酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离及培养条件的优化
2. 酵母浸液0.5g (NH4)2SO4 2g 葡萄糖1g (2) 1.酵母浸液0.5g NH4NO3 1g 葡萄糖1g
2. 酵母浸液0.5g NH4NO3 2g 葡萄糖1g
(3) 1.酵母浸液0.5g NaNO3 1g 葡萄糖1g • 2. 酵母浸液0.5g NaNO3 2g 葡萄糖1g • 3.对比试验:酵母浸液0.5g 蛋白胨1g 葡萄糖1g • 4.配置完毕调PH值 PH等于5为准确 • 包三个移液管然后将以上培养基一起拿去灭菌
• 5.3减少进气量，控制罐压在0.02MPa左右后，点 燃接种火圈内的酒精棉球。
• 5.4 拧下进料口螺盖，放入盛有酒精的培养皿中。
• 5.5将接种瓶是瓶口在火焰上烧一下，并在火焰的 保护下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内。
• 5.6旋上进料口螺盖后灭火焰，拧紧螺盖，并用酒 精棉球将进料口擦洗干净。
二、配制
1、配多少培养基 10L罐装料量60%：10X60%=6L 接种量10%：培养基5400ml(实际操作培养基
5000ml)，种子液600ml 2、配方用多少
6L:60g酵母浸粉1%,120gc120g葡萄糖2%； 150ml:1.5g酵母浸粉1%,3g酵母浸粉1%,3g葡 萄糖2%.其中100ml加1g琼脂配成固体培养基用于 倒平板；50g原液用于测OD时做标准液。 3、所需器材包扎灭菌 4个装有9ml蒸馏水的试管，6个空试管，4个涂 布器，4个移液管1ml，6个平板
四 实验内容
1、分离单菌落
（1）实验物品灭菌
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml 蒸馏水的试管、16个平板、
液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖 2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三 角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml 为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌
酵母菌的分离与纯化
酵母菌的分离与纯化酵母菌的分离与纯化⼩组组员: ⼀、实验⽬的1.学习分离纯化酵母菌的技术与⽅法2.了解培养基的配置与灭菌技术3.增强⽆菌操作技术的意识⼆、基本原理从混杂的微⽣物群体获得只含某⼀种某⼀株微⽣物的过程叫做微⽣物分离与纯化，酵母菌常见于含糖份⽐较⾼的环境中，如果园⼟、菜园⼟及果⽪等的表⾯。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌⽣长迅速，容易分离培养。
马丁⽒培养基是⼀种⽤来分离真菌的选择性培养基。
此培养基是由葡萄糖、蛋⽩胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红，Rose Bengal)和链霉素等组成。
其中葡萄糖主要作为碳源，蛋⽩胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4·7H2O作为⽆机盐，为微⽣物提供钾、磷和镁离⼦。
⽽孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌⽆抑制作⽤，因⽽真菌在这种培养基上可以得到优势⽣长，从⽽达到分离真菌的⽬的。
三、实验材料及⽤具1.⽤品：苹果、葡萄糖、琼脂、⽔、1%孟加拉红⽔溶液、马铃薯2.设备与器材：1ml的⽆菌吸管、⽆菌培养⽫等.四、实验步骤1、马铃薯培养基的配置培养基成分:马铃薯 40克、蔗糖（葡萄糖） 4克、琼脂 4克、⽔ 200毫升、 pH ⾃然。
配置⽅法:（1）配制20%马铃薯浸汁：取去⽪马钓薯40g，切成⼩块，加⽔200ml.加热煮游30 min ，⽤纱布过滤，然后补⾜失⽔互所需体积。
121Pa灭菌30min.即成20%马铃馨漫汁，贮存备⽤。
（2）配制时，按每100ml 马铃薯浸汁加⼊2g蔗糖，加热煮沸后加⼊4克琼脂，继续加热融化并补⾜失⽔。
（3）分装、加塞，包扎。
（4）⾼压蒸汽灭菌：121Pa灭菌30min（5）将灭菌培养基放⼊37C°的温室中培养24-48⼩时，观察是否有菌落⽣成，以检查灭菌是否彻底。
2、倒平板：将马铃薯培养基加热融化，冷却⾄55--50C°时，倒平板，倒三⽫3、制备苹果悬液（1）⾸先将1g苹果在研钵中磨细，放⼊装有10ml⽣理盐⽔和玻璃珠的100ml三⾓瓶中去。
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
酵母分离培养
YPD培养基YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：1 .溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）,20g琼脂粉于900ml水中2 .高压 115度 20min3.加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入) ,注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
酵母的分离与纯化1、接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30℃摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。
2、计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。
