化学发光
化学发光的原理
化学发光的原理化学发光是一种特殊的化学反应，通过这种反应物质能够产生可见的光。
这种现象在自然界和人工制品中都有广泛的应用，比如萤火虫、发光细菌、发光海洋生物以及化学荧光剂等。
那么，化学发光的原理是什么呢？化学发光的原理主要涉及到三个基本要素，发光物质、激发能量和激发态的稳定性。
首先，发光物质是化学发光的基础。
一般来说，发光物质是由发光分子或者离子组成的。
这些分子或者离子在受到激发能量的作用下，会产生激发态，从而释放出光子，产生发光现象。
不同的发光物质会产生不同颜色的光，这取决于其分子结构和能级结构。
其次，激发能量是化学发光的触发条件。
激发能量可以通过多种方式提供，比如化学反应、电磁辐射、光照等。
当激发能量作用到发光物质上时，发光物质的电子会跃迁到激发态，形成激发态的发光分子或者离子。
最后，激发态的稳定性决定了化学发光的持续时间和强度。
激发态的稳定性越高，发光持续的时间就越长，发光强度也就越大。
一般来说，化学发光的激发态是不稳定的，因此发光持续的时间一般比较短暂。
除了以上三个基本要素，化学发光还涉及到一些具体的发光机制，比如荧光、磷光、化学发光等。
荧光是一种发光物质在受到紫外线激发后，能够立即释放出可见光的现象。
而磷光是一种发光物质在受到激发后，能够延迟一段时间才释放出可见光的现象。
化学发光则是一种通过化学反应产生激发态，从而产生发光的现象。
总的来说，化学发光是一种通过化学反应产生可见光的现象，其原理涉及到发光物质、激发能量和激发态的稳定性。
通过对这些基本要素的理解，我们可以更好地理解化学发光现象，并且在实际应用中更好地利用化学发光的特性。
化学发光不仅在实验室中有重要应用，也在生活中有着广泛的应用，比如荧光标识、化学荧光剂、生物成像等领域。
希望通过对化学发光原理的深入了解，能够更好地推动化学发光技术的发展和应用。
化学发光_精品文档
化学发光引言化学发光是一种由化学反应产生的发光现象。
它在许多领域中得到广泛应用，包括生物医学研究、荧光标记、环境检测等。
本文将介绍许多常见的化学发光反应和应用。
化学发光的原理化学发光现象是由于某些物质在受到外界刺激后，经历一系列电子能级跃迁和氧化还原反应，从而产生光子。
这种光子的能量来自于反应中释放出的能量，通常表现为可见光的形式。
化学发光可以通过不同的反应途径实现，但原理大致相同。
常见的化学发光反应1. 芳香酮氧化反应芳香酮氧化反应是一种常见的化学发光反应。
在这种反应中，荧光染料被氧化剂氧化，荧光染料的分子结构发生变化，结果产生发光现象。
这种反应被广泛应用于生物医学研究中，例如免疫荧光染色。
2. 有机过氧化物分解反应有机过氧化物分解反应也是一种常见的化学发光反应。
在这种反应中，有机过氧化物与催化剂接触后分解，产生发光。
这种反应被用于生物检测、环境分析等领域。
3. 金属络合物降解反应金属络合物降解反应是一种利用金属离子与配体反应产生发光的化学反应。
在这种反应中，金属离子与配体形成络合物，随后被氧化剂降解，产生发光。
这种反应广泛应用于分析化学领域。
4. 化学电致发光化学电致发光是一种通过电流刺激产生发光的化学反应。
在这种反应中，电流通过化学发光体系，激发物质发光。
这种反应被广泛应用于电致发光显示器和发光二极管等领域。
化学发光的应用化学发光在许多领域中得到广泛应用。
1. 生物医学研究化学发光广泛应用于生物医学研究中，例如免疫荧光染色、基因检测等。
通过荧光标记分子，可以观察细胞内的分子运动和相互作用，从而了解生物过程的机制。
2. 环境检测化学发光被用于环境检测中，例如水质检测、大气污染监测等。
通过测量发光强度，可以快速准确地检测出环境中存在的污染物。
3. 电子器件化学发光被应用于电子器件中，例如发光二极管、电致发光显示器等。
这些器件利用化学发光的原理，实现了高亮度、高能效、长寿命的发光效果。
4. 安全标识化学发光被用于安全标识中，例如逃生标识、防火标识等。
化学发光的原理
化学发光的原理化学发光，是指物质在不受外界光源激发的情况下，自发地发出可见光的现象。
这种现象在自然界和人工合成的物质中都有所发现，比如某些生物体内会产生发光现象，同时在荧光材料、荧光染料和化学发光剂中也能观察到这一现象。
那么，化学发光的原理是什么呢？首先，我们需要了解发光的基本原理。
化学发光的原理主要包括两种，一种是化学发光，即物质在发生化学反应时产生的发光现象；另一种是电化学发光，即利用电化学方法产生发光现象。
这两种原理都是通过激发物质内部的电子或分子来实现的。
在化学发光中，最常见的原理是通过化学反应产生激发态的分子，然后这些激发态的分子会通过放出光子的方式回到基态，从而产生可见光。
这种化学反应的典型例子就是荧光分子的发光原理。
荧光分子在受到激发后，电子跃迁到激发态，然后在短暂的时间内再次跃迁到基态，并释放出光子。
这种发光过程是一个非常快速的过程，通常持续时间很短，因此我们能够观察到的是瞬间的亮光。
而在电化学发光中，电化学方法通过在电极上施加电压，使得物质发生氧化还原反应，从而产生发光现象。
这种原理被广泛应用于发光二极管（LED）和有机电致发光器件（OLED）等光电器件中。
通过控制电场和电流，可以实现对发光颜色和亮度的调节，因此在显示技术和照明领域有着广泛的应用。
总的来说，化学发光的原理是通过激发物质内部的电子或分子，使其处于激发态，然后再回到基态释放出光子，从而产生可见光。
这种发光现象在生物体内和人工合成的材料中都有所发现，并且在生物成像、荧光标记、光电器件等领域有着重要的应用。
随着科学技术的不断发展，我们相信化学发光的原理将会有更加广泛的应用和深入的研究。
化学发光介绍-PPT
肿瘤标志物
