生物素亲和素系统连接超微泡与阳离纳米脂质体新型的基因载体齐岳
临床免疫学：第十三章 生物素-链霉亲和素标记免疫技术
6
亲和素活性单位 以亲和素结合生物素的
量来表示； 结合1μg生物素所需要
的亲合素量为1个亲合素 活性单位。一般1mg亲合 素约含13～15个活性单 位。
7
链霉亲合素（streptavidin,SA） 与亲合素(A)有类似生物学特性的一种蛋白质。
由Streptomyces avidinii菌分泌的一种蛋白 质，SA分子量为65000，由4条序列相同的肽链 构成，每条SA肽链可以结合1个生物素分子。 SA与A的ka虽然相同，但在实际应用中其检测 灵敏度明显优于A。
糖基化
多糖基化
无糖基化
结合生物素能力
4
4
亲和常数（K）
1015
1015
活性（U）
13～15
15～18
亲和素和链霉亲合素理化特性比较 9
第二节 生物素和亲和素 标记物的制备
一、生物素标记物的制备
1、作为标记物，活化生物素直接标记大分子生物活性 物质如抗原、抗体；
根据抗原或抗体分子所带可标记基团的类型（氨基、醛基或巯 基）以及分子的等电点
17
BAB法(直接法)检测原理示意图
18
二、标记亲和素－生物素法（labelled avidin-biotin tech, LAB）
直接法
间接法
LAB法(直接法)检测原理示意图
20
三、亲和素－生物素化酶复合物法（ABC）
ABC-双抗体夹心ELISA检测原理示意图
四、酶－抗酶－亲和素－生物素化酶 复合物法（PAP-ABC）
tlymphocytebab法直接法检测原理示意图二标记亲和素生物素法labelledavidinbiotintechlab直接法间接法lab法直接法检测原理示意图abc双抗体夹心elisa检测原理示意图三亲和素生物素化酶复合物法abcpapabc复合法检测原理示意图四酶抗酶亲和素生物素化酶复合物法papabc第四节技术评价与应用领域一技术评价1生物素b和亲和素a之间的高亲和力使反应试剂经得起高度稀释降低或避免了非特异性结合
罗丹明B与基因共负载纳米粒子的制备与性能
８０６～１７ ． ． 为胆 固醇分 子 的氢 特 征 峰．与 纯 Ｐ Ｉ Ｅ 相 比，聚 乙烯 亚胺链 上接 枝胆 固醇后 ， ６２～４谱 峰 明
购 自国药 集 团化 学试 剂有 限公 司 ；ｐ Ｇ Ｐ ４ ３ ｐ 购 自 Ｃｏ ｅ ｃ 司 ；鱼精 Ｄ Ａ（ Ｅ Ｆ （ ７ ３ｂ ） ｌｎｔ ｈ公 ｅ Ｎ 钠盐 ， 纯 级 ） 高 和
羟 乙基 哌 嗪乙磺 酸 （ Ｐ ｓ ＨＥ Ｅ ，高纯 级 ） 自 Ａ ｅｃ 司． 购 ｍｒｓｏ公
１ ２ Ｐ ＩｇＣ ｏ 两亲 聚合 物的 制备及 表征 ． Ｅ —－ ｈ ｌ 称 取 ３ ８ｇＰ Ｉ ． Ｅ 溶解 于 】 Ｌ无 水 二 氯 甲烷 溶 液 中 ，在 Ｎ ０ｍ 气保 护 下 ，加 入 １ ０ ０ 三 乙胺．称 取 １ｇ 固醇 酰氯溶 于 ５ｍＬ无 水 二 氯 甲烷 中 ，在 Ｎ 胆 气 保 护 下 缓 慢 滴 加 到 上 述 溶 液 中 ，在 冰 浴 中反 应 １ ．采用 冰 乙醚沉析 产物 并真 空 干燥 后 保存 ．分 别 以氘 代 甲醇 和氘 代 水 为溶 剂 ，测 定 Ｐ Ｉ － ｈ ｌ ２ｈ Ｅ － Ｃ 。 的 ｇ ＨＮ ＭＲ； 照文 献 ［ ０ 中的方法 ， 用芘荧 光探 针光 谱法 测定 Ｐ ＩｇＣ ｏ 的 临界胶束 浓度 ． 参 １］ 采 Ｅ ．— ｈ ｌ
