pESC-URA(酵母表达载体)
pPIC9k-His酵母表达载体说明
其他酵母表达载体：
p416GFD p53blue pACT2-AD pAD-GAL4-2.1 pADH2 pAUR123 pBridge pCL1 pDEST32 pDisplay pDR195 pESC-His pESC-Leu pESC-TRP pESC-URA pFA6a-FGP(S65T)-kanMX6 pFLD pFLD/CAT pFLDα pGADT7-T pGAG424 pGAPZA pGAPZB pGAPZαB pGAPZαC pGBKT7 pGBKT7-53 pGBKT7-Lam pHIC-PI pHIL-D2 pHIL-S1 pHis2 pHisSi-1 pPIC9 pPIC9K pPIC9k-His pPICZA pPICZB pPICZC pPICZαA pPICZαB pPICZαC pPICZαD pPICZαFC pPICZαGB pPink-HC pPink-LC pPinkα-HC pRS316 pRS403 pRS405 pRS406 pRS414 pRS415 pRS416 pRS41H pRS426 pRS426gal pSEP1 pSEP2 pSEP3 pSos pSos-MAFB pUG66 pYC2/CT pYC2/NTA
载体名称
pPIC9k-‐His
Invitrogen pPIC9k-‐His 酵母表达载体 -‐-‐ -‐-‐ 多克隆位点，限制性内切酶 -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ Ampicillin -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐ -‐-‐
pMETA pMETB pMETC pMETαA pMETαB pMETαC pMyr pPIC3.5 pPIC3.5K pPIC6B pPIC6C pPIC6αA pPIC6αB pPIC6αC pYX212 SUMOprotease Ycp22lac-EGFP
毕赤酵母表达载体及宿主菌介绍
毕赤酵母表达载体及宿主菌介绍由于甲醇营养型酵母菌体内无天然质粒，所以携带外源基因的重组体必须整合于染色体中才能实现外源基因的表达。
整合表达的优点在于保持外源基因稳定性并可产生多拷贝基因。
典型的毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列，主要的结构包括：5’AOX1启动子片段、多克隆位点(MCS)、转录终止和polyA形成基因序列(TT)、筛选标记(His4或Zeocin)、3’AOX1基因片段，作为一个能在大肠杆菌中繁殖扩增的穿梭质粒，它还有部分pBR322质粒或COLE1序列。
如果是分泌型表达载体，在多克隆位点的前面，外源基因的5’端和启动子的3’端之间插人了分泌作用的信号肽序列。
在这个分泌信号的引导下，外源蛋白在内质网和高尔基体中经修饰和加工后能够由胞内转移至胞外，将成熟的蛋白质分泌到细胞外。
为方便于操作，通常表达载体都是穿梭质粒。
表达载体与酵母染色体有单交换和双交换整合2种方式，单交换整合时，或插入A0X1位点，或插入his位点。
有文献报道，以his4作为整合位点时，染色体突变株与表达盒间存在基因转换，偶而可使Laz表达盒丢失，故AOX1位点更好。
一般认为，单交换转化效率比双交换效率高，且易得到多拷贝整合，其发生机制可能是重复单交换引起的。
携带外源基因的表达载体可通过电穿孔、原生质体生成法或全细胞法转化酵母细胞。
甲醇酵母转化和大肠埃希氏菌转化不同之处是前者较为复杂。
对于大肠埃希氏菌而言，只要把重组表达载体导入细胞体内即可。
因其载体上携带有自身复制原点，可随染色体复制而复制，重组表达载体能够稳定存在。
在甲醇酵母系统中，所有的表达载体均不含酵母复制原点。
这就是说，导入酵母体内的重组表达载体只有和酵母染色体上的同源区发生重组，整合到染色体上，外源基因才能够稳定存在，外源蛋白才能得到稳定表达，这种整合的转化子一旦形成就非常稳定。
如果转化后的重组表达载体未能整合到染色体上，而是以游离的附加体形式存在，这种转化子就不稳定，重组表达载体极易丢失。
酵母表达载体的构件
各个外显子
终止密码子
真核基因的一般结构
真核生物基因表达过程示意图
真核生物基因的结构特点
真核生物结构基因示意图
可见，真核生物基因的转录和翻译具有时间 和空间上的分隔。上述真核生物基因转录后 的剪切、拼接和转移等过程，都需要有调控 序列的调控，这种调控作用是原核生物所没 有的。
产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋
白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。因此大肠杆菌
是目前应用最广泛的蛋白质表达系统。
真核基因在大肠杆菌中表达体系的不足：
1. 真核基因，在结构上同原核基因之间存在着很大的差别。 2. 真核基因的转录信号同原核的不同。 细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；外源基因可能含 有具大肠杆菌转录终止信号功能的核苷酸序列。 3. 真核基因mRNA的分子结构同细菌的有所差异，影响真核基 因mRNA稳定性。 4. 许多真核基因的蛋白质产物，都要经过转译后的加工修饰 （正确折叠和组装），而大多数的这类修饰作用在细菌细胞 中并不存在； 5. 细菌的蛋白酶，能够识别外来的真核基因所表达的蛋白质分 子，并把它们降解掉。
