生物人教版高二选修1阶段质量检测(二)_微生物的培养与应用(a卷)
生物人教版高二选修1素材：专题综述_专题2微生物的培养与应用_word版含解析
第1页 共1页 专题2 微生物的培养与应用专题综述本专题主要介绍微生物的培养技术及其在生产和生活中的巨大作用。
通过本专题的学习，应该初步掌握培养基的组成、消毒灭菌等基本知识和培养基的制备、高压蒸气灭菌、涂布平板法接种、平板划线法接种等基本操作技能，并可以运用相关技术解决生产和生活中有关微生物的计数、分离和培养等实际问题。
微生物与人类的关系极为密切，以微生物培养为核心原理的发酵工程为人类创造了巨大的财富，在国民生产中的地位也越来越突出。
各种酒类、酱油、味精和食醋等副食品，各种抗生素等药品都早已成为人们正常生活中不可缺少的一部分；以微生物为目的基因重要受体的基因工程也逐渐进入普通人的生活。
微生物大部分是单细胞的，其中既有原核生物也有真核生物，还有没有细胞结构的病毒，因此它是研究分子和细胞时不可缺少的一个类群，和必修1的内容有密切的联系。
生物技术的核心是生物工程，包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，其中发酵工程和基因工程与微生物联系甚为密切，此外本专题中所强调的无菌操作技术有助于专题3的理解与学习。
学习本专题之前，我们首先要回顾有关细胞结构的知识、原核细胞和真核细胞的区别以及组成生物体的化学元素的有关知识。
学习过程中，还要注意基础知识和实验相结合。
课题1是本专题的基础，只有掌握了课题1所介绍的基本知识和基本技术，才有可能完成本专题的其他课题。
微生物的培养和纯化是本专题最重要的知识，学习时一定要掌握涂布法和划线法两种技术。
由于本专题的实验都要接触酒精灯、接种环（针）、高压蒸气灭菌锅等实验器具，因此，大家一定要注意安全，避免被烧伤或烫伤；实验完成后一定要对各种接种器具和培养基彻底灭菌后才能倒掉，以防造成环境污染。
2.1微生物的培养与应用
二、实 验 操 作
㈠ 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方
物质 重量 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 20g 水
定溶至 1000mL
2.称量
按比例称取各种物质。
注意：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨 都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。
㈠ 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 3.溶化：
将接种后和未接种（作为对照组）的培养基 均放到37℃的恒温箱中，培养12～24h后观察并 记录结果。
三、结果分析与评价
1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有
菌落生长，说明了什么？
未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无 菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则 需要重新制备。
2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立 的菌落？它们的大小、形状、颜色相似？
2.稀释涂布平板法
• 分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是 不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获 得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。细 菌稀释度为， 放线菌稀释度为 103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。 • 培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一 般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～ 28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下 培养3～4d。
先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量 水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃 棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅 拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加水 定溶至100mL。
4.灭菌：
将配制好培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞， 包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸 包好）一起放到高压锅内灭菌。
高考生物一轮专题 第40讲 微生物的培养与应用A卷
高考生物一轮专题第40讲微生物的培养与应用A卷姓名:________ 班级:________ 成绩:________一、单选题 (共15题；共30分)1. （2分） (2017高二下·葫芦岛期中) 用稀释涂布平板法统计的样品中活菌的数目与实标值相比（）A . 一致B . 偏高C . 偏低D . 不确定2. （2分）用发酵工程生产的产品，如果是菌体，则进行分离提纯时可采用的方法是A . 蒸馏、过滤B . 过滤、沉淀C . 萃取、离子交换D . 沉淀、萃取3. （2分） (2017高二下·沭阳期中) 培养细菌的培养基适宜的pH为（）A . 1.5﹣2.5B . 3.5﹣4.5C . 6.5﹣7.5D . 8.5﹣9.54. （2分） (2017高二下·沭阳期中) 培养自养型微生物与异养型微生物的培养基，主要差别在于（）A . 碳源B . 氮源C . 无机盐D . 生长因子5. （2分） (2016高二下·黑龙江期中) 下列有关生物技术实践的叙述，正确的是（）A . 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都相同B . 在提取胡萝卜素时，可选用乙醇或石油醚作为萃取剂C . 