罗非鱼鱼皮胶原蛋白提取条件的研究
鱼类胶原蛋白及胶原活性多肽的研究进展
不具备原有胶原蛋白的功能，不能用于医用生物
材料［５】。许庆陵等人探索了热水法从鱿鱼皮中提 取胶原蛋白的制备技术，结果发现此方法提取胶 原蛋白最佳工艺的温度为８０℃【６ Ｊ。 １．１．４酸法提取胶原蛋白 酸法提取是利用一定浓度的酸溶液在一定的 条件下提取胶原蛋白，主要低离子浓度酸性条件 破坏分子间的盐键和希夫碱，而引起纤维膨胀、 溶解，溶剂使用的酸，主要有醋酸、盐酸、柠檬 酸等，采用酸法提取的胶原通常成为酸溶性胶原 蛋白（ａｃｉｄ—ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ
ｃｏｌｌａｇｅｎ
ＡＳＣ）。酸溶解法
可将交联的胶原分子溶解出来，也可溶解含有醛 胺类交联键的胶原，但不适合从酮亚胺交联键 较为丰富的组织提取胶原，例如骨、软骨或来 自于年代较老动物的组织等。酸法是提取胶原 蛋白比较常用和有效的方法，用酸法提胶原最 大程度的保持了其三螺旋结构，适用于医用生 物材料及原料的制备。Ｔａｋｅｓｈｉ Ｎａｇａｉ等人利用 ０．５Ｍｏｌ／Ｌ的醋酸从金枪鱼、海鲈鱼、鲷等鱼皮、 鱼骨及鱼翅中提取胶原蛋白，并对其胶原蛋白 的性质进行了研究川。张培丽等研究了乙酸和 柠檬酸提取罗非鱼、鳙鱼、草鱼和鲫鱼鱼皮胶 原蛋白的工艺¨１。
鱼类胶原蛋白及胶原活性多肽的研究进展
郭玉华，刘扬瑞，李钰金
（泰祥集团，荣成２６４３０９）
摘要：胶原蛋白（Ｃｏｌｌａｇｅｎ）是一种高分子蛋白质，丝状的胶原蛋白纤维，能使皮肤保持结实而有弹 性。胶原蛋白由于其特有的生理活性及物理和化学特性，在医药、食品、化妆品等高附加值领域中得到广泛 应用。从水产品中获取胶原蛋白或制备胶原活性肽成为国内外研究的热点。随着我国渔业的发展，水产品的 综合利用也越来越引起人们的重视。在加工时产生出占鱼体总重约４０％～５５％的下脚料（包括鱼头、鱼皮、 鱼鳍、鱼尾、鱼骨及其残留鱼肉），而这些废弃物是制备胶原蛋白的优良原料，对这些废弃物的再利用，不 仅保护了环境还可提高水产品的附加值。本文简要介绍了来源于鱼类胶原蛋白的制备方法、种类、性质、鱼 类胶原蛋白的研究现状、鱼类胶原蛋白水解物中的活性肽、鱼类胶原蛋白及其肽的应用，并分析了鱼类胶原 蛋白开发前景。 关键词：鱼类；胶原蛋白；活性；肽 中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—２５１３（２０ｌＯ）０３一０１７５一０５
罗非鱼下脚料分析
鱼骨中Ca、 鱼骨中Ca、P元素含量
磷含量标准曲线 10000 9000 8000 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000 0 0 2 4 y = 873.84x + 285.64 R2 = 1
平均强度修正值 平均强度修正值(mean Correct intensity )
实验的主要测定方法
直接干燥法测定水分 马弗炉灰化法测定灰分 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量 索氏提取法测定脂肪含量 等离子喷射法测定Ca、 等离子喷射法测定Ca、P等元素含量 SDS-PAGE凝胶电泳法 SDS-PAGE凝胶电泳法 酸碱法提取并测定胶原蛋白含量
罗非鱼下脚料主要成分