统，需要构建不同的表达载体。克隆基因在不同的系
统中表达成功的把握性，取决于我们对这些系统中宿
主基因表达调控规律的认识程度。
人类对大肠杆菌经过长期的研究，对其特性和遗传背
景了解得最清楚，大肠杆菌培养操作简单、生长繁殖
快、价格低廉，人们用大肠杆菌用外源基因的表达工
具已有二十多年的经验积累，大肠杆菌表达外源基因
第十一章
克隆基因在真核生物中的表达
真核表达系统是指利用真核生物细胞作为外源基因 表达宿主的一类基因表达系统，常用的真核系统包 括酵母、丝状真菌、昆虫类、植物和哺乳动物细胞 等表达系统。 本章主要是关于酵母表达系统。
酵母表达(1)
酵母表达引言酵母是一类单细胞真核生物，被广泛应用于生物学研究中。
酵母表达系统是指利用酵母细胞表达外源基因的技术，被广泛应用于蛋白质的高效表达和产量大规模生产。
本文将介绍酵母表达系统的原理、优势和应用。
原理酵母表达系统的核心原理是将外源基因导入酵母细胞，并通过酵母细胞的转录、翻译和修饰机制，使外源基因在酵母细胞中得到表达和功能发挥。
通常情况下，酵母表达系统主要采用酵母菌属的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或毕赤酵母(Pichia pastoris)作为宿主细胞。
1.酵母转录机制：酵母细胞的基因表达主要通过RNA聚合酶Ⅱ进行转录，产生mRNA分子。
2.酵母翻译机制：酵母细胞通过核糖体进行翻译，将mRNA翻译成蛋白质。
3.酵母修饰机制：酵母细胞具有多种修饰酶，可以对蛋白质进行翻译后修饰，如糖基化、磷酸化等。
优势相比其他常用的表达系统，酵母表达系统具有一系列的优势：1.高效表达能力：酵母表达系统能够实现高水平的外源基因表达，产量可达到克级。
2.翻译后修饰：酵母细胞具有多种修饰酶，可以对蛋白质进行翻译后修饰，使蛋白质得到正确的糖基化等修饰。
3.生长条件简单：酵母菌生长条件相对简单，可以在常规培养基中进行培养，对培养条件的要求相对较低。
4.可溶性蛋白质表达：酵母细胞具有较强的蛋白质折叠和修饰能力，能够高效地表达可溶性蛋白质。
应用酵母表达系统广泛应用于以下领域：1.蛋白质研究：酵母表达系统可用于大规模蛋白质表达和纯化，为蛋白质的结构、功能和相互作用研究提供了高效的工具。
2.药物筛选：酵母表达系统可用于药物靶点鉴定和药物分子筛选，加速药物研发过程。
3.疫苗研究：酵母表达系统可用于疫苗候选抗原的高效表达和产量大规模生产。
4.代谢工程：酵母表达系统可用于代谢工程领域，利用酵母细胞对外源代谢产物的高效合成能力，实现产生复杂化合物的目标。
5.生物制药：酵母表达系统已经被广泛应用于生物制药领域，用于生产重组蛋白和抗体等生物药物。
豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达
薛常鲁，张鹏飞，白丽君，等. 豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达[J]. 食品工业科技，2023，44（20）：101−107. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022120029XUE Changlu, ZHANG Pengfei, BAI Lijun, et al. Heterologous Expression of Leghemoglobin in Saccharomyces cerevisiae [J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(20): 101−107. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022120029· 生物工程 ·豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达薛常鲁1,2，张鹏飞1,2，白丽君1,2，肖功年1,2，魏培莲1,2,*（1.浙江科技学院生物与化学工程学院，浙江杭州 310023；2.浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室，浙江杭州 310023）摘 要：豆血红蛋白是一种植物源血红蛋白，在植物蛋白肉加工中可作为重要的风味催化剂和着色剂，大大增加植物蛋白肉的拟真性。
为实现豆血红蛋白在食品级微生物中的异源表达，将携带豆血红蛋白LBC2基因的质粒PESC-TRP 转入酿酒酵母CEN.PK2-1C 中，通过添加kozak 序列促进其翻译，并进一步对启动子序列进行选择，以提高豆血红蛋白表达量。
对重组菌株进行发酵，用Western blot 分析LegH 蛋白表达水平。
结果显示，诱导型启动子GAL1,10较三种组成型启动子TEF1、ADH1、GAP 在表达LegH 能力上具有显著优势，较产量最低的ADH1启动子提升了3.93倍。
在组成型启动子中，TEF1启动子能力较优，是ADH1启动子的2.91倍，是GAP 启动子的1.2倍。
pHISi使用说明
