蓖麻毒素最简单的提取
蓖麻碱的提取_郑成
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乙醚 !!" " 乙腈 ! 分析纯 " 无水乙醇 ! 化学醇 "
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吐温 &’ 蓖麻籽 # 脱油蓖麻饼粕
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暗杀界的“完美毒药”蓖麻
暗杀界的“完美毒药”蓖麻蓖麻毒素，一种毒性奇高且还无药可解的毒物。
据估测，平均需注射不到0.2毫克就能毒死一个成年人。
它的毒性比砒霜强数千倍，是眼镜蛇毒素的2-3倍。
近年来，西方国家利用蓖麻毒素进行暗杀和恐吓的事件不断发生。
令人费解的是，在我国蓖麻毒素能被广为人知，更多来自于中小学生误食蓖麻子中毒事件。
那么，蓖麻毒素究竟有多毒？为什么我们中国的小朋友总能轻易接触到蓖麻子呢？除了拥有毒性以外，蓖麻又有何妙用呢？要说利用蓖麻毒素暗杀最为经典的案件，就是BBC记者乔治·马可夫（Georgi Ivanov Markov）遭暗杀事件了。
1978年9月11日的一大早，马可夫像往常一样去挤公交上班。
走着走着，他突然觉得右大腿后侧一阵刺痛。
他下意识回过头来看时，发现有一个男人正在弯腰捡雨伞；兴许是不小心被伞尖碰到了，当时马可夫并没有在意太多。
等晚上回到家后，马可夫突然呕吐、高烧、全身无力。
家人赶快将他送进了医院，医生经过诊断后是血液中毒，无药可解。
很不幸，马可夫于三天后死亡。
尸检完才发现，马可夫的死因是被注射了0.45mg的蓖麻毒素。
法医在他的大腿后侧发现一根钻了几个孔的小圆柱，类似针头大小。
化验结果显示，看似空空如也的小孔里残留有蓖麻毒素。
当小圆柱被注射进人体后，其中的毒物就被释放出来，杀死了马可夫。
后来发现这个小圆柱来自于克格勃开发的一种暗杀武器：伞枪。
也就是马可夫当天看到的那把被捡起的雨伞。
谁能想到，走到大街上被雨伞刺了一小下，就被暗杀身亡了。
而这也让我们看到了蓖麻毒素的威力，居然能在如此微小的剂量下，还能致人死亡。
事实上，利用蓖麻毒素进行暗杀的事件时有发生，比如2012年Assiri报道的蓖麻毒素粉末引起的消化道致死事件。
在冷战期间，这种毒素还曾被美苏两国拿来做生化武器。
比起国外诡计多端的暗杀事件，我们更常听到中小学生误食蓖麻子中毒的报道。
比如2011年内蒙古还发生了一起35名小学生集体中毒的事件。
蓖麻毒蛋白提取过程条件优化
蓖麻毒蛋白提取过程条件优化王莹;黄凤兰;陈永胜;魏永春;狄建军;苏雅拉图【摘要】以蓖麻毒蛋白为研究对象,对其提取过程进行优化.采用硫酸铵沉淀,聚乙二醇包埋透析,分子筛层析和亲和层析等处理,从去壳蓖麻籽中分离纯化得到蓖麻毒蛋白,结果得到最优的体系为,高速冰冻离心过滤,聚乙二醇包埋透析,100ml缓冲液A冰浴匀浆,并在SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈32kDa和34kDa两条蛋白带,证明蓖麻毒蛋白已被纯化均一.【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(025)001【总页数】5页(P34-37,53)【关键词】蓖麻毒蛋白;亲和层析;分离纯化【作者】王莹;黄凤兰;陈永胜;魏永春;狄建军;苏雅拉图【作者单位】内蒙古民族大学,农学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业研究工程中心,内蒙古,通辽,028042;内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业研究工程中心,内蒙古,通辽,028042;内