组织多肽抗原（TPA） 临床意义：主要见于恶性肿瘤；也可见于急性肝炎、胰腺炎、肝 炎等，但增高程度较轻。 前列腺特异性抗原（PSA） 临床意义：主要见于前列腺癌，是前列腺癌首选和最有应用价值 的肿瘤标志物。前列腺增生、前列腺炎、良性前列腺瘤、肾脏和泌 尿生殖系统疾病时，PSA可轻度升高
乙肝五项标志物的检测 3、HBeAg和HBeAb（HBeAg作为乙肝病毒复制增殖的间接指标） HBeAg阳性：说明病毒复制活跃，传染性强，是乙肝患者具有传
染性指标。可见于急、慢性乙肝和乙肝病毒携带者，如持续阳性， 表明乙肝转为慢性迁延性肝炎 HBeAb 在急性肝炎时，此抗体阳性表明乙肝复制缓解或终止，在慢性肝 炎或肝硬化患者，此抗体阳性说明乙肝病毒DNA与肝细胞发生整 合，提示病情较长，预后不佳。
27
肿瘤标志物
游离前列腺特异抗原（F-PSA）与F-PSA/PSA比值 临床意义：F-PSA 见于前列腺增生和前列腺癌，但前列腺癌增高 程度不如前列腺增生明显。 F-PSA/PSA降低 见于前列腺癌和前列腺增生，但前列腺癌的降低 程度明显高于前列腺增生 前列腺酸性磷酸酶（PAP） 临床意义：见于前列腺癌、前列腺增生，但前列腺癌增高更明显
22
肿瘤标志物
甲胎蛋白（AFP）
临床意义：常见于原发性肝炎、大多数卵巢和睾丸胚胎性肿瘤或 畸胎瘤，生殖腺外生殖细胞瘤，肝母细胞瘤，肝细胞瘤，转移性肝 癌等，也可见于婴幼儿肝炎，肝硬化、急性肝炎、重症肝炎恢复等， 但多为一过性升高，胎盘梗塞、剥离、羊水栓塞、高危妊娠、母儿 血型不合、糖尿病孕妇等血清AFP也升高。
15
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
常见化学发光技术PPT课件
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质，使其发出特定 波长的光，从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时，这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中，通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质，这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时，会 以光子的形式释放能量，从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单，所需的仪器 设备相对不复杂，操作简便，检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ，对检测结果造成干扰，影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应，也可能与其他类似物质发生反
应，导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质，需要妥善保存，增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度，能够检 测到极低浓度的物质，因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽，可以适应不同浓度 的样品检测，减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷，因此 没有放射性污染，对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测，有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平，研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像， 研究细胞结构和功能。
名词解释化学发光
名词解释化学发光化学发光，即发光化学反应，是一种可以让物质发出可见的光的反应。
可以将它本质上理解成一种能够释放出能量及在体内产生可见光的反应。
这种反应是利用物理和化学原理，将某种物质能量转变为光，或者把光能量转换为化学能量的反应。
这种反应一般不会有任何化学变化，只是产生了光。
发光的过程涉及到4种能量转换：电能转换成光能、分子能转换成光能、电子粒子能转化成光能以及原子能转化成光能。
电能转换成光能时，以电流照射物质，产生发光效果；分子能转换成光能时，分子激发态下发出光；电子粒子能转化成光能时，电子位移时发出光；原子能转化成光能时，原子结构发生变化发出光。
一般情况下，化学发光分为两种：单原子和分子发光。
单原子发光是指原子吸收能量，电子发生跃迁，产生发光现象的发光。
这种发光的本质是由原子的内部结构决定的，即原子的全能级结构，是由电子能级结构决定的能量转换过程。
而分子发光与单原子发光不同，它是一种由分子结构决定的发光反应，也就是说，分子结构内部几个原子之间电子位移产生的能量转换。
一般情况下，在正常情况下，许多物质的原子和分子的结构都不具有发光的能力，所以它们不能发出可见的光，除非遇到其他能量影响，比如热、电或光能等，给它们提供合适的条件，使它们的内部能级发生跃迁，从而产生分子发光或单原子发光的效果。
化学发光在化学领域和生命科学领域有着广泛的应用。
在化学方面，它可以用来检测物质的性质，检测反应物的浓度，分析各种特性，也可用来检测毒素、药物和污染物等；而在生命科学领域，它可以用来影像活体组织，检测蛋白质组成等，也可用来监测疾病、记录遗传资讯等。
综上所述，可以看出，化学发光是一种具有重要价值的化学现象，为各种科学研究提供了重要的实验条件，同时也为社会、工业和经济等领域提供了重要的技术支持。
化学发光材料
化学发光材料化学发光材料是一种能够在外部激发下发出可见光的材料，在许多领域中都有广泛的应用。