制作果酒和果醋时都可用体积分数为70%的酒精对发酵瓶消毒D . 腐乳制作中利用的蛋白酶和脂肪酶只产自毛霉6. （2分） (2019高二下·贵州月考) 下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（）A . 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白膝培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B . 取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C . 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24-48小时D . 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数7. （2分）关于生物工程和技术的说法正确是（）A . 从某生物cDNA文库中获取的目的基因，不含基因中的启动子B . 单倍体育种需要细胞分裂素、生长素、秋水仙素等激素的参与C . 动物细胞培养过程中，培养箱中需含5%的CO2刺激细胞呼吸D . 为统计某水样中活菌的数目，可采用平板划线法进行接种8. （2分） (2017高二下·石家庄期中) 下列有关培养基的叙述正确的是（）A . 培养基中一定都需要添加碳源或氮源B . 固体培养基中加少量水即可制成液体培养液C . 水在培养基中只是作为溶剂，不是微生物的营养成分D . 根据微生物对碳源需要的差异，可使用含不同碳源的培养基9. （2分） (2015高一上·咸阳期中) MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性．为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如表．下列说法正确的是（）A . 细菌死亡与否是通过光学显微镜观察其细胞核的有无来确定B . 第2组和第3组对比表明，使用低浓度的青霉素即可杀死MRSA菌C . 实验还需设计用2μg/mL青霉素做处理的对照组D . 蛋白质H有很强的杀菌作用，是一种新型抗生素10. （2分） (2017高二下·杭锦后旗期中) 关于生物技术实践中的有关检验，不正确的是（）A . 在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铬酸钾的混合液B . 在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起培养C . 检验以尿素为唯一氮源的培养是否分离出了分解尿素的细菌，方法是在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，则说明分离成功D . 检验胡萝卜素纯度的方法是纸层析法，原理是不同的色素分子在层析液中的溶解度不同，故随层析液在滤纸上扩散的速度不同，若样品中有杂质，则会出现不同的色素点（带）11. （2分） (2019高二下·金华期末) 某生物兴趣小组应用微生物显微计数法，开展温度对乳酸菌种群密度（个/mL）影响的研究，实验结果见下图。
高中生物选修一：2.1微生物的培养与应用
纯化微生物：每次划线前的灼烧，为杀死上次残留的菌种，
保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划 线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次 划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
四、 纯化大肠杆菌（微生物的接种） （一）平板划线法
接种针、钩、环
二、 无菌技术
2)干热灭菌
干热灭菌箱内160～170℃ 1～2小时，适 用于耐高温、需保持干燥的物品（吸管、 培养皿）和金属用具等。
3)高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌锅内100KPa、121℃、 15～30min；适用于培养基、水的灭菌。
灭菌完毕后，若压力未降到零就打开气阀， 利用干热灭菌箱和高压蒸汽灭菌锅灭菌时， 高压蒸汽灭菌前，为什么要将灭菌锅内的 超 会出现什么现象？为什么？ 物品不能摆的太挤，为什么？ 冷空气排尽？ 净 工 利于温度升高。若冷空气未排尽，当压力升 灭菌容器内的液体冲出容器。因为灭菌锅内 作 时，锅内温度不会上升到应有高度， 到100kpa 以免妨碍热空气或蒸汽的流通 外压力不平衡的缘故 台 导致灭菌不彻底
孢子：细菌的生殖细胞
细菌芽孢的结构模式图
（五）菌落
菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或少数同种细
胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形 成肉眼可见的子细胞群体。 菌落具有大小、形状、光泽度、颜色、透明度等基本特征。 菌落是鉴定菌种的重要依据。
（六）病毒的繁殖
吸附
注入
合成
释放
组装
噬菌斑即噬菌体侵染细菌细胞，导 致寄主细胞溶解死亡，因而在琼脂培养 基表面形成的肉眼可见的透明小圆斑 （“负菌落”）。 在适当条件下，一个噬菌体形成一 个噬菌斑。
生物人教版高二选修1阶段质量检测(二)_微生物的培养与应用(b卷)
阶段质量检测(二)微生物的培养与应用(B卷能力素养提升)(满分：100分时间：40分钟)一、选择题(每小题4分，共48分)1．从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有()①尿素②有机氮化物③无机盐④有机碳化物⑤水⑥无机碳化物A．①③④⑤B．②③④⑤C．①③⑤⑥D．②③⑤⑥解析：选A分离能分解尿素的细菌，培养基中一定有尿素且是唯一氮源。
另外，水、无机盐和碳源、能源也是细菌生长所必不可少的。
有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，不能利用无机碳化物。
一定没有有机氮化物，因为其他异养型微生物可利用有机氮化物作氮源而能和分解尿素的细菌共同生长，起不到选择培养的作用。
2．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。
下列相关叙述错误的是()A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理解析：选C稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。
