的 激发光的作用下，发出448nm的荧光，可用荧 光光度计进行测量。
1.4 4-MUP
AP H3PO4 +
360nm 激发光
荧
4-MU
光
2.直接化学发光剂
特点：不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件 就能发光的物质。反应迅速、背景低、 信比高，发光量与AE浓度呈线性关系。
根据免疫学反应模式分 1.双抗体夹心法和双抗原夹心法 3.固相抗原竞争法：
荧光酶免疫测定技术反应原理图
E
E E
洗涤EΒιβλιοθήκη 弃上清EE
E
4MU
E
激 发 荧 光
碱性磷酸酶
是抗塑 体料利包微用被珠 理想标的记酶抗体荧光样抗底本原 物，生成的产物稳定并有 强的荧光强度，通过测定荧光强度进行定量。
化学发光酶免疫测定技术反应原理图
②敏感度高，可达pg／ml或pmol水平； ③线性范围宽＞104； ④反应时间短，20min以内可完成测定； ⑤试剂稳定性好，2～5℃可保持一年以上。
3.包被珠分离法：用聚苯乙稀等材料制成小珠,在 小珠上包被抗原或抗体,经抗原抗体反应后,将 结合状态和游离状态的酶标记物进行分离.
全自动化学发光免疫分析仪运行原理ppt课件
39
谢谢！
40
• 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
23
二步法 (i System) 5
• 在位置94加入预激发液(Pre-trigger), 然后振动混合. • 在位置98 CMIA光学系统读空白值, 然后加入激发液(Trigger), 再测CMIA
光学系统速率读数. • 在位置100液体从RV杯中废液吸走. • 在位置109退出RV杯装置(UL)推出RV杯道废物盒.
28
快速反应一步法 (i System) 1
• 在位置47快速反应针加样品到RV杯中. • 在位置48试剂R2针加微粒子和吖啶酯标记的连接物试剂. • 在位置49振动混合样品和试剂. • 在位置50-86孵育11分钟.
29
快速反应一步法 (i System)2
• 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
即：磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或病毒颗粒） 特异的与被分析物中抗原、抗体结合形成抗原抗体复合物， 再与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合 物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成 10-甲基吖啶酮，当它恢复到基态时发光，根据发光强度可 计算出分析物的浓度 。
6
A + B = C + D*（激发态分子） D*→D + hv（激发态分子D*的光辐射）
2
化学发光的反应条件
（1）能快速地释放出足够的能量 （化学 发光反应多为氧化还原反应，激发能与反 应能相当，DE=170～300 kJ/mol）；发光 位于可见光区；
（2）化学反应的能量至少能被一种物质 所接受并使之生成激发态；
7
CMIA分析成份
谢谢！
40
• 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
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二步法 (i System) 5
• 在位置94加入预激发液(Pre-trigger), 然后振动混合. • 在位置98 CMIA光学系统读空白值, 然后加入激发液(Trigger), 再测CMIA
光学系统速率读数. • 在位置100液体从RV杯中废液吸走. • 在位置109退出RV杯装置(UL)推出RV杯道废物盒.
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快速反应一步法 (i System) 1
• 在位置47快速反应针加样品到RV杯中. • 在位置48试剂R2针加微粒子和吖啶酯标记的连接物试剂. • 在位置49振动混合样品和试剂. • 在位置50-86孵育11分钟.
