穴位埋药对脑缺血再灌注大鼠海马细胞因子TNF-α含量的影响
γ-促分泌酶抑制剂对脑缺血再灌注小鼠海马肿瘤坏死因子-α表达的影响
促分泌酶抑制剂对脑缺 血再灌注 小 鼠海马肿瘤坏死 因子一 表达的影响
一
王 昆鹏 朱 宏 王 键
学 和 蛋 白印 迹 法 结 果 发 现 ， 缺 血 处 理 后 的各 个 时 间 点 ， Ｔ ＮＦ － ａ 表达持 续增高 ， 与 假 手 术 组 相 比差 异 有 统 计 学 意 义
（ Ｐ＜ Ｏ ． ０ １ ） ； 与 相 同 时 间 点 的 缺 血组 比较 ， ＭＷ １ ６ ７ 组 的 ＴＮ Ｆ － ａ蛋 白 阳 性 表 达 明 显 降 低 （ Ｐ＜ Ｏ ． ０ ５ ） 。结 论 调 节 炎 性 因 子 ＴＮＦ ＿ “ 蛋 白 的表 达 可 能 是 Ｎ ｏ ｔ ｃ ｈ 信 号 通路 参 与 脑 缺 血再 灌 注 损 伤 的 机 制 之 一 。 【 关键 词】 缺 氧 缺 血 ， 脑； 小 鼠； 肿瘤坏 死因子 ａ
子一 ａ （ Ｔ ＮＦ － ） 表 达 的影 响 。方 法
只） 、 缺血再灌注组（ Ｉ ／ Ｒ， ３ ２只 ） 。７ － 促分泌酶抑制剂组和 Ｉ ／ Ｒ组 依 据 缺 血 后 再 灌 注 的 不 同 时 间 点 再 细 分 为 １ 、 ３ 、 ７ 、 １ ４ ｄ ４个 亚 组 。应 用 免 疫 组 织 化 学 法 、 蛋 白印 迹 法 检 测 各 组 小 鼠海 马 Ｔ Ｎ卜 ａ 蛋 白 的 表 达 。 结 果 免 疫 组 织 化
ＭＷ １ ６ ７ ａ ｎ ｄ Ｉ ／ Ｒ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｓ ｕ ｂ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｅ ｘ ｅ ｃ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｉ ｍｅ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ（ １ ，３ ｎ ｇ ，Ｚｈ ｕ Ｈｏ ｎ ｇ，Ｗａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｎ，Ｃ ａ ｉ Ｄａ ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ，Ｔａ ｎ ｇ Ｒｕ ｒ ｏ ｎ ｇ． Ｄｅ ｐａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ａ Ｐ ｓ Ｐ ５ Ｄ Ｚ ０ ｇ ，ｔ ｈ ｅ
阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注脑组织TNF-α表达的影响
阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注脑组织TNF-α表达的影响董春瑶;高政【期刊名称】《中国实用医药》【年(卷),期】2014(000)032【摘要】目的：探讨阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中炎性细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。
方法将54只SD大鼠随机分为三组,各18例,假手术组、脑缺血再灌注组(对照组)、阿托伐他汀组(实验组)。
利用线栓法制备SD大鼠脑缺血再灌注模型,实验组于造模前14 d给予阿托伐他汀10 mg/(kg·d)灌胃治疗；假手术组、对照组分别给予等容积生理盐水。
免疫组织化学方法检测不同再灌注时间点TNF-α的表达。
结果对照组TNF-α阳性表达细胞数在缺血2 h再灌注2、6、24 h均明显高于假手术组(P<0.01)；实验组较对照组TNF-α阳性表达细胞数明显减少,再灌注2、6 h差异具有统计学意义(P<0.05),再灌注24 h,差异具有统计学意义(P<0.01)。
结论阿托伐他汀能抑制大鼠脑缺血再灌注脑组织炎性细胞TNF-α的表达。
