纳豆激酶发酵及冻干粉制备
纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用
纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用引言：纳豆激酶(Nattokinase)是一种来源于传统日本食品纳豆中的蛋白酶，具有多种生物活性，如溶栓、抗凝血、抗炎等。
在过去的几十年里，人们对纳豆激酶的研究逐渐增多。
本文将重点讨论纳豆激酶的发酵过程、纯化条件的优化以及其在医药和食品工业中的应用。
纳豆激酶发酵的条件优化：纳豆激酶产生菌株的筛选和培养基的优化是纳豆激酶发酵的首要步骤。
选择产纳豆激酶能力较高的菌株，并通过基因工程方法来提高其产酶能力，可以大大增加纳豆激酶的生产效率。
培养基的研究也是优化纳豆激酶发酵条件的重要环节。
适当调整培养基的pH值、碳源、氮源和有机酸等参数，可以显著提高纳豆激酶的产量。
纳豆激酶的纯化方法：纳豆激酶是一种具有较高分子量的蛋白酶，因此采用离子交换、凝胶层析、亲和层析等技术进行纯化是常见的方法。
离子交换层析是利用蛋白质与离子交换柱上的固定相之间的静电作用进行分离，该方法具有简便、高效的特点。
凝胶层析则是基于蛋白质在固定相的排阻效应分离的技术，可以纯化目标蛋白酶。
亲和层析则是利用目标蛋白酶与亲和基质之间的特异结合来纯化蛋白质。
综合应用这些方法，可以得到较纯的纳豆激酶。
纳豆激酶的应用前景：纳豆激酶具有多种生物活性，因此在医药、保健品和食品工业中具有广阔的市场前景。
首先，在医药领域，纳豆激酶被广泛应用于溶栓治疗，可以降低血栓形成的风险。
同时，纳豆激酶还具有抗凝血、抗炎、降低血脂等功能，因此也可以用于治疗心血管疾病。
其次，纳豆激酶可以作为保健品，用于改善心脑血管健康、抗衰老和增强免疫等作用。
此外，纳豆激酶还可以用作食品添加剂，以增加食品的营养价值和保鲜效果。
结论：纳豆激酶发酵、纯化条件的优化以及其在医药和食品工业中的应用有着巨大的潜力。
通过选择高产纳豆激酶菌株和优化培养基条件，可以提高纳豆激酶的产量。
同时，离子交换、凝胶层析和亲和层析等技术可以有效纯化纳豆激酶。
纳豆激酶生产工艺
纳豆激酶生产工艺纳豆知识1、纳豆和纳豆激酶的生产工艺(1)、纳豆的生产过程：精选小粒黄豆→浸泡→清洗→蒸煮→沥干→降温至70度→无菌接种(纳豆菌)→35-52度培养24-36小时→分装→冷冻保存→纳豆纳豆是日本的传统食品，是选用优质黄豆经纳豆菌生物发酵而成。
纳豆的外表带有一层白霜，用筷子搅拌时，会拉出粘丝，拉丝越多越好。
纳豆常配入海鲜酱油、芥末等调味料直接食用，也可烹制各类菜肴。
纳豆需要冷藏保鲜，保质期一般在7~10天。
近几十年来，随着纳豆的有益健康的功能不断被发现，纳豆在日本风靡全国，不断掀起"纳豆热潮"。
目前，日本纳豆产业的年销售额已达2000亿日元(折合150亿人民币)。
(2)、纳豆激酶的生产工艺：1：生产纳豆激酶有两种做法。
一是考虑到纳豆激酶属于高分子物质，所以只要将高分子物质抽取出来即可。
但是用这种方法纳豆中的维他命和纳豆菌也会一起被舍弃掉。
另一种方法是有选择地抽取纳豆菌和纳豆菌的副产物。
用这种方法的话，纳豆菌中所包含的全部的物质都有可能抽取出来。
两种抽取方法谁优谁劣可谓一目了然。
生产的纳豆激酶粉末含有纳豆菌所能生成的全部物质。
正因为如此，能够生产自然的、稳定性高的纳豆激酶粉末。
详细请登陆 2、纳豆激酶纳豆中的纳豆激酶是直接分解血栓的纤维蛋白酶。
具有强大的溶栓作用，比尿激酶的能力还要强，每克湿纳豆溶栓效果相当于尿激酶1600FU，在胃肠中不失活。
纳豆激酶对血栓的作用时间长，与尿激酶3~5分钟作用时间相比，纳豆激酶作用长达8小时，而且安全、无副作用。
食用纳豆后，测定血液中形成血栓的物质会慢慢减少，溶解血栓的物质会越来越多，达到动态平衡。
常吃纳豆还会将毛细血管中的血栓溶解掉，有效改善微循环障碍。
A、人体实验结果发现纳豆激酶有以下作用：(1)缩短血栓溶解时间(2)增加血栓溶解面积(3)增加血栓溶解产物上图()是：纳豆消除体内血栓的临床实验(西村《视膜中心静脉闭塞症的治疗效果》)。
纳豆激酶工艺流程
纳豆激酶工艺流程【中英文实用版】Task Title: Natto激酶工艺流程Task Title: Natto Kinase Process Flow纳豆激酶是一种从纳豆中提取的酶，具有强大的血栓溶解能力。
