如何选择植物组培最合适的外植体？
组培成功必备的几大要素
组培成功必备的几大要素组织培养（tissue culture）是一种在实验室或生物技术设施中，通过控制环境条件来培养植物组织或细胞的技术。
以下是组织培养成功必备的几大要素：1.无菌环境：无菌环境是组织培养成功的首要条件。
所有用于组织培养的材料，包括外植体、培养基、接种工具等，都必须进行严格的消毒处理，以防止细菌、真菌等微生物的污染。
实验室应配备超净工作台、紫外灯、高压蒸汽灭菌器等设备，确保无菌操作。
2.合适的培养基：植物组织培养的成功与否，很大程度上取决于所使用的培养基。
培养基应含有植物生长所需的营养成分，如糖、氨基酸、微量元素、维生素等，以及适量的植物生长调节剂，如生长素和细胞分裂素。
根据不同的植物种类和培养目的，可以选择不同的培养基。
3.适宜的温度和光照：在组织培养过程中，温度和光照也是影响成功的关键因素。
每种植物都有其最适的生长温度和光照条件。
一般来说，大多数植物在25-30℃的温度下和16-24小时的光照条件下生长良好。
4.外植体选择与处理：选择健康、无病虫害的植物材料作为外植体，并对材料进行适当的预处理，如清洗、消毒等，是组织培养成功的关键步骤。
此外，选择适合的外植体类型也对培养成功至关重要。
5.接种技术：接种是将外植体接入培养基的过程。
熟练的接种技术能够减少对植物组织的损伤，避免污染，并提高组织的存活率。
6.细胞分裂与增殖：在适宜的培养条件下，植物细胞会分裂并增殖形成愈伤组织。
这个过程需要定期观察和记录细胞的生长情况，及时调整培养条件以促进细胞的分裂和增殖。
7.生根与移植：当愈伤组织形成后，可以将其转移到生根培养基中，促使组织产生根系。
当根系形成后，可以将其移植到土壤中或进行其他后续实验。
8.遗传稳定性：为了确保组织培养后得到的植株是纯合的，并保持其遗传稳定性，需要采用适当的遗传检测方法。
这可以通过分子生物学方法，如DNA 指纹分析或基因表达分析来实现。
9.法规与伦理：在进行组织培养实验时，必须遵守相关的法规和伦理准则。
外植体的选择与培养精选PPT
无菌培养基上，这一过程叫做接种。 第三节 外植体的选择与培养
(6)接种工具随时蘸95%酒精灼烧，避免交叉污染； (1)在接种前1-2周用甲醛熏蒸接种室； 5、控制好移栽前10天的光、温、湿环境因子 (2)先解开包口纸，将试管等拿成斜角，使试管口在酒精火焰上方转动，灼烧数秒钟； 1、试管苗的生理状况：移栽壮苗 ②合适的培养条件： 第三节 外植体的选择与培养
（一）接种—无菌操作 (4)布质制品的灭菌
(5)无菌室的消毒 (6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进行接种。
定义:把经表面灭菌处理后植物材料，切碎或分 第三节 外植体的选择与培养
2、植物生长调节物质：适当加入生长素，去除细胞分裂素，有利生根，提高成活率
离出器官、组织、细胞，再经无菌操作转接到 第三节 外植体的选择与培养
第三节 外植体的选择与培养
3、减轻褐变现象发生的措施
①选择合适的外植体： ②合适的培养条件： ③连续转移 ④加抗氧化剂： ⑤加活性炭
第三节 外植体的选择与培养
（三）玻璃化现象
1、定义：在长期的离体培养繁殖时，有些 试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状， 这种现象称为玻璃化。
第三节 外植体的选择与培养
第三节 外植体的选择与培养
外植体成苗途径：
①植物品种
(1)在接种前1-2周用甲醛熏蒸接种室； (1)对接种材料进行消毒； 三、外植体的接种与培养
愈伤组织
根、芽
培 细养胞基分中 裂无 素机 浓离 度子 较种 高类 时及；比例不A当时。
芽根
第四节、试管苗驯化与移栽
(5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸95%酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。
第三节 外植体的选择与培养
植物组织培养-外植体的选择与建立
3 个材料/容器： 污染率=100-（60%）3=78.4%
按40%计：接种100个材料