名称 鱼肉 鱼骨 鱼皮 水分 60.12 % \ 61.20 % 脂肪 5.82% \ 6.06% 蛋白质 灰分 30.14 % 10.78 % 28.36 % 2.86% 56.23 % 3.12% 其他 1.06% 32.99 % 1.26%
鱼皮的胶原蛋白含量
名称 鱼皮 干原料质量 胶原蛋白质 胶原蛋白百 （g) 量（g 量（g） 分比 23.0708 8.2 35.54%
由数据可知，罗非鱼皮胶原蛋白的含量高达 35.54%。 35.54%。
SDS凝胶电泳测鱼肉蛋白质分子量 SDS凝胶电泳测鱼肉蛋白质分子量
此图为凝胶电泳 的图，从右往左 数起，第1 数起，第1、2、 4、11条带分别 11条带分别 是鱼肉A、鱼肉B 是鱼肉A、鱼肉B、 MARK、 MARK、MARK （2条MARK均 MARK均 可作参考）
论文总结
完成了对罗非鱼下脚料的主要营养成分的分析工作。罗非鱼下脚料的 主要成分分为鱼肉、鱼皮、鱼骨三部分。然后，鱼肉的主要成分是蛋 白质，占30.14%，而蛋白质的分子量主要在21.8～150.6kDa区间内， 从所了解的分子量中所知蛋白质种类，从而确定研究的方向是有价值 的，脂肪含量占5.82%，由于罗非鱼下脚料水分含量较高， 所以换算 脂肪含量也很高，所以也有一定的研究价值。罗非鱼皮里面的蛋白质 含量也高达28.36%，其中胶原蛋白也占其中的35.54%，所以下脚料中 鱼皮的研究可以从胶原蛋白方向开始。罗非鱼骨的下脚料含量主要是 以灰分为主占56.23%，其中钙和磷的含量分别为12.37%9.52%， 所以 下脚料中鱼骨的研究可以从钙和磷元素起步。因为罗非鱼下脚料的成 本相对很低（目前多是拿来开发作为鱼饲料），所以它们有相当大的 增值空间。因此，在能源缺乏的今天，对罗非鱼下脚料的研究及使用 价值的开发是一项有相当价值量的工作。
鱼鳞胶原蛋白的提取方法
鱼鳞胶原蛋白的提取方法摘要：人口、资源和环境是当前全球性的重大问题，加强对水产品的废弃物鱼鳞的加工利用和实现渔业生产的可持续发展已成为当今热门研究课题。
文章简述了鱼鳞的结构特点，介绍了目前对鱼鳞胶原蛋白的提取方法，旨在使人们了解鱼鳞的真正价值所在，为其开发利用作参考。
关键词：鱼鳞胶原蛋白提取方法近年来，淡水鱼加工业随着我国淡水鱼产量的增长而得到了较快的发展，鱼品加工也越来越广泛。
但是，许多淡水鱼加工过程仅局限于对鱼体肌肉的利用，而对鱼鳞等废弃物的加工利用甚少。
每年淡水鱼加工业的废弃物总量达到200万吨以上，其中鱼鳞约占15%，即30万吨。
若能合理利用，可有效减少环境污染，又可提高企业效益，因此加大对鱼鳞含有物质的利用，可应用多个行业，其利用价值巨大，发展前景广阔。
1 鱼鳞的结构与组成鱼鳞是鱼体与外界接触的组织，是鱼类真皮层的变形物，通常占鱼体重量的1%~5%，起保护鱼体免受伤害的作用。
通常鱼鳞可分为三种：(1)板鳃鱼所特有的木盾鳞；(2)斜方型、边缘相联的硬鳞；(3)最常见的骨鳞，在硬骨鱼中最多。
鱼鳞主要由蛋白质，卵磷脂，羟基磷灰石和鸟嘌呤组成，其中有机物占41％一55％，钙盐38％～46％。
蛋白质占总重的70％，主要为胶原蛋白和鱼鳞角蛋白。
鱼鳞胶原蛋白主要为I型胶原。
I型胶原蛋白为三股超螺旋结构，即三条多肽链每条都向左旋转形成左手螺旋结构，这三条肽链再以氢键相互结合形成右手超螺旋结构。
这种结构非常稳定，胶原一般不溶于水和中性盐溶液、稀酸、稀碱及一般有机溶剂，溶于强酸和强碱。
2 鱼鳞胶原蛋白的提取方法2.1鱼鳞提取胶原蛋白的前处理在鱼鳞的前处理中主要做的是脱钙，方法主要有酸脱钙和EDTA脱钙。