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业研究工程中心,内蒙古,通辽,028042;内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业研究工程中心,内蒙古,通辽,028042;内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古,通辽,028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业研究工程中心,内蒙古,通辽,028042【正文语种】中文【中图分类】S565蓖麻毒蛋白有很好的利用价值，如用于医药、农药，特别是近来用于抗肿瘤的靶向药物〔1，2〕.蓖麻毒素(Ricin)指蓖麻毒蛋白、蓖麻碱、蓖麻变应原和血球凝集素四种毒性物质，其中蓖麻毒蛋白的毒性最大〔3，4〕.在药物研究中，蓖麻毒蛋白又称蓖麻毒素〔5〕.蓖麻毒蛋白对人和哺乳动物有毒害作用，几乎对所有真核细胞都有毒性〔6，7〕.一个毒素分子进入细胞内，就足以使整个细胞的蛋白质合成完全停止.蓖麻毒蛋白具有很强的细胞毒性，一旦进入胞质溶胶，毒蛋白的A链便会催化核糖体的脱嘌呤作用〔8〕，10min便可导致15000个核糖体失活.蓖麻毒蛋白为白色粉末状或结晶形固体，无味.不溶于乙醇、乙醚、三氯甲烷、甲苯等有机溶剂，溶于酸性稀释液或盐类水溶液，在饱和硫酸铵溶液中〔9〕，能沉淀析出.在水中煮沸或加压蒸汽处理即凝固变性，失去毒性，但干热时变性很小〔8〕.蓖麻毒蛋白B链有D-半乳糖的结合位点〔11〕，根据这个特殊的亲和能力，可以用琼脂糖凝胶进行分离〔12〕.蓖麻毒蛋白是一种植物毒素〔10〕，自然条件下可以降解，并且不对环境造成污染，如果用它来支撑生物农药，将产生巨大的经济效益、社会效益和生态效益.国内早在五年前就用蓖麻籽的粗提物进行了杀虫试验〔14〕，表明有一定的触杀效果.本文旨在对蓖麻毒蛋白提取过程进行条件优化，以提高蓖麻毒蛋白提纯效率.1 材料与方法1.1 植物材料通蓖五号蓖麻种子，通辽巨大种业公司提供.1.2 主要仪器 SDS-160数控计滴自动部分收集器，上海青浦沪西仪器厂；HL-2恒流泵上海青浦沪西仪器厂；紫外检测仪UUD-680-1，上海金达生化仪器有限公司；LM17型记录仪，永清示波器厂；DY89-Ⅰ电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技股份有限公司；高速冷冻离心机，湖南湘仪有限公司.1.3 蓖麻毒蛋白粗品提取参照Nicoson等方法，并稍作修改：称取50.00g去壳蓖麻籽，冰浴研磨后，用100ml，5mmol/L磷酸缓冲液（PBS，pH6.5，含100mmol/L NaCl，缓冲液A）冰浴匀浆.匀浆液于4℃放置2～3h后，将匀浆液20000×g冰冻离心30min（这一步对四层纱布过滤进行优化）.上清液20000×g 冰冻离心30min.除去沉淀和溶液表面的白色脂肪，取上清液体.在上清液中加入固体硫酸铵达到60%饱和度.4℃放置2～3h.20000×g冰冻离心30min.倒去上清，把沉淀溶解在缓冲液A中，并在4℃下用聚乙二醇包埋（这一步是对透析过夜的优化），4℃透析2～3h.然后20000×g冰冻离心10min.取上清液即为蓖麻毒蛋白粗品.1.4 蓖麻毒蛋白粗品提纯把Sepharose 4B装柱（1cm×24cm），用缓冲液A平衡后，上蓖麻毒蛋白粗品.先用同一缓冲液A洗脱除去杂蛋白，待洗脱液280nm 的吸光值下降至0.1以下时，改用含100mmol/L D-半乳糖的磷酸缓冲液（缓冲液B）.分部收集，把A280吸光值较高的几管合并.把SephadexG-100装柱（1cm×40cm），用缓冲液A平衡后，上合并管的毒蛋白，用缓冲液A洗脱，分部收集.1.