【总页数】2页(P243-244)【作者】董春瑶;高政【作者单位】110041 沈阳市第一人民医院神经内三科;大连医科大学附属第二医院神经内科【正文语种】中文【相关文献】1.电刺激小脑顶核对局灶脑缺血再灌注大鼠脑组织核因子-κB/p65、TNF-α蛋白和基因表达的影响 [J], 龚家明;蒋瑛子;赵雪;胡德荣;渠翔;谢雪梅2.不同剂量右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织TNF-α、IL-1β及ICAM-1表达的影响 [J], 方洁3.缺血后处理对高脂血症大鼠脑缺血再灌注后脑组织TNF-α和SOCS-3表达的影响 [J], 唐娟;王德芳;徐艳;唐兴江4.缺血后处理对糖尿病大鼠脑缺血再灌注后脑组织SOCS-3及TNF-α 表达的影响[J], 李金容;邹悦;唐兴江5.阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后脑组织IL-17、IL-10、TNF-α表达的影响 [J], 林文东;李振喜;施水液;张美佳;许秀秀;程晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注后海马NMDAR1表达的影响
【摘要】目的探索乌司他丁对脑缺血再灌注大鼠海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体（NMDAR ）表达的影响。
方法将72只雄性SD 大鼠随机分为假手术组（S 组）、模型组（I/R 组）和乌司他丁干预组（U 组）。
采用线栓法阻断大脑右侧中动脉建立脑缺血损伤模型。
U 组于再灌注即刻腹腔注射乌司他丁20000U/kg ，再灌注3h 后进行神经功能评分（NDS ），采用TUNEL 法检测脑组织凋亡细胞数，RT-PCR 检测NMDAR1mRNA 的表达水平，采用免疫组化染色计算平均光密度值（MOD ）观察NMDAR1的表达。
结果与S 组（0）比较，I/R 组（2.58±0.35）和U 组（1.34±0.41）的NDS 升高（P <0.05）；与S 组（0）比较，I/R 组（52.10±3.25）和U 组（26.40±2.70）的凋亡细胞数增加（P <0.05）；与S 组（0.8902±0.0136）比较，I/R 组（1.0398±0.0211）和U 组（0.9073±0.0142）NMDAR1mRNA 的表达上调（P <0.05）；与S 组（0.0066±0.0007）比较，I/R 组（0.0594±0.0111）和U 组（0.0068±0.0004）NMDAR1表达的MOD 值升高（P <0.05）。
与I/R 组（2.58±0.35）比较，U 组（1.34±0.41）的NDS 降低（P <0.05）；与I/R 组（52.10±3.25）比较，U 组（26.40±2.70）凋亡细胞数减少（P <0.05）；与I/R 组（1.0398±0.0211）比较，U 组（0.9073±0.0142）NMDAR1mRNA 的表达下降（P <0.05）；与I/R 组（0.0594±0.0111）比较，U 组（0.0068±0.0004）NMDAR1表达的MOD 值降低（P <0.05）。
不同针刺强度对急性脑缺血再灌注大鼠TNF-α、IL-1β含量的影响
不同针刺强度对急性脑缺血再灌注大鼠TNF-α、IL-1β含量的影响段丽君;朱红英;李和平【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2012(35)5【摘要】目的探讨不同针刺强度对急性脑缺血再灌注大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量的影响.方法将44只SD雄性大鼠随机分成正常组(6只)、假手术组(8只)、模型组(30只),模型组又随机分为模型对照组、弱电针组、强电针组,每组8只,另6只造模备用.采用改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型,针刺"百会"、"大椎"穴,接电针仪:疏密波,频率2～15 Hz,调整不同电流参数,强电针参数:以肢体震颤或肌肉出现轻微强直收缩为度,电流强度4～7 mA;弱电针参数:以胡须微动或肌肉轻度跳动为度,电流强度1～3 mA.24 h后取材,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清中TNF-α、IL-1β含量并进行统计学分析.结果与正常组、假手术组比较,模型对照组TNF-α,IL-1β含量差异有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较,各电针组能明显降低模型大鼠血清TNF-α,IL-1β含量(P<0.01～0.05);与弱电针组比较,强电针组对TNF-α、IL-1β的调节作用显著(P<0.05).