四 目的基因的检测与表达产物的测定
起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受
体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了
目的基因。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必
须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过
程。
标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。 因为标记基因和目的基因同位于运载体上，要导入都 导入，要表达则都会表达。一般标记基因的DNA序列是 已知的，若选用抗氨苄青霉素基因，则可在目的基因 导入后用氨苄青霉素来处理受体细胞，若无异常，则 抗氨苄青霉素已合成，说明基因已得到表达。
思考与探究
1.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器 功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若 要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？
有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网 和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在 于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大 肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。
从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体（对抗进 行同位素标记）进行抗原——抗体杂交；如果出现杂 交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。
2.形态检测:检测转基因生物是否表达出相应的性状 ——目标性状或标记基因的性状
如：一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后， 是否具有了抗虫或抗病特性，需要做抗虫或抗病的 接种实验，观察害虫的存活情况或植物的患病情况 以确定是否具有抗性及抗性的程度。
2.基因表达载体的组成
启动子 终止子
目的基因 标记基因
复制原点
基因工程的概念
把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放 到另一种生物的细胞里，定向的改造生物的遗传性状。
供体 细胞
目的 基因 的获 得
基因 表达 载体 的构 建
将目 的基 因导 入受 体细 胞
筛选 含有 目的 基因 的受 体细 胞
2.检测目的基因是否转录出了mRNA
这是检测目的基因是否发挥功能作用的第一步。 ——分子杂交
采用DNA与RNA分子杂交技术。从转基因生物中提取出 mRNA，把目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记做 成探针；使探针与mRNA杂交，如果出现杂交带，就表 明目的基因转录出了mRNA。
3.检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原-抗体杂交
两种生物的互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链。 即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补 配对进行。因此，当用探针与转基因生物的目的基因杂交时， 如果出现杂交带（用特殊的显影装置能看到），则说明目的 基因已经插入受体细胞的染色体DNA中。
基因探针：
是一小段单链的DNA或RNA,带有放射性同位素标记， 并能与目的基因的一条链碱基互补配对
基因工程：把一种生物的某种基因提取出来，加以 修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向的改造生 物的遗传性状。
前面三个步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够 摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通 过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检 测。
检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒
归纳: 基因工程的基本操作程序构建基因表达载体
目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点
3. 将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法；显微注 射法；氯化钙法
4. 目的基因的检测与鉴定
检测：是否插入、转录、翻译、个体水平的检测
目的 基因 在受 体细 胞中 是否 转录
是否 翻译 出相 应的 蛋白 质
获得新 性状
1.检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。 ——DNA分子杂交
检测方法是：采用DNA分子杂交技术。先将转基因生物 的基因组提取出来；把目的基因的DNA片段用放射性同 位素作标记做成探针；使探针与基因组DNA杂交，如果 出现杂交带，就表明目的基因已插入染色体DNA中。
又如：有的基因工程产品需要与天然产品的功能 进行活性比较，以确定转基因产品的功能中否与天然 产品相同，甚至超过天然产品。