酸脱钙主要是利用酸和钙盐反应，从而将钙盐以Ca2+形式溶出。
EDTA脱钙是由于Ca2+、Mg2+等金属离子能够与EDTA发生络合，而达到脱出金属离子的目的。
在酸脱钙中酸的选择也较多，现在主要应用的是盐酸、柠檬酸、醋酸、乳酸等。
鱼皮胶原蛋白提取工艺的研究进展
鱼皮 胶 原 蛋 白提 取 工艺 的研 究 进 展
艾 超 ，黄灿灿 ，李致瑜 ，陈 东杰 ｚ
（． １ 福建农林 大学 食 品科学学院 ，福建 福州 ３ ００ ； ２ 山东商业职业技术学院 ，山东 济南 ２ ００ ） ５０２ ． ５ １３ 摘要 ：综述 了鱼皮胶原蛋 白的特性与应用 、提取方法的研究进展及存 在问题 ，并对该产品研究前 景进行展望 。
作者简介 ：艾
超 （９ ｌ １９ 一
） ，男 ，福建人 ，在读本科 ，研究方 向：农产品贮藏。
农产品加工 ・ 学刊
２１ ０ ２年第 ５期
度 、ｐ Ｈ值 ５个 因素对 提 取 工艺 条件 进 行 了优 化 ，结 不仅可 以充分利 用资源 ，提高鱼类 加工 的附加 值 ， 果表 明 ，最佳提取 工艺条件为 ：酶加入量 １ ５ ／，ｐ 而且 增加 经济 效益 ，促进 渔业 的发 展 。 ２ ｇ Ｈ Ｕ 值 ７ ，温 度 ３ ． ２ ５℃ ，超 声波 辅 助提 取 时 间 ３ｍｉ，酶 ｎ 胶原蛋 白的提取从传 统的溶剂萃 取法 到酶法 、 超 声 辅 助法 和 微 波 辅 助法 等 ，而 对 于 鱼 皮 胶 原 蛋 白 解 时 间 ７ｈ ，得率 达 ９ ． ２４ ％。
１ 鱼皮胶 原 蛋 白的特 性及 应用
当广泛 ，但其主要是应用 于食 品中 ，包括功能保健 食 品 、食 品添 加剂 、食 品包装 材料 等 。
２ 鱼 皮胶原 蛋 白提取 方法
２１ 酶 提取法 ． 目前 ，酶 法 提 取 已广 泛 用 于 各 类 不 同 物 质 的 提
胶 原 蛋 白是 一 种 白色 、不 透 明 、无 支 链 的纤 维 蛋 白质 ，其 广 泛存 在 于 动物 的皮 、骨 、软骨 、牙齿 、 肌腱 、韧 带 和血 管 中 ，是 结 缔 组 织 极 重要 的 结 构 蛋 白质 ，起 着 支 撑器 官 、保 护 机体 的功 能 【 ５ １ 皮 中含 。鱼
双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的改良及应用评价
Abstract: To develop a rapid method for the determination of tilapia collagen peptide content, the colorimetric biuret
method was improved using tilapia skin collagen peptide as a reference material. We determined the maximum absorption
applicability of this method to the detection of collagen peptides from the skin and scales of tilapia with different molecular
masses was also studied. The results showed that the absorbance was linearly fitted with peptide concentration ranging from