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 100ml缓冲液A冰袋后匀浆电泳，200ml缓冲液A 常温下匀浆后电泳，100ml缓冲液冰袋下粗提毒蛋白电泳，100ml毒蛋白提纯后样品稀释电泳.1.6 优化体系确定1.6.1 100ml缓冲液A匀浆后最佳稀释倍数的确定取50.00g去壳蓖麻籽，冰浴研磨后，在0℃条件下用100ml缓冲液，小心匀浆，匀浆液于4℃放置2～3h后，将匀浆液20000×g冰冻离心30min.除去沉淀和溶液表面的白色脂肪，取上清液.将上清液依次稀释成1倍（原液），2倍，4倍，8倍，16倍，32倍，64倍，128倍，256倍，512倍.进行电泳，确定最佳体系.1.6.2 200ml缓冲液A匀浆后最佳稀释倍数的确定取50.00g去壳蓖麻籽，常温研磨后，在常温条件下用200ml缓冲液，小心匀浆，匀浆过程见1.6.1.将得到匀浆液依次稀释成1倍（原液），2倍，4倍，8倍，16倍，32倍，64倍，128倍，256倍，512倍.进行电泳，确定最佳体系.1.6.3 100ml缓冲液A毒蛋白粗提物最佳稀释倍数的确定称取50.00g去壳蓖麻籽，冰浴研磨后，用100ml，5mmol/L磷酸缓冲液，冰浴匀浆.匀浆液于4℃放置2～3h后，将匀浆液20000×g冰冻离心30min（这一步对四层纱布过滤进行优化）.将上清液20000×g冰冻离心30min.除去沉淀和溶液表面的白色脂肪，取上清液体.在上清液中加入固体（NH4）2 SO4达到60%饱和度.4℃放置2～3h.20000×g冰冻离心30min.倒去上清，把沉淀溶解在缓冲液A中，并在4℃下用聚乙二醇包埋，透析2～3h.然后20000×g冰冻离心10min.取上清液即为蓖麻毒蛋白粗品.将得到的粗蛋白依次稀释20倍，8倍，4倍，2倍，1倍（原液）.进行电泳，确定最佳的稀释体系.1.6.4 100ml缓冲液A，200ml缓冲液A，毒蛋白粗提物最佳条件确定毒蛋白粗提过程见1.6.3.把Sepharose 4B装柱（1cm×24cm），用缓冲液A平衡后，上蓖麻毒蛋白粗品.先用同一缓冲液A洗脱除去杂蛋白，待洗脱液280nm的吸光值下降至0.1以下时，改用含100mmol/LD-半乳糖的磷酸缓冲液（缓冲液B）.分部收集，把A280吸光值较高的几管合并.从依次取200ml缓冲液进行毒蛋白粗提物，过4B后的样品，200ml缓冲液提取匀浆液两个，100ml缓冲液提取下过4B两个样，M 100ml缓冲液提取匀浆液两个样品.进行电泳，确定最佳体系.1.6.5 100ml缓冲液A蓖麻毒蛋白粗品提纯后样品最佳稀释倍数的确定称取50.00g去壳蓖麻籽，冰浴研磨后，用100ml，5mmol/L磷酸缓冲液，冰浴匀浆.匀浆液于4℃放置2～3h后，将匀浆液20000×g冰冻离心30min（这一步对四层纱布过滤进行优化）.除去沉淀将上清液20000×g冰冻离心30min.除去沉淀和溶液表面的脂肪，取上清液体.在上清液中加入固体（NH4）2 SO4达到60%饱和度.4℃放置2～3h.20000×g冰冻离心30min.倒去上清，把沉淀溶解在缓冲液A 中，并在4℃下用聚乙二醇包埋，4℃透析2～3h.然后20000×g冰冻离心10min.取上清液即为蓖麻毒蛋白粗品.把Sepharose 4B装柱（1cm×24cm），用缓冲液A平衡后，上蓖麻毒蛋白粗品.先用同一缓冲液A洗脱除去杂蛋白，待洗脱液280nm的吸光值下降至0.1以下时，改用含100mmol/LD-半乳糖的磷酸缓冲液（缓冲液B）.分部收集，把A280吸光值较高的几管合并.把SephadexG-100装柱（1cm×40cm），用缓冲液A平衡后，上合并管的毒蛋白，用缓冲液A洗脱，分部收集.将得到蓖麻毒蛋白，稀释倍数依次是1倍，2倍，4倍，8倍，20倍，并与匀浆液的两个样一起进行电泳进行对照，确定最优的体系.1.6.6 最佳上样量确定毒蛋白提取过程见1.6.5 ，将粗提后的蓖麻毒蛋白，分别用10ml，8ml，6ml，5ml，4ml，3ml，2ml，1ml.