结论不同针刺强度在调节急性脑缺血再灌注大鼠炎性细胞因子TNF-α、IL-1β含量有差异,强刺激优于弱刺激.【总页数】4页(P604-607)【作者】段丽君;朱红英;李和平【作者单位】新疆医科大学第一附属医院中医内科,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第一附属医院中医内科,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第一附属医院中医内科,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.不同电针刺激强度对急性脑缺血再灌注大鼠IL-1β、IL-10的影响 [J], 段丽君;姚梓平;薛凤玲2.不同灸温对急性佐剂性关节炎大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α含量的影响 [J], 季辉;王玲玲;周攀;谢波3.头针对急性脑缺血再灌注大鼠促炎性反应因子TNF-α、IL-1β含量的影响 [J], 周利;张红星;刘灵光;黄浩;李璇;杨敏4."贺氏三通法"针刺治疗对脑缺血再灌注大鼠血清IL-1及TNF-α含量的影响 [J], 王麟鹏;程金莲;张露芬;王桂玲;宣雅波;赵因;胡俊霞5.针刺不同腧穴对失眠模型大鼠脑内细胞因子IL-1、TNF-α含量影响的实验研究[J], 周艳丽;叶险峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《头穴丛刺对大鼠脑缺血再灌注损伤脑保护作用的研究》
《头穴丛刺对大鼠脑缺血再灌注损伤脑保护作用的研究》一、引言随着社会的发展和人口老龄化的加剧，脑血管疾病已成为威胁人类健康的重要疾病之一。
其中，脑缺血再灌注损伤是脑血管疾病治疗过程中常见的问题，其导致的脑组织损伤严重影响了患者的预后和生活质量。
因此，寻找有效的脑保护措施成为当前研究的热点。
近年来，头穴丛刺作为一种非药物治疗方法，在临床实践中被广泛应用于脑缺血的治疗。
本研究旨在探讨头穴丛刺对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用，以期为临床治疗提供理论依据。
二、材料与方法1. 实验动物与分组本实验选用健康成年SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、头穴丛刺治疗组和药物治疗组。
2. 脑缺血再灌注模型制备采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型。
3. 头穴丛刺治疗方法头穴丛刺治疗组在模型制备后进行头穴丛刺治疗，具体穴位和刺激参数根据前期研究确定。
4. 药物治疗方法药物治疗组给予脑保护药物，剂量和给药方式参照临床常用方法。
5. 指标检测通过神经功能评分、脑梗死体积、炎症因子水平等指标评价各组大鼠的脑保护效果。
三、实验结果1. 神经功能评分头穴丛刺治疗组和药物治疗组大鼠的神经功能评分均较模型组有所改善，且头穴丛刺治疗组的改善程度更为显著。
2. 脑梗死体积头穴丛刺治疗组和药物治疗组大鼠的脑梗死体积较模型组明显减小，表明两种治疗方法均具有一定的脑保护作用。
3. 炎症因子水平头穴丛刺治疗组和药物治疗组大鼠的炎症因子水平较模型组降低，表明两种治疗方法均能减轻炎症反应。
四、讨论本研究结果表明，头穴丛刺对大鼠脑缺血再灌注损伤具有显著的脑保护作用。
这可能与头穴丛刺能够调节神经功能、减小脑梗死体积、降低炎症因子水平有关。
头穴丛刺作为一种非药物治疗方法，具有操作简便、安全无创、副作用小等优点，为临床治疗脑缺血提供了新的选择。
然而，头穴丛刺的具体作用机制尚需进一步研究。
此外，本研究还发现头穴丛刺治疗组的脑保护效果与药物治疗组相当，这为头穴丛刺在临床上的应用提供了有力支持。
脑毒清颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤后IL-6和TNF-α含量的影响
