脂质体制备方法

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脂质体的制备实验报告

脂质体的制备实验报告

脂质体的制备实验报告脂质体的制备实验报告引言脂质体是一种由磷脂类物质构成的微小球体,具有良好的生物相容性和生物可降解性,因此在药物传递和生物医学领域具有广泛的应用。

本实验旨在探究脂质体的制备方法及其性质。

材料与方法实验所需材料包括磷脂、胆固醇、药物(如硝酸甘油)、有机溶剂(如氯仿、甲醇)、无水乙醇等。

制备过程如下:1. 溶解磷脂和胆固醇:将所需量的磷脂和胆固醇溶解于有机溶剂中,如氯仿和甲醇的混合物中,以获得磷脂和胆固醇的混合液。

2. 脂质体的形成:将药物溶解于混合液中,搅拌均匀,使药物与磷脂和胆固醇相互作用。

3. 溶剂挥发:将混合液转移到圆底烧瓶中,使用旋转蒸发仪将有机溶剂挥发,直到获得脂质体的混悬液。

4. 脂质体的稳定:向混悬液中加入一定量的无水乙醇,使脂质体进一步稳定。

结果与讨论通过上述制备方法,我们成功制备了硝酸甘油脂质体。

观察到脂质体呈现微小球形状,粒径均匀分布。

此外,我们还对脂质体的性质进行了一系列的实验和分析。

1. 粒径分析:使用动态光散射仪测定脂质体的平均粒径。

结果显示,制备的脂质体平均粒径为100-200纳米,符合药物传递的要求。

2. 药物包封率:采用高效液相色谱法测定药物包封率。

结果显示,硝酸甘油的包封率达到了90%以上,表明脂质体在药物传递中具有较高的效率。

3. 药物释放性能:通过离心法和体外释放实验,研究了脂质体的药物释放性能。

结果显示,硝酸甘油脂质体具有缓释性能,能够持续释放药物,延长药物的作用时间。

结论本实验成功制备了硝酸甘油脂质体,并对其性质进行了详细的研究。

结果表明,制备的脂质体具有良好的粒径分布、高包封率和缓释性能,适用于药物传递和治疗。

脂质体作为一种重要的药物传递系统,具有巨大的应用潜力,可以进一步研究其在其他领域的应用。

结语通过本次实验,我们对脂质体的制备方法和性质有了更深入的了解。

脂质体的制备过程相对简单,但对于药物传递的效果有着重要的影响。

进一步的研究可以探索不同的制备方法和改进药物的包封率和释放性能,以满足不同药物传递的需求。

脂质体的制备方法

脂质体的制备方法

脂质体的制备方法
脂质体是一种由两层磷脂分子构成的微小囊泡,内部可以包裹
水溶性或脂溶性的药物。

由于其良好的生物相容性和药物传递性能,脂质体在药物输送领域得到了广泛的应用。

下面我们将介绍脂质体
的制备方法。

首先,脂质体的制备需要选择合适的磷脂。

常用的磷脂有卵磷脂、大豆磷脂、磷脂酰胆碱等。

在实验室条件下,我们可以根据需
要选择不同种类的磷脂来制备脂质体。

其次,将所选的磷脂溶解在有机溶剂中,得到磷脂溶液。

常用
的有机溶剂有氯仿、甲醇、乙醇等。

在此过程中需要注意控制温度
和溶剂的选择,以确保磷脂能够完全溶解。

接下来,将药物溶解在水相中。

需要注意的是,药物的选择应
当考虑其溶解度和药效学特性。

将药物溶液缓慢滴加到磷脂溶液中,并利用超声波或机械搅拌等方法使两相充分混合。

然后,利用旋转蒸发、薄膜超滤、凝胶层析等方法去除有机溶剂,得到脂质体悬浮液。

