大鼠卵巢培养
当归芍药散及其不同提取部位对离体培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响
分 泌 ， 括 雌 二 醇 （ 和 孕 酮 （ ） 是 维 持 女 性 正 常 包 Ｅ） Ｐ ，
１ ｅ ， 地 内蒙 海 格 尔 ； 苓 为 Ｐ ｒ Ｏ Ｏ ， 于 浙 ｏ ｓ产 ｄ 茯 ｏｉ ＣＣＳ 产 ａ 江松 阳 ； 泽泻 为 Ｒ ｉ ｍ ｌ ｍａ 产 于 四川彭 ｋ 。 以 ｈｚ ａＡ ｉ ， ｏ ｓ ， Ｊ １ 上药物 经南京 中 医药 大学段 金廒 教授鉴 定 ． 符合《 中 华 人民共 和国药典 》 ２ ０ （０ ５年版 ） 项下标准 ， 品保 留 样 于南京 中医药 大学 标本 馆 （ Ｏ Ｎ Ｕ Ｃ ２０ ０ ｌ Ｎ ． Ｊ Ｔ Ｍ一 ０ ６ ８ １ ２ ０ ０ １ ） 当归 芍药散水 煎液 、 ０ ６８６ 。 水提 ８ ％醇沉沉 ０ 淀、 醇溶 液 部 分 、 溶 部 分 、 不 溶 部分 、 洗 脱部 水 水 水
１ 材 料
分 、０ １ ％～８ ％乙 醇洗 脱 部 分 、５ ０ ９ ％乙 醇洗 脱 部分 、 ９ ％乙醇提取 液 、 油醚 提取 部分 、 ０ 石 二氯 甲烷 萃取部 分 、乙酸 乙酯 萃取部 分 由江苏 省方剂研 究重点 实验 室 提供 。 １２ 动 物 非 孕 ３周 龄 雌 性 Ｓ ｒｇ ｅ Ｄ ｗｅ － ｐａｕ — ａ ｌ ｙ大 鼠 （０ ０ｇ ，购 于江苏 省实 验动 物 中心 ，合格 证号 ６ ￣７ ）
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生理功 能 ， 建立并 维持 妊振 以及性 腺发育所 必需 的 。 本研究 以体外培 养 的大 鼠卵巢颗 粒细胞作 为研 究对 象 ，直接 在细胞 水平 观察 当归芍 药散及 其不 同提取 部位对 卵巢颗粒 细胞增 殖 功能 的影 响 ，探 讨 当归 芍 药散通过 该途径 治疗痛经 的效应 及物质基 础 。
大鼠卵巢颗粒细胞体外培养及哈蟆油对其增殖功能的影响
大鼠卵巢颗粒细胞体外培养及哈蟆油对其增殖功能的影响零小妹;谭焱;季波;杨晶晶;吴新荣;梁磊【摘要】目的采用CCK-8法研究哈蟆油对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响,对比分析哈蟆油含药血清对颗粒细胞的最佳作用浓度和时间,为进一步体外试验奠定基础.方法选用25日龄未成年雌性SD大鼠,腹腔注射孕马血清,48 h后脱颈处死,收集卵巢颗粒细胞,在DMEM-F12培养液中培养,并通过HE染色和免疫荧光技术对颗粒细胞进行鉴定.25只SD大鼠分为正常对照组、阳性药对照组、哈蟆油低、中、高剂量组,灌胃给药7d后采血并分离血清.将体积分数为10％,20％,40％,80％各组不同浓度的含药血清加入体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞体系中,采用CCK-8法检测各组24、48 h和72 h细胞增殖情况.结果哈蟆油显著提高了颗粒细胞的增殖能力,有一定的量效和时效关系,随着哈蟆油浓度的增加,其促增殖能力逐渐增强,在作用48 h后,20％浓度体积分数的哈蟆油含药血清组最为显著(P＜0.05).结论体外建立大鼠卵巢颗粒细胞的培养方法,有助于深入研究哈蟆油等中药对卵巢的作用和机制.%Objective To optimize the effective methods ofisolation,purification,culture in vitro and identification of SD rat ovarian granulosa cells,to research the effects of Oviductus Ranae on the proliferation of rat ovarian granulosa cells by CCK-8,and to contrastively analyze the best optimal action concentration