污染量=100X78.4%=79
1个材料/容器：
获得量= 100X（60%）3= 21
污染量=100X40%=40
4 个材料/容器：
获得量=100-40=60。
获得量= 100X（60%）4=13
2、根据母株的年龄和生长发育阶段选择：
年
程 度
龄 或 幼
化
外
立
植 体
建
阶
段
发 育
外
立
植 体
建
母株年龄和幼化程度与外植体建立
母株阶段发育与外植体建立
精品课件
第二节 外植体（培养物）的选择
杜鹃花 ‘van Weerden Poelman’
精品课件
第二节 外植体（培养物）的选择
精品课件
第二节 外植体（培养物）的选择
第三节 外植体（培养物）的建立
（2）、污染的防止： • 母株保护：保持母株清洁，减少喷
灌。温室种植，喷施杀菌（虫）剂， 减少病原菌含量。 • 材料选择：选取生长发育健壮，病 虫危害少的材料。 • 严格清洗、消毒与无菌操作。 • 小容器、分散接种。
精品课件
第三节 外植体（培养物）的建立
（3）、污染估算及对策：
2个材料/容器：
5 个材料/容器：
2污染：1X40%X40%=16% 弃掉 获得量= 100X（60%）5=8
1污染：2X40%X40%=32%
• 防止污染的对策：
2未污染：60%X60%=36% 污染率=100-36=62%
小容器、多数量、尽量分散、相 互隔离
外植体及消毒
小结
外植物的来源是决定植物组织培养成败的一个 重要因素。选择适宜的外植体需要综合考虑上 述几个方面的因素，同时，还需要考虑外植体 的洁净程度。
从外界或室内选取的外植体，都不同程度的带有各 种微生物。这些污染源一旦带入培养基，便会造成培 养污染。因此，选择外植体时，应同时考虑到洁净程 度。
无菌操作技术分解
（1）在接种前20min，打开超净工作台的风机以 及台上的紫外灯； （2）超净工作台及紫外灯工作20分钟后，关掉 紫外灯，15分钟后可进行操作; （3）实验人员先洗净双手，在缓冲间换好专用 实验服，并换穿拖鞋等； 实验人员衣物带有很多灰尘，在室内走动时，相 当于制造“菌雾”，因此，进入接种室必须换上专 用工作服，头发上的灰尘也很多，因此，应戴上工 作帽。
操作时打开三角瓶或试管，最大污染机会是管口形成 负压，空气进入而带来灰尘，因此要求用火焰烧瓶口， 杀死菌类。用薄膜做瓶盖时，应该在火焰附近打开盖 子；若不用酒精灯接种时，三角瓶或试管应拿成斜角， 既已减少灰尘和偶尔存在的细菌落入也便于操作。
培养物污染的原因及预防措施
污染：在组培过程中,由于真菌、细菌等微生物的 侵染，在培养容器内滋生大量的菌斑，使培养材 料不能正常生长和发育的现象。 污染物的长期存在会引起试管苗生活力下降，叶片 缺绿，甚至死亡。 污染主要原因 1、培养基及各种使用器具消毒不彻底； 2、外植体灭菌不彻底； 3、操作人为因素带入； 4、工作区域污染。
注：1、灭菌后溶液，可倒回原液再次使用； 2、灭菌时间需要严格控制（原因）。
常见消毒剂的配制、作用原理及使用
外植体的选取
百合组培快繁（二）---外植体的选取、灭菌与接种一、实验的目的和意义通过动手操作，掌握组织培养材料的选取、表面消毒、灭菌、及无菌操作的技术，并掌握各种不良现象出现的可能原因和改进方法。
二、实验材料百合成株、子球等烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿、镊子、解剖刀、剪刀、酒精灯；无菌水、乙醇、0.1%升汞；超净工作台等。
三、实验步骤与操作(一)培养材料的灭菌未受病害、虫害侵袭的植物组织块内部被看作是无菌的。
因此，只要用化学灭菌剂对植物材料进行表面灭菌，便成为无菌材料。
常规灭菌方法按如下步骤进行：1、材料的选取与清洗（1）选择无病斑，虫害植株作为取材母株。
（2）剪取所需叶片(整片)与茎段(2～3~m长)。
一般为茎尖、嫩叶、花蕾等幼嫩部位。
（3）除去老叶，把上述材料先置于烧杯中，然后放在自来水下，用流水冲洗20-60分钟，而后用无菌水冲洗1-3次。
2、表面灭菌（1）将植物材料放在有盖容器中，倒入75%酒精使之没过外植体，并轻晃以除去气泡，经过10-20秒，将乙醇倾去，用无菌水冲洗外植体。
因为酒精的渗透力很强，不宜灭菌时间过长。
（2）接着用0．1％的升汞溶液浸泡外植体5～10分钟，处理过程中要轻摇2-3次，将外植体表面的气泡除去。