在此步骤中需要注意控制温度和压力,以
避免对脂质体结构的破坏。

最后,通过超声处理、高压均质等方法对脂质体悬浮液进行处理,得到均匀、稳定的脂质体悬浮液。

在此过程中需要注意控制处
理时间和能量密度,以确保脂质体的质量和稳定性。

综上所述,脂质体的制备方法包括选择合适的磷脂、溶解磷脂、药物的溶解和混合、去除有机溶剂以及最后的处理步骤。

在实际操
作中,需要严格控制各个步骤的条件,以确保脂质体的质量和稳定性。

希望以上内容能够对您有所帮助。

脂质体的制备及其应用

脂质体的制备及其应用

脂质体的制备及其应用近年来,脂质体在制药领域里展现出了广阔的应用前景。

从初期的制备到现在的技术逐渐成熟,脂质体已经成为制药工业中最热门的制剂载体之一。

本文将介绍脂质体的制备及其应用。

一、脂质体的制备1. 胆固醇和磷脂共混法该制备法是最早的脂质体制备方法之一,实现较为简单。

只需将胆固醇和磷脂以特定比例共混,并使用水或其他溶剂进行溶解,即可制备出脂质体。

2. 薄膜法该制备法是制备脂质体的另一种常见方法。

将磷脂及其他组份按一定比例混合,并在热水浴中加热搅拌,并持续将其挤压,形成薄膜,薄膜会自行聚集形成脂质体。

3. 超声波法该制备法利用超声波的力量将水相和油相分散均匀,从而形成脂质体。

简单易行且可重复性良好,所以是制备脂质体最常用的方法之一。

二、脂质体的应用1. 药物传递脂质体是一种非常好的药物传递载体,由于其构成和细胞膜相似,因此可有效载药物,并快速进入人体细胞。

脂质体还可以用于治疗肿瘤和炎症。

2. 增强药物传递的稳定性很多药物容易被分解,但是通过使用脂质体,这些药物可以被稳定传递,并防止药物在消化过程中被分解。

对于某些对稳定性要求极高的药物,如RNA、DNA和酶,脂质体的应用显得尤为重要。

3. 疫苗传递最近几年,脂质体在疫苗传递方面展现出自己的优势。

将疫苗包裹在脂质体中,可呈现出更好的抗原肽处理,并取得良好的抗体反应。

这让脂质体成为了一种非常良好的疫苗传递载体。

4. 脂质体在饮食保健品中的应用还有一些饮食保健品在其制备过程中也可以使用脂质体。

例如,脂质体可用于保护鱼油或其他有益成分的品质和稳定性,并让它们更方便地传递到人体内。

总的来说,脂质体已成为制药工业中不可或缺的一部分,并在医药、食品及化妆品等领域发挥着重要作用。

脂质体的制备方法也在不断更新,未来必将有更多的应用领域,为人类健康和生活发挥更大的作用。

脂质体制备的方法

脂质体制备的方法

脂质体制备的方法脂质体是一种由脂质分子组成的微细粒子,主要用于制备及输送药物、基因和化妆品成分等。

脂质体具有优异的生物相容性和生物可降解性,并且可以有效稳定和保护被包封的药物或成分。

目前,常用的脂质体制备方法包括薄膜溶解法、乳化法、胶束法、膜断裂法、气相法等。

下面将详细介绍这些方法。

薄膜溶解法是一种利用脂质和溶剂溶解及薄膜形成原理制备脂质体的方法。

首先,选择适当的脂质和溶剂。

常用的脂质有磷脂类(如磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸)、脂肪醇(如固体脂肪醇)、脂肪酸等。