目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功
①检测转基因生物染色体的DNA上是否插 入了目的基因 ——DNA分子杂交
1.分子检测 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ——分子杂交
③检测目的基因是否翻译成蛋白质 ——抗原-抗体杂交
2.β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异 常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如 让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白， 想一想，应如何进行设计？
（2012福建）32．现代生物科技专题 肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引 发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细 胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技 术基本流程如图１。
“汉水丑生的生物同行”超级群大型公 益活动：历年高考题PPT版制作。本 课件为公益作品，版权所有，不得以 任何形式用于商业目的。2012年1月15 日，汉水丑生标记。
基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将表达载体导入受体细胞
4、目的基因的检测与鉴定
为什么非要有载体和目的基因一同进入受体细胞呢？
研究发现，单个基因或DNA片段导入另一生 物体的细胞后，往往会被细胞内的防御系统消 灭掉，这样就大大降低了目的基因的表达效率； 如果把目的基因包装一下，就很容易逃过受体 细胞的防御系统，免遭“灭顶之灾”。
2.形态检测:检测转基因生物是否表达出相应的性状 ——目标性状或标记基因的性状
归纳步骤
①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因
DNA与DNA杂交
②检测目的基因是否转录出了mRNA
DNA与RNA杂交 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质
抗原抗体杂交
检测抗虫棉是否翻译出毒蛋白：从苏云金芽孢杆菌中提取毒蛋白， 注入某种动物体内，从动物的血清中分离出相应的抗体，并用荧 光标记该抗体，然后用标记的抗体与抗虫棉的细胞提取液混合， 如出现杂交带，则表明抗虫基因已经在棉花细胞中表达。
《基因工程》PPT教学 ppt课件
PPT课件
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典型例子：抗烟草花叶病毒的转基因烟草、 抗病毒的转基因小麦、甜椒
PPT课件
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转黄瓜抗青枯病基因的甜椒
3.抗逆转基因植物
PPT课件
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4.利用转基因改良植物的品质
PPT课件
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富含赖氨酸的转基因玉米
基转 因入 的荧 发光 荧素 光酶 烟蛋 草白
PPT课件 不会引起过敏的转基因大4豆0
原 理： 基因重组
表达水平： DNA分子水平
过程：
意义： 1、定向改造某些性状
2、克服远缘杂交
PPT课件
3
原核细胞的基因结构
非编码区 编码区上游 启动子
编码区
非编码区 编码区下游
终止子
RNA聚合酶结合位点
启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起 始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。
将目的基因导入 农杆菌介导的遗传转化法
植物细胞
基因枪法
方法
将目的基因导入 动物细胞
——显微注射法
将目的基因导入——感受态细胞吸收DNA分子
微生物细胞
(氯化钙法)
PPT课件
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(四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 ①形态检测
检测— ②分子检测
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非目的基因片段 GACATAGCTACA CTGTATCGATGT
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1
我们主要讨论4个问题：
1. 什么是基因工程——基因工程的概念。
2. 为什么能进行基因工程——基因工程的原理和技术。 3. 怎样进行基因工程——4大步骤 4. 基因工程的应用和前景
PPT课件
2
1、概念：又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。
20-21版：3.2.2 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定（创新设计）
第2课时将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定将目的基因导入受体细胞———————————————自主梳理———————————————提醒：农杆菌转化法中的两次拼接、两次导入(1)两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的TDNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的TDNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。