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快速反应一步法 (i System)2
• 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
即：磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或病毒颗粒） 特异的与被分析物中抗原、抗体结合形成抗原抗体复合物， 再与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合 物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成 10-甲基吖啶酮，当它恢复到基态时发光，根据发光强度可 计算出分析物的浓度 。
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A + B = C + D*（激发态分子） D*→D + hv（激发态分子D*的光辐射）
2
化学发光的反应条件
（1）能快速地释放出足够的能量 （化学 发光反应多为氧化还原反应，激发能与反 应能相当，DE=170～300 kJ/mol）；发光 位于可见光区；
（2）化学反应的能量至少能被一种物质 所接受并使之生成激发态；
7
CMIA分析成份
化学发光ppt课件
47
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
6
2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
27
酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
25
酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
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2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
27
酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
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酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
化学发光法技术概要ppt课件
主要实验流程（3）——两步法
样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－ 30分钟；
洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4）， 37℃孵育5－30分钟；
洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。
16
全自动仪器其他要求
样品加量10µl~200 µl，试剂加量50µl~200 µl， 随检测项目不同而有所增减。
化学发光法技术概要 及自动化免疫分析仪 技术要点
科华生物研发中心光免小组 李基
2010.7.14
1
化学发光法反应基本原理
➢ 抗原-抗体反应
抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反 应称之为抗原抗体反应。 抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。
➢ 酶促底物发光
将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标 记，通过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测 目标抗体或抗原的浓度。
2
化学发光法反应模式
一步法 （15min反应+15min显色）
➢ 夹心法 ➢ 竞争法
两步法 （15min+15min反应+15min显色）
➢ 间接法 ➢ 捕获法
3
一步法：夹心法
4
一步法：竞争法
5
两步法：间接法
6
两步法：捕获法
7化学发光法ຫໍສະໝຸດ 应介质✓ 固相介质：磁珠 ✓ 酶标记物：碱性磷酸酶（AP） ✓ 发光底物：AMPPD
第一个结果报告时间（min ）
检测通量（T/hour）
10
68-120
15.6
200
<15.6
1200
18
240
15
样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－ 30分钟；
洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4）， 37℃孵育5－30分钟；
洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。
16
全自动仪器其他要求
样品加量10µl~200 µl，试剂加量50µl~200 µl， 随检测项目不同而有所增减。
化学发光法技术概要 及自动化免疫分析仪 技术要点
科华生物研发中心光免小组 李基
2010.7.14
1
化学发光法反应基本原理
➢ 抗原-抗体反应
抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反 应称之为抗原抗体反应。 抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。
➢ 酶促底物发光
将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标 记，通过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测 目标抗体或抗原的浓度。
2
化学发光法反应模式
一步法 （15min反应+15min显色）
➢ 夹心法 ➢ 竞争法
两步法 （15min+15min反应+15min显色）
➢ 间接法 ➢ 捕获法
3
一步法：夹心法
4
一步法：竞争法
5
两步法：间接法
6
两步法：捕获法
7化学发光法ຫໍສະໝຸດ 应介质✓ 固相介质：磁珠 ✓ 酶标记物：碱性磷酸酶（AP） ✓ 发光底物：AMPPD
第一个结果报告时间（min ）
检测通量（T/hour）
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68-120
15.6
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<15.6
1200
18
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Autolumo-A2000-全自动化学发光测定仪PPT演示课件
11
8、优缺点
优点： 1、反应杯自动加载； 2、样本载入灵活,可批量可随机； 3、管式反应体系，检测结果一致性好； 4、检测通量大，每小时200个测试； 缺点： 1、人机交互的模块分布在仪器的3个角上，不利于操作； 2、开机状态不能加载更换试剂，需停机才能操图：1999年成立，ISO9001 ISO13485 检测项目：主要包括肝炎项目、肿瘤项目、肝纤 项目、甲状腺项目、心肌标志物项目、炎症项目、 糖代谢项目、高血压项目等。 检测原理：酶促化学发光 通量：200测试/小时，18s/个
3
4
5
2、基本架构
6
3、进样单元
1、流水线式自动进样,条码自动扫描； 2、一批次100个样本，可循环追加； 3、急诊优先（可以插队）； 4、摆臂钢针加现方式做保护处理对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑并不能对任何下载内容负责
Autolumo A2000 全自动化学发光测定仪
1
大纲
1、仪器简介 2、基本架构 3、进样单元 4、耗材单元 5、试剂单元 6、温育单元 7、液路单元 8、优缺点
7
4、耗材单元
1、反应杯自动连续加载，无需人工排列； 2、能储存2000个反应杯并可随时添加； 3、反应杯通过抓手转移到孵育盘；
8
5、试剂单元
1、24个试剂位，大转盘设计，4-10℃冷藏； 2、试剂条码自动扫描，二维条码； 3、磁微粒混悬液自动不间断混匀； 4、摆臂钢针加样，双试剂针； 5、停机后更换试剂；
