微生物实验

微生物实验

实验一常用玻璃器皿的清洗及包扎

一.目的与要求

（一）熟悉微生物实验所需各种常用器皿的名称和规格。

（二）学会正确的清洗玻璃器皿的方法和包扎方法

二.原理

为了包装实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净，保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎，试管和三角瓶要做棉塞。清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗净剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同，不同的器皿包扎方法也不同。

三.材料与仪器

（一）常用的各种玻璃器皿。

（二）洗涤工具和去污粉、肥皂、洗涤液。四.操作步骤

（一）清洗

1.新玻璃器皿的清洗

新购置的玻璃器皿均含有游离碱，故应先将其浸于洗液或2%的盐酸溶液中数小时，再用自来水

冲洗干净。

2.用过的玻璃器皿的清洗

（1）试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯可用瓶刷或海绵沾上肥皂、洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后在用自来水充分冲洗干净。经洗涤后，若内壁的水均匀分布在一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则需用洗涤液（或洗液）浸泡数小时，再用自来水充分冲洗，洗涤干净的器皿倒置与铁丝框内或有空心格子木架上，室内晾干。

（2）玻璃吸管、滴管一般用完后应立即用清水和蒸馏水浸泡（或冲洗），免得干燥后难以冲洗干净，如附有污物可用洗液浸泡。

（3）载玻片与盖玻片带有油污的应擦去有无后用热乙醇、丙酮、二甲苯等溶液浸泡10~15min，溶液油垢然后用水冲洗，再用洗涤液浸泡、冲洗，干后置于95%乙醇中保存备用。

（二）玻璃器皿的包扎

1.培养皿常用旧报纸或牛皮纸包紧，一般以5~10套培养皿作一包。包好后进行干热或湿热灭菌，如将培养皿放入金属（不锈钢）筒内进行热灭，则不必用纸包。

2.试管和三角瓶

试管管口和三角瓶都需要塞以棉花塞（或泡膜塑料塞），棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。棉花塞的制作要求使用棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过紧也不能过松，长度不少于管口直径的二倍，约2/3塞进管口。若干支试管用绳扎在一起，在棉塞部分外包裹牛皮纸或2层旧报纸，再扎好。

三角瓶每个单独用牛皮纸或旧报纸包扎棉塞。3.吸管洗净烘干后的吸管，在口吸的一端月0.5cm处，用尖头镊子或针塞入少许脱脂棉，以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外，棉花要塞得松紧恰当。然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，以45度左右的角度螺旋形卷起来，右端多余的报纸大一小结，不使散开。

五、实验报告

（一）结果检查实验效果

（二）思考题

1.能否用橡皮塞、木塞来代替棉塞，为什么？

2.玻璃器皿清洗时应注意什么？

实验二普通光学显微镜的构造和使用

一、目的与要求

（一）学习普通光学显微镜的结构、部分功能及使用方法。

（二）学习并掌握油镜的原理的使用方法。二、原理

普通光学显微镜由机械装置和光学系统2大部分构成。在光学系统中物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜中配置的几种物镜以油镜的放大倍数最大，与其他物镜相比，使用较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，以增加照明亮度和提高分辨率。

三、材料与仪器

（一）菌种金黄色葡萄球菌及枯草杆菌染色玻片标本，啤酒酵母水浸片。

（二）其他香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。

四、操作步骤

（一）显微镜的安置置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘3~4cm，镜检时姿势要端正。

（二）调节光源安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，而使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用凹面或平面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。

（三）低倍镜观察将标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下方，下降10×物镜，使其接近标本，用粗调节器（粗调螺旋）慢慢升起镜筒，出现图像后，再用细调节器（细调螺旋）调节图像至清晰。通过标本夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部位，找到合适目的物，仔细观察。（四）高倍镜观察在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置，对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节器使物象清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录。

（五）油镜观察在低倍镜或高倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器将镜筒升高约2cm，然后在待观察区域滴加1~2滴香柏油，将油镜转到工作位置，从侧面注视，用粗调节器将

镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接，将聚光器升至最高位置并开足光圈，用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野中出现物象并用细调节器使其清晰为止。

（六）显微镜用后处理

1.上升镜筒，取下载玻片。

2.用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，然后擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留的油迹，然后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。

3.用擦镜纸清洁其他物镜和目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件。

4.将各部分还原，反光镜垂于镜座，将物镜转成“八字形“再向下旋，同时把聚光镜降下，以免物镜与聚光镜发生碰撞危险。

五、实验报告

（一）结果分别绘出在不同物镜下观察到的不同菌种的形态，同时注明放大倍数。

（二）思考题

1.油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意什么？

2.显微镜中调节光线强弱的装置有哪些？

实验三酵母菌形态观察

一、目的与要求

观察酵母菌的形态及出芽繁殖方式。

二、原理

大小通常比细菌大几倍甚至于十几倍，大多数的酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的二分裂繁殖。用美兰支制成的水浸片，可观察酵母的形态和出芽繁殖方式以及进行死活细胞的鉴别（染成蓝色的为死细胞，无色的为活细胞）、

三、材料与仪器

（一）啤酒酵母，假丝酵母，汉逊酵母。（二）显微镜，载玻片，盖玻片，接种针，酒精灯。

（三）吕氏美蓝染液。

四、操作步骤

（一）在干净载玻片中央加一滴吕氏美蓝染色液，以无菌操作接种环挑取少量酵母菌体放于美蓝液中，混合均匀。

（二）取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下（以免产生气泡），使其盖在菌液上，将多余菌液用吸水纸吸干。