本文将介绍化学发光材料的基本原理、应用领域以及未来发展方向。
一、化学发光原理化学发光又被称为化学发光发射或荧光（fluorescence），是指在某些物质受到激发后，能够吸收外部能量并以光的形式释放出来。
这种发光现象基于受激发的分子的电子能级变化。
化学发光过程包括三个基本步骤：激发、激发态寿命和发光。
首先，化学发光材料受到外部激发源（如光或电能）的作用，将分子的电子从基态激发到激发态。
其次，激发态分子经过一段寿命，有两种可能的衰变途径，一是通过非辐射衰变转化为基态而不发光，二是通过辐射衰变向周围环境释放出能量并发出光。
最后，发光产生的颜色由材料的分子结构决定。
二、化学发光材料的应用1. 生物医学领域化学发光材料在生物医学领域中有着广泛的应用。
例如，生物标记技术中常用的荧光染料、荧光探针和荧光微粒等都是化学发光材料。
这些材料可以用于细胞成像、蛋白质检测、基因表达分析等多个方面，为生物学研究提供了有力的工具。
2. 环境监测与安全防护化学发光材料在环境监测和安全防护方面也发挥着重要作用。
以化学发光为基础的传感器可以用于检测空气中的有害气体、水质中的重金属离子以及食品中的有害物质等。
此外，发光材料还可以被用作防伪标识、光学信号器件等，提高产品的安全性和可追溯性。
3. 光电子器件化学发光材料在光电子器件中有广泛应用。
发光二极管（LED）是一种利用化学发光原理制造的光源，具有高效、长寿命、低功耗等优点，已广泛用于室内照明、显示器件和车辆照明等领域。
三、化学发光材料的未来发展方向未来，化学发光材料的研究与应用将会进一步拓展。
以下是几个可能的发展方向：1. 新型发光材料的合成科学家们将继续探索新材料的合成方法，以获得更高的发光效率和更广泛的应用范围。
例如，研发新型的有机荧光材料、稀土离子掺杂的无机材料等，以满足不同领域对发光材料的需求。
化学发光 参考方法
化学发光参考方法1. 化学发光是指通过化学反应产生的能量释放出可见光的现象，在科学领域中有着广泛的应用。
2. 化学发光的研究方法常常通过测量反应的发光强度和持续时间来评估反应过程。
3. 一种常见的化学发光研究方法是利用光电倍增管或光电探测器来测量光的强度和波长。
4. 另一种常见的方法是利用荧光光谱仪或发光光谱仪来分析发光物质的光谱特性。
5. 利用荧光显微镜观察化学发光过程中物质的荧光特性也是一种常见的研究方法。
6. 通过调节反应条件，如温度、pH值、添加催化剂等来研究化学发光反应的影响也是一种有效的方法。
7. 利用高灵敏度的光电探测器和放大器来检测微弱的化学发光信号是一种常见的方法。
8. 利用光学成像技术观察化学发光反应的过程和动态变化，如荧光成像技术或放射性测定等。
9. 通过实验室制备发光试剂和标记物质来研究化学发光的基本特性和应用潜力。
10. 发展新型的化学发光探针和传感器，如利用纳米材料或生物标记物等。
11. 通过多通道数据采集系统对不同波长的发光信号进行同时监测和分析。
12. 利用荧光共振能量转移技术（FRET）来研究分子间的化学发光过程和信号传递机制。
13. 进行化学反应动力学研究，通过测量发光强度随时间的变化来分析反应速率和动力学参数。
14. 利用冷光技术来研究低温条件下的化学发光反应机制和性质。
15. 在生物医学领域，利用化学发光技术来标记生物分子并进行生物成像研究，如细胞内钙离子浓度的动态变化等。
16. 通过红外光谱仪分析化学发光反应产生的化合物和产物的结构和化学特性。
17. 利用质谱技术研究化学发光反应中的中间产物和反应机制。
18. 开发利用化学发光反应进行环境监测和污染物检测的传感器和监测系统。
19. 通过研究化学发光反应的光谱特性和波长分布来设计新型的发光材料和发光器件。
20. 利用电化学技术研究化学发光反应的电化学特性和机理。
21. 通过建立化学发光仪器和设备来实现对化学发光现象的自动化测量和控制。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一些化学反应能释放足够
的能量把参加反应的物质激
发到能发射光的电子激发态，
若被激发的是一个反应产物
分子，则这种反应过程叫直
接化学发光。反应过程可简单地描述如下：
A十B
C*
C*
C＋ h·γ
其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态。
若激发能传递到另一个未参加化学反应
的分子D上，使D分子激发到电子激发态，
在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三 联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体)发生 免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物， 这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。
当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合 的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应， 使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度 与待测抗原的浓度成正比。
第一节 概 述
四大标记技术
放
酶
射
免
免
疫
疫
技
技
术
术
荧
发
光
光
免
免
疫
疫
技
技
术
术