pHISi编号载体名称北京华越洋VECT76301pHISipHISi载体图谱:pHISi载体简介：pHISi is a yeast integration and reporter vector for use with the MATCHMAKER One-Hybrid System.pHISi contains the yeast HIS3gene downstream of the MCS and the minimal promoter of the HIS3locus(PminHIS).Cis-acting sequences of interest (i.e.,target elements)can be inserted into the MCS.Without activation by a target element,constitutive HIS3expression from PminHIS is very low in yeast,but allows enough growth to select for integration when constructing HIS3reporter strains. During library screening,the leaky expression of HIS3is controlled by adding3-AT to the medium.The yeast URA3and HIS3genes of pHISi can be used as selectable markers for integration into the nonfunctional ura3and his3loci,respectively,of the YM4271 host strain.Before integrating,the vector is linearized at the Xho I or Afl II sites(his3 locus)or at the Apa I site(ura3locus).The Kpn I site cannot be used for integration because it cuts within the coding region of the HIS3gene,and that region is deleted in YM4271.pHISi cannot replicate autonomously in yeast.The plasmid contains a bacterial Col E1origin(ori)and the ampicillin resistance gene(Ampr)for propagation and selection in E.coli.Unique restriction sites are in bold.。
酵母整合型表达载体整合原理和整合原件
酵母整合型表达载体整合原理和整合原件一、概述酵母整合型表达载体是一种用于基因工程研究中的重要工具，它能够整合外源基因并稳定地在酵母细胞中表达。
这一载体在生物技术领域具有广泛的应用，能够帮助科研人员进行基因表达调控、蛋白质功能研究等方面的工作。
本文将针对酵母整合型表达载体的整合原理和整合原件进行深入探讨，并结合个人观点对其进行分析。
二、整合原理酵母整合型表达载体的整合原理是指外源基因在酵母细胞染色体中的整合方式和机制。
一般来说，酵母整合型表达载体通过与酵母染色体的同源配对，使外源基因在染色体特定位点发生整合。
整合的过程需要依赖一系列的整合原件来进行调控和介导。
其中，整合原件主要包括酵母选择标记基因和整合酶等。
1. 酵母选择标记基因酵母选择标记基因是酵母整合型表达载体中的重要组成部分，它能够在酵母细胞中产生特定的表型，并在培养基中通过筛选来实现对整合事件的筛选。
常见的酵母选择标记基因包括TRP1、LEU2、HIS3等，它们分别对应酵母细胞的色氨酸、亮氨酸和组氨酸代谢通路，能够使突变体在对应的缺陷培养基上无法生长。
通过选择适当的酵母选择标记基因，可以在整合过程中实现对突变体的筛选，从而保证整合事件的稳定性和准确性。
2. 整合酶整合酶是酵母整合型表达载体中的另一个重要组成部分，它能够介导整合事件的进行，并在酵母细胞中调控外源基因的整合。
常见的整合酶包括酵母整合酶(INC)和整合介导蛋白(INP)等，它们能够与酵母染色体上的同源序列进行特异性结合，并介导外源基因的整合过程。
通过对整合酶的调控和改变，能够实现对整合事件的精准和高效地控制，从而满足不同研究需求的整合要求。
三、个人观点酵母整合型表达载体的整合原理和整合原件在基因工程研究中发挥着重要的作用，它们为科研人员提供了强大的工具和评台，能够帮助他们实现对外源基因的整合和驱动。
在未来的研究中，我认为可以进一步优化和改进整合原件的设计和构建，以提高整合事件的稳定性和效率，从而更好地满足不同研究领域对整合事件的需求。
pPICZ A酵母表达载体说明
pPICZ A编号 载体名称北京华越洋生物VECT2440 pPICZ ApPICZA载体基本信息出品公司: Invitrogen载体名称: pPICZA, p PICZ A质粒类型: 毕赤酵母蛋白表达载体表达水平: 高拷贝启动子: AOX1克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 3329 b p5' 测序引物及序列: 5´ A OX1:5´-‐GACTGGTTCCAATTGACAAGC-‐3´ 3' 测序引物及序列: 3´ A OX1:5´-‐GCAAATGGCATTCTGACATCC-‐3´ 载体标签: C-‐Myc, C-‐His载体抗性: Zeocin 博来霉素筛选标记: HIS4备注: 插入基因是必需包含起始密码子ATG。