只有在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物才被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
3．“筛选”是生物学中培育生物新类型常用的手段，下列有关技术过程中不可能筛选成功的有() A．在无氮培养基上筛选圆褐固氮菌B．在不含精氨酸的培养液中筛选能合成精氨酸的杂交细胞C．用含青霉素的培养基筛选酵母菌和霉菌D．用不含碳源的培养基筛选根瘤菌解析：选D圆褐固氮菌可以固定氮气，所以可以在无氮培养基上生长；青霉素可抑制细菌细胞壁的形成，而对酵母菌和霉菌无抑制作用；根瘤菌是异养生物，在不含碳源的培养基上不能生长。
4．大肠杆菌能够在哪种培养基上生长繁殖()A．无氮培养基B．分解尿素的细菌的选择培养基C．纤维素分解菌的选择培养基D．牛肉膏蛋白胨培养基解析：选D大肠杆菌在含碳源、氮源、水、无机盐的培养基上才能生长，A中没有氮元素，B、C中的氮元素和碳元素不能被大肠杆菌利用。
人教版选修1 专题2.课题1 微生物的实验室培养 作业
专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养理一理判一判1.所有的培养基中都要加入琼脂。
(×)2．微生物在液体培养基表面生长可形成菌落。
(×)3．培养不同微生物的培养基成分完全一样。
(×)4．培养纯净培养物的关键是防止杂菌污染。
(√)5．相对于消毒，灭菌对微生物的杀灭更彻底。
(√)6．无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
(×)7．培养基最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
(√)8．倒平板后，待平板冷凝之后需将其倒置。
(√)9．若皿盖和皿底之间溅上培养基，这个培养基不可再用。
(√)10．采取平板划线接种法时，每一次划线前都要挑取菌种。
(×)11．对微生物进行计数时最好采用稀释涂布平板法。
(√)12．需要一个不接种的培养基放在相同条件下培养以检验培养基的灭菌是否合格。
(√)悟一悟1.牛肉膏提供的主要营养是碳源、氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨提供的主要营养是碳源、氮源和维生素。
2．溶化后如需调整pH，应先调节pH，再灭菌。
3．培养基灭菌后要冷却到50 ℃左右时开始倒平板，其原因是琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃会烫手，低于50 ℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。
4．倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
5．平板冷凝后，要将平板倒置。
因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可避免培养基中的水分过快地蒸发。
6．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
感悟体会：练一练1.[2019·江苏高考题]下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是( )A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基解析：接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，A项错误；为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，B项正确；接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠落入培养基造成污染，C项正确；分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法，后者还可以用于微生物的计数，所用培养基为固体培养基，D项正确。
人教版高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳
专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
2019-2020学年高中生物人教版选修1配套习题：专题2 课题1 微生物的实验室培养
③接种可疑菌后,在温度为 35 ℃的环境中培养 24 h,液体培养基变浑浊,原因是
。对照组试管中应加入 ,与实验组同时培养 6 h 后,若实验组液体
培养基的浑浊度比对照组 (填“高”或“低”),则可确定疑似患者被炭疽杆菌感染;反之,
则排除。
④对排除的疑似患者及易感人群,可接种炭疽杆菌疫苗,刺激机体产生相应抗体。与产生抗体
3.下列有关微生物培养的叙述,正确的是( ) A.培养基一般都含水、碳源、氮源和无机盐 B.涂布接种时,涂布器应在干热灭菌箱中灭菌冷却后再使用 C.纯化培养时,培养皿应倒置放在恒温培养箱内的摇床上培养 D.观察菌落时,应将培养皿盖拿掉后在显微镜下进行观察计数 解析:涂布接种时,涂布器应在酒精灯火焰引燃灭菌,冷却后再使用;用液体培养基培养微生物时, 应放在摇床上,培养皿中的是固体培养基,应倒置放在恒温培养箱内培养;菌落肉眼可见,不需要 借助于显微镜。 答案:A
的原因是
。
解析:实验室中能耐高温的、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等,可用干热灭菌的
方法灭菌。对于一些不耐高温的液体,如牛奶,需采用巴氏消毒法和高温瞬时消毒法消毒,这种
消毒方法的优点是可以杀死牛奶中的微生物,并且牛奶中的营养成分基本不被破坏。自来水通
常用氯气消毒,氯气与水反应生成次氯酸和氯化氢,次氯酸具有强氧化性,能杀死自来水中的微
6.防止杂菌入侵,获得纯净的培养物,是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是( )
A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒 B.接种环、接种针等金属用具,直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌 C.在实验室中,切不可吃东西、喝水,离开实验室时一定要洗手,以防止被微生物感染 D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理,以免污染环境 解析:接种环等金属用具应放在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰处灼烧灭菌。 答案:B