（3）灭菌结束后，倒出消毒液，用无菌水冲洗3-6次。
沥干水分备用。
如果材料本身带菌，则可在培养基内加入少量抗生素，如橄榄霉素20ppm，氨苄青霉素50-500 PPm与适量制霉菌素。
以便控制细菌与霉菌的生长，在抗菌素培养基上经多次继代培养，可使植物组织无菌化。
常用的灭菌剂及其效果详见下表(2—1)。
（二）无菌操作1、花卉组织培养常用的接种工具和试剂有镊子、剪刀、解剖刀、解剖针、酒精灯、酒精棉、消毒剂、无菌水等。
这些工具在使用前必须严格消毒。
2、接种前，无菌室要用紫外灯或化学杀菌剂(如甲醛、来苏水等)消毒，紫外灯照射要在30min以上。
在进行室内消毒时，要注意人身安全和过敏反应，比如，要防止紫外灯长时间照射和甲醛等化学试剂对人体的毒害作用。
组织培养的操作规程(3篇)
第1篇一、准备阶段1. 查阅相关文献，根据已成功培养相近植物资料，结合实际制定切实可行的培养方案。
2. 根据实验方案配制适宜的消毒剂及同培养阶段所需培养基，并经高压灭菌或滤除菌备用。
二、外植体选择与消毒1. 选择合适部位作外植体，如茎尖、叶片、花药等。
2. 对外植体进行预处理，如切割、剥离等。
3. 将外植体用75%乙醇消毒1分钟，再用0.1%升汞消毒5-6分钟，最后用无菌水冲洗3-5次。
三、初代培养1. 将消毒后的外植体接种到初代培养基上。
2. 将接种好的培养基置于培养室或光照培养箱中，温度控制在25-28℃，光照时间12-16小时。
3. 观察外植体生长情况，如脱分化、愈伤组织形成、芽萌发等。
四、继代培养1. 当外植体形成愈伤组织或芽时，将其切割成小块，接种到继代培养基上。
2. 继代培养基的激素配比可根据实际情况进行调整，如增加细胞分裂素或生长素浓度。
3. 继代培养条件同初代培养。
五、根培养1. 当芽长到一定长度时，将其转移到生根培养基上。
2. 生根培养基的激素配比应适当降低细胞分裂素浓度，提高生长素浓度。
3. 生根培养条件同初代培养。
六、炼苗移栽1. 选择健壮的根苗进行室外炼苗。
2. 炼苗期间注意保温、保湿、遮荫，防止病虫害。
3. 待苗适应外部环境后，移栽到疏松透气的基质中。
4. 移栽后加强管理，如浇水、施肥、防治病虫害等。
七、注意事项1. 培养基的配制和灭菌要严格按照操作规程进行。
2. 消毒剂的使用要适量，避免对外植体造成伤害。
3. 培养环境要适宜，温度、光照、湿度等条件要稳定。
4. 观察外植体生长情况，及时调整培养方案。
5. 操作过程中要穿戴无菌手套，避免污染。
通过以上操作规程，您可以根据实验需求进行组织培养。
在实际操作过程中，请根据具体情况调整方案，以确保实验成功。
第2篇一、准备阶段1. 查阅相关文献，了解植物组织培养的基本原理和操作流程。
2. 根据已成功培养相近植物资料，结合实际情况，制定切实可行的培养方案。
植物组织培养技术：3-任务三 植物组培快繁技术
已离体培养植株 （试管苗）
❖ 多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制 培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程 中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件下 的植物可以保持培养料间的一致性，提高实验的 可重复性，也便于培养技术的规范。
❖ 某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长 的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于潮 湿和不洁净环境中的植物。对于培养过程中可能 出现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
任务四、植物脱毒技术
植物病毒对园艺植物的危害；脱毒技术； 脱毒苗鉴定；脱毒苗的保存和繁殖。
任务五、常见园艺植物的脱 毒与快速繁殖
马铃薯、苹果、草莓、兰花的脱毒快繁。
主要内容
1. 外植体选择与处理 2. 外植体培养 3. 试管苗驯化移栽 4. 快繁过程中出现的问题及解决办法
