Crohn病唾液中炎症因子的研究

Crohn病唾液中炎症因子的研究目的：分析炎症因子白细胞介素1β（Interleukin 1β，IL-1β）、白细胞介素6（Interleukin 6，IL-6）、肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor α，TNF-α）与活动期CD患者相关性，为疾病的诊断提供检测指标。

方法：选取本院2011-2013年克罗恩病（Crohn’s disease，CD）患者，其中48例为活动期CD组患者和42例非活动期CD组患者，并选择45例正常健康人作为正常对照组，所有患者抽取静脉血进行血细胞计数和CRP检测，采用R&D SYSTEMS检测唾液中IL-1β、IL-6和TNF-α浓度，比较分析三组患者的差异。

结果：与正常对照组比较，活动期CD组与缓解期CD组患者的BMI、RBC 和Hb减低，而WBC、CRP和PLT增高，比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；活动期CD组和缓解期CD组患者的相关指标比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

活动期CD组患者IL-1β（282.3±52.1）pg/mL；IL-6（13.1±4.3）pg/mL；TNF-α（32.9±8.6）pg/mL。

缓解期CD组患者IL-1β（192.1±42.1）pg/mL；IL-6（7.1±3.1）pg/mL；TNF-α（10.3±6.2）pg/mL；正常对照组IL-1β（180.0±37.1）pg/mL；IL-6（6.2±1.2）pg/mL；TNF-α（8.6±2.9）pg/mL。

活动期CD组患者唾液中IL-1β，IL-6和TNF-α比缓解期CD组患者和正常对照组显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.01）；但是缓解期CD组患者与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。

结论：活动期CD组患者口腔特异性损害与血红蛋白、血小板、CRP、BMI相关，唾液IL-6和TNF-α与特异性口腔损伤有关，这些炎症因子可作为活动期CD患者的检测指标。

克罗恩病（Crohn’s disease，CD）是肠道全层的慢性肉芽肿炎症疾病，病因尚不明确，临床可表现为腹痛、腹泻、发热、体重下降和其他肠外表现，并可累及口腔，如口疮、溃疡、舌炎，且病情反复发作，经久不愈[1-2]。

由于克罗恩病临床表现多样，缺乏特异性，因此其早期诊断率非常低。

虽然目前有许多检测手段，但均不能很好地解决克罗恩病的诊断问题。

由此可见，寻找对克罗恩病早期、快速、准确的诊断方法具有重要意义。

近年来对口腔唾液的检测逐渐增高，由于口腔唾液检测简单易行，为非侵入性，特别适用于儿童，并且能反映口腔和胃肠道的分泌功能，因此应用于CD[3-4]。

研究发现在炎症性疾病里，唾液中许多细胞因子会升高，如IL-6，可能是口腔也参与了整个胃肠道的炎症反应[5]。

本文研究了CD患者中的白细胞介素1β（Interleukin 1β，IL-1β）、白细胞介素6（Interleukin 6 ，IL-6）肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor α，TNF-α）水平，并探索了CD的活动性和口腔损伤的相互关系。

1 资料与方法1.1 一般资料选取本院消化内科2011-2013年90例CD患者，同时选取45例非CD患者作为对照组。

CD的诊断符合临床、放射、内镜和组织学标准。

根据疾病活动指数（Clinical disease activityindex，CDAI）将CD分为活动期和缓解期，其中48例为活动期CD组，42例为缓解期CD组[6]。

患有慢性炎症、心血管疾病、糖尿病、自身免疫性疾病、肿瘤、过敏以及服用抗生素等其他影响炎症因子的患者排除在外。

三组患者的年龄、性别、病程等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

表1 三组患者一般资料比较组别年龄（岁）性别例病程（年）女男活动期CD组（n=48） 32.9±2.1 13 35 6.2±1.5缓解期CD组（n=42） 33.2±3.2 12 30 7.2±2.3正常对照组（n=45）35.7±3.1 17 28 0P值>0.05 >0.05 >0.051.2 方法（1）一般检测：所有患者抽取静脉血进行血细胞计数和CRP检测。

（2）细胞因子的检测：按照标准方法采集唾液后，4000 rpm离心20 min后收集上清立即进行检测或冻存于-80 ℃[4]。

IL-1β，IL-6和TNF-α采用R&D SYSTEMS试剂盒用ELISA进行检测。

1.3 统计学处理使用SPSS 13.0软件进行统计学分析，计量资料采用（x±s）表示，组间非参数的差异利用Mann-Whitney检验，字2检验和Kruskal-Wallis 单因素方差分析，相关性分析利用Spearman进行检验，以P＜0.05为有统计学差异。