进行凝胶层析，得到毒蛋白，进行PAGE，确定最优体系.2 结果与分析2.1 100ml缓冲液A匀浆后最佳稀释倍数的确定将100ml缓冲液A冰浴研磨得到的匀浆液上清液依次稀释成1倍（原液），2倍，4倍，8倍，16倍，32倍，64倍，128倍，256倍，512倍.进行电泳，结果如图1图1 100ml缓冲液A冰浴匀浆后电泳Figure 1 100ml buffer solution A iced bath homogenate1：稀释1倍（原液）；2：稀释2倍；3：稀释4倍；4:稀释8倍；5:稀释16倍；6:稀释32倍；7:稀释64倍；8:稀释128倍；9:稀释256倍；10:稀释512倍图2 200ml缓冲液A常温下匀浆后电泳Figure 2 200ml buffer solution A homogenate in common temperature1：稀释1倍（原液）；2：稀释2倍；3：稀释4倍；4：稀释8倍；5：稀释16倍；6：稀释32倍；7：稀释64倍；8：稀释128倍；9：稀释256倍；10：稀释512倍由图1可以明显看出随着稀释倍数的增大，带状分布越来越不明显，原液，稀释2倍和稀释4倍，有明显的带状分布，且条带清晰.其他稀释倍数并未见较明显的条带.2.2 200ml缓冲液A匀浆后最佳稀释倍数的确定将200ml缓冲液A常温研磨得到的匀浆液上清液依次稀释成1倍（原液），2倍，4倍，8倍，16倍，32倍，64倍，128倍，256倍，512倍.进行PAGE，结果如图2.由图2可以看出随着稀释倍数的增大，带状分布越来越不明显，原液，稀释2倍和稀释4倍，有明显的带状分布，且条带清晰.其他稀释倍数并未见较明显的条带.2.3 100ml缓冲液毒蛋白粗提物最佳稀释倍数的确定用100ml缓冲液A将蓖麻毒蛋白粗提，得到的粗蛋白依次稀释20倍，8倍，4倍，2倍，1倍（原液）.并与200ml缓冲液A冰浴匀浆及100ml缓冲液常温匀浆后毒蛋白粗提物进行对照.结果如图3.图3 粗提毒蛋白电泳Figure 3 Simple extraction of ricin1：稀释20倍；2：稀释8倍；3：稀释4倍；4：稀释2倍；5：稀释1倍（原液）；6：200ml冰浴匀浆稀释1倍；7：M 蛋白质marker；8：200ml冰浴匀浆稀释2倍；9：100ml常温匀浆稀释1倍；10：100ml常温匀浆稀释两倍图4 毒蛋白粗提物过4BFigure 4 Simple extraction of ricin laminar analysis in 4B1：200ml缓冲液过4B；2：200ml缓冲液匀浆液；3：200ml缓冲液匀浆液；4：100ml缓冲液过4B；5：100ml缓冲液过4B；6：M 蛋白质marker；7：100ml缓冲液匀浆液；8：100ml缓冲液匀浆液由图3粗提毒蛋白同样是稀释倍数越大，带的颜色越深，整体差异不大，并与前两次的粗提样液进行对照，认为100ml缓冲液冰浴匀浆下原液粗提效果好.其他稀释倍数均不理想.2.4 100ml缓冲液，200ml缓冲液，毒蛋白粗提物最佳条件确定取200ml缓冲液进行毒蛋白粗提物，过4B后的样品，200ml缓冲液A冰浴研磨后匀浆液两个，100ml缓冲液冰浴研磨匀浆后蓖麻毒蛋白粗提物下过4B两个样，M 100ml缓冲液提取匀浆液两个样品.进行电泳，确定最佳体系.由图4从左到右依次是200ml缓冲液提取下过4B，200ml缓冲液提取匀浆液两个，100ml缓冲液提取下过G100两个样，M，100ml缓冲液提取匀浆液两个样品.看出100ml缓冲液匀浆毒蛋白含量明显高于200ml缓冲液，100ml缓冲液过4B毒蛋白的含量高于200ml缓冲液，且分离效果很好.2.5 100ml缓冲液毒蛋白粗提物最佳稀释倍数的确定将过G100提纯后得到蓖麻毒蛋白，稀释倍数依次是1倍，2倍，4倍，8倍，20倍，并与100ml冰浴研磨匀浆液（原液）和200ml冰浴研磨匀浆液（原液）的两个样一起进行电泳以便对照，确定最优的体系.