摘 要：为探究罗非鱼源胶原蛋白肽含量的快速测定方法，以罗非鱼皮胶原蛋白肽为对照品，改良双缩脲比色法测 定肽含量的操作方法，考察显色络合物最大吸收波长、线性拟合度高的肽和三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA） 用量范围、pH值；在优化条件下对标准曲线进行重复性、精密度评价以及加样回收率实验；研究本方法对不同分 子质量罗非鱼皮及鱼鳞胶原蛋白肽体系检测的适用性。结果显示，当胶原蛋白肽（标称分子质量3 kDa）质量浓 度在0.3～1.5 mg/mL范围内，使用13% TCA溶液，调整体系pH 12.5，在波长545 nm处检测，吸光度与肽质量浓度 线性拟合好（R2=0.999），标准曲线方程为y=0.144 9x＋0.001 5；重复性和精密度实验得到相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）分别为1.86%和1.84%，加样回收率分别为113.9%、109.7%，RSD分别为1.39%、1.00%； 线性范围宽、重复性好、准确度高。将本法应用于不同种类罗非鱼肽产品体系的检测，加样回收率相差不大，偏差 均较小，说明本法简便、快捷，适用于罗非鱼源肽含量的检测。 关键词：罗非鱼；胶原蛋白肽；双缩脲比色法；肽含量测定；吸光度
鱼皮胶原蛋白提取研究进展
展望。
关 键词 ： 皮 ； 原 蛋 白 ； 取 鱼 胶 提
Ｒ ｅ ｅ ｒ ｈＰｒ ｇ ｅ ｓｏ ｔ ａ ｔ ｌ ｇ ｎｆ ｏ ｓ ｋ ｎ ｓ ａ ｃ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｅｘ ｒ ｃ ｉ Ｃｏ ｌ ｅ ｒ ｍ Ｆｉｈ Ｓ ｉ ｎｇ ａ
ＹＵ — ｉ ｇ， Ｕ ｉ ｉ ＸＩ Ｙｉ ｐ ｎ Ｌ Ｌ－ｘａ， ＯＮＧ ａ — ｕ Ｘｉｏ ｈ ｉ
ｌ ｓ ｆａ ｅ ｏｋｄ ｅｆ ｉ ｓ［ ． ｕ ａ ｏｆ ｄ ｎｉ ｅ ｎ， ０ ， ｏ 】 ｇ ｃ ｅ ｅｊ ｎ Ｊ Ｊ ｒ ｌ ｆ ｏ ｇ ｅｒ ｇ ０ ７ ｓｏ ｒ ｏ ｂ ｏ ｔ 】ｏ ｎ ｏ ｅ ｎ ｉ ２
４采用真空冷却保存的 ３ ） 种代表性食 品 ２ 之 内 ４ｌ ｔ 的食味品质与 自然冷却组 的产品没有 明显差别 ；
［ 黄琛， ４ ］ 蒋士龙， 李云飞． 鱼香肉丝真空冷却工艺研究 ［． Ｊ上海交 通 】
大学学报： 农业科学 版， ０ ，５６：９ — ９ ２ ７２ （） ０ ５ ４ ０ ５ 【】 张晓敏， ５ 徐宝 才． 真空冷却技术 在肉制品 中的应用［． Ｊ 肉类 工业， 】
［０ ａ ｃ ａｋ ｎ Ｄ ｎＳ ｎ ｉ ｕ ｈｎ ． ｆｃ ｆｃｍ ｉｅ １】Ｐｔ ｋＪｃｍａ， ａＷｅ ｕ，Ｌ ｙ ｎＺ ｅｇ Ｅ ｅｔ ｏ ｂｎｄ ｉ ｒ ｏ
ｖ ｃ ｕ ｃ ｏｉｇａ ｄａｒｂａｔｃ ｌｎ ｎｐｏ ｅ ｓｎ ｉ ｎ ｏ ｌ ｇ ａ ｕ ｍ ｏ ｌ ｎ ｉ ｌｓ ｏ ｉｇｏ ｒｃ ｓｉｇｔｍｅａ ｄｃ ｉ ｎ ｎ
４ 结论
【］ 熊燕 子． ７ 真空冷却 技术在熟 肉制 品加工 中的应用 ［． Ｊ 肉类研 究， ］
２ ０ ．ｌ （） ０ ７ ０ ８１ ２６ ： － ３ ７
ｆ 李静， 民， ８ １ 李兴 刘毅． 真空冷却与常规冷却方式对 白煮牛 肉品质影
鱼鳞胶原蛋白提取工艺的研究现状及应用
