三磷酸腺苷检测方法综述
ATP检测方法范文
ATP检测方法范文ATP（Adenosine Triphosphate，腺苷三磷酸）是一种能量分子，在生物体内广泛存在，并代表着生物体的活动水平。
ATP的检测方法主要包括生物发光法、生物酶法和生物传感器法等。
一、生物发光法：生物发光是利用生物体内氧化还原酶系统以及氧化酶或酶反应，在氧气存在的条件下将底物发光。
ATP检测方法中，常用的底物为辅酶或荧光基团（luciferin），通过与ATP反应，生成可发光的物质。
1.生物发光法的原理：ATP酶或荧光基团与氧化剂中的氧产生氧化反应，生成Ox2-（Ox-Dioxetan），然后从氧化剂分子中获取能量，进而引发可见光或发射荧光。
2.生物发光法的操作步骤：（1）制备反应液：包括辅酶AB、荧光素、酶、酶抑制剂等。
（2）加入底物：将待检测的样品加入反应液中。
（3）测量发光值：使用光度计或荧光分光光度计测量样品在特定波长下的发光值，并与标准曲线或标准品对照得到ATP的浓度。
二、生物酶法：生物酶法是通过一些酶与ATP底物发生显色或变色反应，进而进行浓度测定的方法。
1.生物酶法的原理：ATP酶与底物发生反应，生成染色产物，如酚酞或过氧化物。
2.生物酶法的操作步骤：（1）制备反应液：包括酶、底物、辅助试剂等。
（2）加入底物：将待检测的样品加入反应液中。
（3）显色反应：根据底物与酶的反应特性，观察样品的颜色变化，并与标准品对照，得到ATP的浓度。
三、生物传感器法：生物传感器法是一种利用生物分子识别特异性和生物反应性等特点，与传感器相结合实现对ATP检测的方法。
1.生物传感器法的原理：通过将ATP与传感器的生物组分（如酶、抗体、单链DNA）结合，使传感器发生变化，如电位变化、荧光变化等。
2.生物传感器法的操作步骤：（1）构建传感器：将ATP与传感器的生物组分结合，构建传感器。
（2）传感器测定：测定传感器的电位、荧光等变化，与标准品对照，得到ATP的浓度。
综上所述，ATP的检测方法主要包括生物发光法、生物酶法和生物传感器法。
三磷酸腺苷生物发光法
三磷酸腺苷生物发光法摘要：一、引言二、三磷酸腺苷（ATP）的作用与意义1.生物学功能2.在生物发光中的应用三、生物发光法的原理1.发光生物分子的合成2.发光反应的触发与调控四、三磷酸腺苷生物发光法的实验操作步骤1.制备发光生物分子2.添加三磷酸腺苷3.激发发光反应4.检测与分析发光信号五、应用领域与前景六、总结与展望正文：一、引言三磷酸腺苷（ATP）作为生物体内能量的主要载体，其含量和分布对生物体的生理功能具有重要意义。
近年来，随着生物发光技术的发展，三磷酸腺苷生物发光法在生物学、医学等领域的研究中得到了广泛应用。
本文将对三磷酸腺苷生物发光法的原理、实验操作步骤及其应用领域进行详细介绍。
二、三磷酸腺苷（ATP）的作用与意义1.生物学功能ATP是生物体内能量的主要来源，通过其磷酸键的水解，释放出大量的能量，供给细胞进行各种生物活动。
ATP在细胞内的浓度梯度对于许多生物学过程，如细胞内物质的运输、生物大分子的合成与降解等，具有调控作用。
2.在生物发光中的应用ATP在生物发光过程中的作用主要体现在两个方面：一是作为能量源，为发光生物分子提供能量；二是作为发光反应的底物，参与发光过程。
在生物发光法中，ATP的浓度与发光强度成正比，从而可以间接反映生物体内能量代谢的水平。
三、生物发光法的原理1.发光生物分子的合成生物发光是由生物体内某些特定分子在受到激发后，通过发光反应产生的。
常见的发光生物分子有荧光素、荧光蛋白等。
在实验室中，可以通过基因重组技术或化学合成方法制备这些发光生物分子。
2.发光反应的触发与调控生物发光反应通常在特定条件下进行，如温度、pH值、酶的催化等。