脑毒清颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤后IL-6和TNF-α含量的影响曲颖;王巍;贾维刚;王加志【摘要】目的观察脑毒清颗粒对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组和脑毒清组,采用线栓法(MCAO)制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,2h后抽取线栓对大鼠进行脑缺血再灌注,研究脑毒清颗粒对脑缺血再灌注神经功能缺损、脑梗死体积、血清中白细胞介素(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的影响.结果脑毒清颗粒能减少MCAO神经功能缺损评分和脑梗死体积,降低血中IL-6和TNF-α含量.结论脑毒清颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用.【期刊名称】《中国中医急症》【年(卷),期】2014(023)010【总页数】3页(P1823-1825)【关键词】脑毒清颗粒;缺血再灌注损伤;白细胞介素-6;肿瘤坏死因子-α【作者】曲颖;王巍;贾维刚;王加志【作者单位】黑龙江省医院,黑龙江哈尔滨150001;黑龙江省中医药科学院,黑龙江哈尔滨150001;黑龙江省中医药科学院,黑龙江哈尔滨150001;黑龙江中医药大学佳木斯学院,黑龙江佳木斯154000【正文语种】中文【中图分类】R289.9随着缺血性脑损伤机制研究的不断深入，脑缺血早期的炎症反应及其损伤日益受到关注［1］。
白细胞介素6（IL-6）通过多种方式参与缺血再灌注损伤过程。
炎性介质肿瘤坏死因子α（TNF-α）在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用。
本实验制作脑缺血再损伤模型（MACO），观察脑毒清颗粒对IL-6、TNF-α的影响，以研究脑毒清颗粒对脑缺血灌注损伤的保护作用机制。
现报告如下。
1.1 实验材料健康雄性SD大鼠80只，体质量（300±20）g，由哈尔滨市实验动物中心提供（2011007018）。
脑毒清颗粒剂（由黑龙江省中医研究院药剂室提供）；IL-6、TNF-α定量ELISA试剂盒（北京环亚泰克生物医学技术有限公司）；考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒（南京建成生物工程研究所）；其他试剂均为国产分析纯。
黄连解毒汤对脑缺血-再灌注大鼠脑组织IL-1β和TNF-a的影响
黄连解毒汤对脑缺血-再灌注大鼠脑组织IL-1β和TNF-a的影响吴安康;杨长江;王斌【期刊名称】《陕西中医学院学报》【年(卷),期】2010(0)5【摘要】目的观察黄连解毒汤对缺血性损伤大鼠脑组织炎性因子的影响。
方法采用线栓法复制大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型,用ELISA法测定大鼠患侧脑匀浆中炎性因子IL-1β和TNF-a的含量。
结果脑缺血2 h再灌22 h后,模型组大鼠患侧脑组织促炎细胞因子IL-1β和TNF-a均明显升高,与假手术组相比有显著差异((P<0.05或P<0.01)。
黄连解毒汤2.5、5和10 g/kg组患侧脑组织中的IL-1β含量降低,与模型组相比具有显著差异(P<0.01);黄连解毒汤2.5和10 g/kg组患侧脑组织中的TNF-a含量降低,与模型组相比具有显著差异(P<0.001,P<0.01)。
结论黄连解毒汤可降低缺血性损伤后脑组织炎性因子的升高,可能具有抗脑缺血作用。
【总页数】2页(P85-86)【关键词】黄连解毒汤;缺血性脑损伤;炎性因子【作者】吴安康;杨长江;王斌【作者单位】秦都区食品药品监督管理局;陕西中医学院附属医院;陕西中医学院【正文语种】中文【中图分类】R285;R289.5【相关文献】1.消栓通络胶囊对急性脑缺血再灌注大鼠脑组织TNF-α和IL-1β水平的影响 [J], 严亚锋;白海侠;2.消栓通络胶囊对急性脑缺血再灌注大鼠脑组织TNF-α和IL-1β水平的影响 [J], 严亚锋;白海侠3.帕瑞昔布对大鼠局灶脑缺血-再灌注脑组织GFAP及IL-1β、TNF-α的影响 [J], 刘少星;刘丹彦;代月娥;刘文良4.血栓心脉宁对脑缺血再灌注大鼠脑组织IL-1β和IL-12的影响 [J], 留晓强;王杰华;潘莹5.冰七片对脑缺血再灌注大鼠脑组织IL-1β、TNF-α影响 [J], 李静;陈永顺;蒋建平;杨斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
复方桂枝茯苓丸对脑缺血再灌注损伤大鼠TNF—α、ET的影响
张 建荣 １ 潘 强 柏 江锋 。 王 波 刘文 蕊
（ １ ． 陕西 中医学 院 ， 陕西 咸 阳 ７ １ ２ ０ ４ ６ ； ２ ． 同煤 集 团总 医院 ， 山西 大 同 ０ ３ ７ ０ ０ ２ ； ３ ． 陕西省 榆 林