鱼鳞胶原蛋白提取工艺的研究现状及应用摘要：简述了胶原蛋白的作用，提取鱼鳞胶原蛋白的重要性，结合鱼鳞胶原蛋白研发的相关背景和现状,列举了鱼鳞胶原蛋白的多种提取方法，简述鱼鳞胶原蛋白的应用。
关键词：鱼鳞；胶原蛋白；提取方法；应用1 前言胶原蛋白在鱼类的真皮、骨、键、鳞等处含量丰富。
通常胶原由三条多肽链构成三股螺旋结构，分子量约30万道尔顿，主要组成氨基酸为脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸，而且脯氨酸为其特征氨基酸。
胶原蛋白一级结构的特征是含有甘氨酸的三联体（Gly-X-Y）重复排列着，其中，X，Y经常为亚氨基酸的脯氨酸和羟脯氨酸。
胶原蛋白(Collagen)是一种白色、不透明、无支链的纤维蛋白质，为重要的功能性蛋白质，主要存在于动物的皮、骨、软骨、牙齿、肌腱、韧带和血管中，是结缔组织极重要的结构蛋白质，起着支撑器官、保护机体的功能。
由于胶原蛋白的特殊功能，其提取物已被广泛应用于医药、食品、日用化工、生物合成等工业领域，如医用胶囊、外科手术材料、食用明胶、化妆品等。
鱼鳞中含有丰富的胶原蛋白，占20%~ 40%，这对提取鱼鳞胶十分有利。
海水鱼鳞中含有较为丰富的磷脂，占7%左右，具有提高机体免疫力、延缓衰老、增强骨细胞和神经细胞功能的作用，还与机体的生殖生理和激素的代谢密切相关。
鱼鳞灰分含量高，约占30%，主要成分是羟基磷灰石，绝大部分集中在骨质层；脂质含量少，相对目前生产胶原蛋白的主要原料猪皮和牛皮而言，这更有利于胶原的提取和纯化。
2 本课题研究的目的和意义近年来，随着养殖规模的日益扩大和养殖技术的不断完善，养殖鱼类的产量提高很快。
中国的水产品产量一直保持着高速增长势头，水产品产量2011年已经达到5611万t，占世界水产品产量35%，位居世界第一位。
随着我国水产业的发展，水产加工也越来越受到人们的重视，加工的同时产生出大量下脚料，占鱼体总重的30%～50％，其中约5％是鱼鳞。
然而，这些鱼鳞没有被充分利用，大部分作为废弃物丢弃了。
鱼鳞胶原蛋白的提取工艺研究【开题报告】
鱼鳞胶原蛋白的提取工艺研究【开题报告】开题报告食品科学与工程鱼鳞胶原蛋白的提取工艺研究一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义胶原蛋白是细胞外基质的结构蛋白质，其分子在细胞外基质中聚集为超分子结构。
其分子量为30万道尔顿，它是由3条左手螺旋构型α肽链结合而成的三螺旋结构，互相盘绕成螺旋结构。
在胶原蛋白中甘氨酸（Gly）几乎占总含量的1/3，脯氨酸（Pro）和羟脯氨酸（Hyp）的含量是都高于其他蛋白质中的含量，且羟基赖氨酸（Hyl）仅在胶原蛋白中存在。
胶原蛋白是结缔组织中极其重要的一种结构蛋白占全身总蛋白质的30%以，它广泛存在于动物的骨、腱、肌鞘、韧带肌膜、软骨和皮肤中。
由于其分子结构稳定并具有良好的生物相容性，在医药、保健、食品加工、化妆品等领域有良好的应用前景。
近年来，我国水产品产量一直保持着高速增长的势头，其中，2005年产量高达4900万吨，约占世界水产品产量的35%，位居世界第一位。
伴随着我国渔业生产的快速发展，水产品加工也越来越广泛，但是在加工过程中会不可避免地产生大量的下脚料，其中的鱼鳞通常被人们视为下脚料，这类下脚料往往被随意丢弃，不但造成了资源浪费，还会污染环境。
据统计，我国每年废弃的鱼鳞达到30万吨以上。