在反应过程中，发光生物分子受到激活，产生发光现象。
ATP作为能量源，在反应中被消耗，使发光强度与ATP浓度呈动态平衡。
通过调控ATP的浓度，可以实现对发光强度的调节。
四、三磷酸腺苷生物发光法的实验操作步骤1.制备发光生物分子根据研究需要，通过基因重组技术或化学合成方法制备发光生物分子。
三磷酸腺苷检测方法综述
三磷酸腺苷检测方法综述三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate，A TP)是一切生物体新陈代谢的能量源泉，普遍存在于一切生物细胞体内，为细胞内各种需能过程提供能量，是细胞生存的必须因素。
三磷酸腺苷(AdenosinetriphosPhate)简称ATP，又名腺三磷，腺嗓吟配糖三磷酸，分子式为C10H16N5Ol3P3，分子量为507.21。
ATP是核苷酸，一分子ATP中含有一分子腺嚓吟碱基，一分子核糖和三分子磷酸基。
ATP是白色无定形粉末，无臭无味。
具有引湿性，易溶于水，不溶于醇、醚及其它有机溶剂。
ATP在水溶液中呈微酸性，其中性钠、钾盐在-15℃保存，可稳定数月，在0℃保存可稳定一星期；在0℃，7%的三氯乙酸中，ATP可稳定数小时；在100℃lmol/L盐酸中，10分钟就游离出66%的磷；在0℃以上的碱性溶液中ATP分解成为无机焦磷酸盐及一磷酸腺苷。
中国专利CN104297219A提供一种高灵敏度的三磷酸腺苷检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：制备氨基化磁性纳米粒子；制备固定化三磷酸腺苷检测酶系统；对配置好的三磷酸腺苷检测酶系统进行预处理，清除酶系统中残留的三磷酸腺苷；使用MPI-B化学发光检测仪进行三磷酸腺苷测定。
同时，通过查阅文献，我们找到了这几种方法，根据A TP与其所含杂质理化性质的差异，发展起来了许多A TP的分析方法，归纳起来主要有层析法、电泳法和光学分析法。
关于层析法又分为纸层析法、薄层层析法、离子交换柱层析法和高效液相色谱法。
纸层析方法测定ATP含量是生化试剂核苷酸含量测定的通用方法，其常用的展开剂组成为异丙醇+浓氨水+水(7:1:2)。
薄层层析法与纸层析法一样，是生化试剂核苷酸含量测定的通用方法。
离子交换柱层析法是通过调节pH使核苷酸带负电，阴离子树脂吸附，通过改变PH值或降低阴离子浓度将核苷酸分离出来。
高效液相色谱具有强大的分离能力，随着高效液相色谱法(HPLC)的广泛应用，ATP制剂及生物组织中ATP纯度与含量的测定变得简便易行。
三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌细胞株药物敏感试验中的应用(精)
三磷酸腺苷生物发光法在卵巢癌细胞株药物敏感试验中的应用楼江燕彭芝兰刘珊玲王和1983年,Moyer等提出内源性三磷酸腺苷(ATP)的数量可以反映细胞的活性度。
随后Kangas等提出三磷酸腺苷生物发光 (ATP-CVA) 法这一新的药物敏感（药敏）试验方法。
ATP-CVA的原理为，内源性ATP是活体细胞最基本的能量来源，细胞死亡时,由于有ATP酶的存在,ATP迅速水解。
细胞内的ATP与荧光素-荧光素酶复合物作用产生可测定光，测定所产生的光，从而可获得ATP的数量。
通过测定已加入化疗药物的癌细胞中的ATP与对照组进行比较，可评价药物的敏感性。
本研究采用ATP-VCA法对卵巢癌细胞株SKOV3进行药敏检测，以探讨ATP-CVA法用于卵巢癌药敏试验的可行性。
一、材料与方法1. 研究对象：卵巢癌细胞株SKOV3购于美国Type CultureCollection(ATCC)公司。