导人患 者体 内，从而 达到 治疗 和预 防疾病 的 目的 ， 中非病 毒 基 因传 递体 系 的 构建 成 为 当前 的研 究 热 其
点 ．已有研究 发现 ， 治疗 基 因与抗 癌药 物 同时 输送 到肿 瘤 细胞 中 ，充 分 发挥 两 者 的协 同增强 作 将 用 ，能达 到 更好 的肿 瘤 治 疗 效 果 ！ ．基 因 与药 物 复 合 的多 元 联 合 治疗 已成 为癌 症 治 疗 的重 要 发 展
生物素化rna下拉法
生物素化rna下拉法
生物素化RNA下拉法（Biotinylated RNA pulldown）是一种用于研究RNA与其他生物分子（如蛋白质或DNA）相互作用的实验技术。
在这种方法中，生物素标记的RNA（通常是转录后修饰过的RNA）被用作亲和分子，用于寻找和富集与其相互作用的其他生物分子。
具体步骤包括：
一、生物素化RNA的合成：首先，目标RNA被通过化学或生物学方法与生物素（biotin）标记。
这样的生物素化RNA就可以与生物素结合亲和物质（如Streptavidin）形成非共价结合。
二、RNA与生物分子的共价交联：生物素化RNA与其所要研究的生物分子（例如蛋白质）进行共价交联，以固定它们之间的相互作用。
三、亲和纯化：交联后的生物素化RNA与其结合的生物分子一起通过亲和纯化的方法（如亲和层析）进行富集和纯化。
四、分析和鉴定：富集后的样品可以通过多种分析技术（如质谱、免疫印迹、或核酸测序）来鉴定与RNA相互作用的生物分子。
生物素化RNA下拉法通常用于研究RNA在细胞中的功能、相互作用和调控机制，以及发现RNA结合蛋白质或RNA结合DNA的新的生物分子。
巯基化透明质酸包封的仿生交联基因微载体的构建
装 ，构建 了壳层二硫键仿生交联 的基 因超分 子组装体 （ Ｅ／ Ｎ ／ Ａ—Ｈ） Ｐ ＩＤ Ａ Ｈ Ｓ ．凝胶 电泳 结果表 明 ， 组装体 有 该 很好的 Ｄ Ａ缔合特性 ．壳层 的仿生交联使基 因超分子组装体在生理盐 溶液 中的稳定性 得到有效 改善 ，细胞 Ｎ 毒性显著降低 ，并能有效转染细胞 ，为非病毒基 因传递体 系的设计 提供了新途径．
胱 甘肽 对壳 层二 硫键 的“ 生物 开关 ” 效应 ， 有望 实 现细胞 内的解 组装 响应 ，为高效 安 全 的非 病 毒基 因载 体 的设 计提 供切 实 可行 的新 思路 ．
１ 实 验 部 分
１ １ 试 ． 剂
支 化 聚 乙烯 亚胺 （ Ｐ Ｉ ｂ Ｅ ，分 子 量 ２ ０ ０ 和 胱 胺 二 盐 酸盐 购 自 Ｓｇ — ｌｒ ｈ公 司 ；透 明 质 酸 钠 盐 ５０ ） ｉ Ａ ｄｉ ｍａ ｃ （ 子量 为 ２ ０ ０～ ０ ０ ０ 购 自山东 福瑞 达 生化 有 限公 司 ；１羟 基 苯 并 三唑 （ Ｏ ｔ 和 １（ 一 甲氨 基 分 ００ ４０ ０ ） 一 Ｈ Ｂ ） 一３ 二 丙基 ）３乙基 碳二 亚胺 盐 酸盐 （ Ｄ ・ Ｃ ） 自上 海延 长 生 化 科 技发 展 有 限公 司 ； 硫 苏 糖 醇 （ Ｔ ） 一一 Ｅ Ｃ Ｈ １购 二 Ｄ Ｔ