and time of serum contsining Oviductus Ranae on granulosa cells to lay the foundation for further in vitro experiment.Methods Nonage SD rats aged 25 d were selected and intraperitoneally injected by pregnant mare serum,then killed after 48 h.Ovarian granulosa cells were collected and cultured in the DMEM-F12 culture solution.The hematoxylin & eosin(HE) staining andimmunofluorescence technique were used to identify the ovarian granulosa cells.Twen ty-five SD rats were randomly divided into the normal control group,positive medicine control group,and low,middle and high do ses Oviductus Ranae groups.Blood was collected and serum was separated after 7 d mediaction gavage.The volume percent of 10 ％,20％,40％,80％serum in each group was added into the in vitro medium system of ovarian granulosa cells culture.Then the cell proliferation situation at24,48,72 h in each group was measured by CCK-8.Results Oviductus Ranae significantly increased the proliferation ability of granulosa cells in a certain dose-dependent relation.With the increase of Oviductus Ranae concentration con centration,its.proliferation ability was gradually increased,after 48 h action,which in the Oviducthus Ranae-Comtaining serum group with the volume fraction of 20％ was most significant (P＜0.05).Conclusion Establishing in vitro cultural method of rat o varian granulosa cells is conductive to further research the action and mechanism of Oviductus Ranae on ovary.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2017(046)013【总页数】5页(P1792-1796)【关键词】哈蟆油;卵巢颗粒细胞;增殖;含药血清;CCK-8【作者】零小妹;谭焱;季波;杨晶晶;吴新荣;梁磊【作者单位】广东药科大学中药学院,广州510006;广州军区广州总医院药剂科,广州510010;广州军区广州总医院干部病房一科,广州510010;广州军区广州总医院药剂科,广州510010;广东药科大学中药学院,广州510006;广州军区广州总医院药剂科,广州510010;广州军区广州总医院药剂科,广州510010;广东药科大学中药学院,广州510006;广州军区广州总医院药剂科,广州510010【正文语种】中文【中图分类】R711女性进入围绝经期卵巢功能衰退可能导致多种疾病发生[1]。