图5 毒蛋白提纯后样品稀释电泳Figure 5 Attenuate electrophoresis of ricin purification1：稀释1倍（原液）；2：稀释2倍；3：稀释4倍；4：稀释8倍；5：稀释20倍；6：蛋白质marker；7：100ml缓冲液匀浆液；8：200ml缓冲液匀浆液图6 不同层析量电泳Figure 6 Different laminar analysis quant1：上样量为10ml；2：上样量为8ml；3：上样量为6ml；4：上样量为5ml；5：蛋白质marker；6：上样量为4ml；7：上样量为3ml；8：上样量为2ml；9：上样量为1ml由图5可以看出随着稀释倍数的增大，带状分布越来越不明显，原液有明显的带状分布，且条带清晰.其他稀释倍数并未见较明显的条带.蓖麻毒蛋白粗品提纯后经SDS-PAGE后呈32k Da和34k Da两条蛋白带.由此表明从Sepharose 4B亲和层析柱洗脱下来的比蓖麻毒蛋白已经被纯化至均一.2.6 最佳层析量确定把Sepharose 4B装柱（1cm×24cm），用缓冲液A平衡后，将合并管中毒蛋白粗品进一步纯化，分别用10ml，8ml，6ml，5ml，M ，4ml，3ml，2ml，1ml跑PAGE，确定最优体系.由图6看出，上样最适上样量是3ml.2.7 蓖麻毒蛋白最佳紫外吸收峰的确定毒蛋白分离提纯及等电点蓖麻毒蛋白粗品上Sehparose4B层析柱后用5mmol/L缓冲液A洗脱时，出现一个大的蛋白洗脱峰.待洗脱液在280nm的吸光值下降至0.1以下时，改用缓冲液B洗脱，得到第二个蓖麻毒蛋白小峰.待洗脱液在280nm的吸光值下降至0.1以下时再改用含更高浓度半乳糖或NaCL的PBS洗脱，没有出现第三个蛋白峰.3 结论与讨论3.1 结论蓖麻毒蛋白用高速冰冻离心效果明显好于纱布过滤用聚乙二醇包埋透析，效率明显高于透析过夜，且透析效果好于透析过夜.在冰浴匀浆下100ml缓冲液提取效果好于200ml缓冲液，原液上样效果好，最适上样量是3ml.蓖麻毒蛋白粗品上Sehparose4B层析柱后用5mmol/L缓冲液A洗脱时，出现一个大的蛋白洗脱峰.待洗脱液在280nm的吸光值下降至0.1以下时，改用缓冲液B洗脱，得到第二个蓖麻毒蛋白小峰.待洗脱液在280nm的吸光值下降至0.1以下时再改用含更高浓度半乳糖或NaCL的PBS洗脱，没有出现第三个蛋白峰.蓖麻毒蛋白粗品经过提纯后，经SDS-PAGE后呈32k Da和34k Da两条蛋白带.由此表明从Sepharose 4B亲和层析柱洗脱下来的蓖麻毒蛋白已经被纯化至均一.3.2 讨论为了探求有效的提取蓖麻毒素的方法，笔者对毒蛋白分离提纯的过程进行优化，本文省去纱布过滤，采用高转速离心除去杂质，除杂效果优于纱布过滤，并在透析过程中，用聚乙二醇包埋透析〔15〕，显著提高了透析效率，同时优化整个过程提纯检验过程.参考文献【相关文献】〔1〕邹立波，詹金彪.蓖麻毒素的提取及其抗肿瘤作用研究〔J〕.浙江大学学报(医学版)，2005，34（3）:217-219.〔2〕邹立波.蓖麻毒素与肿瘤治疗〔J〕.国外医学临床生物化学与检验学分册，2001，22（6）：213-215.〔3〕Gon D，et al.Ricin〔M〕.Institute for International Cooperation in Animal Biologics，2004.19-20.〔4〕ZHAN J B，de SOUSA M，CHADDOCK J A，et al.Restoration of lectin activity to a non-glycosylated ricin B chain mutant bythe 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世界上最致命的十大毒药