(2)两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的TDNA导入受体细胞。
(1)花粉管通道法是我国科学家独创的一种方法，主要适用于双子叶植物和裸子植物。
(×)提示：农杆菌转化法主要适用于双子叶植物和裸子植物。
(2)农杆菌侵入植物细胞后，其Ti质粒上的T－DNA能转移到被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体DNA上。
(√)(3)培育转基因动物时，常选择受精卵作为受体细胞，利用显微注射法将目的基因直接注入受精卵中。
(√)(4)将目的基因导入原核细胞时，通常用大肠杆菌作为受体细胞，并需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态。
(√)[典型例题](2020·黑龙江哈尔滨三中高二期末)下列关于目的基因导入受体细胞的方法中，不正确的是()A.我国利用花粉管通道法培育了转基因抗虫棉B.用Ca2＋处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞C.将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是显微注射法D.利用农杆菌转化法培育大多单子叶转基因植物解析目前我国的转基因抗虫棉是利用花粉管通道法培育的，A正确；为使大肠杆菌易吸收DNA分子，应先用氯化钙溶液进行处理，使大肠杆菌处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，B正确；显微注射技术是将目的基因导入动物细胞最为有效的一种方法，C正确；农杆菌转化法可将目的基因导入双子叶植物细胞，D错误。
答案D[变式训练](2020·郑州一中高二期末)下列关于农杆菌转化法的叙述，错误的是()A.农杆菌是一种生活在土壤中的微生物，能在自然情况下侵染双子叶植物和裸子植物B.可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共同培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株C.可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植物并获得种子，再进行筛选鉴定D.由于农杆菌自然状态下对大多数单子叶植物没有侵染能力，所以不可能利用农杆菌转化法转化玉米、水稻等单子叶植物细胞解析随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种单子叶植物也取得了成功，D错误。
专转本生物制药试卷
专转本生物制药试卷一、单选题（每题3分，共30分）嘿呀，咱开始咯！这些单选题可都是基础中的基础呢，看看你能不能轻松拿下。
1. 生物制药中常用的基因工程技术不包括（）A. 基因克隆B. 基因编辑C. 基因测序D. 基因治疗2. 以下哪种生物大分子不是生物制药的主要来源（）A. 蛋白质B. 核酸C. 脂肪D. 多糖3. 生产单克隆抗体的细胞是（）A. B淋巴细胞B. 骨髓瘤细胞C. 杂交瘤细胞D. T淋巴细胞4. 基因工程药物生产中常用的载体是（）A. 质粒B. 染色体C. 线粒体D. 内质网5. 生物制药中用于分离纯化蛋白质的常用方法不包括（）A. 盐析B. 透析C. 电泳D. 燃烧6. 以下哪种生物技术在疫苗生产中应用最广泛（）A. 细胞工程B. 基因工程C. 发酵工程D. 酶工程7. 生物制药中，药物质量控制的关键指标不包括（）A. 纯度B. 活性C. 颜色D. 稳定性8. 以下哪种药物不属于生物制药范畴（）A. 抗生素B. 重组蛋白药物C. 基因治疗药物D. 单克隆抗体药物9. 细胞培养技术中，常用的培养基成分不包括（）A. 氨基酸B. 维生素C. 重金属D. 葡萄糖10. 生物制药的发展趋势不包括（）A. 个性化治疗B. 绿色环保C. 回归传统制药D. 基因治疗的广泛应用二、多选题（每题5分，共25分）哎呀，多选题可有点挑战性啦，要仔细思考哦。
1. 生物制药的特点有（）A. 高技术含量B. 高投入C. 高风险D. 高回报2. 基因工程药物的生产流程包括（）A. 目的基因的获取B. 载体的构建C. 基因的导入D. 药物的分离纯化3. 生物制药中常用的发酵工程技术包括（）A. 微生物发酵B. 细胞发酵C. 酶发酵D. 固态发酵4. 单克隆抗体的应用领域包括（）A. 疾病诊断B. 疾病治疗C. 药物研发D. 生物检测5. 生物制药质量控制的主要内容有（）A. 原材料质量控制B. 生产过程质量控制C. 成品质量控制D. 包装质量控制三、简答题（每题10分，共30分）简答题可要好好发挥啦，把你知道的都写出来哟。
第三章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序
第2节基因工程的基本操作程序一、目的基因的筛选与获取1．培育转基因抗虫棉的四个步骤(1)目的基因的筛选与获取。
(2)基因表达载体的构建。
(3)将目的基因导入受体细胞。
(4)目的基因的检测与鉴定。
2．目的基因的筛选与获取目的基因：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。
主要指编码蛋白质的基因，如与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。
(1)筛选合适的目的基因：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。
(2)利用PCR获取和扩增目的基因①PCR的含义：PCR是聚合酶链式反应的缩写，它是一项根据DNA半保留复制的原理，在生物体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。