2.试剂及仪器：试剂及仪器包括RPMI-1640培养基、胰岛素、胰酶、ATP 标准品，胎牛血清、荧光素、荧光素酶。
药物有顺氯胺铂 (cDDP)和拓扑特肯（topotecan）。
药物浓度的配制按其血浆峰浓度值（PPC）进行计算。
另外，还备有二氧化碳培养箱、超纯水器、F2105液闪计数仪、超净工作台及倒置生物显微镜等。
3.实验方法：（1）ATP标准品的检测：用培养基将ATP标准品配制成系列浓度:10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/ml，加入等量的4%三氯醋酸溶液混匀，取100 μl进行测定，每种浓度做3个平行管。
（2）ATP生物荧光检测法：将样品100 μl加入闪烁瓶中，加200 μl中和液，调整pH为7.8，加入300 μl含荧光素-荧光素酶的反应混合液，轻轻摇匀，再加入4 ml反应缓冲液，于缓冲液闪计数仪中检测1 min，计算其累计计数值。
(3)卵巢癌细胞株SKOV3的培养及检测：将冻存的细胞株解冻复苏后，置于二氧化碳培养箱，于37℃、5%二氧化碳、95%湿度条件下进行培养。
三磷酸腺苷(ATP)检测
迪信泰检测平台
三磷酸腺苷（ATP）检测
腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine triphosphate, ATP），又称为三磷酸腺苷、腺苷三磷酸，是由一分子腺嘌呤、一分子核糖和三分子磷酸基团连接而成，水解时释放出能量较多，是生物体内最直接的能量来源。
ATP是一种不稳定的高能磷酸化合物，
在细胞中，它能与ADP的相互转化实现贮能和放能，从而保证了细胞各项生命活动的能量供应。
生成ATP的途径主要有两条：一条是植物体内含有叶绿体的细胞，在光合作用的光反应阶段生成ATP；另一条是所有活细胞都能通过细胞呼吸生成ATP。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液相质谱联用(LC-MS)，可高效、精准
的检测ATP的含量变化。
此外，迪信泰检测平台还提供其他多种核苷酸检测服务，以满足您的不同需求。
对于常见核苷酸，可配合标样进行检测，对于稀有的核苷酸，如提供标准样品，可提供定制检测。
HPLC和LC-MS测定ATP样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. ATP含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
亚磷酸三酯法
亚磷酸三酯法
亚磷酸三酯法，也称为ATP法，即Adenosine TriPhosphate（三磷酸腺苷）法，是生物化学领域中经常使用的一种重要方法。
本文将围绕亚磷酸三酯法进行阐述。
一、原理
亚磷酸三酯法是通过测定样品中ATP的含量来确定其化学反应能力的一种方法。
ATP是细胞内能量传递和生化反应的主要物质，在化学反应中起到催化剂的作用。
因此，测定样品中ATP的含量可以反映其化学反应的潜力。
二、步骤
1.样品提取
将要测定的生物样品取适量，如组织、细胞等，用适量的缓冲液或磷酸盐缓冲液等提取。
2.ATP酶反应
将提取的样品与ATP酶、亚磷酸三酯水解酶以及底物反应，使ATP分解为二磷酸腺苷（ADP）和无机磷酸盐，同时还释放出能量。
3.荧光检测
将反应后的产物与荧光素荧光素磷酸盐自由酸混合，使荧光素磷酸盐受到激发而发出荧光，使用荧光检测仪检测荧光强度，进而确定样品中ATP的含量。
三、优点
（1）亚磷酸三酯法不受其他物质的影响，测定结果准确可靠。
（2）使用荧光检测仪，检测精度高，检测速度快。
（3）操作简单，物质易得。
四、应用