购 自 ＢｏＢ ｓ 公 司 ； Ｅ Ｆ （７ ３ ｐ 购 自 Ｃｏｅ ｃ 司 ； ５一 代 － 一２硝基 苯 甲酸 ） Ｄ Ｎ 购 ｉ ａｉ ｃ ｐ Ｇ Ｐ ４ ３ｂ ） ｌ ｔ ｈ公 ｎｅ ５， 二硫 双 （一 （ Ｔ Ｂ） 自 日本 株式 会社 同仁化 学研 究所 ；鱼精 Ｄ Ａ（ 盐 ，高纯 级 ） 羟 乙基 哌 嗪 乙磺 酸 （ ｅｅ） 自 Ａ ｒ Ｎ 钠 和 Ｈ ｐｓ 购 ｍｅ—
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
生物素亲和素系统连接超微泡与阳离纳米脂质体新型的基因载
体齐岳
目的利用生物素亲和素系统连接超微泡与阳离子纳米脂质体．制备一种新型的基冈载体。
方法机械振荡法制备生物素化超声微泡 (BioMB)。
薄膜分散膜挤压法制备生物素化阳离子纳米脂质体 (BioCNIP)。
采用生物素亲和素系统偶联 Bio—MB与 BioCNIP。
以非生物素化超声微泡 (MB)加非生物素化阳离子纳米脂质体 (CNIP) 组作为对照，行激光共聚焦显微镜观察复合物彤态与连接效果。
结果 BioCNIP的平均粒径约 291．7nm，平均表面电荷约 (21．6± 2．i)mV。
激光共聚焦显微镜下 Bio—MB + Bio—CNIP 组可见绿色 BioMB壁因连接 BioCNIP而不光滑．周围可见红色小圆形点状 Bio—CNLP 呈花环状聚集，而 MB+CNIP组 MB壁光滑．周围未见 CNIP 聚集。
结论生物素亲和素系统可成功将 BioCN1P与 Bio—MB 牢固连接．有卑为肿瘤基因治疗提供一种新的手段，为探索基因载体和转染方法提供一种新的思路。
基因治疗已成为当前肿瘤治疗研究的热点。
超声靶向微泡爆破 (ultrasound—targetedmicrobubblede— Struct1On，UTMD)介导基因定位释放是当前一种新型、无创的靶向性基因治疗技术，可显著提高基因转染效率。
但微泡携带基因量难以满足治疗需要。
目前阳离子脂质体是一种成熟的非病毒基冈投递载体．其携基因能力强，但靶向性与转染效率不够。
基于两者的优势与不足，本实验拟通过生物素亲和素系统将超声微泡与纳米阳离子脂质体连接，制备一种新型的高效的基因载体，并通过激光共聚焦显微镜观察其连接效果。
CT成像显影剂
MRI磁共振成像成像显影剂
Gd类、含Mn类的顺磁阳性显影剂
含氧化铁的超顺磁物质
影像对比剂
活体荧光造影剂
T2对比剂（顺磁性铁锰）
MRI造影
CT造影
荧光造影
超声造影
SPECT影像
影像双模态
MRI的T1造影剂
T1造影剂
Gd类的顺磁阳性显影剂
含Mn类的顺磁阳性显影剂
氧化铁的超顺磁物质
MRI成像显影剂
双核素PET-CT显影剂/示踪剂
多层面螺旋CT胆影葡胺显影剂
生物荧光成像CT显影剂
SPECT/CT显影剂
稀土上转换纳米荧光探针CT显影剂
巴胺转运蛋白显影剂
SPECT/CT同机融合脑成像
18F-FDG显像剂
钡磷灰石显影剂
新型含氟药物氟代吲哚美辛PET显影剂
ct/mri双显影剂
氟-19磁共振/荧光双模态显影剂(19F MRI) Au/Fe3O4复合CT/MRI双模态造影剂
四氧化三铁纳米粒子的磁共振成像造影剂T2类造影剂Fe3O4-BSA
Gd-DTPA修饰的金纳米粒子Au-BSA-Gd-DTPA(Gd-Au NPs) 新型TO-Au纳米粒子荧光/CT
CT成像造影剂(Au-BSA-DTA)
荧光/T1-MRI双功能造影剂
wyf 03.31。