②目的：快速扩增目的基因。
③原理：DNA半保留复制。
④基本条件：DNA模板、4种脱氧核苷酸、2种引物、耐高温的DNA聚合酶、缓冲液。
⑤过程a．变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链。
b．复性：温度下降至50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
c．延伸：温度升至72 ℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
⑥结果：每一次循环后，目的基因的量可以增加一倍，即成指数形式扩增(约为2n，n为扩增循环的次数)。
⑦鉴定：采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物。
⑧仪器：PCR扩增仪。
(3)在获得转基因产品的过程中，还可以通过构建基因文库来获取目的基因。
【强化记忆】图1、图2分别是PCR扩增技术相关过程，请思考回答：(1)图1所示利用PCR技术扩增目的基因，在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段？提示第3轮。
(2)图2是某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理，请分别说明理由。
提示第1组：引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效。
生物技术制药 第二版 课后思考题及答案(全)
1. 生物技术制药分为哪些类型？生物技术制药分为四大类：（1）应用重组DNA技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂。
（2）基因药物，如基因治疗剂，基因疫苗，反义药物和核酶等（3）来自动物、植物和微生物的天然生物药物（4）合成与部分合成的生物药物2．生物技术制药具有什么特征？（1）分子结构复杂（2）具有种属特异性（3）治疗针对性强，疗效高（4）稳定性差（5）基因稳定性（6）免疫原性（7）体内的半衰期短（8）受体效应（9）多效性（10）检验的特殊性3.生物技术制药中有哪些应用？应用主要有：（1）基因工程制药：包括基因工程药物品种的开发，基因工程疫苗，基因工程抗体，基因诊断与基因治疗，应用基因工程技术建立新药的筛选模型，应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物，基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用，利用转基因动植物生产蛋白质类药物（2）细胞工程制药：包括单克隆抗体，动物细胞培养，植物细胞培养生产次生代谢产物（3）酶工程制药（4）发酵工程制药4.基因工程药物制造的主要程序有哪些？基因工程药物制造的主要步骤有：目的基因的克隆，构造DNA重组体，构造工程菌，目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化产品的检验5.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？（1）外源基因的计量（2）外源基因的表达效率：a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、SD序列和起始密码的间距 d、密码子组成（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢付荷（5）工程菌的培养条件6.质粒不稳定分为哪两类，如何解决质粒不稳定性？质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。
质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象；质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排，缺失所致工程菌性能的改变。
提高质粒稳定性的方法如下：（1）选择合适的宿主细菌2）选择合适的载体（3）选择压力（4）分阶段控制培养（5）控制培养条件（6）固定化7.影响基因工程菌发酵的因素有哪些？如何控制发酵的各种参数？影响因素：（1）培养基（2）接种量（3）温度（4）溶解氧（5）诱导时机的影响（6）诱导表达程序（7） PH值8.什么是高密度发酵？影响高密度发酵的因素有哪些？可采取哪些方法来实现高密度发酵？高密度发酵：是指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上，理论上的最高值可达200gDCW/L 影响因素：（1）培养基（2）溶氧浓度（3）PH (4)温度（5）代谢副产物实现高密度发酵的方法：（1）改进发酵条件：a、培养基 b、建立流加式培养基 c、提高供养能力（2）构建出产乙酸能力低的工程菌宿主菌：a、阻断乙酸产生的主要途径 b、对碳代谢流进行分流 c、限制进入糖酵解途径的碳代谢流 d、引入血红蛋白基因（3）构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌9.分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?它们的原理是什么?方法有离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱及高压液相色谱。
第3章第1节第2课时基因工程的基本操作程序课件--苏教版2019 高中生物选择性必修3
(2)从RNA方面检测受体细胞 ①方法：分子杂交技术。 ②操作：从待测转基因生物细胞中提取mRNA分子，用已标记 的目的基因片段 作为探针与mRNA杂交，观察是否出现杂交带。