世界上最致命的十大毒药一、肉毒杆菌(摄入)要选出世界上杀伤力最强的毒药，真的不是一件易事，不过专家们一致同意首当其冲的应该是肉毒杆菌，其杀伤力远远超过沙林。
它会破坏人的神经系统，使人在极度痛苦中死去。
但是，在减缓皱纹方面却能发挥奇效。
二、蓖麻毒素(摄入或吸入)蓖麻毒素是从蓖麻子中提取获得的。
蓖麻毒素可引起人的呼吸和身体器官衰竭，导致人在几小时内死亡。
有时，嚼少量蓖麻子就可致命。
蓖麻毒素是一种剧毒蛋白质。
它主要存在于蓖麻籽中。
该毒素易损伤肝、肾等实质器官，发生出血、变性、坏死病变。
并能凝集和溶解红细胞，抑制麻痹心血管和呼吸中枢，是致死的主要原因之一。
三、炭疽(吸入)皮肤接触炭疽可致命，但最常见的是吸入性炭疽。
它首先会引起感冒，然后会彻底毁灭人的呼吸系统。
炭疽是由炭疽杆菌所致，一种人畜共患的急性传染病。
人因接触病畜及其产品及食用病畜的肉类而发生感染。
临床上主要表现为皮肤坏死、溃疡、焦痂和周围组织广泛水肿及毒血症症状，皮下及浆膜下结缔组织出血性浸润;血液凝固不良，呈煤焦油样，偶可引致肺、肠和脑膜的急性感染，并可伴发败血症。
自然条件下，食草兽最易感，人中等敏感，主要发生于与动物及畜产品加工接触较多及误食病畜肉的人员四、沙林毒气(吸入)一种致命性的毒气，杀伤力是氰化物的几百倍。
只要吸入一小口，人就会口吐白沫，进入陷入昏迷状态，最后死亡。
最初，沙林毒气被当作杀虫剂使用，1997年被定位非法药剂。
沙林，又叫沙林毒气，学名甲氟膦酸异丙酯，英文名称Sarin，可以麻痹人的中枢神经。
化学式：(CH3)2CHOOPF(CH3)，它是常用的军用毒剂，按伤害作用分类为神经性毒剂。
二战时以“新星六号”冠名。
1995年在日本东京发生了沙林毒气事件是二战后最大的沙林中毒事件，2013年，叙利亚使用沙林毒气作战，两次事件均造成了较大的人员伤亡。
五、河豚毒素(摄入)发现于河豚(即著名的日本美食河豚鱼)体内，即使是煮熟的河豚鱼，其毒素依然存在。
植物毒素提取方法
植物毒素提取方法植物毒素是由植物体内生产的化合物，具有潜在的有害作用。
这些毒素可以通过水解、提取和纯化等步骤来提取。
在这篇文章中，我们将探讨植物毒素提取方法。
一、水解法水解是一种将植物毒素从其天然物质中分离的方法。
水解是通过水解酶进行的，这种酶可以分解出毒素分子。
该方法可以使用简单而廉价的原料。
用于水解的物料可以是干燥的或新鲜的植物，水解酶可用于液体培养基或直接添加到植物中。
水解的过程主要包括两个步骤。
在第一个步骤中，将水解酶加入到植物中，以帮助水解毒素的结构。
在第二个步骤中，通过低温沉淀法来分离出毒素。
水解法需要考虑的一些因素是：最适温度和pH值，水解酶的用量和使用时间。
最终的产物需要通过纯化和鉴别来确定其化学结构和毒性。
二、提取法提取是分离出植物毒素的另一种方法。
提取可以使用多种溶剂，包括醇、乙醇、乙醚和酸性水等。
不同的溶剂可以提取出不同种类的毒素，因此需要进行多种类型的提取。
提取的过程中，先将干燥或鲜活的植物材料加入到溶剂中，然后使用离心机沉淀残留物。
将上清液留取，然后使用浓缩器浓缩液体。
使用色谱法和质谱法等技术来鉴别和纯化产物。
三、纯化法如果需要进一步纯化提取出的植物毒素，可以使用色谱法和凝胶渗透法等技术。
这些技术可以使得相近的性质不同成分分开，最终得到一个更加纯净的产物。
凝胶渗透法是一种将不同大小的物质分开的方法。
通过将提取液体滤过一层具有孔洞的凝胶，可以将较大子单位分开。
色谱法是另一种分离物质的方法。
色谱技术可以分离化学物质，以帮助确定化合物的纯度和结构。
色谱法可以使用高效液相色谱法、气相色谱法或薄层色谱法等技术。
需要注意的是，这些技术需要高精度的仪器设备和优质的耗材，成本高昂。
在使用这些技术时，必须要进行良好的样品制备和操作，以避免杂质和偏差。
提取和纯化植物毒素是一项复杂的过程，需要考虑许多因素。