常用的溶剂有乙醇、二甲酚、甲醇和酯类溶剂。

然后,将脂质和溶剂溶解在一起,通过快速旋转薄膜机或制备配制机将溶液薄膜扩散到玻璃底板上,在适当的温度和时间下形成脂质质体。

最后,通过超声处理或其他方法将脂质质体分散成脂质体悬浮液。

乳化法是一种利用乳化剂和脂质相互作用生成脂质体的方法。

乳化剂常用的有表面活性剂和共乳剂。

表面活性剂包括非离子型(如Tween系列)和阴离子型(如脂肪酸钠盐)。

共乳剂包括长链脂肪醇(如固体脂肪醇)、糖(如蔗糖、葡萄糖)和胆汁酸类。

首先,将乳化剂和脂质在适当比例下溶解在无水有机溶剂中。

然后,加入水相,通过机械剪切或超声处理将脂质和乳化剂形成乳液。

最后,通过去除有机相或冷冻干燥等方法获得脂质体。

胶束法是一种利用表面活性剂和脂质相互作用形成胶束后制备脂质体的方法。

首先,选择适当的表面活性剂,如磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸等。

然后,将表面活性剂溶解在溶剂中,通过搅拌、超声处理等方法形成胶束。

最后,将胶束与药物或成分混合,通过快速稀释或其他方法获得脂质体。

膜断裂法是一种利用高压处理使脂质质体断裂形成脂质体的方法。

首先,通过之前介绍的方法制备脂质质体悬浮液。

然后,将悬浮液经过高压处理,使脂质质体断裂成小颗粒,形成脂质体。

最后,通过超声处理或其他方法除去未断裂的脂质颗粒,获得脂质体。

气相法是一种利用空气或氮气吹淋使脂质溶液蒸发形成脂质体的方法。

脂质体制备方法

脂质体制备方法

2 脂质体的制备方法2.1 薄膜蒸发法该方法是将脂质及芯材(脂溶性药物)溶于有机溶剂,然后将此溶液置于大圆底烧瓶中,再旋转减压蒸干,磷脂在烧瓶内壁上会形成一层很薄的膜,然后加入一定量的缓冲溶液(生理盐水),充分振荡烧瓶使脂质膜水化脱落,即可制得脂质体。

尽管薄膜分散法是使用最广泛的方法,由于这种方法比较原始,所以尚存在较多缺点。

用该方法制备得到的脂质体的粒径较大且不均匀,为了使其粒径更小、更均匀,可通过超声波仪处理,在一定程度上降低脂质体的粒径,从而提高包封率。

如采用此法制备得到的细辛脑脂质体的包封率达54. 1%[5]。

2.2 超声波法MLVs的混悬液经超声波处理,再通过 Sepharose 2B或4B柱色谱仪可去除较大的脂质体和MLVs 。

常用的方法有探针型和水浴型。

小量脂质悬液(高浓度脂质或黏性水溶液)需要高能量时用探针型。

水浴型更适于大量的稀释脂质。

郑宁等[6]采用薄膜 -超声分散法制备依托泊苷脂质体,按均匀设计的最优组合制备脂质体的平均包封率为(61.58±0.83)% ,粒径均小于2卩m,体外释药达到了长效缓释的作用,60Co灭菌后脂质体较稳定。

李维凤等⑺以薄膜-超声法和乙醚注入法制备硝苯地平脂质体,结果表明薄膜蒸发法和超声法综合使用,所得脂质体粒径均匀,粒度小,且多为单室。

2.3复乳法(二次乳化法)这种方法是先将脂质溶于有机溶剂,加入待包封芯材的溶液,乳化得到W/O初乳,其次将初乳加入到 10 倍体积的水溶液中混合,进一步乳化得到 W/O/W 乳液,然后在一定温度下去除有机溶剂即可得到脂质体,其包封率变化较大,一般为20%-80% 。