3、涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
做平行样。
4、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。
5、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
6、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。
血球计数板使用1.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
2.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
水果表皮酵母菌的分离和鉴定_理论说明
水果表皮酵母菌的分离和鉴定理论说明1. 引言1.1 概述:酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的各种环境中。
其中，水果表皮是一种容易寄生、繁殖和生长的适宜环境之一。
水果表皮酵母菌指的是那些在水果表面附着并且以水果作为营养基质的酵母菌。
随着食品工业和农业领域的发展，对于水果表面酵母菌的分离和鉴定以及其在水果保存中作用与影响的研究变得愈加重要。
1.2 文章结构:本篇文章将分为五个主要部分来进行阐述。
首先，引言部分将在本节中提供一般背景，并对文章内容进行概述。
第二部分将重点介绍水果表皮酵母菌的分离和鉴定方法，包括方法原理、实验步骤和结果分析等内容。
第三部分将探讨酵母菌在水果保存过程中对水果品质的影响以及其发酵机制。
第四部分将介绍食品工业和农业领域中酵母菌的应用案例、研究进展，并对其未来发展方向进行展望。
最后，结论部分将总结研究结果，提出存在问题并给出改进建议，并对未来酵母菌研究的发展趋势进行展望。
1.3 目的:本篇文章旨在探讨水果表皮酵母菌的分离和鉴定方法，深入了解其对水果品质及保存过程产生的影响与机制，并探索酵母菌在食品工业和农业领域中的应用前景和趋势。
通过此次研究与分析，我们希望为相关领域提供一定的理论指导和实际参考，从而推动酵母菌研究的进一步发展和应用。
2. 水果表皮酵母菌的分离和鉴定2.1 分离水果表皮酵母菌的方法：要分离水果表皮上的酵母菌，可以采用以下步骤：步骤1: 准备样品选择新鲜的水果作为研究对象，如苹果、葡萄、香蕉等。
确保水果表面干净，并且没有明显的腐烂或受损。
步骤2: 表皮去污使用无菌棉花球蘸取70%乙醇或其他消毒液，轻轻擦拭水果表皮，以去除外部细菌和霉菌。
步骤3: 分离样品使用无菌刀具将水果表皮剥离下来，并将其放入含有适当培养基（如琼脂）的培养皿中。
步骤4: 培养孵育将培养皿密封并置于适宜温度下（通常为25-30摄氏度），并在黑暗环境中培养孵育一段时间，通常为24-48小时。
酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化∙实验目的1.了解培养基的配置与灭菌技术；2.无菌操作技术；3.工业微生物的分离与纯化技术；4.工业微生物的检测及保藏。
∙基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH 的要求选择合适的PH。
由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法（CFU）、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤
酵母菌纯培养的实验步骤如下：
1. 取少量酵母菌样品，使用选择培养基（例如固体葡萄糖、面粉琼脂培养基，添加有特殊药液和增菌剂的选择培养基有利于酵母菌的筛选）进行分离纯化。
2. 筛选出发酵力良好的菌落并进行纯培养。
在酒精发酵实验中发现典型的酵母菌菌落可移种至综合生化管培养箱中进一步鉴定。
3. 使用液体培养基进行酵母菌扩大培养，准备好无菌吸管和无菌锥形瓶，将酵母菌从锥形瓶中转移到试管中。
4. 对酵母菌进行计数，准备血液培养皿和牛肉膏琼脂培养基，接种菌液到培养基中使其生长并繁殖，观察生长情况并进行计数。
通过以上步骤，就可以对酵母菌进行纯培养，请确保所有使用到的工具和试剂都经过灭菌处理。
以上步骤仅供参考，建议您咨询专业人士获取更具体的信息。
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酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵
第一部分酵母菌的分离纯化
一、实验目的
应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理
酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。
三、器材和用品
1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶；试管斜面1支/组
3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为左右，再分装试管9ml2支/组。
4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等。
四、实验方法
1、接种：取果皮（不需冲洗）或土壤5克，加入到100ml无菌水中，充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊。
2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。
3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后
分离得到单个菌落。
6、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