发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态 （较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回 到基态，并释放光子的过程。 根据形成激发态分子的能量来源不同可分为: 光照发光、生物发光、化学发光等。
光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧 光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁 到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可 见光（荧光）。
一、化学发光剂
在化学发光反应中参与能量转移并最终以 发射光子的形式释放能量的化合物，称为化 学发光剂或发光底物。
能作为化学发光剂的条件： ①发光的量子产率高； ②它的物理-化学特性要与被标记或测定的
物质相匹配； ③能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物； ④其化学发光常是氧化反应的结果； ⑤在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。
分配样品, 磁颗粒 和试剂
孵育 使反应物
结合
在磁场中 清洗去除 未结合物质
加入 底物 产生 信号
孵育, 促使ห้องสมุดไป่ตู้号
的产生
信号 检测
三、电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析 （electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体， 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应，它包括电化学和化学发光两个过程。
电化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫测定示意图
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
四、临床应用
1. 甲状腺激素 2． 生殖激素 3． 垂体激素和皮质激素 4． 贫血因子 5． 肿瘤标志物 6． 感染性疾病 7． 糖尿病 胰岛素、血清C-肽、血浆胰高糖素等。 8． 心脏标志物 9． 病毒标记物 10．过敏性疾病 11．治疗药物监测
4. N-羟基琥珀酰亚胺活化法（羧基）
影响标记的因素
1．发光剂的选择 2．被标记蛋白质的性质 3．标记方法的选择 4．原料比 5．标记率 6．温度 7．纯化与保存
第三节 化学发光免疫分析的类型
一、直接化学发光免疫分析
用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶 酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和 NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分 解、发光 。
思考题
1．什么是发光免疫分析？什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光与荧光的区别？化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂有哪些？其发光原理和特点是？
思考题
6．三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？ 7．三丙胺在电化学发光中起什么作用？ 8. 发光剂的标记有那些方法？影响因素有那些？ 9．什么是直接化学发光免疫分析？其特点是什么？ 10．什么是化学发光酶免疫分析？其特点是什么？
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用
思考题 小结
发光免疫分析（CLIA）:是将发光分析和免 疫反应相结合而建立起来的一种新的检测 微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。
1．鲁米诺及其衍生物 2．AMPPD
1．鲁米诺 鲁米诺发光原理
2．AMPPD
〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕
二、发光剂的标记技术
1. 碳二亚胺（EDC）缩合法（羧基或氨基）
2. 过碘酸钠氧化法（芳香伯胺和脂肪伯胺）
3．重氮盐偶联法（芳香胺）
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内 的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧 光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发 态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子 的形式释放出来。
一、化学发光
化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反应过 程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂)在化学反 应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产 物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当 电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出 能量，这一现象称为化学发光。