回顾知识点： ❖ 什么是外植体？
因此，外植体的采集尽量选用植物体最幼态的组织。
2、材料取材
(4)外植体的大小： 外植体越大，污染率越高，但也不能过小，越小成活率越 低。在通常情况下，叶片、花瓣等的面积约为5mm²，茎段 为0.5cm²，除非是用于去除病毒，否则不宜将外植体切得
过小。
一、外植体选择与处理
（二）外植体处理
1、外植体预处理 首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干 净，如用刷子刷洗。 把材料切割成适当大小，以能放入灭菌容器为宜。 置于自来水下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁轻度 为宜。细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。洗时可加入洗衣粉清洗， 然后用自来水清洗洗衣粉水。目的是去除轻度附着在植物表面的污 物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。最理想的清洗物 质是表面活性物质——吐温。
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根据植物细胞全能性学说，所有植物细胞在理论上都具有重新形成新植株的能力，然而在同
一植物的各个不同部位的组织、器官中，其形成新植株的能力因植物年龄、季节及生理状态
而有很大不同，对培养的反应也不同，因此选择合适的外植体对于组培的成功是很重要的。
1. 外植体的类型
外植体可分为带芽外植体和分化组织构成的外植体两种类型。
1.1 带芽的外植体
如茎尖、侧芽、原球茎、鳞芽等，利用此类外植体进行培养有两种目的：一是诱导茎轴伸长，
为此就要在培养基中添加生长素和赤霉素；
另一个是抑制主轴发育，促进腋芽最大限度的生长，以产生丛生芽，为此则在培养基中加入
细胞分裂素。这类外植体产生植株的成功率高，而且很少发生变异，容易保存材料的优良特
性。
1.2 由分化组织构成的外植体
如茎段、叶、根、花茎、花瓣、花萼、花粉、胚珠、果实等，这类外植体大多由已分化的细
胞组成，需要经过脱分化诱导出愈伤组织，再分化出芽或胚状体，然后形成新植株，因此这
里外植体形成的后代可能有变异。
2. 外植体的选择条件
2.1 外植体的部位
确定取材部位时，一方面要考虑朋友材料的来源是否丰富，另一方面也要考虑外植体材料经
过脱分化产生的愈伤组织是否会引起不良变异，丧失了原品种的优良性状。
对于大多数植物来说，茎尖无疑是较好的取材部位，因为其形态已经基本建成，生长速度快，
茎段侧芽或顶芽容易萌发，遗传性状稳定，同时也是获得无病毒植株的重要途径。但是茎尖
常常受到材料来源的限制，因此，茎段成为广泛应用的外植体材料。
而一些草本植物可以采用叶片、叶柄、花瓣等作为外植体。一些培养较困难的植物，可选取
子叶或下胚轴作为外植体进行培养。花药和花粉是育种和获得无病毒苗（如草莓）的重要途
径之一。此外，还可根据需要，进行根、花瓣、鳞茎等部位的培养。
2.2 取材季节
一般按照植物生长的最适时期取材，即春夏季节取材，材料幼嫩，生理机能旺盛，灭菌也容
易，且易培养。而秋冬季节取材，植物已经进入生长末期或休眠期，对诱导反应迟钝或无反
应，培养很难成功。雨季湿热季节取材，灭菌相对会困难。
2.3 器官的生理状态和发育年龄
总体来说，树龄小的要比树龄大的容易获得成功，幼年组织比老年组织有较高的形体发生能
力。
沿植物的主轴，越向上的部分形成的器官其生长时间越短，生理年龄也越老，越接近发育上
端越成熟，越易形成花器官。相反，越向下，其生理年龄越小，越易形成营养芽。
比如，在木本植物的组织培养中，取幼龄树的春梢嫩枝段或基部的萌蘖条叫好，下胚轴与具
有3-4对真叶的幼嫩茎段，生长效果也较好。
2.4 外植体大小
在许多植物材料的组培中发现，外植体材料大，灭菌工作很难测彻底，容易产生污染，而且
浪费材料；外植体太小，多形成愈伤组织，成活率较低，除非用于去除病毒，否则外植体不
宜过小。
一般茎尖朋友存活的临界大小应为一个茎尖分生组织带1-2个叶原基，大小约为0.1-0.5毫米；
叶片、花瓣约为0.5-1。0平方厘米；茎段长约为0.5-1.0厘米。