9
6、温育单元
1、共192个反应位，内外3环，兼容一步法、二步法、三步法？ 反应杯通过抓手转移； 2、整个转盘37℃温育； 3、带反应杯自动混匀，磁分离自动洗涤功能；
10
7、液路单元
8、优缺点
优点： 1、反应杯自动加载； 2、样本载入灵活,可批量可随机； 3、管式反应体系，检测结果一致性好； 4、检测通量大，每小时200个测试； 缺点： 1、人机交互的模块分布在仪器的3个角上，不利于操作； 2、开机状态不能加载更换试剂，需停机才能操图：1999年成立，ISO9001 ISO13485 检测项目：主要包括肝炎项目、肿瘤项目、肝纤 项目、甲状腺项目、心肌标志物项目、炎症项目、 糖代谢项目、高血压项目等。 检测原理：酶促化学发光 通量：200测试/小时，18s/个
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2、基本架构
6
3、进样单元
1、流水线式自动进样,条码自动扫描； 2、一批次100个样本，可循环追加； 3、急诊优先（可以插队）； 4、摆臂钢针加现方式做保护处理对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑并不能对任何下载内容负责
Autolumo A2000 全自动化学发光测定仪
1
大纲
1、仪器简介 2、基本架构 3、进样单元 4、耗材单元 5、试剂单元 6、温育单元 7、液路单元 8、优缺点
7
4、耗材单元
1、反应杯自动连续加载，无需人工排列； 2、能储存2000个反应杯并可随时添加； 3、反应杯通过抓手转移到孵育盘；
8
5、试剂单元
1、24个试剂位，大转盘设计，4-10℃冷藏； 2、试剂条码自动扫描，二维条码； 3、磁微粒混悬液自动不间断混匀； 4、摆臂钢针加样，双试剂针； 5、停机后更换试剂；
9
6、温育单元
1、共192个反应位，内外3环，兼容一步法、二步法、三步法？ 反应杯通过抓手转移； 2、整个转盘37℃温育； 3、带反应杯自动混匀，磁分离自动洗涤功能；
10
7、液路单元
化学发光法技术概要ppt课件
精选ppt
12
各种全自动仪器主要技术参数
HCG Axsym Architect i2000 Architect ci8200 ADVIA Centaur Access Access2 Vidas Dimension Xpand Dimension RXL Immulite Immulite2000 Vitros Elecsys 2010 Elecsys 1010
主要实验流程（3）——两步法
样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－ 30分钟；
洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4）， 37℃孵育5－30分钟；
洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。
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16
全自动仪器其他要求
样品加量10µl~200 µl，试剂加量50µl~200 µl， 随检测项目不同而有所增减。
洗涤3-5次； 加入发光底物，5-15分钟检测。
精选ppt
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全自动仪器实验流程要求（2）要实验流程（2）——一步半法样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－ 30分钟；
加入试剂3， 37℃孵育5－30分钟； 洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。
精选ppt
15
全自动仪器实验流程要求（3）
Axsystem: 基于粒子的荧光偏振技术。
Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。 拜尔公司
ADVIA Centaur：基于磁分离的化学发光检测。
贝克曼公司
Access系列：基于磁分离的化学发光检测。
生物梅里埃公司
Vidas系列：管式包被的酶促荧光检测。
精选ppt
11
电化学发光检验的原理PPT课件
特点
1.高特异性 ↆ
高度特异性结 合
2.高敏感性 ↆ
4个结合位点 3.高稳定性
ↆ 亲和常数高， 解离常数很低。
15
4 最终在反应杯里形成磁颗粒连接的抗原抗体复合物
编辑版pppt
16
5 反应杯中的复合物被转移至测量池
测量池中启动磁场，吸附磁颗粒连接的免疫复合物。
加入Procell溶液，去除反应体系杂质并提供三丙胺TPA 。
编辑版pppt
23
编辑版pppt
8
2.电化学发光反应原理
顾名思义，电化学发光（ECL）是电场参与化学发光所产生的结果，是指通过施加一定的电压进行电 化学反应：
[Ru(bpy)3]2+：三联吡啶钌，是一种电化学发光剂 TPA：三丙胺，电子供体。
失电子
(阳离子自由基,不稳定) ↆ
TPA－e¯→TPA+·－ H+ → TPA·（强还原剂）
电化学发光原理及应用
• 2017.10
编辑版pppt
1
目录
1 免疫检测技术的发展 2 电化学发光系统及其原理 3 电化学发光技术的优势
编辑版pppt
2
一.免疫检测技术的发展
电化学发光
放免
酶免 荧光免疫 化学发光
1959 1970~80‘S
2000‘S
免疫检测技术三个重要的历程
编辑版pppt
3
放射免疫分析
1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了 免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。
缺点 半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。
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光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底
1. 天然荧光寿命小，而发光微粒发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采集光信 号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 2. 采用680nm红光激发，其能级不可能激发生物样品中的荧光物质。 3. LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质， 用荧光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出， 有效降低本底。
敏化化学发光 是指某些化学反应中的由于激发态产物 本身不发光或反光十分微弱，但通过加入某种接受体 （荧光剂）可导致发光。反应式为：
A+B → C*+D, F+C* → F*+C,
F* → F+ hv C为能量给于体，F为能量接受体
化学发光强度与反应物浓度的关系
化学发光强度与化学反应速度（dp/dt）相关联，而一切 影响反应速度的因素多可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为：
CL基本类型
按反应机理 自身化学发光、 敏化化学发光、电致化学发光 自身发光：是指被测物质为反应物直接参与化学反应， 利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光辐射。 可用反应式表示为：
A+B → C*+D， C* → C+hv
这类最普遍，多数有机物分子在液相中的化学反应属于这一类型
CL基本类型
缺点：水溶性差。适用于有机相体系。
荧光棒
常用化学发光试剂
C 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm 光。
CL发光效率和发光强度
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本身；而发光效率则 取决于发光体本身的结构和性质，也受环境的影响。
化学发光强度
动力学 反应时间，提高灵敏度?