2 结果2.1 三组患者BMI、RBC、Hb等指标比较与正常对照组比较，活动期CD 组与缓解期CD组患者体质指数（Body Mass Index，BMI）、红细胞计数（Red Blood Cell Count，RBC）和血红蛋白浓度（hemoglobin concentration，Hb）减低，而白细胞计数（White blood cell count，WBC）、C反应蛋白（C reactive protein，CRP）和血小板计数（Platelet count，PLT）增高，差异均有统计学意义（P＜0.05）；活动期CD组和缓解期CD组患者的相关指标比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.2 三组患者唾液中细胞因子水平比较活动期CD组患者唾液中IL-1β，IL-6和TNF-α比缓解期CD组患者和正常对照组均显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.01）；但是缓解期CD组患者与正常对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.3 口腔损害比较Spearman相关性分析显示活动期CD组口腔特异性损害与Hb、PLT、CRP和BMI相关，但与RBC、CDAI和WBC无相关性，见表4。

Spearman相关性分析显示活动期CD组口腔特异性损害与唾液中IL-6和TNF-α正相关，而与IL-1β无相关性，见表5。

表3 三组患者唾液中细胞因子水平比较（x±s）pg/mL组别IL-1βIL-6 TNF-α活动期CD组（n=48） 282.3±52.1 13.1±4.3 32.9±8.6缓解期CD组（n=42） 192.1±42.1* 7.1±3.1* 10.3±6.2*正常对照组（n=45）180.0±37.1* 6.2±1.2* 8.6±2.9**与活动期CD组比较，P＜0.01表4 活动期CD组口腔特异性损伤与血液检查和其他因子的相关性分析相关指标r值 t（n–2）值P值WBC 0.206 1.739 0.079RBC -0.211 -1.653 0.104Hb -0.428 -3.728 0.0001PLT 0.339 2.953 0.004CRP 0.458 4.092 0.001CDAI 0.221 1.291 0.211BMI 0.317 2.747 0.008表5 活动期CD组口腔特异性损害与唾液IL-1β、IL-6和TNF-α相关性分析相关指标r值 t（n–2）值P值IL-1β0.169 1.077 0.291IL-6 0.323 2.578 0.011TNF-α0.41 2.934 0.0273 讨论据统计，近年来我国克罗恩病的发病率进行性增加，但是克罗恩病的发病机制非常复杂，其病因尚未完全明确。

目前有学者认为克罗恩病的发生可能是感染、饮食等环境因素作用于具有遗传易感性的人群，使肠道免疫反应异常引起黏膜损伤所致[7-8]。

免疫系统的异常在克罗恩病的发病中具有极为重要的作用，炎症递质、炎症因子和免疫调节等多个方面均可以参与其中。

而炎症因子的作用则越来越受到人们的重视。

笔者研究了活动期和缓解期CD患者唾液中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平，结果显示活动期CD组患者明显高于缓解期CD组患者和正常对照组，炎症因子与疾病的临床表现和疾病严重性相关联。

笔者的结果表明IL-1β、IL-6和TNF-α在胃肠道炎症中升高，因而可作为CD活动性的一个指标，并且IL-6和TNF-α与活动期CD相关联，这与以前的结果相一致[9]。

Nielsen等[6]发现CD患者唾液IL-6明显升高，并可用来评价和监测疾病的活动性。

一些研究表明CD患者可能会增加牙周炎的发生，唾液中炎症因子发生了改变，这表明CD改变了细胞因子的产生，唾液在维持口腔环境中发挥了重要作用。

NF-κB依赖的细胞因子如IL-1β、IL-6和TNF-α在炎症性疾病如CD中发挥了重要作用。

NF-κB转录因子对一系列炎症因子可进行调控，其活化可引起炎症和免疫应答。

TNF-α和IL-6是由单核细胞、上皮细胞和巨噬细胞刺激T细胞和B细胞时产生的急性时相蛋白[10]。

TNF-α和IL-6联合其他炎症因子通过细胞因子网络对机体发挥免疫调节作用，并参与慢性炎症病理改变如炎症性肠炎、类风湿、哮喘等[11]。

相关学者发现NF-κB依赖的细胞因子在某些疾病的唾液中会升高[6，10]。

唾液中炎症因子的升高可能是局部口腔黏膜或腺体细胞产生的，亦可能是口腔黏膜屏障的破坏特别是炎症活动期。

在笔者的试验中也证实活动期CD患者唾液IL-1β、IL-6和TNF-α升高，胃肠道包括口腔的炎症可影响唾液中炎症因子的水平。

Nielsen等[6]发现局部IL-6分泌增高引起唾液中IL-6的升高。

IL-6是最主要的炎症介质，联合IL-1β和TNF-α可刺激急性时相蛋白如CRP的产生，并激活骨髓释放血小板。

在笔者的试验中CRP和血小板亦升高，其可能与血液和口腔中炎症因子升高有关。

笔者试验亦证实活动期CD患者唾液IL-6和TNF-α与口腔的特异性损害正相关，但IL-1β尚未发现有相关性，这需进一步进行研究。

综上所述，笔者研究表明活动期CD患者的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α均升高，具有诊断和预测的临床价值。

此外细胞因子与口腔损害有相关性，从而证实活动期CD有口腔损害，因而对CD患者进行口腔检查和唾液检测有助于治疗和判断预后。

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