通过研究发现,在第二步乳化过程和有机溶剂的去除过程中, 对脂质体的粒径有较大影响的因素是温度, 较低的温度有利于减小脂质体的粒径。

姚瑶等[8]采用二次乳化法制备的酪丝亮肽多囊脂质体,不仅稳定性好,80%的粒径分布在 20-30卩m,且包封率为 92. 43%。

脂质体的制备和应用

脂质体的制备和应用

脂质体的制备和应用脂质体是一种具有生物相容性和可控释放性的纳米粒子。

它由一层或多层脂质分子组成,内部可装载药物或其他活性分子,可用于制备药物纳米载体、化妆品、食品添加剂等。

本文将从脂质体的制备和应用两个方面进行论述。

一、脂质体的制备脂质体的制备方法主要有两种:膜溶法和乳化法。

膜溶法是将两种或多种脂质在适当的溶剂中混合,使其形成可溶的薄膜,再通过一定的方法使膜状脂质分子团聚为球形的脂质体。

这种制备方法能够制备出不同的脂质体结构,如单层脂质体、多层脂质体、脂质体纳米囊泡、异构脂质体等,各种结构的脂质体在载药和释药方面都有其独特的特点。

但这种方法制备出的脂质体的形状和大小比较难控制,存在着较大的批次差异性。

乳化法是将一定的脂质、表面活性剂、油相和水相等成分按一定的比例混合,然后进行超声波或机械搅拌等加工,制备出直径约为50~200 nm的脂质体。

由于该方法制备的脂质体比较均匀,易于批量制备,成本较低,因此是制备脂质体的常用方法之一。

二、脂质体的应用脂质体作为一种优良的药物纳米载体,在药物传递、治疗等方面发挥着重要作用,下面分别从药物纳米载体、化妆品、食品添加剂等方面进行阐述。

1. 药物纳米载体脂质体可作为药物纳米载体来输送药物,可用于改善药物的生物利用度、提高药物的稳定性、降低药物副作用和缩短药物作用时间等。

临床上,脂质体已得到广泛应用,如含有异丙肾上腺素的脂质体制剂,用于治疗心血管系统疾病;脂质体氟替卡松乳剂,用于治疗儿童哮喘等。

此外,脂质体还可以结合靶向纳米技术,通过修饰脂质体表面的靶向物质,使其“找到并粘附”在靶细胞上,进一步提高药物的靶向性和效果。

2. 化妆品脂质体还可用于化妆品的制备和应用。

与普通化妆品不同,脂质体化妆品能够带来更好的修复效果。

这是因为脂质体具有良好的生物相容性,可渗透入皮肤细胞、发挥长时间的药效;同时脂质体尺寸小,能够更好地适应皮肤细胞的形态和结构。

值得一提的是,脂质体还能够改善化妆品中活性成分的稳定性,如纳米透明质酸脂质体化妆品,能在保湿的同时降低透明质酸分子的分解,从而更好地发挥保湿效果。

脂质体实验报告

脂质体实验报告脂质体实验报告引言:脂质体是一种由磷脂和胆固醇等成分组成的微小球状结构,具有良好的生物相容性和生物降解性。

由于其独特的结构和性质,脂质体在药物传递、基因治疗和化妆品等领域中得到广泛应用。

本实验旨在研究脂质体的制备方法和性质,以期为进一步应用脂质体提供实验依据。

实验一:脂质体的制备方法一般来说,脂质体的制备方法主要包括薄膜溶解法、乳化法和胶束法等。

本实验选择薄膜溶解法制备脂质体。

实验材料:1. 磷脂(如卵磷脂)2. 胆固醇3. 乙醇4. 磷酸缓冲液实验步骤:1. 将磷脂和胆固醇按照一定比例称取,并加入乙醇中,制备脂质体溶液。

2. 将脂质体溶液用玻璃棒搅拌均匀,使磷脂和胆固醇充分溶解。

3. 将脂质体溶液转移到磷酸缓冲液中,使脂质体形成。

实验结果:经过制备,我们成功得到了形态规整、粒径均一的脂质体。

实验二:脂质体的性质研究为了研究脂质体的性质,我们进行了一系列实验。

实验一:脂质体的稳定性我们将制备好的脂质体溶液放置在不同温度下,观察其稳定性。

结果显示,脂质体在室温下稳定性较好,但在高温下容易发生相互融合。

实验二:脂质体的药物传递性能我们选择一种常用的抗癌药物,并将其包载到脂质体中。

通过体外释放实验发现,脂质体具有较好的药物缓释性能,能够延长药物的释放时间。

实验三:脂质体的细胞摄取能力我们将标记有荧光染料的脂质体与细胞共同培养,并观察细胞对脂质体的摄取情况。

结果表明,脂质体能够有效地被细胞摄取,并释放荧光染料。

实验四:脂质体的毒性研究为了评估脂质体的安全性,我们进行了细胞毒性实验。

结果显示,脂质体对细胞没有明显的毒性作用,具有较好的生物相容性。

结论:通过本实验,我们成功制备了形态规整、粒径均一的脂质体,并研究了其性质。