产品目录号: -‐-‐稳定性: 稳定 Stable组成型: 组成型 Constitutive病毒/非病毒: 非病毒pPICZA载体质粒图谱和多克隆位点信息pPICZA多克隆位点pPICZA载体简介pPICZ A，B和C是3.3 k b的毕赤酵母蛋白载体。
表达的重组蛋白是融合蛋白，含有一个C-‐端多肽，多太重含c-‐myc和C-‐His标签。
载体能够在毕赤酵母中利用甲醇诱导的高水平的表达目的蛋白，并且可以用在任何毕赤酵母中，包括X33，GS115菌株，SMD1168H，KM71H。
pPICZ系列载体包含以下元素：•5'片段含有AOX1启动子的严格调控，利用甲醇诱导表达任何感兴趣的基因（Ellis等，1985; Koutz等人，1989;tschopp等人，1987A）。
•Zeocin抗性基因在大肠杆菌和毕赤酵母都能用于筛选（Baron等人,1992; D rocourt等人，1990）。
酵母菌表面展示操作步骤之病毒载体构建
酵母菌表面展示操作步骤之病毒载体构建酵母菌表面展示技术是一种利用酵母细胞表面附着或展示外源蛋白的技术，广泛应用于蛋白质互作、高效酶催化等领域。
而病毒载体则是一种常用的酵母表面展示工具，利用病毒颗粒的稳定性和灵活性，可以有效地展示外源蛋白。
下面将详细介绍病毒载体构建的操作步骤，以供参考：1. PCR扩增目标基因：首先，从所需的基因资源中提取目标基因的DNA序列。
设计引物并进行PCR 反应，扩增目标基因片段。
确保引物的特异性和合理的扩增条件。
2. 构建目标基因的表达载体：将PCR扩增得到的目标基因片段与适当的表达载体进行连接。
表达载体可以根据实验需要选择，常用的有pET等质粒载体。
连接可以通过酶切、连接酶等方法进行。
3. 转化酵母细胞：将得到的重组表达载体转化到酵母细胞中。
常用的酵母细胞有酵母菌Saccharomyces cerevisiae。
转化方法可以选择化学法、电转法或直接注射法，具体方法根据实验室条件和实验目的进行选择。
4. 筛选阳性克隆：通过选择性培养基，筛选含有重组表达载体的酵母细胞。
选择性培养基中含有特定抗生素或表达特定标记物的基因，可以选择性地培养阳性克隆。
5. 验证表达：从阳性克隆中提取酵母总蛋白，通过蛋白鉴定方法如SDS-PAGE或Western blot等进行目标蛋白的验证。
确认目标蛋白的表达情况。
6. 病毒包装：将经验证的酵母表达载体转染到病毒包装细胞中，通过细胞内的重组表达载体转录和病毒包装蛋白的辅助，使病毒组装出现。
包装可以采用辅助病毒或者可移动元件。
7. 提纯病毒颗粒：将包装完成的病毒颗粒从细胞中提取出来。
可以通过超低速离心、密度梯度离心或离子交换层析等方法进行纯化。
提纯后的病毒颗粒即可用于酵母表面展示。
8. 酵母菌表面展示：将提纯的病毒颗粒与酵母细胞进行共培养。
病毒颗粒通过与酵母细胞表面特异性的结合蛋白相互作用，将目标蛋白表面附着在酵母菌表面上。
共培养时间可以根据实验需要进行调整。
一种酵母表达载体的构建及表达鉴定
一种酵母表达载体的构建及表达鉴定王海涛;李雪萍;郭红云;王涛;闵建平;郭欢;朱公建;苏海翔【摘要】目的:通过基因工程技术构建霍乱毒素B亚基(CTB)与人Aβ42的融合基因,并进行表达鉴定.方法:将融合基因克隆到酵母表达载体pYES2中,并将鉴定正确的重组载体通过乙酸锂转化法转入野生型酵母菌株INVSc1.筛选阳性转化株,并将其诱导表达,通过Western blot检测融合蛋白CTB-Aβ42.结果:成功构建了CTB-Aβ42融合基因的酵母表达载体,并且可以有效表达融合蛋白.结论:本研究为进一步研制有效的抗阿尔茨海默症药物提供了一种新思路,具有一定的理论和应用价值.【期刊名称】《甘肃医药》【年(卷),期】2017(036)012【总页数】4页(P993-996)【关键词】乱毒素B亚基;β淀粉样蛋白;融合蛋白;酵母表达【作者】王海涛;李雪萍;郭红云;王涛;闵建平;郭欢;朱公建;苏海翔【作者单位】甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050;甘肃省医学科学研究院,甘肃兰州730050【正文语种】中文【中图分类】Q78阿尔茨海默症（alzheimer’s disease，AD）又称老年痴呆症，是老年人中一种最为常见的中枢神经系统退行性疾病［1］。
老年痴呆症的症状在临床上主要表现为中枢神经系统全面衰退，认知功能、记忆逐渐丧失，造成生活自理能力的障碍和精神行为的异常，最终导致死亡［2］。
AD最显著的神经病理组织学特征是老年斑的形成、神经元纤维缠结和神经细胞的大量死亡，AD晚期还伴有乙酰胆碱水平的降低。
其中老年斑主要是由41～43个氨基酸片段的β淀粉样蛋白（β-amyloidpeptide，Aβ）沉积而成的，而Aβ是β淀粉样前体蛋白经由β和γ分泌酶分解产生的，具有高度的成纤维性和神经毒性［3］。
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pESC-URA编号 载体名称北京华越洋生物VECT2500 pESC-‐URA载体基本信息载体名称: pESC-‐URA, p ESC U RA Gene a ccession N O. : AF063585质粒类型: 酿酒酵母蛋白表达载体表达水平: 高拷贝诱导方法: 半乳糖启动子: GAL1和GAL10克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 6631 b p5' 测序引物及序列: GAL1-‐F: A TTTTCGGTTTGTATTACTTC; GAL10-‐F: G GTGGTAATGCCATGTAATATG3' 测序引物及序列: GALI-‐R: G TTCTTAATACTAACATAACT GAL10-‐R: G GCAAGGTAGACAAGCCGACAAC载体标签: C-‐Flag, C-‐Myc载体抗性: 氨苄筛选标记: URA3备注: 利用半乳糖诱导，可以同时使两个基因在酿酒酵母中表达。