鱼鳞约占鱼体重的2%~5%，研究表明，鱼鳞中含有丰富的蛋白质、卵鳞脂和各种矿物质，有机物占41%~55%，钙盐为38%~46%，主要由蛋白质和羟基磷灰石组成，其中蛋白质占鱼鳞总重的70%，主要为胶原蛋白和鱼鳞角蛋白。
水产胶原蛋白具有陆生动物胶原蛋白没有的一些特点以及更高的安全性，由此以鱼鳞作为原料提取胶原蛋白是一种很好的途径。
胶原蛋白质结构和功能特点的多样性和复杂性，决定了它在许多领域的重要地位以及广阔的应用前景。
当今科学技术已将胶原蛋白广泛应用于医药工业、食品工业、日用化学品工业、生物合成及胶原修饰等领域中，鱼鳞胶原蛋白作为极有发展潜力与应用价值的高附加值产品而倍受人们的关注与青睐。
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表 5 提取胶原蛋白的正交试验结果及因素 、级差分析
酸种类 时间 溶胀比 酸浓度 吸光度 Hyp%
工产生的废弃物 ,除小部分被用于生产饲料外 ,大 部分被丢弃 ,造成了污染和浪费 。因此 ,如果能从 这些废弃物中提取胶原蛋白加以利用 ,则既可促 进淡水鱼加工废弃物的综合利用 ,同时又能为胶 原蛋白的生产和加工利用提供丰富的原料 ,可带 来不菲的经济效益 。本试验着重研究了从罗非鱼 鱼皮中提取胶原蛋白的条件 。
1材料与方法
1. 1试验材料 尼奥杂交罗非鱼鱼皮 (上海水产品加工技术
开发中心提供 ,产地广州 ) , - 20℃低温冻藏 ,试 验时于 4℃解冻 。 1. 2主要仪器
752紫外可见分光光度计 。 1. 3试验方法与步骤 1. 3. 1罗非鱼鱼皮基本组分的测定 罗非鱼鱼 皮经解冻 、滤干 、剪碎 、捣碎后 ,进行水分 (直接干 燥法 ) 、灰分 (总灰分 ) 、粗蛋白 (凯氏定氮法 ) 、脂 质 (索氏抽提法 )的测定 。 1. 3. 2测定去除非胶原蛋白的量 [ 1 ] 在浓度分 别为 1、2 、3 mg /mL 的卵清蛋白溶液中加入双缩 脲试剂 2. 0 mL ,充分混匀 ,即有紫红色出现 ,测定 540 nm 处的吸光度 ,绘制出标准曲线 ,用以测定 试验中被去除的非胶原蛋白的量 。 1. 3. 3确定罗非鱼鱼皮中胶原蛋白的含量 [ 2、3 ] 羟脯氨酸是胶原蛋白的一种特性蛋白质 ,通过 ISO3496 ( E)对羟脯氨酸的测定来确定罗非鱼鱼 皮中胶原蛋白的含量 [ 2 ] 。称取 50 m g羟脯氨酸溶 解 于 水中 , 加 1滴 硫酸 溶液 , 定容 至 1 0 0mL。移
8 3. 117 1. 055 0. 911 0. 968 0. 883 0. 085
9 3. 500 0. 736 0. 921 0. 942 0. 898 0. 044
192
水产科技情报 2006, 33 (4)
10的样水比条件下 ,非胶原蛋白溶出最多 。但如 果在粗蛋白含量增加时 ,羟脯氨酸的含量也相应 地增加 ,则表明其中溶出的胶原蛋白的含量也增 加 ,这显然与我们所要求的粗蛋白含量较多 ,而羟 脯氨酸含量较少相违背 。因此 ,在考虑非胶原蛋 白含量较高的同时 ,不能忽略羟脯氨酸的含量。 从表 4中直观看 ,其最佳方案为 A3B3C3,从极差 分析结果看 , A 因素的极差为 0. 244; B 因素的极 差为 0. 085; C 因素的极差为 0. 044,即对羟脯氨 酸含量的影响因素按重要性排序依次为 A > B > C。综 合 考 虑 两 个 方 面 , 选 取 的 最 佳 方 案 为 A3B2C2。因 为 对 羟 脯 氨 酸 而 言 , A3 是 关 键 , B2C2与 B3C3相差不大 ,即在 6% NaCl、12 h3 2、 1: 10的样水比条件下非胶原蛋白的含量比较多 而羟脯氨酸的含量比较少 ,为去除非胶原蛋白的 最佳条件 。