市 中 医 医院 。 陕 西 榆林 ７ １ ９ ０ ０ ０ ）
Ｇｕ ｉ ｚ ｈ ｉ ｆ ｕ ｌ ｉ ｎ ｇ Ｐ ｉ ｌ ｌ ａ ｎ ｄ Ｌ ｉ ｇ ｕ ｓ ｔ ｒ ａ ｚ ｉ ｎ ｅ Ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｅ ． Ｔ ｈ ｅ １ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｆ ｓ ｅ Ｎ ｌ ｍ Ｔ ＮＦ — ． ＥＴ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｓ ｅ ｖｅ ｒ ｄ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｔ ｗｏ ｗｅ ｅ ｋ ｓ ． Ｒｅ － ｓ ｕ ｉ ｔ ｓ ：Ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｕ ｎ ｄ Ｇｕ ｉ ｚ ｈ ｉ ｆ ｕ ｌ ｉ ｎ ｇ Ｐ ｉ ｔ ｌ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ＣＲＩ ｒ ａ ｔ ｓ ｃ ｌｌ ａ ｅ ｄ ａ ｌ ｐ ｈ ａ， Ｅ Ｔ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ．Ｃｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ：Ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｕ ｎ ｄ
乌司他丁降低脑缺血再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α的机制
乌司他丁降低脑缺血再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α的机制李晓昶白宏英曾志磊王轲1（郑州大学第二附属医院神经内科，河南郑州450014）〔摘要〕目的探讨乌司他丁通过JNK 通路和p38通路降低肿瘤坏死因子（TNF ）-α的表达，以研究乌司他丁的抗炎机制。
方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO ）模型。
应用RT-PCR 方法检测治疗前后缺血侧TNF-α、JNK 、p38含量变化。
结果与假手术组相比，缺血再灌注脑皮层TNF-α、JNK 、p38表达水平明显增加，乌司他丁可抑制缺血再灌注脑皮质TNF-α、JNK 、p38的表达。
结论乌司他丁可能通过抑制JNK 和p38的表达减少炎症因子TNF-α的释放而抑制脑缺血再灌注损伤炎症反应。
〔关键词〕乌司他丁；脑缺血再灌注；TNF-α；p38；JNK 〔中图分类号〕R749〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）02-0332-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.02.0491郑州市第七人民医院心外科通讯作者：白宏英（1964-），女，教授，主任医师，硕士生导师，主要从事脑血管疾病研究。
第一作者：李晓昶（1985-），女，在读硕士，主要从事脑血管疾病研究。
炎症反应在脑缺血再灌注（I /R ）的发生发展中起重要作用，炎症反应能加重缺血半影区转变为梗死中心区。
肿瘤坏死因子（TNF ）-α是炎症反应的始发细胞因子。
在脑I /R 时具有保护作用，但其机制尚不清楚。
乌司他丁（UT ）即尿胰蛋白酶抑制剂，除了抑制以胰蛋白酶为主的多种酶活性以外，还有抗炎症介质作用。
p38-MAPK 和JNK-MAPK 在炎症信号转导途径的发病机制中起着重要作用，UT 可能通过p38-MAPK 和JNK-MAPK 信号通路减低TNF-α的含量。
本研究应用RT-PCR 的方法检测UT 治疗前后脑I /R 过程中损伤皮质TNF-α，JNK ，p38的含量变化。
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穴位埋药对脑缺血再灌注大鼠海马细胞因子ＴＮＦ－α含量的影响[摘要] 目的比较胶原川芎嗪缓释剂穴位埋药与腹腔注射川芎嗪对脑缺
血再灌注后大鼠海马炎性细胞因子TNF－α含量的影响，以期为针灸临床治疗提供更有效的方法。