稳定性: 稳定 Stable组成型/诱导型: 诱导型病毒/非病毒: 非病毒载体质粒图谱和多克隆位点信息pESC-‐URA多克隆位点载体序列ORIGIN1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 181 accataccac agcttttcaa ttcaattcat catttttttt ttattctttt ttttgatttc 241 ggtttctttg aaattttttt gattcggtaa tctccgaaca gaaggaagaa cgaaggaagg 301 agcacagact tagattggta tatatacgca tatgtagtgt tgaagaaaca tgaaattgcc 361 cagtattctt aacccaactg cacagaacaa aaacctgcag gaaacgaaga taaatcatgt 421 cgaaagctac atataaggaa cgtgctgcta ctcatcctag tcctgttgct gccaagctat 481 ttaatatcat gcacgaaaag caaacaaact tgtgtgcttc attggatgtt cgtaccacca 541 aggaattact ggagttagtt gaagcattag gtcccaaaat ttgtttacta aaaacacatg 601 tggatatctt gactgatttt tccatggagg gcacagttaa gccgctaaag gcattatccg 661 ccaagtacaa ttttttactc ttcgaagaca gaaaatttgc tgacattggt aatacagtca 721 aattgcagta ctctgcgggt gtatacagaa tagcagaatg ggcagacatt acgaatgcac 781 acggtgtggt 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cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa 4201 gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct 4261 cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta 4321 cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct4381 caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg 4441 gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa 4501 gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt 4561 cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta 4621 catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca 4681 gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta 4741 ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct 4801 gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg 4861 cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac 4921 tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact 4981 gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa 5041 atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt 5101 ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat 5161 gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg 5221 aacgaagcat ctgtgcttca ttttgtagaa caaaaatgca acgcgagagc gctaattttt 5281 caaacaaaga atctgagctg catttttaca gaacagaaat gcaacgcgaa agcgctattt 5341 taccaacgaa gaatctgtgc ttcatttttg