脂质体具有良好的稳定性、药物传递性能和细胞摄取能力,并且对细胞没有明显的毒性作用。

这些结果为脂质体在药物传递和其他领域的应用提供了实验基础。

未来,我们将进一步研究脂质体的制备方法和性质,以期推动其在临床和科研中的广泛应用。

脂质体的制备方法

脂质体的制备方法
脂质体是一种在生物医药领域中应用广泛的载体,可以用于药物传递、基因转
染等领域。

脂质体的制备方法多种多样,下面将介绍几种常用的制备方法。

首先,常见的脂质体制备方法之一是薄膜溶解法。

这种方法是将所需的脂质和
胆固醇按一定的摩尔比溶解在有机溶剂中,然后蒸发除去溶剂,得到薄膜,再用含有水溶液进行重溶,形成脂质体。

这种方法简单易行,制备的脂质体质量较好。

其次,还有脱水膜膨胀法。

这种方法是将所需的脂质和胆固醇溶解在有机溶剂中,然后蒸发除去溶剂,得到脂质膜,再用含有脱水剂的溶液使脂质膜膨胀,形成脂质体。

这种方法制备的脂质体内部结构较为均匀,适用于一些特殊药物的载体。

另外,还有超声法制备脂质体的方法。

这种方法是将所需的脂质和胆固醇溶解
在有机溶剂中,然后通过超声波作用使其形成脂质体。

这种方法制备的脂质体颗粒大小较为均匀,适用于一些需要粒径较小的药物载体。

除此之外,还有脂质体凝胶法。

这种方法是将所需的脂质和胆固醇溶解在有机
溶剂中,然后加入水溶液,形成脂质体凝胶,再用超声或机械方法使凝胶分散成脂质体。

这种方法制备的脂质体内部结构较为稳定,适用于一些需要长时间存储的药物。

总的来说,脂质体的制备方法多种多样,可以根据具体的需要选择合适的方法。

不同的方法制备的脂质体具有不同的特点,可以满足不同的药物载体需求。

希望以上介绍的方法可以为相关研究和实践提供一定的参考和帮助。

药物制剂中脂质体的制备与应用研究

药物制剂中脂质体的制备与应用研究近年来,随着药物研究的深入,脂质体作为一种重要的药物载体逐渐受到了广泛关注。

脂质体是一种由磷脂类物质组成的微囊体,具有优异的生物相容性和生物降解性,对水溶性和油溶性药物都有良好的包封效果。

本文将重点讨论脂质体的制备方法及其在药物制剂中的应用研究。

一、脂质体的制备方法1. 脂膜溶解法脂膜溶解法是一种常用的脂质体制备方法。

其主要步骤是将磷脂溶解在有机溶剂中,然后加入药物,通过溶剂蒸发或超声乳化等方法形成脂质体。

这种方法制备的脂质体具有较小的粒径和较高的药物包封率。

2. 沉淀法沉淀法是一种通过药物与磷脂的共沉淀形成脂质体的方法。

药物和磷脂在溶液中共同形成微囊体,然后通过离心等方法分离得到脂质体。

这种方法制备的脂质体结构较为稳定,能够有效保护药物免受外界环境的干扰。

3. 脂质指位法脂质指位法是一种通过指位的膨胀作用使药物与磷脂相互混合形成脂质体的方法。

该方法制备的脂质体具有较高的药物包封率和较好的稳定性,适用于疏水性药物的制备。

二、脂质体在药物制剂中的应用1. 提高药物稳定性脂质体作为一种良好的药物载体,能够有效保护药物免受外界环境的干扰。

在药物制剂中加入脂质体可以提高药物的稳定性,延长药物的有效期,并减少药物的副作用。

2. 改善药物生物利用度脂质体能够提高药物的生物利用度,增加药物的口服吸收。

脂质体由于具有与细胞膜相似的结构,能够在胃肠道中与细胞膜融合,促进药物的吸收。

因此,在口服给药制剂中加入脂质体可以提高药物的生物利用度,减少药物的剂量。

3. 改善药物的靶向性脂质体可以通过改变其表面性质,使药物能够更好地靶向到病灶部位。

例如,通过改变脂质体的表面电荷,可以增强脂质体对肿瘤细胞的亲和力,实现药物的靶向输送。

4. 提高药物的溶解度和稳定性脂质体在药物制剂中添加后,可以显著提高药物的溶解度和稳定性。

由于脂质体具有良好的生物相容性和降解性,能够与药物形成亲和性较好的结合,从而改善药物的溶解度和稳定性,提高药物的疗效。

脂质体制备方法

脂质体制备方法
脂质体是一种由脂质构成的微粒,常用于药物传递和基因转染等领域。

常见的脂质体制备方法包括以下几种:
1. 脂质薄膜混悬法(Thin-film hydration method):将脂质和
药物按一定比例溶解在有机溶剂中,制备成薄膜,然后通过加入缓冲溶液或其他溶液来重悬薄膜,形成脂质体。