其生产工艺流程如下：atto kinase is an enzyme extracted from natto, which has strong thrombolytic activity.The production process flow is as follows:1.原料准备：首先，挑选新鲜、优质的黄豆作为原料。
1.Raw material preparation: First, select fresh and high-quality soybeans as raw material.2.浸泡：将黄豆浸泡在水中，通常需要8-12小时，使其充分吸水膨胀。
2.Soaking: Soak the soybeans in water for about 8-12 hours to allow them to absorb water and expand.3.蒸煮：将浸泡好的黄豆进行蒸煮，通常在100℃下煮30-40分钟，使其熟化。
3.Cooking: Steam the soaked soybeans for about 30-40 minutes at 100℃to cook them.4.发酵：将熟化后的黄豆接种上纳豆菌，进行发酵。
发酵温度一般控制在30-35℃，发酵时间约为24小时。
4.Fermentation: Inoculate the cooked soybeans with natto bacteria and ferment them.The fermentation temperature is generally controlledat 30-35℃, and the fermentation time is about 24 hours.5.提取：将发酵好的纳豆进行提取，提取过程中需要控制一定的pH值和温度，以保证纳豆激酶的活性。
纳豆激酶的生产提取工艺
纳豆激酶的生产提取工艺纳豆激酶(nattokinase简称NK)是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilisl natto)产生的一种丝氨酸蛋白酶，属于胞外酶。
具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。
一、发酵液生产1、菌种活化无菌室内用无菌环挑取保存的纳豆杆菌，连续划线于平板培养基上，盖上培养皿盖，倒置于37 ℃恒温培养箱中培养24 h。
2、种子液的制备种子培养基成分无机离子：MgSO4 0.5 g/L，K2HPO4 1 g/L其它成分：葡萄糖20 g/L，蛋白胨10 g/L（pH=7.0-7.2）挑取斜面种子接入种子培养基，种龄8 h，装液量50 mL/250 mL，接种量2%，在37 ℃，200 r/min下摇床培养24 h。
3、发酵培养无机离子：MgSO4 2 g/L，Na2HPO4 9 g/L，NaH2PO4 0.5 g/L，CaCl2 0.4 g/L其它成分：麦芽糖15 g/L，大豆蛋白胨20 g/L，豆油2 g/L（pH=7.0）按照2% (V/V)的接种量转接种子液于发酵培养基中，装液量100 mL/500 mL，于30 ℃，200 r/min 摇床振荡培养72 h。
二、预处理和固液分离采用离心的方法。
将所得到的发酵液立即分装在的离心管内,冷冻离心10 min,转速5000 r/min。
收集上清液，弃去沉淀，调pH值到7.0，即得粗酶液。
三、提取1、分级盐析法使用分级盐析法，分段将杂蛋白和目的蛋白沉淀，达到分离的目的。
将粗酶液倒于锥形瓶内，利用蛋白质盐析原理,加入研细的固体(NH4)2SO4，使其浓度达到40%，4 ℃过夜，使其析出杂蛋白。
再将过夜的发酵液转移到干净的离心管内，然后离心，弃去沉淀，再次得到上清液，调节上清液pH值到8.6，后转移到锥形瓶内，加入研细的固体（NH4）2SO4，使其浓度达到65%，4 ℃过夜，使目的蛋白沉淀下来。
纳豆激酶固态发酵工艺及纳豆冻干粉制备的研究
Supervisor: Researcher Shi Yanmao Senior Engineer Dong Chao
May 2013
This work is supported by Science and Technology Research and Development Program of Hebei Province. NO.11275508D.