(3)从蛋白质方面进行检测 ①方法：抗原—抗体杂交 。 ②操作：从待测转基因生物中提取蛋白质，再用相应的抗体进 行抗原—抗体杂交，观察是否出现 杂交带。 (4)从个体水平进行鉴定：检测转基因生物是否表现出目的基因 控制的性状。
③过程 将目的基因插到农杆菌Ti质粒的 TDNA 特定区段上→转入 农杆菌→侵染植物细胞→整合到受体细胞染色体的 DNA 上→目的 基因稳定的遗传和表达
(2)将目的基因导入动物细胞 ①主要方法：显微注射法。 ②操作对象： 受精卵。 ③其他方法：也可用 病毒DNA 与目的基因一起构建的载体， 去感染受体动物细胞。
限制酶 BamHⅠ
HindⅢ
EcoRⅠ
Sma Ⅰ
识别序
列及切
割位点
图2 图1
①构建基因表达载体时，能否用Sma Ⅰ酶切割质粒？为什么？
提示：不能；因为Sma Ⅰ会破坏质粒的抗性基因。质粒上的抗 性基因是标记基因，便于重组DNA分子的筛选，若被破坏，无法进 一步筛选。
②与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶 同时处理质粒、外源DNA的优点是什么？
NO.1 必备知识·聚焦概念
一、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 (1)通过化学合成法直接人工合成目的基因 ①对于比较小的目的基因，在明确脱氧核苷酸序列后，可以通 过DNA合成仪直接人工合成。 ②全基因或较大基因，使用半合成 的生物体 全部基因片段 的重组DNA 的克隆群体。 特点：受体菌群中的不同个体含有该种生物的不同基因拷贝， 整个菌群所含有的基因拷贝便可能涵盖了该生物的所有基因 。 筛选方法：一般采用核酸探针杂交 的方法。
实验室基因测序实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着分子生物学技术的不断发展，基因测序技术在生命科学领域发挥着越来越重要的作用。
基因测序技术能够快速、准确地测定生物体基因组的DNA序列，为基因功能研究、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
本实验旨在利用高通量测序技术对某生物样本进行基因测序，并分析其基因表达情况。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：某生物样本、DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒、测序文库构建试剂盒等。
2. 实验仪器：PCR仪、荧光定量PCR仪、测序仪、离心机、PCR仪、凝胶成像系统、超净工作台等。
三、实验方法1. DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取某生物样本的总DNA。
2. PCR扩增：根据基因序列设计特异性引物，利用PCR扩增试剂盒进行目的基因的扩增。
3. 测序文库构建：将PCR扩增产物进行纯化、连接等操作，构建测序文库。
4. 测序：将测序文库上机进行高通量测序。
5. 数据分析：利用生物信息学软件对测序数据进行质量评估、比对、组装、注释等分析。
四、实验结果1. DNA提取：成功提取某生物样本的总DNA，A260/A280值在1.8-2.0之间，符合实验要求。
2. PCR扩增：扩增得到目的基因片段，大小约为500bp，符合预期。
3. 测序文库构建：成功构建测序文库，文库浓度和插入片段大小符合实验要求。
4. 测序：测序仪成功完成测序，得到大量原始数据。
5. 数据分析：（1）数据质量评估：原始数据经过质量评估，去除低质量序列，保留高质量序列。
（2）比对：将高质量序列与参考基因组进行比对，确定基因位置。
（3）组装：对比对结果进行组装，得到基因结构。
（4）注释：对组装得到的基因结构进行功能注释，包括基因名称、基因家族、功能注释等。
五、实验结论1. 成功提取某生物样本的总DNA，并进行PCR扩增和测序文库构建。
2. 利用高通量测序技术成功获得某生物样本的基因序列，并进行了数据分析和注释。
3. 通过基因测序，揭示了某生物样本基因表达情况，为进一步研究基因功能、疾病诊断和治疗提供了重要依据。
(完整版)生物技术制药考试题复习
一：选择题1、酶的主要来源是（C）A、生物体中分离纯化B、化学合成C、微生物生产D、动/植物细胞与组织培养2、所谓“第三代生物技术”是指 (A)A、海洋生物技术B、细胞融合技术C、单克隆技术D、干细胞技术3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A)A、大于B、等于C、小于D、无关4、促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（E）A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化5、目前基因治疗最常用的载体是：(B)A、腺病毒B、反转录病毒C、腺相关病毒D、痘苗病毒E、疱疹病毒6、cDNA第一链合成所需的引物是：（D）A、Poly AB、Poly CC、Poly GD、Poly TE、发夹结构7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A)A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A)A、表达产物的功能B、表达产物的产量 C.表达产物的稳定性D.表达产物分离纯化的难易9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和（安全性鉴定）。