水解、提取和纯化方法是不同的，并且每种方法都具有其特定的用途。
准确选择最适合的方法，将会充分提高最终提取产物的质量。
夹心ELISA快速检测蓖麻粕中残留的蓖麻毒素
１ ． 溶 液 配 置 ２
１ ． 抗体 包 被液 （ ．１ｍ １ 、Ｈ值 ９６的碳 酸 盐缓 ．１ ２ ０Ｏ ５ ０／ Ｄ １ ．
冲溶 液 ）
溶 解 １ ９ 碳 酸钠 、． ｇ碳 酸 氢钠 于 蒸馏 水 中 ． ．ｇ ５ ２９ ３ 确定 的结果 ， 但样 品处理 复杂 ， 本 高 ， 成 也不 适用 于低 定 容 至 ｌＯ ０ １ ０ ｍ 含 量 蓖 麻 毒 素 样 品 的 检 测 １ ． 封 板 液 ．２ ２ 溶 解 １ ｇ牛 血 清 白 蛋 白 和 ５ ｔ ｗ ｅ ２ 于 ． Ｏ ０ｚ Ｔ ｅｎ＿Ｏ ｌ １０Ｏ ｌ 体包 被液 中 ０ ．ｒ 抗 ａ
变… 对 蛋鸡 而言 ， 喂未 脱毒 蓖麻 粕 ， 表现为脱 毛 、 麻粕 的脱毒 丁艺提供 参考 。 饲 则 停产 、 机体消瘦 和 内脏器 官病变［ ２ １ 给猪 饲喂含 ３ ％热 Ｏ
喷 蓖麻 粕 （ 毒 不 彻 底 ） 日粮 ． 胃底 和 肾 出 血 及 肝 脱 的 有
１ 材 料 与 方 法 １１ 仪 器 和 试 剂 ．
维普资讯
《 饲斟 工 业》 ２ ０ ・０ ６芷第 ２ ７誊 第 １ ７期
摘Leabharlann 要通过 实验 建立 了蓖麻 粕 中残 留蓖麻毒 素 的 夹心 Ｅ ＩＡ检测 方 法（ ＬＳ 双抗 原 夹心 法 ） 。蓖麻
粕样 品经 ｐ Ｈ值 ７４的磷 酸 盐缓 冲液 （ Ｂ ） － Ｐ Ｓ 提取 ， 蓖麻 毒 素充 分溶 出后 可 直接 用 于 Ｅ ＩＡ检测 。在 使 ＬＳ
１ ． 抗体 稀释液 （ ０１ Ｓ ．４ ２ 含 ．％Ｂ Ａ的 Ｐ Ｓ Ｂ ）
维普资讯
王宗义等： 夹心Ｅ ＩＡ快速检测蓖麻粕中残留的蓖麻毒素 ＬＳ
脏病 变发生嘲 蓖麻毒 素的作用 机制 已经 比较 清楚 ． 作
蓖麻的用途与毒性
蓖麻的用途与毒性科学松鼠会发表于2021-12-25作者：郝凤桐医师（首都医科大学附属北京朝阳医院职业病与中毒医学科主任医师）蓖麻的花掉与幼果记得小时候，住所的院子里经常种有许多蓖麻，每到秋季就和伙伴们去采摘蓖麻籽，并且知道蓖麻籽不能吃，所榨取的油脂是飞机上使用的高级润滑油。
现在利用零散地方栽种蓖麻的现象已经很少见了，不少儿童不认识蓖麻，不了解其毒性，所以一旦误食，往往造成意外中毒。
蓖麻原产于非洲东部的埃寒俄比亚，先后传至亚洲、欧洲和美洲，现在遍布全球的热带、温带地区，就是一种经济价值很高的油料作物。
我国的蓖麻就是1400年前由印度引入，至上世纪末期，印度、中国、巴西三国的蓖麻籽产量已经占到至世界总产量的80％以上。
蓖麻籽含油量一般在50%左右，蓖麻油在－18℃低温状态下不凝固，在500℃-600℃高温条件下不变质、不燃烧，用于高级润滑油的生产；在化工、冶金、机电、纺织、印刷、染料等行业用作助染剂、润滑剂、增塑刑、乳化刑和制造涂料、油漆、皂类及油墨的原料。
蓖麻的整个植株都有一定的经济价值。
蓖麻茎皮含有麻纤维，是生产绳索、纸张和板材的原料。
因蓖麻秆中含有蓖麻碱和毒蛋白，不会藏有虫卵和害虫，用蓖麻茎皮生产的包装材料，是国际免检产品。
蓖麻叶可饲养蓖麻蚕，蓖麻蚕丝是优良的轻纺材料。
蓖麻油粕经脱毒处理后,是优质的蛋白质饲料，也可以用作肥料及活性炭的生产原料。
在医药领域，蓖麻籽也具备药用价值，但是蓖麻子毒性很强，通常以外用居多。
在2021年，曾经出现过轻信传言“蓖麻子可以防非典”,引致30余名小学生误食篦麻子中毒的事件。
蓖麻毒素有很强的细胞毒性，研究人员从去壳蓖麻籽中提取天然蓖麻毒素，以白血病k562细胞、大肠癌sw480细胞、结肠癌colon205细胞和正常小鼠成纤维细胞nih3t3为受试对象，发现蓖麻毒素在低浓度下也能对细胞发挥毒性作用。
蓖麻毒素因其极高的细胞毒性引起科学家的兴趣，人们开始考虑将蓖麻毒素应用于抗肿瘤治疗。