分类号： UD C ：
密级： 编号：
河北工业大学硕士学位论文
纳豆激酶固态发酵工艺及纳豆 冻干粉制备的研究
论 文 作 者： 学 科 门 类： 指 导 教 师：
田智斌 工 学
学 生 类 别： 全 日 制 学 科 专 业： 生物化工 职 称： 研 究 员 高级工程师
史延茂 董 超
资助基金项目：河北省科技支撑计划资助项目（NO.11275508D）
关键词：纳豆激酶，固态发酵，工艺优化，纳豆冻干粉，储存稳定性
I
纳豆激酶固态发酵工艺及纳豆冻干粉制备的研究
ABSTRACT
Nattokinase is a fibrinolytic serine enzyme that is produced by Bacillus subtillis natto. It has safe and effective, long half- life in the body, no bleeding tendency and so on. So nattokinase can be developed as a new fibrinolytic medicine. However, the liquid fermentation mode and the downstream separation technology for production of nattokinase by most factories at present, and lower production capacity at the laboratory level. In recent years, the solid-state fermentation production mode in the development of enzyme preparation that make production of nattokinase has a realistic significance. Screening of high nattokinase yield for the solid-state fermentation strain. On the basis of single factor experiment, response surface methodology and artificial neural network coupling genetic algorithm were used for optimizing solid-state fermentation process parameters of nattokinase, and the optimization effects of the two methods were estimated. The results showed the best conditions were as following: inoculum size 4%, initial water amount 55%, soybean content 90g/250mL, fermentation temperature 36.09 ℃, sucrose concentration 1.5%, MgSO 4 · 7H2 O concentration 0.21%, CaCl2 concentration 0.27%, fermentation time 24h. Under these conditions, the maximum nattokinase activity was up to 7 631.28 U/g, which was 29.02% higher than that in single factor test. Adopt vacuum freeze drying technology for producing natto power, against natto power producing in the production of freeze drying and crushing methods. The influence of the research work was for optimizing producing natto power production process and development to provide the choice of dosage form technical support. At the same time, the changes of nattokinase were determined in simulated gastrointestinal environment, and its main components and bioactive substances were determined. It found that the two aspects of nutrition and bioactive substances content higher than soybean powder raw materials through the analysis, so the freeze-dried natto power producing can be used as a potential health care products for development. Freeze-dried natto power in pharmaceutical producing active substances of the storage stability was studied which used accelerated storage stability determination method. The results showed that the international degree of predicted value and experimental value was higher at 4℃ and room temperature, so the method had certain practicability and accuracy , at the same experimental time was shortened.