taaaacaaaa atgcaacgcg agagcgctaa 5401 tttttcaaac aaagaatctg agctgcattt ttacagaaca gaaatgcaac gcgagagcgc 5461 tattttacca acaaagaatc tatacttctt ttttgttcta caaaaatgca tcccgagagc 5521 gctatttttc taacaaagca tcttagatta ctttttttct cctttgtgcg ctctataatg 5581 cagtctcttg ataacttttt gcactgtagg tccgttaagg ttagaagaag gctactttgg 5641 tgtctatttt ctcttccata aaaaaagcct gactccactt cccgcgttta ctgattacta 5701 gcgaagctgc gggtgcattt tttcaagata aaggcatccc cgattatatt ctataccgat 5761 gtggattgcg catactttgt gaacagaaag tgatagcgtt gatgattctt cattggtcag 5821 aaaattatga acggtttctt ctattttgtc tctatatact acgtatagga aatgtttaca 5881 ttttcgtatt gttttcgatt cactctatga atagttctta ctacaatttt tttgtctaaa 5941 gagtaatact agagataaac ataaaaaatg tagaggtcga gtttagatgc aagttcaagg 6001 agcgaaaggt ggatgggtag gttatatagg gatatagcac agagatatat agcaaagaga 6061 tacttttgag caatgtttgt ggaagcggta ttcgcaatat tttagtagct cgttacagtc 6121 cggtgcgttt ttggtttttt gaaagtgcgt cttcagagcg cttttggttt tcaaaagcgc 6181 tctgaagttc ctatactttc tagagaatag gaacttcgga ataggaactt caaagcgttt 6241 ccgaaaacga gcgcttccga aaatgcaacg cgagctgcgc acatacagct cactgttcac 6301 gtcgcaccta tatctgcgtg ttgcctgtat atatatatac atgagaagaa cggcatagtg 6361 cgtgtttatg cttaaatgcg tacttatatg cgtctattta tgtaggatga aaggtagtct 6421 agtacctcct gtgatattat cccattccat gcggggtatc gtatgcttcc ttcagcacta 6481 ccctttagct gttctatatg ctgccactcc tcaattggat tagtctcatc cttcaatgct 6541 atcatttcct ttgatattgg atcatactaa gaaaccatta ttatcatgac attaacctat 6601 aaaaataggc gtatcacgag gccctttcgt c//其他酵母表达载体：pPIC3.5 Ycplac33 Ycplac33pPICZαC pPICZαD pPICZαDpHIL-S1 pYES2 pYES2pMETA pDR195 pDR195pMETαB pYIP5 pYIP5pYES2-NTC pADH2 pADH2pESC-Leu pFLDαpFLDαpPICZαB pGBKT7-53 pGBKT7-53pYES2-kan pSos pSospYIP211 pCL1 pCL1pYC2/NTB pYES2-NTB pGAPZαCpAD-GAL4-2.1 pYES6/CT pPink-LCpGAPZA pESC-URA pMETαApPIC9 pYRP7 pYES2-NTApPICZB pYEPlac112 pESC-HispSEP2 pPICZαFC pFLD/CATpRS414 pPICZA pACT2-ADpRS405 pPIC9k-His pBridgepPIC6αB pYES2-EGFP pSos-MAFBpPIC6C pPICZC p53bluepHIL-D2 pAUR123 pRS406pMETB pPIC3.5K pPIC6αApMETαC pPinkα-HC pPIC6BpYES3/CT pDisplay pYC2/CTpESC-TRP pGBKT7-Lam pPICZαApRS426 pMyr pGAPZBpYCP211 pHisSi-1 pPIC9Kp416GFD pSEP1 pGAPZαBpRS426gal pRS416 pPink-HCpHIC-PI pHis2 pMETCpRS316 pGADT7-T pUG66pRS41H pGAG424 SUMO proteasepYX212 pSEP3 Ycp22lac-EGFPpYEPlac195 pRS415 pFLDpPICZαGB pRS403 pGBKT7pGADT7-T pPIC6αC pFA6a-FGP(S65T)-kanMX6 pDEST32 pYES-DEST52 pYC2/NTA。