亚磷酸三酯法广泛应用于生物质的测定，如测定细胞的活力、酶的活性、蛋白质含量等。
同时，该方法也适用于医学领域，如测定肌肉疾病患者的肌肉ATP含量，反映肌肉病变的程度。
总之，亚磷酸三酯法是一种非常有用的化学分析方法，其测定结果可靠性高，操作简单，应用范围广泛，因此受到生物化学领域内的广泛关注和应用。
高效液相色谱法测定5′-三磷酸腺苷含量
高效液相色谱法测定5′-三磷酸腺苷含量张爱雷;王岚【摘要】采用高效液相色谱法测定5′-三磷酸腺苷含量.色谱条件为:XTerraTMRP18(3.9 mm×150 mm,5 μm) 色谱柱,流动相为0.05 mol·L-1 pH 值7.0 的NH4H2PO4缓冲溶液,检测波长259 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温(25±2)℃,进样量20 μL.在10～80 mg·L-1范围内,ATP浓度与其259 nm处吸光度值呈良好线性关系,R＝0.9994;检测重复性较好,平均回收率为98.87%,整个色谱过程可在7 min内完成.该方法也可用于ADP和AMP的分离检测.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2010(027)010【总页数】3页(P89-91)【关键词】三磷酸腺苷;一磷酸腺苷;二磷酸腺苷;含量;检测;高效液相色谱【作者】张爱雷;王岚【作者单位】江苏省产品质量监督检验研究院,江苏,南京,210007;常州大学化学化工学院,江苏,常州,213164【正文语种】中文【中图分类】O657.75′-三磷酸腺苷 (Adenosine triphosphate,ATP)又名腺三磷、腺嘌呤配糖三磷酸，临床应用广泛，是用于治疗进行性肌萎缩、脑溢血后遗症、心机能不全、心肌疾患及肝炎等疾病的辅酶类药物，被称为人体内的“能量货币”[1]。
在ATP的制备、存储过程中，易混入或产生一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)等杂质。
ATP、ADP及AMP的结构相似、理化性质相近，因此检测较为困难[2]。
我国部标和地方标准均采用纸电泳法[3]或纸层析法[4]测定ATP含量，存在操作时间长、误差较大、操作繁琐的缺点。
也有报道采用生物发光法测定ATP含量，但该方法不能对杂质进行分析[5]。
作者采用高效液相色谱法测定ATP含量，结果令人满意。
1 实验1.1 试剂和仪器对照品：ATP二钠(Sigma)，ADP (中国医药上海化学试剂公司)，AMP(中科院上海生化所东风生化技术公司)；样品：ATP二钠(批号：200209070,上海太平洋制药厂)；NH3·H2O、磷酸二氢铵，分析纯。
三磷酸腺苷二钠片微生物限度检查法验证研究
三磷酸腺苷二钠片微生物限度检查法验证研究摘要：建立三磷酸腺苷二钠片的微生物限度检验方法。
采用常规法对样品进行方法验证。
结果五种规定试验菌的回收率均不低于70%，可用于三磷酸腺苷二钠片的微生物限度检验。
关键词：三磷酸腺苷二钠片；微生物限度检查；方法验证三磷酸腺苷二钠片就是细胞新陈代谢提升药。
根据其制剂用药途径，应当展开细菌数、霉菌和酵母菌数的测量、及掌控菌—大肠埃希菌检查。
经实验研究，确认使用常规法展开细菌数、霉菌和酵母菌数、大肠埃希菌检查。
经对所确认的方法展开检验，合乎2021年版《中国药典》二部第三章?j有关微生物限度检查法有关规定，方法可取。
1实验仪器、试药1.1实验菌种枯草芽孢杆菌cmcc（b）63501、金黄色葡萄球菌cmcc（b）26003、大肠埃希菌cmcc （b）44102、白色念珠菌cmcc（f）98001、黑曲霉cmcc（f）98003。