纳豆激酶生产工艺
纳豆激酶生产工艺纳豆知识1、纳豆和纳豆激酶的生产工艺(1)、纳豆的生产过程：精选小粒黄豆→浸泡→清洗→蒸煮→沥干→降温至70度→无菌接种(纳豆菌)→35-52度培养24-36小时→分装→冷冻保存→纳豆纳豆是日本的传统食品，是选用优质黄豆经纳豆菌生物发酵而成。
纳豆的外表带有一层白霜，用筷子搅拌时，会拉出粘丝，拉丝越多越好。
纳豆常配入海鲜酱油、芥末等调味料直接食用，也可烹制各类菜肴。
纳豆需要冷藏保鲜，保质期一般在7~10天。
近几十年来，随着纳豆的有益健康的功能不断被发现，纳豆在日本风靡全国，不断掀起"纳豆热潮"。
目前，日本纳豆产业的年销售额已达2000亿日元(折合150亿人民币)。
(2)、纳豆激酶的生产工艺：1：生产纳豆激酶有两种做法。
一是考虑到纳豆激酶属于高分子物质，所以只要将高分子物质抽取出来即可。
但是用这种方法纳豆中的维他命和纳豆菌也会一起被舍弃掉。
另一种方法是有选择地抽取纳豆菌和纳豆菌的副产物。
用这种方法的话，纳豆菌中所包含的全部的物质都有可能抽取出来。
两种抽取方法谁优谁劣可谓一目了然。
生产的纳豆激酶粉末含有纳豆菌所能生成的全部物质。
正因为如此，能够生产自然的、稳定性高的纳豆激酶粉末。
详细请登陆 2、纳豆激酶纳豆中的纳豆激酶是直接分解血栓的纤维蛋白酶。
具有强大的溶栓作用，比尿激酶的能力还要强，每克湿纳豆溶栓效果相当于尿激酶1600FU，在胃肠中不失活。
纳豆激酶对血栓的作用时间长，与尿激酶3~5分钟作用时间相比，纳豆激酶作用长达8小时，而且安全、无副作用。
食用纳豆后，测定血液中形成血栓的物质会慢慢减少，溶解血栓的物质会越来越多，达到动态平衡。
常吃纳豆还会将毛细血管中的血栓溶解掉，有效改善微循环障碍。
A、人体实验结果发现纳豆激酶有以下作用：(1)缩短血栓溶解时间(2)增加血栓溶解面积(3)增加血栓溶解产物上图()是：纳豆消除体内血栓的临床实验(西村《视膜中心静脉闭塞症的治疗效果》)。
（提高纳豆激酶的方法）自制纳豆,游刃有余
（提高纳豆激酶的方法）自制纳豆,游刃有余三、提高纳豆激酶的方法材料一:纳豆激酶的生产提供一种得率高，酶活高，成本低，可进行产业化生产的纳豆激酶的生产方法。
依次包括下述两个步骤：(一)、发酵；所述第的发酵是固体发酵，该发酵过程依次有如下工序:①用特制浸泡液浸泡优质黄豆，所述的特制浸泡液的配方为：牛肉浸膏5～l0g，蛋白胨4～12g，酵母浸出汁3—8g，NaCl 5～l0g，葡萄糖l5～20g，自来水l000ml，PH值为6.8～7，浸泡到黄豆吸足水份，豆无硬心，表面无皱纹为止；②装瓶灭菌接种：采用常规灭菌方法，等瓶温自然冷却至40℃以下，在无菌条件下接种，接种所用的菌种是枯草芽孢杆菌；③培育：采用常规培养条件；采用高低温培养方法，先在37℃下培养22—32小时后马上转入3～10℃条件下保温，l2～24小时获得发酵物。
(二)、将经发酵步骤后得到的干燥物粉碎；①干燥：采用常规方法。
干燥工序中采用的是将发酵物进行低温真空冷冻干燥，发酵物水分小于l5％时干燥结束。