CL基本原理
A +B = C + D* D* → D + hV
（1）能快速地释放出足够的能量 （化学发光反应多为氧化还原反应， 激发能与反应能相当，DE=170～300 kJ/mol；发光位于可见光区； （2）化学反应的能量至少能被一种物质所接受并使之生成激发态； （3）激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态
CL基本原理
在化学发光（chemluminescence, CL）中，由化学反应 产生能的原子或分子由激发态回到基态时所产生的这一 光辐射现象叫化学发光。根据化学发光的强度测定物质 含量的分析方法叫化学发光分析。
1887年 Redziszewski首次报道了络吩碱（lophine,2,4,5三苯基咪痤）在碱性条件下与氧气反应发出黄金设色的 光———人为的化学发光……
A+B → C*, C* → C+hv 该发光反应的化学发光强度取决于反应速度dp/dt和反应 的化学发光量子效率（ ΦCL ）
ICL（T）= ΦCLdp/dt
常用化学发光试剂
A 鲁米诺（luminol）及其衍生物
（3—氨基—邻苯甲酰肼）
在碱性条件下能被许多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发 出蓝色光，量子产率介于0.01~0.05之间是一个研究最早，最多，
适用范围广
光激发化学发光特点
高灵敏度 低本底 适用范围广
酶的活性、受体-配体反应、低亲和力的反应、第二信使 水平、DNA、RNA、蛋白质、多肽、碳水化合物、小分 子、大分子
易使用 高通量
光激发化学发光
特点：
2. 低本底 第一，天然荧光寿命小，而发光微粒的稳定发光时间超过1秒，可采取时间分辨模式采 集光信号，也就是在激光器关闭后50-100毫秒采集光信号。 第二，由于LiCA采用680nm红光激发，而红光的能级几乎不可能激发生物样品或微孔 板中的荧光物质，故本底很低。 第三，LiCA发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，所以称为化学发光。而荧光 是激发光为高能量的而发射光为低能量的。由于生物体内富有天然的荧光物质，用荧 光法测定生物样品本底会较高，而LiCA检测反其道而行之，采用低进高出，有效降低 本底。
时间
O3, NO, NO2, H2S, SO2, CO
化学发光在CE中的应用
柱后套管式 柱端液池式 电致发光式
光激发化学发光
Light initiated chemiluminescence assay, LiCA
主要原理是由光激发产生的均相化学发光技术。是 以纳米级高分子微粒为基础的新一代化学发光技术， 被广泛地应用于研究生物分子的相互作用。
逐级放大的化学反应的结果。 感光微粒富含感光化合物，在光照射后每个微粒会释放出60000个/s离 子氧，离子氧作用于发光微粒中的二甲基噻吩衍生物产生大量紫外光完 成第二级放大；紫外光激发包埋在发光微粒中的镧系元素释放光能完成 第三级放大过程。三级梯度放大过程使LiCA的检测限低至10-15摩尔。
低背景 适用范围广
应用最广泛的发光试剂。 pH 10-12 水溶性好
O
O
NH NHNH2O源自鲁米诺NH NH H2N O
异鲁米诺
常用化学发光试剂 鲁米诺发光原理
鲁米诺与双氧水的发光机理
异鲁米诺
常用化学发光试剂
B 过氧草酸盐（peroxalate）
自身并不发光，其化学发光均为敏化发光反应。是芳香草酸盐和 H2O2芳香草酸盐和H2O2反应形成高能量的中间物。 与鲁米诺相比，过氧草酸盐化学反应的发光效率更高，可达到 27%，且在较宽的酸度范围内(pH 4~10)都能发光。
光激发化学发光
感光化合物的感光微粒和含有 发光化合物的发光微粒组成。 微粒直径约188nm，表面覆盖 多糖水凝胶。其功能为： 1. 非特异性结合少 2. 增加微粒的悬浮性。 3. 连接目标生物分子。 4. 增加了反应的表面积，可结
合成百上千个生物分子
镧系元素 60000个/s
光激发化学发光特点
高灵敏度