大鼠卵泡提取原理
大鼠卵泡提取的原理主要是通过手术取出大鼠的卵泡，利用特殊的试剂和条件模拟体内环境进行培养，以研究卵泡生长发育和排卵等过程。
这个过程涉及到生理学、解剖学、组织学、细胞生物学等多学科知识，以及精密的手术技术和实验仪器。
具体来说，大鼠卵泡提取的原理主要包括以下几个方面：
1. 手术取出大鼠卵巢卵泡：首先需要对大鼠进行全身麻醉，然后打开腹腔，暴露卵巢，用特殊工具分离卵泡，并将其取出。
这个过程需要精确控制手术刀的深度和力度，以避免对大鼠造成伤害。
2. 模拟体内环境培养：卵泡在培养过程中需要模拟体内的环境，包括温度、湿度、pH值、渗透压、营养物质等。
同时，还需要添加一些特殊的试剂，如激素、生长因子等，以促进卵泡的生长发育。
3. 研究卵泡生长发育和排卵：通过观察卵泡在培养过程中的形态学和生理学变化，可以研究卵泡的生长发育过程和排卵机制。
此外，还可以利用基因芯片等技术分析培养液中哪些细胞因子和生长因子表达发生变化，以进一步揭示卵泡发育和排卵的分子机制。
总之，大鼠卵泡提取是一个复杂的过程，需要多学科知识和技术的综合运用。
这个过程为研究卵泡生长发育和排卵提供了重要的实验手段，有助于深入了解人类生殖系统的功能和疾病的发生机制，为不孕不育等生殖系统疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。
卵巢实验报告
一、实验目的1. 了解卵巢的结构和功能。
2. 掌握卵巢的生理学特点。
3. 学习卵巢的实验操作技术。
二、实验材料1. 实验动物：雌性大白鼠。
2. 实验仪器：解剖显微镜、手术器械、注射器、生理盐水、显微镜等。
3. 实验试剂：戊巴比妥钠、肝素钠、生理盐水、生理盐水溶液等。
三、实验方法1. 实验动物处理：选用健康雌性大白鼠，随机分为实验组和对照组。
实验组动物进行卵巢摘除手术，对照组动物进行假手术。
2. 卵巢摘除手术：（1）麻醉：将实验组动物用戊巴比妥钠进行麻醉，剂量为50mg/kg体重。
（2）手术操作：打开腹腔，暴露卵巢，用镊子夹住卵巢，将其从输卵管和子宫的连接处切断，取出卵巢。
（3）缝合：将卵巢摘除后，用生理盐水清洗创面，用生理盐水溶液缝合腹腔。
3. 组织切片制备：（1）取实验组和对照组动物的卵巢组织，置于10%甲醛溶液中固定。
（2）将固定后的卵巢组织进行石蜡包埋，切片。
（3）切片进行苏木精-伊红染色。
4. 显微镜观察：（1）显微镜下观察卵巢组织的结构，包括卵泡、黄体、卵泡膜等。
（2）观察实验组和对照组卵巢组织的差异。
四、实验结果1. 卵巢结构：（1）卵巢表面为白膜，内部含有卵泡、黄体、卵泡膜等结构。
（2）卵泡：包括初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡等。
（3）黄体：由卵泡破裂后形成的结构，分泌孕酮。
2. 卵巢功能：（1）分泌雌激素和孕酮，调节月经周期和生殖功能。
（2）产生卵子，参与受精和胚胎发育。
3. 实验组与对照组卵巢组织的差异：（1）实验组卵巢组织结构较对照组更为疏松，卵泡数量减少。
（2）实验组卵巢组织中黄体数量减少，孕酮分泌减少。
五、实验讨论1. 卵巢是女性生殖系统的重要组成部分，具有产生卵子和分泌激素的功能。
2. 卵巢摘除手术可以模拟女性绝经期的生理状态，研究卵巢功能的变化。
3. 实验结果表明，卵巢摘除后，卵巢组织结构发生变化，卵泡和黄体数量减少，孕酮分泌减少，与绝经期女性的生理状态相似。
六、实验结论1. 本实验成功制备了卵巢摘除动物模型，为研究卵巢功能提供了实验基础。
大鼠卵巢颗粒细胞体外培养及哈蟆油对其增殖功能的影响
［ 摘要 ］ 目的 采用Ｃ Ｃ Ｋ － ８法研 究哈 蟆油对体外培养 大鼠卵巢颗粒细胞增 殖的影响， 对 比分析 哈蟆油含 药血 清对 颗 粒细胞 选用 ２ ５日龄 未成年雌性 ｓ Ｄ大鼠 ， 腹腔 注射 孕马血清 ， ４ ８ ｈ后 脱颈
的最佳作 用浓度 和时间 ， 为进一 步体 外试验 奠定基 础。方法