0. 5388; D 为 0. 2291,即对羟脯氨酸含量的影响 因素 ,按其重要性排序分别为 : A、C、B、D。考虑 到时间对结果的影响不是太大 ,而且 24 h的试验 显然不是很经济 ,综合两个方面 ,选取的最佳方案 为 : A1B2C1D3,即醋酸的浓度为 0. 5 mol/L、溶胀 比为 1: 20、处理 4 h。
7
A3
B1
C3
D2 0. 2065 2. 7582
8
A3
B2
C1
D3 0. 1978 3. 9000
9
A3
B3
C2
D1 0. 4872 3. 9309
K1 12. 2691 10. 1909 11. 8745 11. 2091 K2 10. 7727 11. 3127 11. 4982 10. 8673
1
A1
B1
C1
D1 0. 2004 3. 9709
2
A1
B2
C2
D2 0. 5064 4. 1055
3
A1
B3
C3
D3 0. 2854 4. 1927
4
A2
B1
C2
D3 0. 4356 3. 4618
5
A2
B2
C3
D1 0. 2367 3. 3073
6
A2
B3
C1
D2 0. 2016 4. 0036
191
取 5 mL 溶液到 500 mL 的容量瓶中定容 。稀释该 溶液 10、20、30、40 mL 至 100 mL ,获得浓度分别 为 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0 μg /mL 的羟脯氨酸标准溶 液 。四种不同浓度的羟脯氨酸标准样品经氧化脱 羧反应生成吡咯 。以对二甲氨基苯甲醛显色 ,测 定 558 nm 处的吸光度 ,绘制出标准曲线 。 1. 3. 4采用正交法确定去除非胶原蛋白的最佳条 件 [ 4 ] 用正交法确定去除非胶原蛋白的最佳 条件 (正交因素见表 1) 。鱼皮经解冻后分别加入 特定浓度 、特定样水比例的 NaCl溶液 ,于 5℃下 , 根据正交方案所确定的时间进行处理 。用尼龙纱 布过滤得滤液 ,测定滤液中蛋白质的含量 [ 5 ]和羟 脯氨酸的含量 。去除非胶原蛋白的条件的选择依 据是 :滤液中蛋白质的含量越高 ,羟脯氨酸的含量 越低 ,则非胶原蛋白的去除率越高 。
罗非鱼又称非洲鲫鱼 ,属鲈形目 、丽鱼科 。该 属共有 100多个品种 ,已被养殖的约有 15 种 ,我 国先后引进的有莫桑比克罗非鱼 、尼罗罗非鱼 、奥 利亚罗非鱼 、红罗非鱼等近 10种 。罗非鱼日益受 到大众的欢迎 ,它的消费量增加迅速 。在美国 ,罗 非鱼也日益受到大众的欢迎 ,其消费量迅速增加 。 2003年 1～4月 ,美国进口罗非鱼的数量与 2002 年同期相 比 , 从 2 万 t 增 加 到 2. 6万 t, 增 加 了 30% ;与 2003 年同期相比 , 2004 年 1 ～3 月进口 冷冻罗非鱼片增加近 100%。但是目前罗非鱼加
收稿日期 : 2006 - 06 - 01; 修改日期 : 2006 - 07 - 21 项目资助 :上海市重点学科建设项目 编号 : T1102 作者简介 :丁卓平 (1957 - ) ,女 ,副教授 ,从事食品科学与工程 、仪器分析的教学与科研 。
