鱼类血液基因组DNA的提取
动物基因组DNA的提取流程总结
动物基因组DNA的提取1.切取组织5g 左右，用组织粉碎机或研钵将细胞分离。
注：1）少量结缔组织并不影响最后得到的DNA勺质量；2）若标本为血液，则只需肝素抗凝、离心后取白细胞层；3）若为培养的贴壁细胞，则用胰酶消化后收集，PBS洗涤即可。
2.加入5ml DNA提取缓冲液，（10mmol/L Tris-CI ,0.1 mol/L EDTA 0.5% SDS）, 混匀。
注：1）最好先加入Tris-Cl、EDTA再加入SDS 2）最好一边匀浆，一边加入液体，使之充分混匀。
3.加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml，混匀，37C温浴过夜。
注：1）致密组织（如小鼠尾巴）可以适当延长蛋白酶的作用时间；2）若组织量很大且组织比较疏松（如动物脾脏），或对所提取的DNA完整性要求不高时，可以不用蛋白酶K,而是剧烈振荡20分钟，将组蛋白与DNA分离。
此法可能会使部分DNA链断裂，但足以达到一般实验要求，并不影响后续处理；3）也可同时加入RNase。
4.加入等体积的酚－氯仿－异戊醇混合物（25:24:1），剧烈振荡10分钟，冰浴10 分钟，2500rpm 10 分钟离心收集水相。
注：不要混带中间蛋白层。
5.加1/10 体积3mol/L NaAc 及 2 倍体积冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀。
冰浴1小时，沉淀DNA注：冰浴时间从10分钟到2小时均可，只是时间太短会影响到最后的产量，但不影响质量。
6.用玻棒轻搅钩出DNA沉淀，置于另一离心管中。
注：如果确信没有混入蛋白，也可用离心的方法去除液体，但应在加入蛋白酶K的同时加入RNaseA7.70%^醇洗涤，晾干，加适量TE或灭菌水溶解，-20 C保存。
注：若要长久保存DNA（数年以上），最好将其沉淀以无水乙醇封闭后，置于-80 °C。
基因组dna提取步骤
基因组DNA提取步骤1.从无水乙醇中取出少许组织（约50mg）加入干净灭菌的EP管中，剪碎；2.加入400ul 1％的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K，充分浸润，入55℃摇床（100转/分），期间振荡助溶至澄清（5-6h）；3.取出消化液，加入6mol/L的NaCl300ul，氯仿200ul，轻柔正反颠倒，使其充分乳化，4℃13000转/分离心30min；4.取出上清（约400ul），加入等体积氯仿抽提一次，轻柔颠倒后，4℃13000转/分离心10min；5.上清加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
6.取上清加入等体积异丙醇，轻柔混匀后-20℃沉淀10min；7.4℃13000转/分离心15min，弃上清；8.用75％乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心2min），弃上清；9.冰冻无水乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心4min）弃上清，自然晾干或烘干，DDW溶解，30-50ul。
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。
利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。
加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。
在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。
一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。
而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。
大黄鱼高质量基因组 DNA的简便提取方法
大黄鱼高质量基因组 DNA的简便提取方法李明云;张海琪【期刊名称】《海洋科学》【年(卷),期】2002(026)010【摘要】目前常用的分子标记技术如 RAPD、 AFLP、微卫星等都是以 DNA为研究对象,而高质量 DNA的简便快速提取是至关重要的 [1].大黄鱼( Pseudosciaena crocea (Richardson))曾是我国著名的四大海洋渔业对象之一,也是目前闽浙两省重要的经济养殖品种.近年来养殖大黄鱼普遍出现生长缓慢、抗病能力弱、性成熟提早、个体小等生物学性状退化的现象 [2].为了从 DNA水平上研究大黄鱼遗传多样性,为养殖大黄鱼种质的改良和养殖业的健康持续发展提供依据,我们首先要从大黄鱼组织中提取基因组 DNA.在提取实验中,发现常规的酚 /氯仿 /异戊醇抽提法不够理想,操作繁琐,需时较长,稳定性差.为此,我们尝试用星普组织微量 DNA纯化试剂盒提取大黄鱼的基因组 DNA,获得了较满意的结果.【总页数】3页(P15-17)【作者】李明云;张海琪【作者单位】宁波大学海洋与水产系,315211;宁波大学海洋与水产系,315211【正文语种】中文【中图分类】Q959【相关文献】1.一种简便实用的玉米干种子基因组DNA提取方法 [J], 魏琦超;畅丽萍;周岩;宫俊丽;王慧娟2.大黄鱼基因组DNA的不同提取方法及RAPD扩增比较 [J], 李明云;张海琪3.高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究 [J], 黄东亮;覃肖良;廖青;高轶静;方锋学4.一种简便分离高质量家蚕基因组DNA的方法 [J], 陈冬妹;林英;王艳霞;杨瑜;代方银;夏庆友5.一种快速简便的植物病原真菌基因组DNA提取方法 [J], 刘少华;陆金萍;朱瑞良;戴富明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验四动物血液基因组DNA的提取ppt课件