1.2样品：三磷酸腺苷二钠片：批号：20211101，20211102，20211103。
1.3培养基及稀释剂营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，营养肉汤培养基，胆盐乳糖培养基（bl），改进马丁培养基，mug培养基，曙红亚甲蓝琼脂培养基，ph7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液，0.9%无菌氯化钠溶液等。
培养箱、高压蒸汽灭菌器等。
2细菌数、霉菌和酵母菌数测定方法的创建及检验2.1菌液制备求教35℃培育18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培育物用0.9%无菌氯化钠溶液制取变成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，水泵；求教25℃培育24～48h的白色念珠菌液体培育物用0.9%无菌氯化钠溶液制取变成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，水泵；求教25℃培育1周的黑曲霉斜面培育物，提10ml0.9%无菌氯化钠溶液洗脸下霉菌孢子，汲取菌液用0.9%无菌氯化钠溶液制取变成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，水泵。
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三磷酸腺苷检测方法综述
三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate，A TP)是一切生物体新陈代谢的能量源泉，普遍存在于一切生物细胞体内，为细胞内各种需能过程提供能量，是细胞生存的必须因素。
三磷酸腺苷(AdenosinetriphosPhate)简称ATP，又名腺三磷，腺嗓吟配糖三磷酸，分子式为C10H16N5Ol3P3，分子量为507.21。
ATP是核苷酸，一分子ATP中含有一分子腺嚓吟碱基，一分子核糖和三分子磷酸基。
ATP是白色无定形粉末，无臭无味。
具有引湿性，易溶于水，不溶于醇、醚及其它有机溶剂。
ATP在水溶液中呈微酸性，其中性钠、钾盐在-15℃保存，可稳定数月，在0℃保存可稳定一星期；在0℃，7%的三氯乙酸中，ATP可稳定数小时；在100℃lmol/L盐酸中，10分钟就游离出66%的磷；在0℃以上的碱性溶液中ATP分解成为无机焦磷酸盐及一磷酸腺苷。
中国专利CN104297219A提供一种高灵敏度的三磷酸腺苷检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：制备氨基化磁性纳米粒子；制备固定化三磷酸腺苷检测酶系统；对配置好的三磷酸腺苷检测酶系统进行预处理，清除酶系统中残留的三磷酸腺苷；使用MPI-B化学发光检测仪进行三磷酸腺苷测定。
同时，通过查阅文献，我们找到了这几种方法，根据A TP与其所含杂质理化性质的差异，发展起来了许多A TP的分析方法，归纳起来主要有层析法、电泳法和光学分析法。
关于层析法又分为纸层析法、薄层层析法、离子交换柱层析法和高效液相色谱法。
纸层析方法测定ATP含量是生化试剂核苷酸含量测定的通用方法，其常用的展开剂组成为异丙醇+浓氨水+水(7:1:2)。
薄层层析法与纸层析法一样，是生化试剂核苷酸含量测定的通用方法。
离子交换柱层析法是通过调节pH使核苷酸带负电，阴离子树脂吸附，通过改变PH值或降低阴离子浓度将核苷酸分离出来。
高效液相色谱具有强大的分离能力，随着高效液相色谱法(HPLC)的广泛应用，ATP制剂及生物组织中ATP纯度与含量的测定变得简便易行。