2. 油水乳化法(Emulsion method):将脂质和药物溶解在水
相和油相中,通过机械剪切或超声波处理使两相乳化,并形成脂质体。

3. 水介质溶解法(Ether injection method):将脂质和药物溶
解在有机溶剂中,然后使用高速搅拌或机械剪切射入水相中,并迅速挥发有机溶剂,使脂质形成粒状结构。

4. 反向脂质体法(Reverse phase evaporation method):将脂质和药物按一定比例混合,加入有机溶剂形成混合体系,然后加入水相,通过振荡或加热使有机溶剂插入水相,形成胶束,最后去除有机溶剂,得到脂质体。

5. 膜片发育法(Lipid film hydration method):将脂质溶解在
有机溶剂中形成薄膜,将溶剂挥发干燥后,加入含有药物的水相,经超声辐照或搅拌使薄膜与水相均匀悬浮,并形成脂质体。

这些方法各有优缺点,选择合适的方法取决于具体应用的要求和物质特性。

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微脂体(又称脂质体)及其制备方法一二微脂体(又称脂质体)微脂体起源于1960 年代中期,Bangham博士等人首先提出,在磷酸脂薄膜上加入含盐分的水溶液后,再加以摇晃,会使脂质形成具有通透性的小球;196 8年,Sessa 和Weissmann 等人正式将此小球状的物体命名为微脂体(liposo me)并做出明确的定义: 指出微脂体是由一到数层脂质双层膜(lipid bilayer)所组成的微小的囊泡,有自行密合(self-closing)的特性。

微脂体由脂双层膜包裹水溶液形成,由于构造的特性,可同时作为厌水性(hydrophobic)及亲水性(hydrophilic)药品的载体,厌水性药品可以嵌入脂双层中,而亲水性药品则可包覆在微脂体内的水溶液层中。

如同细胞膜,微脂体的脂质膜为脂双层构造,由同时具有亲水性端及厌水性端的脂质所构成,脂双层由厌水性端相对向内而亲水性端面向水溶液构成,组成中的两性物质以磷酸脂质最为常见。

微脂体的形成是两性物质在水溶液中,依照热力学原理,趋向最稳定的排列方式而自动形成。

微脂体的性质深受组成脂质影响,脂质在水溶液的电性,决定微脂体是中性或带有负电荷、正电荷。

此外,磷酸脂碳链部分的长短,不饱和键数目,会决定微脂体的临界温度(transition temperature, Tc),影响膜的紧密度。

一般来说,碳链长度越长临界温度越高,双键数越多则临界温度越低,常见的DPPC(dipalmitoylp hosphatidylcholine)与DSPC(distearoylphosphatidylcholine)的临界温度分别是42℃与56℃,而Egg PC(egg phosphatidylcholine)与POPC(palmitoyl oleoyl phosphatidylcholine)的Tc 则低于0℃。

临界温度影响微脂体包裹及结合药物的紧密度,当外界温度高于Tc时,对膜有通透性的药物,较容易通过膜;此外,当外界温度处于临界温度时,微脂体脂质双层膜中的脂质,会因为流动性不一致而使微脂体表面产生裂缝,造成内部药物的释出。

在磷脂质内加入胆固醇,会对微脂体性质产生下列影响:增加微脂体在血液中的安定性,较不易发生破裂;减少水溶性分子对微脂体脂膜的通透性;增加微脂体的安定性,使其在血液循环中存在的时间较长。

微脂体可依脂双层的层数或是粒子大小,加以命名或分类:(1) Multilamellar vesicle(MLV)是具有多层脂双层之微脂体,粒子大小介于100-1000 nm,特色是粒子内具多层脂质膜,一般而言,干燥后的脂质薄膜,直接水合后,即形成MLV,体积通常较为庞大,脂质含量较高。