用于稀释和清洗实验器 具。
用于离心和吸液操作。
实验设备
紫外分光光度计
用于检测DNA浓度和质量。
离心机
用于高速离心，使细胞沉淀。
移液器
用于准确移取液体。
冰箱和冷藏设备
用于储存试剂和血液样本。
微波炉或恒温水浴锅
用于加热和融化相关试剂。
03
实验操作步骤
样本准备
01
02
03
收集动物血液样本
使用无菌注射器采集动物 静脉血液，存放在无菌的 离心管中。
实验注意事项
样本来源
确保所使用的动物血液样 本来源合法，并符合伦理 要求。
试剂储存与使用
严格按照试剂说明书进行 DNA提取试剂的储存和使 用，避免试剂受到污染或 失效。
仪器操作
正确操作和使用相关仪器 设备，如离心机、PCR仪 等，确保实验结果的准确 性。
异常情况处理与应急措施
皮肤接触
若发生皮肤接触，立即用大量 清水冲洗，并及时就医。
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THANKS。
了解基因组DNA的 理化性质和提取过程 中的注意事项。
实验原理
基因组DNA是生物体遗传信息 的载体，存在于细胞核中。
通过离心分离动物血液中的白细 胞和红细胞，利用细胞裂解液裂 解白细胞，释放出基因组DNA
。
利用吸附柱去除杂质，如蛋白质 和RNA，纯化基因组DNA。
实验步骤概述
1. 准备实验器材和试剂：离心 机、移液器、离心管、吸附柱 、细胞裂解液、洗涤缓冲液等 。
吸入
若发生吸入，立即离开实验区 域，呼吸新鲜空气，并及时就 医。
化学品泄漏
海洋动物组织基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
海洋动物组织基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN37适用于快速提取各种海洋动物组织基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次（DN3701）100次（DN3702）200次（DN3703）裂解液SL 室温11 ml 20 ml 40 ml 结合液CB 室温11 ml 20 ml 40 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 50 ml 100 ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 15 ml 15ml×2蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20mg 2×20mg 4×20mg吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项:1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性、方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1ml灭菌水溶解，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。
也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。
用水洗脱DNA应该保存在－20℃。
DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
实验二全血基因组DNA的提取
实验二全血基因组DNA的提取实验二：全血基因组DNA的提取一实验目的：1．学习并掌握动物全血提取DNA的方法2．从全血中提取到一定量的纯净的DNA样品二实验原理DNA存在于细胞核中，用细胞裂解液除取红细胞，核裂解液破坏白细胞，氯仿使蛋白质变性，用无水乙醇洗涤DNA，从而得到纯净的DNA分子。
三、实验仪器、材料、试剂（一）仪器1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱4．水浴锅5．微量移液器6．高压灭菌锅（二）材料1．鸡血、2．细胞裂解液3．核裂解液、4．饱和NaCl、5．氯仿、6．无水乙醇、7．ddHO、8.滤纸、9．微量取液器、10.1.5mL/2mL 离心管、11.一次性2手套、12.离心管架、13.记号笔等（三）试剂配制细胞裂解液:10mm/l Tris-Hcl(1mol/L) ,11%w/l蔗糖,5 mmol/L Mgcl2,1%v/vEDTA, 10mm/L Triton 核裂解液：10mm/l Tris-Hcl, 1%w/v SDS, 10mm/L Na2柠檬酸三钠四、实验步骤1．吸取500ul血液至2ml离心管，加入1000ul的细胞裂解液，上下颠倒2-3min。