［ 中 图分 类 号 ］ Ｒ ７ １ １ ［ 文 献标 识码 ］ Ａ ［ 文章编号］ １ ６ ７ １ — ８ ３ ４ ８ （ ２ ０ １ ７ ） １ ３ — １ ７ ９ ２ — ０ ５
Ｃｕ ｌ ｔ ｕｒ ｅ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｏ ｆ ｒ ａ ｔ ｏ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ ｇ ｒ ａ ｎｕ ｌ ｏ ｓ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａｎ ｄ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｒａ ｎａ ｅ Ｏｖ ｉ ｄｕ ｃ ｔ ｕ ｓ ｏ ｎ ｉ ｔ ｓ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
零 小妹 “ 。 ， 谭 焱。 ， 季 波。 ， 杨 晶晶 。 ， 吴新 荣。 ， 梁 磊 （ １ ． 广 东药科 大 学 中药 学院 ， 广州 ５ １ ０ ０ ０ ６ ； ２ ． 广 州军 区广 州总 医院药 剂科 ， 广州 ５ １ ０ ０ １ ０ ；
３ ． 广 州 军 区广 州 总 医院干部病 房 一科 ， 广州 ５ １ ０ ０ １ ０ ）
卵巢结构实验报告
一、实验目的1. 了解卵巢的位置、形态和结构；2. 观察卵巢的内部结构，包括卵巢小叶、卵泡、黄体等；3. 学习卵巢的生理功能及其在女性生殖系统中的作用。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：雌性小白鼠卵巢组织；2. 实验仪器：显微镜、解剖显微镜、手术刀、镊子、剪刀、培养皿、生理盐水、70%酒精、蒸馏水等。
三、实验步骤1. 实验动物处死：取雌性小白鼠一只，用颈椎脱位法处死，打开腹腔，取出卵巢；2. 漂洗卵巢：将卵巢放入70%酒精中浸泡10分钟，然后用生理盐水清洗；3. 观察卵巢外观：用解剖显微镜观察卵巢的形态、大小和颜色；4. 横切卵巢：用手术刀将卵巢横切成薄片；5. 制片：将卵巢切片放入培养皿中，用生理盐水漂洗，然后用70%酒精固定；6. 观察卵巢结构：用显微镜观察卵巢切片，观察卵巢小叶、卵泡、黄体等结构；7. 记录实验结果：记录卵巢的结构特点和数量。
四、实验结果1. 卵巢外观：卵巢呈灰白色，表面光滑，呈椭圆形；2. 卵巢结构：（1）卵巢小叶：卵巢小叶是卵巢的基本结构单位，由卵泡、黄体和间质组成；（2）卵泡：卵泡是卵巢中的主要结构，分为初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡；（3）黄体：黄体是卵泡破裂后形成的结构，具有分泌激素的作用；（4）间质：间质由结缔组织、血管和神经组成，为卵巢提供支持和营养。
五、实验讨论1. 卵巢是女性生殖系统中重要的器官，其主要功能是产生卵子和分泌激素；2. 卵巢小叶是卵巢的基本结构单位，由卵泡、黄体和间质组成；3. 卵泡是卵巢中的主要结构，分为初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡，其中成熟卵泡是卵子释放的地方；4. 黄体是卵泡破裂后形成的结构，具有分泌激素的作用，如孕酮和雌激素，维持妊娠；5. 间质为卵巢提供支持和营养，同时参与激素的分泌。
六、实验结论通过本次实验，我们了解了卵巢的位置、形态和结构，掌握了卵巢小叶、卵泡、黄体等结构的观察方法，明确了卵巢在女性生殖系统中的作用。
这对于进一步研究女性生殖生理和疾病诊断具有重要意义。
《卵巢Ⅱ号对多囊卵巢大鼠垂体、肾上腺及卵巢作用的实验研究》
《卵巢Ⅱ号对多囊卵巢大鼠垂体、肾上腺及卵巢作用的实验研究》摘要本研究以多囊卵巢大鼠为研究对象，采用卵巢Ⅱ号作为治疗手段，观察其对垂体、肾上腺及卵巢的作用，通过一系列的实验分析，以评估其效果与作用机制。
研究结果提示卵巢Ⅱ号能够改善多囊卵巢大鼠的生理功能，且作用明显。
本文将对实验过程及结果进行详细阐述。