蓖麻毒素及其A,B链的提取分离纯化的研究
蓖麻毒素及其A,B链的提取分离纯化的研究
谢蜀生
【期刊名称】《北京医科大学学报》
【年(卷),期】1989(021)002
【摘要】本文研究蓖麻毒素及其A、B链的提取、分离、纯化,根据B链能与Sepharose-6 B上的半乳糖结合,而A链不具有这一性质,用β-巯基乙醇使蓖麻毒素直接在Sepharose-6B柱上断链,然后分别用Tris-HCl和Tris-HCl-半乳糖溶液洗脱,首次把蓖麻毒素的制备、纯化以及A、B链的断链、分离结合起来,大大简化了工艺。
【总页数】3页(P147-149)
【作者】谢蜀生
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】TQ464.7
【相关文献】
1.BALB/c小鼠免疫重组蓖麻毒素B链蛋白的免疫机制研究 [J], 王俊虹;吴绘;魏茂提
2.蓖麻毒素A链与底物作用的结构基础及其解毒剂的研究进展 [J], 郭雷鸣;冯健男;黎燕
3.重组蓖麻毒素A链的表达及其对肿瘤细胞的毒性研究 [J], 张旭;陈春;詹金彪
4.利用蓖麻毒素(RCA I)亲和层析进一步分离纯化玉米精细胞 [J], 徐恒平;金城;杨
寿钧;张树政;曹宗巽
5.重组蓖麻毒素A链与几种天然单链核糖体失活蛋白的活性研究 [J], 裴武红;王润华;郑硕;沈倍奋
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蓖麻毒素：
蓖麻毒素为具有两条肽链的高毒性的植物蛋白。
它主要存在于蓖麻籽中。
该毒素易损伤肝、肾等实质器官，发生出血、变性、坏死病变。
并能凝集和溶解红细胞，抑制麻痹心血管和呼吸中枢，是致死的主要原因之一。
小鼠静脉注射LD50值为2.7μg/kg，腹腔注射为7~10μg/kg；对狗LD50值为0.6μg/kg；人致死量约为7mg。
蓖麻毒素除染毒水源和食物经消化道中毒外，还可作为国际间谍情报人员和恐怖分子进行暗害和破坏活动的毒素战剂武器。
1978年在伦敦的国际间谍人员曾用装有蓖麻毒素的伞尖在公开场所行刺，一名被刺人员中毒身亡。
同时在法国巴黎也有类似事件和发生。
结构特点：
蓖麻毒素(约占蓖麻蛋白的5%，分子量约为66 kD)是一种Ⅱ型异二聚体核糖体失活蛋白，由核糖体失活酶(蓖麻毒素A 链)及与半乳糖/N－乙酰半乳糖胺特异结合的凝集素(蓖麻毒素B 链)组成，二者之间连接一个二硫键。
对蓖麻毒素的一级结构进行分析发现，A 链含有267 个氨基酸残基，分子量约为32 kD，具有催化活性，是蓖麻毒素蛋白的效应链。
A 链中N 端第4 位及C 端附近分别含有1 个赖氨酸(Lys)残基，是蓖麻毒素A 链毒性作用的关键中心。
B链具有2 个结构域，这2 个结构域具有同源性，由基因复制产生。
结构域1 中含有氨基末端，而结构域2 中含有羧基末端。
蓖麻毒
素B 链由267 个氨基酸残基组成，具有结合活性，是蓖麻毒素的结合链。
理化性质：
蓖麻毒素的一、二级结构已清楚，由A、B两条链组成。
A链比B链稍短，两链之间以一个二硫键相连接。
它含有共价键结合的糖分子，糖的主要组成是甘露糖、葡萄糖和半乳糖。
分子量为66,000。
在0.1克分子半乳糖溶液中，毒素可在冰箱中贮存数月而不失活性，但煮沸易失去活性。
蓖麻毒素是从蓖麻籽中提取的植物糖蛋白，分子量64000。
毒素由A和B两条多肽链组成，两链间由一个二硫键连接。
目前，A 链和B链的氨基酸序列以及二级结构已基本清楚。
毒素B链上含有两个半乳糖或半乳糖残基结合位点，可和细胞表面的含半乳糖残基的受体结合，通过内陷作用进入细胞质，发挥毒性作用。
蓖麻毒素A、B链上还分别含有1和2个糖支链，链末端均为甘露糖残基，可以和网状内皮细胞特别是巨噬细胞结合。
后者细胞表面富含甘露糖受体，可优先摄取蓖麻毒素，这对于毒素发挥生物功能有重要的作用。