10、基因工程药物的化学本质属于：(C)A.糖类B.脂类C.蛋白质和多肽类D.氨基酸类11、用聚二乙醇（PEG）诱导细胞融合时，下列错误的是：(C)A、PEG的相对分子量大，促进融合率高B、PEG的浓度高，促进融合率高C、PEG的相对分子量小，促进融合率高D、PEG的最佳相对分子量为400012、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C)A、表达产物为糖基化蛋白质B、表达产物存在的部位是在菌体内C、容易培养，产物提纯简单D、表达产物为天然产物13、人类第一个基因工程药物是：(A)A、人胰岛素B、重组链激酶C、促红细胞生成素D、乙型肝炎疫苗14、下列不属于加工改造后的抗体是：(C)A、人-鼠嵌合抗体B、单链抗体C、鼠源性单克隆抗体D、单域抗体15、动物细胞培养的条件中，不正确的是：(D)A.最适pH为7.2-7.4B.最适温度为37±0.5CC.最理想的渗透压为290-300mOsm/kgD.氧浓度为100%16、第三代抗体是指：(D)A、B淋巴细胞合成和分泌的球蛋白B、多发性骨髓瘤细胞产生的免疫球蛋白C、融合细胞产生的单克隆抗体D、利用基因工程技术制备的基因工程抗体17、现代生物技术的标志是：(C)A、DNA互补双螺旋结构模型的提出B、DNA测序技术的诞生C、第一只克隆羊“多莉”的诞生D、人类基因组草图的完成18、获得目的基因最常用的方法是：(B)A、化学合成法B、PCR技术C、逆转录法D、DNA探针技术19、疫苗组成是由抗原和（佐剂）组成20、鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（A）A、原核细菌B、酵母菌C、丝状真菌D、植物E、人类21、cDNA法获得目的基因的优点是：（B）A.成功率高B.不含内含子C.操作简便D.表达产物可以分泌E.能纠正密码子的偏爱性22、有机相酶反应的优点：1．有利于疏水性底物的反应；2．可提高酶的热稳定性；3．从低沸点的溶剂中易分离纯化产物；4．热力学平衡向产物方向移动如脂合成和肽合成；5．减少由水引起的副反应，如水解反应；6．酶易于实现固定化；7．酶和产物易于回收；8．可避免微生物污染。
目的基因的扩增及扩增产物鉴定分析报告
扩增条件优化
温度循环
根据所使用的DNA聚合酶特性，设 置合适的温度循环，包括变性、退火 、延伸等温度设置。
延伸时间
根据目的基因长度和DNA聚合酶活 性，设置合适的延伸时间。
循环数
根据目的基因浓度和扩增效率，确定 合适的循环数，避免非特异性扩增和 过度扩增。
产物检测
扩增后对产物进行电泳检测，确认目 的基因是否成功扩增。
关重要。
产物纯度评估
总结词
产物纯度评估是判断扩增产物质量的重要环节，有助于提高后续实验的准确性 和可靠性。
详细描述
通过电泳、质谱分析、光谱分析等方法评估产物纯度，可以了解扩增产物中杂 质成分的含量，从而判断产物的质量。产物纯度评估对于后续的实验操作和应 用研究具有重要意义。
04
目的基因的功能研究
产物鉴定
通过DNA测序，证实了目的基因 的准确性，与预期序列一致，进 一步验证了扩增产物的可靠性。
研究意义与价值
01
基础研究
本实验为深入了解目的基因的结 构和功能提供了基础数据，有助 于推动相关领域的研究进展。
02
生物技术应用
03
疾病诊断与治疗
成功扩增目的基因可为基因克隆 、基因表达、基因治疗等生物技 术应用提供关键材料。
目的基因的扩增及扩增 产物鉴定分析报告
目录 CONTENT
• 目的基因的扩增 • 扩增产物的鉴定 • 数据分析与解读 • 目的基因的功能研究 • 结论与展望
01
目的基因的扩增
引物设计
引物长度
根据目的基因序列，选择合适的引物长度，通常为18-24个核苷 酸。
引物特异性
确保引物与目的基因特异性结合，避免与基因组其他部分发生非特 异性结合。
基础学习实验 目的基因的PCR扩增及其扩增产物的鉴定
Fascin蛋白的三级结构：由4个β-三叶草结构组成，含多个β折叠
➢ 我们课题组发现，在永生化食管上皮细胞SHEE向食管癌细胞SHEEmt的恶性转化中， Fascin基因呈现上调表达，并且在食管癌组织中也检测到Fascin蛋白呈阳性表达。
➢ Fascin在食管癌中的具体功能以及过表达的机制至今仍没有得到很好的阐明。为此我们 设计并合成了靶向Fascin基因的siRNA，试图通过RNA干扰的方法减少Fascin基因的表 达，从而探讨Fascin对肿瘤的分化、分裂增殖和浸润等生物学行为的影响。
➢ NGAL基因的蛋白产物具有保护调节基质金属蛋白酶-9的活性，作为小分子铁配合物 结合蛋白参与机体铁代谢和天然免疫反应等功能。另外，NGAL作为一种早期标志物还 可以帮助判定缺血性肾损伤程度。
➢ NGAL的mRNA信息在NCBI核酸数据库中有来自不同实验室登记的多个版本，包含完 整编码区的有BC033089和NM_005564等，编码区长为597 bp，编码198个氨基酸，包含 了N端前部长为20个氨基酸的信号肽序列（为核酸序列的1-60 bp）。
➢ ERM家族蛋白还参与细胞表面粘附分子的定位，通过细胞与细胞、细胞与基质之间的相互 作用参与细胞粘附作用降。
➢ ERM家族蛋白还是酪氨酸激酶的受体，并通过Rho-GTP酶参与信号转导。 ➢ Ezrin含有585个氨基酸，等电点为6.15，理论分子量为69kD。Ezrin分子带有大量电荷
（38.5%的氨基酸残基带电荷），这可能是导致它的理论分子量与实际分子量不同的原因 （Ezrin实际分子量为80kD）。
NGAL核酸编码区序列及其相应的蛋白序列：
前20个AA 为信号肽序 列
2001年汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室李恩民课题组以永生化食管上皮细胞 系SHEE 和食管癌细胞系SHEEC 互为对照，用cDNA 微列阵进行筛选，用RNA 印迹和RTPCR 进行鉴定，cDNA 克隆测序后与GenBank 进行BLAST 分析比较。结果表明NGAL 基 因在SHEEC中出现显著差异过表达，其cDNA 序列与小鼠24p3、大鼠NRL (neu-related lipocalin) 和人中性粒细胞NGAL 具有较高的相似性。这提示NGAL 基因在永生化食管上 皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用，可能是一种新的癌基因或促癌基因。