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阶段质量检测(二)微生物的培养与应用(A卷学业水平达标)(满分：100分时间：40分钟)一、选择题(每小题4分，共48分)1．平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是()A．接种时再拿起来方便B．在皿底上标记日期等方便C．正着放置容易破碎D．防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基造成污染解析：选D平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高。
将平板倒置，可以使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染。
2．产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是()A．一个细菌、液体培养基B．许多细菌、液体培养基C．一个细菌、固体培养基D．许多细菌、固体培养基解析：选C菌落是一个或几个细菌的子细胞群体，在固体培养基上有一定的形态，肉眼可见，而液体培养基不具备该条件。
3．需要在火焰旁操作的有()①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④解析：选D为了防止杂菌污染，称取土壤、稀释土壤和涂布平板均应在酒精灯火焰旁进行，土壤取样不用在火焰旁进行，但所用器具均应先灭菌再使用；微生物的培养在恒温箱中进行，无需灭菌。
4．下列关于微生物培养的叙述，不．正确的是()A．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵B．高温灭菌的目的是杀死微生物的细胞、孢子、芽孢C．划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落D．稀释涂布平板法易获得单菌落和计数活菌数目解析：选C获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵；高温灭菌的目的是杀死微生物的细胞、孢子、芽孢；稀释涂布平板法易获得单菌落和计数活菌数目；划线分离可在培养基上获得单菌落，但不是均匀分布的。
5．下列有关平板划线接种法的操作错误的是()A．将接种环放在火焰上灼烧B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连解析：选D划线时最后一区的划线与第一区的划线不能相连。
6．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，倒平板的具体描述正确的是()①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A．①③④⑤D．④⑤⑥C．③⑤D．①②④⑥解析：选C待培养基冷却至50 ℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板；将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，左手拔出棉塞，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，等待平板冷却凝固5～10 min后，将平板倒过来放置。
7．在农田土壤的表层自生固氮菌较多。
将用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是()①加抗生素②不加抗生素③加氮素④不加氮素⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦37 ℃恒温箱中培养⑧28～30 ℃温度下培养A．①③⑤⑦D．②④⑥⑧C．②④⑤⑧D．①④⑥⑦解析：选C自生固氮菌有固氮功能，因此培养基中不需要加氮素；细菌对抗生素敏感，因此，不能加抗生素；自生固氮菌是异养型的，应加葡萄糖；其生长繁殖的适宜温度是28～30 ℃。
8．若将酵母菌和圆褐固氮菌混合在一起，可采用下列哪组培养基将它们分开()A．加食盐的培养基和牛肉膏、蛋白胨培养基B．固体培养基和液体培养基C．加伊红—美蓝的培养基和含硝酸盐的培养基D．加青霉素的培养基和无氮培养基解析：选D青霉素可杀死原核生物如细菌，酵母菌为真菌，因而不会被杀死。
圆褐固氮菌是固氮菌，无氮源也能存活，但酵母菌无法存活，借此可分离两种微生物。
9．细菌分离与计数实验操作过程应注意()①无菌操作②做好标记③规划时间④土样灭菌A．①②③④D．②③④C．①②③D．①②解析：选C由于本实验操作复杂，目的是对细菌进行分离和计数，整个过程需要无菌操作，如取土样时用到的小铁铲和盛土样的信封及容器等均需灭菌，土样称量、样品稀释及涂布平板等操作均在火焰旁进行；本实验用到的平板和试管比较多，为避免混淆，最好在使用前就做好标记；本实验耗时较长，需事先规划好时间，以便提高工作效率，在操作时更加有条不紊。
10．下列有关纤维素酶作用的验证实验的叙述，不．正确的是()A．可用报纸、复印纸来代替滤纸条B．两支试管中所加缓冲液的量相等C．在一定范围内，滤纸条的分解速度会随着纤维素酶量的增加而加快D．振荡会加快滤纸条的分解解析：选B在验证纤维素酶作用的实验中，两支试管中所加缓冲液的量分别为10 mL和11 mL，加入10 mL的试管中还需滴加1 mL的纤维素酶，而另一支试管则不加。
11．下列关于微生物的分离与计数的叙述，错误的是()A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C．只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基解析：选C如果涂布三个平板能够得到2个菌落数目在30～300的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。
计数的方法是舍弃相差很大的一个，然后取平均值。
12．若将某种细菌置于含有营养物质的物体上，它会繁殖并形成细胞群。
下列哪种实验可以用来检验两种抗生素的杀菌效用()解析：选C要检验抗生素的杀菌作用需要设置对照实验。
检验抗生素甲的杀菌作用，可设置不加抗生素甲培养基培养细菌为空白对照，加抗生素甲的作为实验组，适宜条件下培养；同理也可检验抗生素乙的杀菌效果。