MLV 的脂双层数,一般在五层以上;小于五层的MLV 又称为oligo-lamellar liposomes 或paucilamellar vesicle。

(2) Large Unilamellar Vesicle ( LUV) 则是单层脂双层所构成的微脂体,一般指1000 nm 等级(250-2500 nm 或更大)的微脂体,动物细胞便是一种LU V。

(3) Intermediate-sized Unilamellar Vesicle (IUV) 也是单层脂双层所构成的微脂体,一般指100 nm 等级(25-250 nm)的微脂体。

不过,目前一般文献已经很少使用IUV,而是将它并入SUV 中。

(4) Small Unilamellar Vesicle (SUV)是单层脂双层所构成的小微脂体,早期的分类指特定磷酸脂所能够成的最小微脂体(一般以超音波震荡制成)。

如egg PC 以生理食盐水(normal saline) 水合的SUV 是15 nm;DPPC 则是25 nm。

制备微脂体最传统的方法是薄膜摇振法。

如今已经发展出非常多种制备微脂体的方法,包括:1.) 薄膜摇振法(Thin film method; Hand-shaking method):又称做Ban gham’s method,将脂质以有机溶剂如氯仿(chloroform)、甲醇(methanol)及乙醇(ethanol)等溶解,均匀混合后,利用旋转真空干燥机(rotary evapor ator) 使圆底瓶内的溶剂挥发之后,即可在瓶壁上形成均匀的脂质膜,在临界温度以上的温度条件下,将欲包覆物质的水溶液和脂质膜混合,用手左右摇动,将瓶壁上的脂质膜振下来,脂质在水溶液中即会自动形成MLV。

2.) 冷冻-再解冻(freez-thaw)、均质(homogenization)及超音波震荡法(soni cation method):利用微脂体破裂后会再自行密合的特性,以机械性的力量均质或超音波震荡的方式,或者多次冷冻、再解冻的方式,造成微脂体的破裂及重组再密合,最后可形成大小较均匀的单层微脂体。

3.) 反相蒸发法(Reverse phase evaporation method):以有机溶剂溶解高浓度的脂质,快速混入对于脂质量而言体积极少的药品水溶液,将两者混合均匀后再以旋转真空干燥机使有机溶剂挥发,形成包覆率较高的微脂体。

这种方法适合用来包覆较为稀少或是较珍贵的药品及蛋白质。

4.) 有机溶剂注射法(solvent injection)和清洁剂透析法(detergent dialysi s):利用有机溶剂和清洁剂溶解脂质,与准备包覆的水溶液混合形成微脂体后,以透析法除去有机溶剂和清洁剂。

5.) 滤膜挤出法(Extrusion ):可将上述方法制成的微脂体,改变成所需粒径大小的单层微脂体。

MLV或LUV置于挤压器(extruder)中,加热到临界温度以上的温度,以氮气或氩气加压,即能将粒径较大的微脂体挤成接近滤膜孔径大小的微脂体。

重复挤压数次后,即可制造出所需粒径大小且粒径分布范围相当窄的微脂体。

利用这种方法制成的微脂体可将粒径大小控制到一百奈米以下。

微脂粒在体内之举止,依其本身的型态、粒径、脂质组成、表面电荷及服用者的生理状况、投药部位等而有很大差异。

微脂粒于静脉注射后,在血液中至少与两类血浆蛋白发生作用,1)所谓调理素(opsonins)可附着于微脂粒表面,促使其被RES之吞食细胞噬食。

2)高密度脂蛋白(HDL)袭击微脂粒,藉phosph atidylcholine transferase活性蛋白之助,抽掉微脂粒上之磷脂分子,使微脂粒破洞或崩溃,内容物漏出。

此二作用皆导致微脂粒在体内之半减期缩短。

目前已研究出几种改善之道以延长微脂粒在血液循环中之半减期,此种微脂粒称为长命微脂粒(stealth liposomes)。

微脂粒的表面可设法接上抗体或受质,在体内发挥指向功能。

针对目标细胞膜上的特殊抗原或受体,将对应抗体或受质分子接在微脂粒上,可使绝大部份的微脂粒聚集至目标细胞。

微脂粒与细胞作用的机制有数种:1)膜组成交换(intermembrane transf er):即微脂粒膜的组成与细胞膜的组成中有一部份互相交换;2)吸着(ads orption):微脂粒附着于细胞膜;3)膜融合(fusion):微脂粒与细胞膜融合,将包容物送进细胞内;4)吞食(phagocytosis, endocytosis):微脂粒被细胞吞食。