方法将sD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组(24h组、72h组、120h组)、穴位埋药组(24h组、72h组、120h组)、腹腔注射组(24h组、72h组、120h组)。
采用改良线栓法制备局灶型脑缺血(MCAO)再灌模型，以胶原川芎嗪制备的缓释剂(药线)在大椎、双侧内关穴位埋药。
用放射免疫法观察各组大鼠海马组织中TNF－α含量的变化。
结果脑缺血再灌注模型24h组大鼠海马组织TNF－α含量即明显升高达到峰值，之后逐渐下降，与正常组，假手术组比较有显著性差异(P＜0.01)；治疗各组大鼠缺血侧海马组织TNF－α含量均有所降低，与模型组同时相比较有显著意义(P＜0.01)，并随时间的推移逐渐趋于正常。
穴位埋药组治疗效果明显优于腹腔注射组(P＜0.01)。
结论穴位埋药可降低脑缺血再灌模型大鼠海马组织TNF－α的水平，减少炎症反应引起继发的脑神经元损伤，疗效优于腹腔注射组。
[关键词]脑缺血再灌注；穴位埋药；腹腔注射；海马；TNF－α
缓释剂具有长效作用和恒释作用，近年来它的发展及应用越来越受到人们的重视，但鲜见其应用于脑病的治疗。
我们采用现代工艺制备胶原川芎嗪缓释剂，观察大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织TNF－α含量的变化及穴位埋药与腹腔注射的影响，探讨穴位埋药对脑缺血再灌注损伤的保护作用。
1 材料与方法
1．1实验动物及分组清洁级健康SD大鼠52只，雌雄不限，体重为(200+20)g，由湖北中医学院实验动物中心提供。
于实验前一周一次性购进，饲养于安静、温暖且避强光的环境中，室温(22±2)℃，自由饮水饮食。
随机分为5组：正常组4只，假手术组12只，模型组12只，穴位埋药组12只，腹腔注射组12只。
另购10只以造模备用。
1．2 胶原川芎嗪缓释剂(药线)的制备采用酸溶解法从大鼠鼠尾肌腱提取胶原蛋白，和中药川芎的有效成分川芎嗪(北京市永康药业有限公司)按照一定比例制成药线，常温干燥，紫外照射消毒，备用。
1．3 试剂及主要仪器TNF－α放射免疫试剂盒，购于北京科美东雅生物技术有限公司；50ml醋酸缓冲液(pH4.75)，无水乙醇，生理盐水，由华中科技大学同济医学院组胚教研室提供(北京中山生物技术有限公司)。
LG-10低温高速离心机，(北京医用离心机厂)；GC-1200T放射免疫计数器(中国科技大学科技实业公司中佳光电仪器分公司)。
1．4 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型制备及处理
1．4．1 线栓的制备选择直径为0.26-0.28mm单股缝合尼龙线，长60mm,将插入端加热熔化，使之成为光滑球面，直径约0.30mm，用酒精清洁后置于生理盐水中备用。
1．4．2 MCAO/R模型制备局灶性脑缺血(Middlecerebral artery occlusion，MCAO)再灌模型的建立采用改良线栓法。
大鼠造模前禁食不禁水24h，称重后以10％水合氯醛(0.3ml/100g)进行腹腔麻醉并保温。
麻醉大鼠仰卧固定于手术台上，常规皮肤消毒后，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉(CCA)，分离出颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA)。
电凝ECA 脑分支，结扎游离ECA主干，分离ICA主干至翼腭动脉(PPA)，并在其起始部位置一动脉夹。
先将CCA用动脉夹夹住，再在ECA残端剪0.2mm的小口，将栓线插入。
轻推尼龙线尾端经CCA分叉部沿ICA入颅，至大脑中动脉(MCA)，遇阻即止。
尼龙线插入深度约18mm，30min 后，抽取栓线对大鼠进行脑缺血再灌，缝合切口后，用碘酒消毒，动物保温喂养，注意观察造模大鼠生理指征。
1．4．3 处理方法正常组：4只，正常给水给食，不予处理。
假手术组：12只，大鼠麻醉切开颈部皮肤后，仅分离CCA，ECA及ICA至PPA，不插线栓。
按时相分为24h、72h、120h3组，各4只。
模型组：12只，栓塞30rain后再灌注。
按时相分为24h、72h、120h3组，各4只。
穴位埋药组：12只，栓塞30rain 后再灌注。
按时相分为24h、72h、120h3组，各4只。
大鼠选取大椎穴、双侧内关穴(参照华兴邦制定的《实验动物穴位图谱》)进行治疗。
大椎：第7颈椎与第1胸椎间，背部正中；内关：前肢内侧，离腕关节约3mm左右的尺桡骨间。