②粉碎是采用细胞破壁技术。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物，其特殊之处在于：制备片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊或口服液时，在所得产物中直接添加可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糊精(等)配料调整至每克内有200～680的酶活单位。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物每克内有200～380的酶活单位，具有预防心血管疾病的作用。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物每克内有300～680的酶活单位，具有治疗心血管疾病的作用。
上述生产方法培养的纳豆激酶制备的冻干粉每克内含大于800的酶活单位，制备的针剂纯度达95％以上。
下面将通过实施例对方案作详细叙述：第一部分：纳豆激酶的生产方法1、使用特制浸泡液的实施例及其与使用常规浸泡液的产物酶活比较实验条件：300ml三角瓶加入特制浸泡液浸泡过的大豆l0g，调PH7，121℃灭菌15min，接入枯草芽孢杆菌斜面菌种，在37℃条件下培养24小时，常规干燥、常规粉碎后测定酶活。
纳豆激酶生产工艺流程
纳豆激酶生产工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!纳豆激酶生产工艺流程纳豆激酶的生产工艺流程大致可以分为以下几个步骤：一、原料准备1.1 选择大豆：选用优质的大豆作为原料，要求大豆新鲜、无霉变、无虫蛀。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
ｄ ｉ１ ． ６ ０ｉ ｎ１７ — ０ Ｘ２ １ ． — １ ｏ：０３ ９ ．ｓ．６４ ５ ６ ．０ ２ ３ ０ ５ ９ ｓ ０
面进 行 了研 究 ，许 多 研 究 参 数 是 无 法 通 过 实 验 室
摇 瓶 工 艺 获 得 的 ，该 研 究 更 加 接 近 大 生 产 的实 际
情 况 ， 因而 该 研 究 的 工 艺 过 程 及 参 数 更 加 具 有 参 考 性及 实 用 性 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
ｐ ．， Ｈ ７２ 自来 水配置 。
１ ． 发 酵 ３
１３１ 摇瓶 种子 制备 ．．
将 甘油 冻存 菌种 转 接 至 斜 面培 养 基 。 ７ ３ ℃培 养 １ ｈ 取一 环斜 面菌 种 ， ８， 接人 装有 ２ ｍＬ种 子 培养 基 的 试 管 ，在 恒 温 水 浴 震 荡 器 中 ，７ 、０ ｒ ｉ ３ ℃ ２ ０／ ｎ培 养 ｍ １ ｈ 将 该种 子 液 ２ Ｌ转 入 装有 １ ０ Ｌ种 子培 养 基 ２。 ｍ ０ｍ
（．ｃ ｕｎ Ｉｄ ｓｉｌＩｓｔｔ ｏ Ａ ｔ ｉ ｉ，ｈｎ ｈ ｒ ａｅ ｔａ ｒｕ Ｃ ｅｇ ｕ６ ０ ５ ， ｈｎ ； Ｊ ｉｈａ ｎ ｕｔａ ｎｔｕｅ ｆ ｎｉ ｏ ｃ Ｃ ｉ Ｐ ａｍ ｃｕｉ Ｇｏｐ，ｈ ｎｄ １ ０２ Ｃ ｉａ Ｓ ｒ ｉ ｂｔ ａ ｃ ｌ