D分子从激发态回到基态时发光，这种过
程叫间接化学发光。反应过程可表示如下：
A十B
C*
C*十D
C十D*
D*
D十h·γ
二、化学发光效率
化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以 及光谱范围，完全由发光物质的性质所决定，每一 个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同 的化学发光效率。
第二节 化学发光剂和标记技术
•四个标记：酶标记技术、放射免疫标记 技术、荧光素标记技术与化学发光标记 技术。
化学发光免疫分析技术
教学目标及任务
一、掌握化学发光免疫技术的概念 二、掌握化学发光免疫分析基本原理 三、熟悉化学发光免疫分析的类型 四、了解临床应用 五、了解发展与展望
第九章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
2．三联吡啶钌 三联吡啶钌 [RU(bpy)3]2+是 电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA） 在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化 反应。
三联吡啶钌
电化学发光剂反应原理
㈡ 酶促反应发光剂： 是利用标记酶的催化作用，使发光剂（底 物）发光，这一类需酶催化后发光的发光剂 称为酶促反应发光剂。
临床免疫学检验
（ Clinical Immunoassay）
昆明医科大学附属甘美医院检验医学教研室 田敏
(Min Tian)
学好临床免疫检验，必须掌握“一个 核心，三个要素与四个标记”。
一个核心： 抗原抗体反应 (Antigen-antibody interaction) •三个要素：抗原、抗体和免疫细 胞
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，在与反应 体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成 固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入 AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基 团而发光。
碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图
分析步骤
㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的
发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶
酮是该发光反应体系的发光体。
磁微粒模式图
特点 ▪ 抗原和抗体结合与未结 合部分的易分离
Y
二、化学发光酶免疫分析
化学发光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay， CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP） 或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗 体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物， 经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系 统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送 至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
小结
• 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃迁到激发态，然后再 返回到基态，并释放光子的过程。
• 化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能使分子激发而发光。 • 化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或
抗体的标记免疫分析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫 分析和电化学发光免疫分析。
㈠ 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体 (或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发 生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶 （HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、 H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。
辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图
由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的 光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准 曲线上计算出待测抗原的含量。
直接化学发光的原理
--- 夹心法
+ + 磁微粒 抗体