自制药线长约2mm，其中药物含量约0.2mg。
埋药方法：28号1.5寸针灸针剪去针尖、磨平，穿入7号注射针头制成埋药工具。
大鼠大椎、内关穴备皮、常规消毒，药物及埋药针具经紫外照射消毒。
将药线装入注射针头，大椎、内关穴埋药时，直刺2mm轻推针灸针针柄将药线埋人，然后将注射针头缓慢退出，埋药处常规消毒。
脑缺血再灌注后lh穴位埋药一次，以后每天埋药一次，取材当天不埋药治疗。
腹腔注射组：12只，栓塞30min后再灌注。
按时相分为24h、72h、120h 3组，各4只。
选用川芎嗪注射液(北京市永康药业有限公司，2ml：40mg)，注射剂量为33.3mg/kg(依据《实验针灸学》实验动物与人用药量的换算方法计算)。
用5号注射针头从大鼠腹股沟处缓慢推注药液。
脑缺血再灌注后1h腹腔注射一次，以后每天注射一次，取材当天不注射治疗。
1．5 神经功能缺损评分参照Zea—LongaE41的5级评分标准对其神经障碍进行评分。
0级：无神经功能丧失；1级：左前肢不能充分伸展；2级：向左环形运动，轻度局灶神经功能缺失；3级：向左侧倒，中度局灶神经功能缺失；4级：不能自然行走，重度局灶神经功能缺失。
只有神经功能障碍在l级以上的存活大鼠才能保留下来。
1．6 标本制备动物完成观察时间后，在大鼠尽量安静的条件下迅速断头取脑，在冰盘上迅速分离出病灶侧(正常组相对应侧)的海马区脑组织，称取50mg 左右置于冰浴中盛有50mM醋酸缓冲液(pH4.75)的匀浆器中，将组织粉碎匀浆后的悬浮液移入10ml试管内，用2ml无水乙醇洗匀浆器，然后将洗后的乙醇倒入悬浮液内静置5min，350rmp离心15min，将上清液收集在青霉素小瓶内，再用
75％乙醇1ml洗匀浆器连续两次，用该2ml 75％乙醇洗沉淀，混匀，3500rpm离心15min，合并上清液，60℃水浴中吹干，4℃保存备测。
1．7 TNF－α含量测定TNF－α含量测定用放射免疫法，具体操作依据试剂盒说明书进行。
1．8 数据处理所有数据以x±s表示，组间比较用t检验，P＜0.05设为有显著性差异。
所有数据均输入计算机，以SPSS13.0软件统计包处理。
2 结果
假手术组大鼠海马组织TNF－α含量虽有一定升高，但与正常组比较无显著意义(P＞0.05)；模型24h组大鼠海马组织TNF－α含量即明显升高达到峰值，之后逐渐下降，与正常组、假手术组比较有显著性差异(P＜0.01)；治疗各组大鼠缺血侧海马组织TNF－α含量均有所降低，与模型组同时相比较有显著意义(P＜0.01)，并随时间的推移逐渐趋于正常。
其中穴位埋药组效果明显优于腹腔注射组(P＜0.01)。
3 讨论
脑缺血再灌注后可诱导多种炎性细胞因子的表达，TNF－α作为一种重要的炎性细胞因子参与了脑损伤的发病过程。
许多研究表明，脑缺血再灌注后TNF －α的表达增加，提示TNF－α参与了脑缺血再灌注损伤。
肖阳等实验发现，脑缺血再灌注后2h大鼠缺血侧皮质TNF－α含量明显升高(与假手术组比较P＜0.01)，经蛇毒活性多肽处理后其TNF－α含量明显下降(与模型组比较P＜0.05)。
另有实验证明，电针可以下调脑缺血再灌注损伤引起的TNF－α的升高，减少炎症反应引起的继发性神经元损伤。
本实验研究结果与前期研究结果相似，模型24h组大鼠海马组织TNF－α含量即明显升高达到峰值，之后逐渐下降，与正常组、假手术组比较有显著性差异(P＜0.01)；治疗各组能降低大鼠缺血侧海马组织TNF－α含量，与模型组同时相比较有显著意义(P＜0.01)，并随时间的推移逐渐趋于正常。
结果证明，穴位埋药与腹腔注射治疗各组可以通过下调脑缺血再灌注后炎性细胞因子TNF－α的表达起到脑保护作用，其中穴位埋药组效果明显优于腹腔注射组(P＜0.05)。
胶原是人体和脊椎动物的主要结构蛋白，是支持组织和结缔组织(皮肤、肌腱和骨骼的有机成分)的主要组成部分，是一种理想的生物医用材料和药物的载体。
川芎嗪(Tetramethylpyrazine)是中药川芎的一种主要成分，其化学本质是四甲基吡嗪，对急慢性缺血性脑血管病有肯定的治疗效果。
我们用胶原川芎嗪制备缓释剂，选取大椎、双侧内关穴位埋药观察其对脑缺血再灌注大鼠海马组织中TNF －α含量的影响，发现穴位埋药组对TNF－α的调节明显优于腹腔注射组(P＜0.01)，本实验提示，疗效可能与药物的作用途径不同有关。
腹腔注射组治疗药物先要经过血液循环才能到达病灶脑区；而穴位埋药组，埋药后药物可能以经络为通道，直达脑部，加上缓释剂具有长效作用和缓释作用，可以通过不断刺激穴位和缓慢释放药物，通过腧穴和药物的协同作用起到更明显的治疗效果。