２Ｓｅｕ ｎＡｃｄ ｍ ｏｄ ａ ｄ Ｆ ｒ ｎａ ｏ ｎ ｕｔｅ ，ｈ ｎｄ １ １ ０ Ｃ ｉａ ．ｉ ａ ａｅ ｙ ｏ Ｆｏ ｎ ｅｍｅｔ ｉｎＩｄ ｓ ｉ Ｃ ｅ ｇ ｕ６ １３ ，ｈ ） ｈ ｆ ｔ ｒｓ ｎ
样 品可 以按照该 方法 进行 酶活性 检测 。如果 活 行在 线性 范 围外 ， 稀释处 理再测 定 。 可
１ ． 罐 种子 制备 ．２ ３
将 培 养 好 的 摇 瓶种 子 液 １０ ０ ｍＬ在火 焰 保 护 下
倒 入 １ Ｌ种 子 罐 中 ．种 子 罐 装 有 ５ ０ １种 子 培 养 基 ，
收 稿 日期 ： ０ ２ ０ — ９ ２ １— ５ ０ 作者简介 ： 曾志 刚 （９ ４ ）男 ， 士 ， 研 究 员 ， 究 方 向为 微 生 物 及 生 化 药 学 。 １７ 一 ， 硕 副 研 通 讯 作 者 ： 刚 （９ ８ ） 男 ， 级 工 程 师 ， 要 从 事 发 酵 工程 方 面研 究 。 王 １６ 一 ， 高 主
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ｔ ｅ ｌ ｕ ｄ ｆ 珊 ｅ ｔ ｔ ｎ ｒ ｃ ｓ ｏ ａｔ ｋ ｎ ｓ ｙ Ｂａ ｉ ｕ ａ ｔ ｎ ３ ０ ｅ ｍｅ ｔｒ ａ ｄ ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ ｏ ａ— ｈ ｉ ｉ ｑ ｎ ａｉ ｐ ｏ ｅ ｓ ｆｒ ｎ ｔ ｉａ ｅ ｂ ｃ ｌ ｓ ｎ ｔ ｉ ０ Ｌ ｆｒ ｎｏ ， ｎ ｅ ａ ａｉ ｆ ｎ ｔ ｏ ｏ ｌ ｏ ｏ ｔｋｎ ｓ ｏ ｉ ａ ｅ，ａ ｄ ｔ ｅ ｅ ｅ ａｕ ｅ ｓａ ｉ ｔ ｆ ｎ ｔ ｋ ｎ ｓ ｒ ｅ ｄ ｄ ｉ ｄ ｐ ｗ ｅ ｒ ｓ ｄ ｅ ．Ｔ ｅ ｒ ｓ ｌ ｓ ｏ ｅ ｈ ｔ ｔ ｅ ｎ ｈ ｔｍｐ ｒ ｔ ｒ ｔｂ ｌ ｙ ｏ ａｔ ｉ ａ ｅ ｆ ｚ － ｒ ｏ ｄ ｒ ｗｅ ｅ ｔ ｉ ｄ ｈ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗ ｄ ｔ ａ ， ｈ ｉ ｏ ｅ ｅ ｕ ｓ
ｔ ｅ ｐ ｅ ｅ ｃ ｏ ｅａ ｉ ｈ ｒ ｓ ｎ ｅ ｆ ｇ ｌｔ ｎ，ｗａ ｏ ｉ ｎｆ ａ ｔ ｆ ｃ ｅ ｈ ｎ ｔ ｅ ａ ｔｋ ｎ ｓ ｒ ｅ ｄ ｄ ｅ ｏ ｅ ａ ｓ ｙ ｄ ６ ｄ ｙ ａ ｓ ｎ ｔ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｌ ａ ｆ ｔ ｄ ｗ ｅ ｈ ｎ ｔ ｉａ ｅ ｆｅ ｚ — ｒ ｄ ｐ ｗｄ ｒ ｗ ｓ ｔ ｅ ａ ｔ ｉ ｙ ｅ ｏ ｉ ａ
种 子 培养 基 ： 豆 蛋 白胨 ０５ ， 萄 糖 ０５ ， 大 ．％ 葡 ． ％ Ｎ Ｃ ． ｐ ． ， ａ １０５ ％，Ｈ ７２ 自来水 配置 。 发 酵 培养 基 ： 豆 蛋 白胨 １ ％ ， 萄 糖 １ ％ ， 大 ． 葡 ５ ． ５
甘 油 ０８ Ｎ Ｃ ．％， Ｈ Ｐ ４０２ ， Ｓ ４００ ％ ．％， ａ １１ ５ Ｋ ２Ｏ ． Ｍｇ Ｏ ． ％ ５