二、非选择题(共52分)13．(16分)在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)，该除草剂在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。
为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌，已知该除草剂在水中溶解度低且含一定量该除草剂的培养基不透明。
(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行________处理。
(2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基的特点是：________(填“固体”或“液体”)培养基且________________。
若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装________(填“前”或“后”)进行。
对培养基进行灭菌，常采用的方法是___________________________________________________________________。
(3)在划线前，接种环应该在酒精灯火焰上____________。
培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是___________________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。
(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是________，有透明带菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。
(5)A细菌和B细菌都能降解该除草剂，研究发现以每克菌体计算，A细菌降解该除草剂的能力比B细菌要强，对此现象合理的假设是________________________或________________。
解析：(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。
(2)从物理性质方面来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基，且以该除草剂为唯一氮源。
若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装前进行。
对培养基进行灭菌常采用高压蒸汽灭菌法。
(3)在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的。
(4)在固体培养基中，无透明带菌落利用的氮源主要是氮气；有透明带菌落利用的氮源主要是除草剂，据此可筛选出目的菌。
(5)A细菌降解该除草剂的能力比B细菌强，可能的原因是A细菌产生的酶活性更高或酶量更多。
答案：(1)稀释(2)固体以除草剂作唯一氮源前高压蒸汽灭菌(3)灼烧灭菌培养基中缺少这些细菌可利用的氮源(4)氮气该除草剂(5)A细菌酶活性更强A细菌酶量更多14．(16分)(2013·新课标Ⅱ)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。
实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。
回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用______法或_________________________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
(2)取该单菌落适当稀释，用________法接种于固体培养基表面，在37 ℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。
(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板的不同位置上，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B__________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________________________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。
(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好选用抗生素________。
解析：(1)微生物的常用分离方法为划线法和稀释涂布平板法。
(2)能够使菌落均匀生长、布满平板的接种方法为涂布法。
(3)(4)含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A敏感；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B不敏感；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明该致病菌对C的敏感性比对A的弱；含D的滤纸片周围的透明圈比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落(排除杂菌污染)，说明该致病菌可能对抗生素D产生了抗药性。
答案：(1)划线稀释涂布平板(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌(4)A15．(20分)某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。
研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。
实验的主要步骤如下图所示。
请分析回答下列问题：(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选__________，这种培养基属于________培养基。
(2)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________，实验需要振荡培养，由此推测目的菌的代谢类型是异养________(填“需氧”或“厌氧”)型。