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水产科技情报 2006, 33 (4)
罗非鱼鱼皮胶原蛋白提取条件的研究
丁卓平 刘振华 李仁冬 朱卫钦 (上海水产大学食品学院 ,上海市 200090)
胶原蛋白用途广泛 ,其制品已应用于医药 、保 健品 、食品 、化妆品等众多领域 。如胶原护肤霜 、 胶原面膜 、胶原美容口服片等系列产品 ,其内服外 用效果良好 ,满足了当前消费者对功能性产品的 强烈需求 ;目前在欧美国家 ,服用胶原产品进行皮 肤深层养护已成时尚 。据专家预测 ,我国的胶原 热潮也即将到来 。胶原也是人类皮肤的主要组成 成分 。人处于幼年时 ,皮肤中胶原的含量高 ,随着 年龄的增长 ,其含量开始逐渐下降 ,导致皮肤渐渐 丧失保湿功能 ,人体只有不断合成新胶原才能保 持皮肤健康且具有弹性 。胶原蛋白的阴离子侧链 丰富 ,能吸附大量水分 ,维持皮肤的湿润 、弹性 。 胶原蛋白含有一种独特的氨基酸 ———羟脯氨酸 (Hyp ) ,合成新胶原蛋白时需要大量的羟脯氨酸 。 除化妆品外 ,在医疗用品方面还研制了胶原止血 纱布及胶原创可贴 ,应用于外科手术 、战地救护 , 其市场巨大 ,前景广阔 。以往 ,很大一部分胶原蛋 白是从陆生哺乳动物中提取的 ,近年来 ,由于疯牛 病和口蹄疫的影响 ,人们已经开始从鱼类中提取 胶原蛋白 ,所提取的胶原蛋白更为安全 。
正交试验 非胶原蛋白 mg /mL
Hyp / % 非胶原蛋白 k1 非胶原蛋白 k2 非胶原蛋白 k3 非胶原蛋白 R
表 4 去除非胶原蛋白的正交试验结果及因素 、级差分析
1 2. 721 0. 986 3. 262 2. 870 2. 874 0. 392
2 4. 227 1. 021 2. 491 3. 290 3. 225 0. 779
3 2. 838 1. 191 3. 059 3. 491 2. 457 1. 034
4 2. 747 1. 070
5 2. 525 0. 827 Hyp k1 Hyp k2 Hyp k3 HypR
6 3. 338 0. 721
7 2. 006 0. 676 1. 066 0. 873 0. 822 0. 244
去除非胶 原 蛋 白 是 提 取 胶 原 蛋 白 的 关 键 步 骤 ,胶原蛋白的常规提取方法是去除水溶性蛋白 和盐溶性蛋白或者用稀碱去除碱溶性蛋白 。考虑 到碱会使胶原蛋白变性 [ 6 ] ,采用水和 NaCl溶液来 去除非胶原蛋白 。为有效去除非胶原蛋白 ,本试 验用正交法研究了 NaC l的浓度 ( 2%、4%、6% ) 、 处理时间 (24 h、12 h3 2、8 h 3 3 ) 、样水比例 ( 1: 5、1: 10、1: 20)三因素三水平对非胶原蛋白去除的 影响 ,测定滤液中蛋白质的含量和羟脯氨酸的含 量 [ 7 ] 。L9 (33)正交结果见表 4。9 个试验的第 2 个结果 (A1B2C2 )中 ,上清液非胶原蛋白的含量 最高 ,与正交分析得到的最佳条件即 A1B2C2 正 好 相 符 。从 极 差 分 析 来 看 , C 为 1. 034; B 为 0. 799; A 为 0. 392,所以 ,其重要性依次为 C >B > A ,即罗非鱼鱼皮样品在 2%的 NaC l、12 h3 2、1:
罗非鱼皮 鱿鱼皮 草鱼皮 鲢鱼皮
粗蛋白 26. 27 11. 13 29. 80 25. 90