ｉ ｎ ｈ ｕ ｄ ｃ ｎｒ ｌ ｔ ｅ ｆａ ｂ ｃ ｕ ｅ ｔ ｅ ｆａ ｔ ａ ｄ ｓ ｏ ｌ ｏ ｔ ｈ ｍ ｅ ａ ｓ ｈ ｍ ｍａ ｅ ｔ ｅ ｎ ｔ ｋ ｎ ｓ ｏ ｅ ｔ ｅ ｃｉｉ ．Ｎａｔ ｋｎ ｓ ｘｒ ｃ ｓ ａ － ｙ ｏ ｏ ｏ ｄ ｈ ａ ｔ ｉ ａ ｅ ｌ ｓ ｈ ａ ｔ ｔ ｏ ｖｙ ｔ ｉ ａ ｅ ｅ ｔ ｔ ｗａ ｃ ｏ ａ ｑ ｉ ｄ ｂ ｍｍｏ ｉ ｎ ｓ ｌ ｔ ｒ ｄ ｉｉ ｉ ｔ ｎ，ｔ ｅ ａ ｔ ｉ ｆ ｎ ｔ ｋ ｎ ｓ ｒ ｅ ｄ ｄ ｅ ｏ ｅ ｓ ｓ ｏ ｇｙ ｐ ｏ ｅ ｔｄ ｂ ｕｒ ｙ ａ ｅ ｎ ｕ ｕｆ ｅ ｇａ ｅ ｒ ｐ ｔ ｉ ａ ｃ ａｏ ｈ ｃ ｉ ｔ ｏ ａｔ ｉ ａ ｅ ｆ ｚ — ｒ ｄ ｐ ｗｄ ｒ ｗａ ｔ ｎ ｌ ｒ ｔｃｅ ｙ ｖｙ ｏ ｅ ｉ ｒ
１ ．Ｉ ／ Ｌ， ． Ｕ ｍＬ ３９Ｕ ｍＬ ５６Ｕ ｍ ７８ ／ ， ．Ｉ ／ ；精 密 量 取 尿 激 酶 Ｉ 标 准 品溶 液 各 １ Ｌ 分 别 点 在 同 一平 皿 中 ， 盖 ， ０ ， 加 置 ３ ℃恒 温箱 中反应 １ ｈ 取 出要用 卡 尺 测 量溶 圈 ７ ８：
垂 直 两直 径 ， 以尿 激 酶标 准 品单 位 数 的对 数 为横 坐标 ， 直 两 直 径乘 积 的对 数 为 纵 坐标 ， 算 标 准 垂 计
食 品 与 发 酵 科 技
Ｆ ｏ ｎ ｏ ｄ ａ ｄＦ ｒ ｎ ａｉ ｎ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｅｍｅ ｔ ｔ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｏ
第４ ８卷 （ ３期 ） Ｖ Ｌ ８， ． 第 ｏ ４ Ｎｏ ３
纳豆激 酶发 酵及 冻干粉 制备
曾志 刚 ， 刚 王
（． 国 医药 集 团 四川 抗 菌 素 工业 研 究 所 ， 川成 都 ６０ ５ ；． ）省 食 品发 酵 工 业 研 究 设 计 院 ， １中 四 １０ ２ ２ｍ ｌ ｌ 四川 成都 ６ １ ３ ） １ １０
纳豆 菌 ： 庆西 吉瑞 有 限公 司提供 ： 重 纤维 蛋 白原 购 自中国医学科 学 院输 血研究 所 ；尿激 酶购 于 丽珠 集 团丽宝 生物化 学 制剂有 限公 司 ；凝血 酶购 于杭 康 生物 药业 。
的 发 酵 过 程 ，提 取分 离 过 程 及 酶 粉 原 料 制 备 等方
立 即倒 入 纤 维 蛋 白原 和 琼 脂 糖 的 混合 液 中 ， 匀 ， 摇 倾 倒 在 ９ ｍｘ ｃ 平皿 中 ， 置 １ ， ｃ ９ｍ 静 ｈ 备用 ； 生 理 盐 用 水溶解尿激酶 ， 配置 为 不 同 浓 度 的标 准 液 ， 别 为 分
５ ０ Ｕ Ｌ ２ ０ Ｕ ＩＬ １ ５Ｕ ｎ ， ２ Ｉ Ｌ ３ ２５ Ｕ ｎ ０ Ｉ ，５ Ｉ ＿ ，２ Ｉ Ｌ ６ ５ Ｕ ｎ ， Ｉ ＾ Ｌ． ／ ｎ １
培 养 条 件 为 转 速 ２ ０／ ｎ，温 度 ３ ℃ ，空 气 流 量 ６ｒ ｍｉ ７
２ Ｌ ｍ ｎ 动态 监控种 子生 长状 态 。 ４ ／ ｉ。
１ － 发酵罐 培养 ．３ ３ 将 培 养 好 的种 子 液 ５ Ｌ经 过 管 道 压 入 到 ３ ０ ０Ｌ
５ ８
１ ． 培 养 基 ２
食 品 与 发 酵 科 技