欲使微脂粒依期望之机制与细胞作用,则要设计微脂粒。

阳离子脂质体(cationic liposome) 介导转染核酸进入真核细胞的方法是从8 0 年代中期发展起来的一种最具创新性的、高效的转染(transfection) 技术。

阳性脂质体(cationic liposome) ,又称阳离子脂质体、正电荷脂质体(positively ch arged liposome) ,是一种本身带有正电荷的脂质囊泡。

它可作为荷负电物质的传递载体,特别适用于蛋白质、多肽和寡核苷酸类物质、脱氧核糖核酸(DNA) 、核糖核酸(RNA) 等,所以在基因治疗方面有独特应用,近年来,成为在体外研究基因功能和基因表达调控机理的重要手段。

阳性脂质体介导的转染法可将外源基因导入任意种类哺乳动物的原代细胞或连续培养的细胞,在贴壁培养体系和悬浮培养体系中均能应用,并且能得到顺时表达(transient expression)和稳定表达(stable expression)的细胞株。

1.阳性脂质体的组成绝大多数阳性脂质体是由一种中性磷脂和一种或多种阳性成分组成。

中性磷脂和阳性成分都是具有亲水和疏水两种基团,其分子间相互间隔定向排列形成类脂双分子层。

其中,中性磷脂起到稳定双层膜和降低阳性成分毒性的作用,同时提供阳性脂质的细胞渗透功能。

阳性成分是具有不同化学结构的两性分子,多为双链季铵盐型表面活性剂,为整个脂质体提供正电荷,有很强的细胞膜去稳定化作用。

目前,使用最广泛的阳性成分有以N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、3β-[ N-( Nˊ, Nˊ-二甲基胺乙基) 胺基甲酰基]胆固醇(DC-Ch ol)、2,3-二油酰氧-N-[2(精胺羧基酰胺)乙基]-N,N-二甲基-1-丙基-三氟乙酸铵(DO SPA) 、1 ,2-二油酰氧丙基-N,N,N-三甲基溴化铵(DOTAP)等,具有体外稳定性好,体内可被生物降解的特点,但具有一定的细胞毒性。

2.阳性脂质体介导基因转染的作用机制阳性脂质体介导的基因转染过程中,阳性脂质体的重要性体现在三个方面:(1)与DNA形成脂质体-DNA复合物(2)与细胞膜的作用(3)将DNA释放到细胞中。

2.1 阳性脂质体-DNA复合物(Lipoplex)的形成最初人们认为,阳性脂质体的表面带正电荷,能被核酸中带负电荷的磷酸根所吸附,这样通过阳性脂质体的介导,可以把核酸物质结合到细胞膜上。

Gershon于1993年使用电镜技术,研究了复合物的形成和结构特征。

他认为,阳性脂质体最初结合到DNA分子上,在核酸分子上形成成束的囊泡聚合物。

当聚合达到一定程度时,DNA 诱导的脂质体膜融合和脂质体诱导的DNA断裂同时发生,断裂后的DNA分子被包封于重新形成的脂质体中。

后来,Stefan Huebner等于1999年系统地阐述了复合物的结构特征及形成机理。

他指出,复合物的形成与脂质体/DNA的电荷比例有密切联系。

复合物有三种形式:(1)由DNA包裹的单层囊泡(2)由单层囊泡组成的寡聚复合物(3)多层囊泡聚合物。

并且他提出“脂质体滚动”:当一个由DNA包裹的单层囊泡被另一个“模板”囊泡吸附,随即发生断裂,沿着“模板”囊泡“滚动”,依此类推,就形成了多层囊泡聚合物,这就解释了复合物缺口形成的原因。

目前,这一观点已逐渐为广大研究者所认可。

2.2 细胞对阳性脂质体-DNA复合物的摄取最初的研究指出,最初的研究指出,对于带负电荷的核酸物质(DNA、RNA和寡核苷酸) ,主要是通过胞饮作用(endocytosis)进入靶细胞的。

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