一、引言多囊卵巢综合征（PCOS）是一种常见的内分泌紊乱性疾病，主要表现为月经失调、不孕、高雄激素血症等特征。
目前，对于PCOS的治疗多以激素替代疗法为主，但副作用及长期疗效不尽如人意。
因此，寻求安全有效的治疗方法具有重要意义。
近年来，中医理论中对于多囊卵巢综合征的调治颇具特色，本实验采用中药制剂卵巢Ⅱ号，对多囊卵巢大鼠的垂体、肾上腺及卵巢的作用进行深入研究。
二、材料与方法1. 实验材料本实验所用药品为卵巢Ⅱ号，实验动物为多囊卵巢大鼠模型。
2. 实验方法将多囊卵巢大鼠随机分为实验组和对照组，实验组给予卵巢Ⅱ号治疗，对照组给予等量安慰剂。
通过定期给药，观察并记录大鼠的生理变化及各项指标。
采用组织学、免疫组化、生化分析等方法，对垂体、肾上腺及卵巢进行检测分析。
三、实验结果1. 垂体功能变化实验结果显示，经过卵巢Ⅱ号治疗的多囊卵巢大鼠，其垂体功能得到明显改善。
促性腺激素（FSH）和促黄体生成素（LH）水平趋于正常，表明卵巢Ⅱ号能够调节垂体激素的分泌，有助于恢复正常的内分泌环境。
2. 肾上腺功能变化在肾上腺方面，实验结果显示卵巢Ⅱ号可有效降低多囊卵巢大鼠肾上腺皮质的体积和重量，减少肾上腺皮质激素的分泌，从而改善因PCOS引起的肾上腺功能紊乱。
3. 卵巢作用及形态学改变对于卵巢而言，通过显微镜下观察和生化分析发现，卵巢Ⅱ号能促进卵泡发育和排卵功能恢复。
形态学上，大鼠的卵泡数量增多，体积增大，排卵过程趋于正常化。
同时，对多囊性囊肿也有明显改善作用。
四、讨论本实验结果显示，卵巢Ⅱ号在治疗多囊卵巢大鼠方面具有明显优势。
Wistar大鼠卵巢颗粒细胞的分离、培养与鉴定
Wistar大鼠卵巢颗粒细胞的分离、培养与鉴定肖娟;邬静;屠迪;袁慧;文利新;李荣芳【期刊名称】《中国老年保健医学》【年(卷),期】2012(010)001【摘要】目的探讨Wistar大鼠卵巢颗粒细胞的分离、培养与鉴定的方法.方法选用21～29天龄wistar大鼠,皮下注射PMSG,取出卵巢,采用机械分离方法释放卵巢颗粒细胞,于CO2培养箱中培养.用HE染色和免疫细胞化学法观察FSHR蛋白表达的方法来对卵巢颗粒细胞进行鉴定,并用MTT法测定细胞生长曲线,同时检测E2、P的分泌情况.结果分离培养出的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞存活率＞90％,细胞纯度达到90％以上；体外培养的颗粒细胞对数生长期为48～ 96小时；HE染色在镜下可见贴壁细胞形态完整,细胞浆和细胞核染色均匀,核染深蓝色,位于细胞中央,胞浆淡红色并含有许多颗粒；激素的分泌趋势与细胞的生长情况基本一致,于在96～120小时左右达到峰值,随后逐渐下降.结论采用机械分离法分离培养的卵巢颗粒细胞纯度高、活性好,用FSHR表达染色鉴定颗粒细胞是一种简便快速的方法.【总页数】4页(P8-11)【作者】肖娟;邬静;屠迪;袁慧;文利新;李荣芳【作者单位】湖南农业大学动物医学院 410128;湖南农业大学动物医学院 410128;湖南农业大学动物保健工程技术研究中心 410128;湖南农业大学动物医学院410128;湖南农业大学动物保健工程技术研究中心 410128;湖南农业大学动物医学院 410128;湖南农业大学动物保健工程技术研究中心 410128;湖南农业大学动物医学院 410128;长沙绿叶生物科技(集团)有限公司 410128;湖南农业大学动物医学院 410128;湖南农业大学动物保健工程技术研究中心 410128【正文语种】中文【相关文献】1.Wistar大鼠脑和脊髓微血管周细胞的分离、培养、鉴定及其功能差异的比较 [J], 武清斌;荆瀛黎;苑晓晨;李宏伟;修瑞娟2.Wistar大鼠胚胎脑源性神经干细胞分离、培养及其鉴定 [J], 葛岩;王医术;张丽红;高婷;廖祥宇;李亚娟;王心蕊;李玉林3.Wistar大鼠骨髓源性神经干细胞分离与培养及其鉴定 [J], 刘永良;孙培;李泽福;隋德华;刘鹏飞;邵伟4.新生Wistar大鼠心肌细胞的分离培养与鉴定 [J], 陈克研;蔡书成;陈振文;王洋;张贺;王承利5.新生Wistar大鼠心肌细胞的分离培养与鉴定 [J], 陈克研;王洋;王承利;张贺;梁娟;孙倩;苏朋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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1．材料和方法