２ｌ －＇ Ｏ２￣Ｊ ３期 － Ｉ ｇ
取 ０４ ． ｍＬ凝 血 酶 溶 液 溶 解 在 ３６ ． ｍＬ生 理 盐 水 中 ．
斜 面 培养 基 ： 豆 蛋 白胨 ０５ 牛 肉 膏 ０５ 。 大 ．％， ．％ Ｎ Ｃ ． ， 脂 １ ％。 ａ ｌ０５ 琼 ％ ． ５
的摇 瓶 。７Ｉ ２ ０／ ｉ 养 １ ｈ ３ ｃ 、０ ｒ ｎ培 ＝ ｍ ２。
曲 线 回 归方 程 ，再 以该 方 法 测 定各 样 品 中 的纳 豆
激 酶 的活力 。
２ 结 果 与 讨 论 ２１ 尿 激 酶 活 力 标 准 曲 线 ．
纳豆激 酶 活力 的测定是 以其相 对 于尿激 酶 的单 位来 表示 的 ， １ 图 的标 准 曲线 有较好 的相关性 ， 它 其
Ｆｅ ｍ ｅ ａｔｏ ｏ ｔｏ ｎｓ ｅ ａ ｅ ｒ ｔｏ ｏ ｅ ｚ ｒ ｎｔ ｉ ｎ ｆ Ｎａ ｔ ｋｉ ａ ｎｄ Ｐｒ ｐａ ａ ｉ ｎ ｆ Ｆｒ ｅ ｄ－ｄ ｉ ｄ Ｐｏ ｅ ｒ ｅ ｗｄ ｒ
ＺＥＮＧ ｉ ｇ ｎｇ ， Ｗ ＡＮＧ ｎｇ Ｚｈ － ａ Ｇａ ２
摘 要 ： 纳 豆 菌 为 出发 菌株 ． ３ ０ 以 在 ０ Ｌ发 酵罐 中液 体 发 酵 生 产 纳 豆 激 酶 并 进 行 了提 取 分 离 ， 备 了纳 豆 激 酶 冻 干 酶 制
粉 ． 考 察 了其 热稳 定 性 。 并 结果 表 明 ： 据 发 酵 时 间与 酶 活 力的 关 系 ， 酵 培 养 时 间 需要 控 制 在 ２ ｈ以 内 ， 于 泡 沫 会 根 发 ０ 由
使 得 酶 失 活 ， 当控 制 发 酵罐 中泡 沫 ， 应 通过 硫 酸铵 分 级 沉 淀 获 得 纳 豆 激 酶 粗提 物 ， 制备 的 纳 豆 激 酶 冻 干酶 粉 活 性 在 有 明胶 保 护 的 情 况 下 非 常稳 定 ． 干粉 在 ６ ℃保 存 ６ 冻 Ｏ ｄ的条 件 下 ， 活 力 没有 受到 显 著 的 影 响 。 酶 关 键 词 ： 豆 菌 ． 豆激 酶 ， 纳 纳 热稳 定性 中 图分 类 号 ： Ｓ ０ ． ５ Ｔ２ １ ＊ ２ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ４ ５ ６ ２ １ ） ３ ０ ５ — ０ ３ １ ７ — ０ Ｘ（０ ２ ０ — ０ ７ ０ ０
纳 豆在 日本 已有 ２ ０ ０ ０多 年 的食用历 史 ． 它是 由 大 豆经过 发酵 而制 成 ； 中的纳豆 激酶 （ａ ｏ ｉａｅ 其 ｎｔ ｋｎ ｓ ， ｔ Ｎ 是 纳 豆 枯 草芽 孢 杆 菌 （ ａｉｕ ａ ｏ 在 发 酵 过 Ｋ） Ｂ ｃｌ ｓ ｎｔ ） ｌ ｔ 程 中产 生 的 一 种 丝 氨 酸蛋 白酶 。有 防治 心 脑 血 管 血 栓形 成 的 作用 ＿ 。 内外关 于其 菌 株筛 选 、 酵 】 国 发 优 化 、 溶 性 能 、 取 分 离 及 制 剂 等方 面 的研 究 方 纤 提 兴 未 艾 ，但 是 多 是从 实验 室 摇 瓶 发 酵 的角 度 进 行 研 究 分 析 ［５ 本 文 利 用 四川 抗 菌 素 ห้องสมุดไป่ตู้ 业 研 究 所 的 ４］ －； 中试 基 地 良好 条件 ， 中试 生 产 的角 度 ． 纳 豆 菌 从 对