2．在4°C，6000rpm转速离心3min,弃上清液。
3．重复1-2步（1-3次），直至洗净红细胞，颜色变白为止。
4.加入300ul核裂解液，上下颠倒2min,室温静置2min。
5.加入100ul饱和NaCl和600ul氯仿，轻轻上下颠倒2min, 4°C，6000rpm 转速离心5min。
6.小心吸取上清液（不能吸入下层液体），移至新的1.5ml的离心管。
7.加入600ul冷藏无水乙醇，轻轻摇动，观察有无絮状物质。
8. 4°C，13000rpm转速离心3min，小心倒掉上清液，用滤纸吸取管壁周围的液体，室温下是离心管完全干燥。
（1h左右）9.沿管壁慢慢加入50ul ddHO，然后轻轻吹打均匀。
210.-20°C的冰箱保存。
基因组dna提取流程
基因组DNA提取的流程
1. 样本选择：选择适合提取基因组DNA的样本类型，如细胞、组织或血液。
确保样本保存在合适的条件下，以保持DNA的完整性。
2. 细胞破碎：对于细胞样本，首先需要将细胞破碎以释放DNA。
可以使用物理方法，如机械剪切或超声波处理，或者使用化学方法，如洗涤溶解和细胞裂解酶处理。
3. DNA溶解：将细胞裂解提取物加入DNA溶解缓冲液中，以彻底溶解DNA。
4. 去除杂质：通过离心、过滤或沉淀等方法去除蛋白质、RNA 等杂质。
5. 纯化DNA：使用吸附剂、洗涤剂或沉淀剂等方法去除剩余的杂质，得到纯化的基因组DNA。
6. 检测与定量：通过电泳、荧光光谱等技术检测提取的DNA质量和浓度，确保提取的DNA满足后续实验的要求。
以上是基因组DNA提取的一般流程，具体操作可能会因实验条件、样本类型和目标DNA的不同而有所差异。
从血液中提取基因组DNA
从血液中提取基因组DNA
(1)取少量浸了血液的脱脂棉，剪碎，然后加入370 μl的TNE缓冲液(10 mM Tris，10 mM EDTA，100 mM NaCl)，100 μl的10%的SDS，10 μl的10 mg/ml 蛋白酶K，20 μl的1 mol/L的DTT，混匀后放入55℃下消化至透明；
(2) 4000 rpm离心5 min，取上清；
(3)加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，在自动混匀器上混匀10 min，4000 rpm离心10 min，取上清；
(4)重复步骤(3)；
(5)加入氯仿：异戊醇(24：1)，在自动混匀器上混匀10 min，4000 rpm离心10 min，取上清；
(6)在上清中加入1/10体积的3M NaAC和2倍体积的冷冻的无水乙醇，混匀后放入-20℃冰箱中沉淀30 min；
(7) 12000 rpm离心10 min，弃无水乙醇，再用冷的70%乙醇洗涤沉淀；
(8)真空干燥，加入100 μl TE(pH8.0)溶解沉淀，储存于4℃或-20℃备用[74, 75]。
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鱼类血液基因组DNA的提取
1.取0.3ml血液于1.5ml离心管中，加入1/6体积(0.05ml)ACD抗凝剂，再加入1ml 0.35 %
NaCl 淡水鱼生理盐溶液, 混匀,12 000 r/ min离心2 min (若上清仍带红色可加入0.35 % NaCl 再洗一次) 去上清;
2.沉淀加入100μl 0.35 %NaCl 摇匀, 加入400μl 无离子水作低渗处理15 min , 13 000 r/
min离心3 min , 去上清, 获乳白色沉淀( 细胞核) ;
3.向沉淀中加入100 μl0135 % NaCl , 混匀, 再加入400μl 裂解液缓缓混匀后, 加入蛋白酶
K (20mg/ml) 10μl , 温和混匀，置入50 ℃水浴5 h。
4.将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚，充分摇匀，12000rpm离心10min；
5.将上层水相转入另一无菌1.5ml离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），
旋涡振荡至充分混匀，12000rpm离心10min；
6.将上层水相转入另一无菌1.5ml离心管中；并加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1），充
分振荡混匀，12000rpm离心10min；
7.将上清液转移到另一无菌1.5ml离心管中；加入2倍体积的冰乙醇，1/10体积醋酸钠
(NaAc)水平摇动，直到可见絮状DNA析出；
8.将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15～20min，取出后再次12000rpm离心10min，
使DNA沉淀；
9.倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
用700μl 70%乙醇洗涤并晃动，以
洗出DNA的杂质；
10.倒出乙醇，将DNA用真空干燥或自然晾干，加入适量的TE缓冲液或无菌水回溶，-20℃
保存备用。