1.1实验动物
1）采用健康性成熟为交配过的雌性SPF级Wistar大鼠，鼠龄（60±5）d，每只体质量200～250g，试验期间提供足量自来水及普通饲料，动物是温度保持在22℃左右，自动通风，光照周期8:00～18:00,适应3d后用于实验。
《被动吸烟对大鼠卵巢雌激素受体α、孕激素受体表达的影响》解剖学杂志201 1年第34卷第l期
2）雌性SD大鼠90只，日龄50-60d，体质量145-165g，普通喂养，自由进食，给予12h的亮暗间隔。
《大鼠胚胎卵巢原位移植的生殖内分泌研究》南方医科大学报
3）成年雌性Wistar大鼠清洁级39只，体重（186.76±9.33）g。
上海实验动物中心提供。
成年雌性SD大鼠清洁级16只，体重（243.93±17.4）g。
福建医科大学实验动物中心提供。
《镉对大鼠卵巢性激素分泌功能的影响》毒理学杂志2005年12月第19卷第四期
4）未交配过成年雌性SD大鼠，经阴道细胞学检查，证实动情周期正常者作为受体，随机分成4组，每组20只。
供体分别为成年雌性sD大鼠和出生2～3天雌性SD大鼠，各20只。
《大鼠卵巢组织移植的实验研究》中华器官移植杂志1996年7月第17卷第三期
5）受体为SD成年雌性大鼠(购于浙江大学医学院实验动物中心)，体重220～250 g。
卵巢来源：出生24 h以内的SD新生大鼠(购于浙江大学医学院实验动物中心)卵巢。
《微囊化新生大鼠卵巢组织体外及异体移植》细胞生物学杂志
1.2实验试剂
1)兔抗大鼠ERa、PR多克隆抗体购自Santa-Cruz公司；SP免疫组织化学试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
《被动吸烟对大鼠卵巢雌激素受体α、孕激素受体表达的影响》解剖学杂志201 1年第34卷第l期
2)孕马血清促性腺激素（PMSG),杭州动物药品厂;人绒毛膜促性腺激素（HCG)，安徽新力药业股份有限公司。
孕酮（P)、雌二醇（E2）放免测定药盒，北京北方生物制品研究所，DME/F-12 1:1细胞孵育盒，Hyclone公司。
《镉对大鼠卵巢性激素分泌功能的影响》毒理学杂志2005年12月第19卷第四期
3)海藻酸钠f中国医药集团上海化学试剂公司)；聚左赖氨酸分子量为27400(Sigma公司，美国)；RPMI 1640培养基(上海吉诺生物医药技术有限公司)；胎牛血清(FBS，杭州四季青生物制品所)；Estradiol Test Units(美国Beckman Coulter公司)；PGN Test Units(美国Beckman Coulter公司)；其余试剂均为分析纯。
《微囊化新生大鼠卵巢组织体外及异体移植》细胞生物学杂志
2.大鼠器官体外培养
2.1 椎间盘体外培养
1）取健康清洁级SD大鼠60只，5-6周龄，150g左右，无菌条件下完整取出腰段椎间盘器官（包括髓核组织、纤维环、上下软骨终板及少量附着于终板的松质骨）共350个，随机分为5组；
2）无菌条件下高渗肝素盐水冲洗椎间盘3次，2.5倍放大镜下进一步修整后置入12孔培养皿内，37℃、5％CO2条件下培养，高渗DMEM/F12培养液通过每1000ml等渗培养液内加入3.72克NaCl获得，小牛血清浓度：20％，每天换液一次。
2.2 体外前庭器官培养
按照Lambert的方法，取新生2 d大鼠，20℃冰箱冷冻麻醉5min后全身浸入750mL／L乙醇5 min，无菌条件下断头，置于冰的Hank液中，在解剖显微镜下取出椭圆囊，打开囊壁，去除耳石，用吸管悬滴将椭圆囊移人鼠尾胶包被过的24孔培养板中央，放于37℃，50
mL／L CO2培养箱，待组织贴壁后加入适量DMEM高糖培养液，置于培养箱中培养．每日于倒置显微镜下观察移植物色泽及培养液情况，隔日将原液吸出，加入等量培养液．培养至1，3，5和7d取出固定，透射电镜观察。