近年来，报道的A TP电泳分析方法主要有纸电泳法、醋酸纤维薄膜电泳法、琼脂糖凝胶电泳法和毛细管电泳法。
卫生部及地方的ATP标准测定方法均采用纸电泳法。
该方法采用纸电泳将ATP与杂质分离，紫外分光光度计测定分离出的ATP的吸收值，计算其含量。
醋酸纤维薄膜电泳法采用了与纸电泳类似的实验路线。
琼脂糖凝胶电泳法可以快速测定ATP 的含量。
采用毛细管的区带电泳技术，克服了传统区带电泳的热扩散和样品扩散问题，使分
析灵敏度有了很大提高，分离效率可达数百万块塔板数。
光学分析法也有着其独到的优势，主要有ATP试剂盒法和生物发光法，ATP试剂盒法是运用试剂盒检测ATP的含量，生物发光法是运用荧光素酶和Mg2+的作用下，经过一些列处理发出光，根据发光强度来确定ATP的含量。
检测方法方法名称操作特点
专利方法CN104297219A 制备氨基化磁性纳米粒子；制备固定化三
磷酸腺苷检测酶系统；清除酶系统中残留
的三磷酸腺苷；使用MPI-B化学发光检测
仪进行三磷酸腺苷测定。
利用纳米技术去除试剂本底残存的ATP（三磷酸腺苷），降低试剂本身的发光值，从而提高试剂的检测灵敏度。
层析法纸层析法点样量50ug，在30cm长新华一号滤纸上
层析12~16小时。
层析毕，50℃烘干，于
紫外光下划斑点，对照标准，剪下ATP层
析斑点(画点要同样大小)。
分别将层析斑点
用0.0lmol/L HCl15ml，40-50℃洗脱2小时，
测定A260，据此算出A TP含量。
对于一些
定性分析，也可以直接用显色剂显色观察
结果。
技术成熟，操
作简便，操作
时间长，精度
低。
薄层层析法以正丁醇十丙酮+冰乙酸+5%氨水+水技术成熟，操
(7:5:3:3:2)为展开剂，点样量20ug，在以硅胶GF为吸附剂的薄板上展层。
层析完毕后，于50℃干燥，紫
外光下观察吸收斑点。
作简便，精度低。
离子交换柱层析法PH值高于5时，所有的核苷酸都会带负电
荷，会被阴离子树脂吸附，因此可以采用
分步降低PH值或分步增加阴离子浓度的
方法将不同的核苷酸依次洗脱下来。
检测
洗脱液彻60，将之与洗脱液体积作图，便
能得到A TP的分析结果。
可大量制取
ATP，操作时
间长，精度低
高效液相色谱法采用UV-HPLC法检测了ATP 操作简单，结
果准确，仪器
昂贵。
电泳法纸电泳法以0.05mol/L，pH3.0的柠檬酸溶液作缓冲
液，处理过的新华二号滤纸为支持介质，
湿法点样，电压梯度18~20v/cm，电泳1
小时45分钟。
电泳毕，吹干滤纸，于紫外
灯照射下剪出各吸收斑点，在0.01mol/LHcl
溶液浸泡1小时，过滤，测定上清液A257，
按照吸收系数计算出A TP含量。
技术成熟，操
作繁琐，耗时
长。
醋酸纤维薄膜
电泳法
通过电泳、干燥、描斑点、洗脱、测吸光
度值等步骤来测定ATP的含量，程序繁杂。
电泳时间短，
检测便捷，需
薄层扫描仪。
琼脂糖凝胶电
泳法
以琼脂糖做支持介质，以0.05mol/L、pH3.5
的柠檬酸溶液做缓冲溶液，在40V/cm电压
梯度下电泳5分钟，实现了ATP与其它杂
电泳时间短，
精度低。
质的有效分离，测得了ATP含量。
毛细管电泳法在Beelaman5010型毛细管电泳仪上，采用
熔融石英毛细管柱，以0.025m。
比磷酸氢
二钠为电极缓冲液(用lmol氢氧化钠溶液
调pH值至10.2)，检测波长为214nm，在
25℃及21KV的条件下进行定量分析。
快速，便捷，结果准确，仪器昂贵
光学法ATP试剂盒法使用试剂盒检测操作简单，精
度高，未分析
杂质。
生物发光法ATP测定仪AF-100测试。
操作简单，结
果准确，未分
析杂质。