7、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。
第二部分酵母菌的固定化技术
一、实验目的
1.了解固定化细胞的原理。
2.掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。
二、实验原理
固定化细胞技术是指用物理或化学的手段将游离细胞定位于限定的空间区域，并使其保持催化活性、反复使用的方法。
优点：细胞密度高、反应速度快、耐毒害能力强、产物分离容易、可反复使用、能实现连续操作，可大大提高生产能力。
用于生产各种胞外产物，包括酒精酒类、氨基酸、有机酸、酶、辅酶、抗生素。
细胞固定化的方法有多种，如吸附法、交联法和包埋法等。
吸附法：又叫载体结合法，依据带电的微生物细胞和载体之间的静电、表面张力和黏附力的作用，使细胞固定在载体表面和内部；简便，活力损失小；但细胞与载体作用力小，易脱落。
交联法：利用双功能或多功能试剂，直接与细胞表面的反应基团（如氨基酸、羟基、咪唑基等）发生反应，使其彼此交联形成网状结构的固定化细胞，其结合力是共价键。
此法制备麻烦，活力损失较大；但细胞与载体结合较紧。
包埋法：分为凝胶包埋法和半透膜包埋法。
凝胶包埋法是将细胞包埋在各种凝胶内部的微孔中而使细胞固定；半透膜包埋法是将细胞包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内。
简单，条件温和，稳定性好，包埋细胞容量高。
工业上常用包埋法固定微生物细胞。
海藻酸盐是一种广泛应用的固定化介质，具有化学稳定性好、无毒、包埋效率高且价格低廉等优点。
在海藻酸钠呈溶液状时，将细胞加入混匀，然后在氯化钙中凝固形成海藻酸钙凝胶，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。
海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可以新陈代谢（固定活细胞)。
三、实验材料
1、分离的酵母菌。
2、培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖30g，蒸馏水1000m L，p H自然，115℃灭菌20m i n。
3、试剂：m o l/L氯化钙溶液150m l/瓶（氯化钙，蒸馏水1000m L）、2%海藻酸钠50m l/瓶：称取一定的海藻酸钠加入无菌烧杯中，先加少量水调成糊状，在不足水份适当加热融化。
4、器具：200m l无菌烧杯1个、玻璃棒1根、无菌注射器1个（20m l）、无菌吸管1支，无菌水200m l/三角瓶、10m l培养基试管1支、200m l三角瓶培养基1个、青霉素、天平、纱布、细绳、电炉、培养箱、棉塞等。
四、实验步骤
1、将酵母菌接入10m l培养基中,于30℃培养箱中培养24h后待用。
2、取3m l酵母菌培养液（预热到35℃左右）加入到50m l2%海藻酸钠溶液中（冷却到45℃左右），均匀混合后用注射器吸入制成小球滴入m o l/L氯化钙溶液中，搅拌成珠（固定酵母）。
3、待凝胶珠在氯化钙溶液中浸泡30m i n后，用蒸馏水洗涤固定酵母2次后，再转入到灭过菌的200m L液体培养基中（其中加入1m g青霉素）。
4、将固定酵母于28℃静置培养3天后观察，可见培养基中有大量的C O2气泡产生，嗅气味有酒香；用刀片切开固定酵母，镜检可见大量密集的酵母菌。
第三部分酵母菌的酒精发酵
一、实验目的
1.掌握酵母菌生产酒精的方法。
2.了解酒精发酵的主要类型及其控制条件。
二、实验原理
在厌氧条件下，己糖分解为乙醇并放出二氧化碳的作用，称为酒精发酵作用。
酒精发酵的类型有三种：即通过E M P途径的酵母菌酒精发酵、通过H M P途径的细菌酒精发酵（即异型乳酸发酵）和通过E D途径的细菌酒精发酵。
在工业酒精和各种酒类的生产中，酒精发酵的主要作用是由酵母菌来完成的。
酵母菌通过E M P途径分解己糖生成丙酮酸，在厌氧和微酸性条件下，丙酮酸继续分解为乙醇。
但是，如果在碱性条件下或在培养基中加入亚硫酸盐时，产物主要是甘油，这就是工业上的甘油发酵。
因此，如果酵母菌要进行酒精发酵，就必须控制发酵液在微酸性条件下。
三、实验材料
1、菌种：分离的酵母菌。
2、培养基：
白糖（蔗糖）80g、(NH
4)
2
SO
4
、KH
2
PO
4
、H
2
O 1000ml；pH自然，115℃灭菌
20m i n。
150m l三角瓶装上述培养基50m l，250m l三角瓶装培养基100m l，大试管中装一个注满培养基的杜氏小管，再装入10m l培养基。
3、试剂：10%的NaOH、10%H
2SO
4
、1%K
2
Cr
2
O
7。
4、器材：150m l三角瓶1个、250m l三角瓶1个、大试管1支、杜氏小管1支、无菌吸管1支。
接种环、培养箱、100m L量筒、纱布、细绳、天平、棉塞3个。
四、实验步骤
1、取分离的酵母菌种一环，接入150m l的三角瓶中，于28-30℃培养箱中培养24h，作为液体种子。
将上述液体种子以5%的接种量分别接入250ml的三角瓶和大试管中，在于28-30℃培养箱中培养24-36h，后观察结果。
2、二氧化碳生成的检验
1）观察三角瓶中的发酵液有无泡沫或气泡溢出，再观察发酵试管中的杜氏小管中有无气体聚集。
2）取10%的NaOH溶液1ml注入发酵试管内，轻轻搓动发酵管，观察杜氏小管内液面是否上升，如气体逐渐消失，则证明气体为发酵过程中产生的二氧化碳。
3、酒精生成的检验：
1）打开发酵瓶塞子，嗅闻有无酒精味；
2）取发酵液5ml加入试管，加10% H
2SO
4
溶液2ml；向试管中滴入1% K
2
Cr
2
O
7
溶液
10～20滴；如管内由橙黄色变为黄绿色，证明有酒精生成。
2K
2Cr
2
O
7
+ 8H
2
SO
4
+ 3CH
3
CH
2
OH → 3CH
3
COOH + 2K
2
SO
4
+ 2Cr
2
(SO
4
)
3
(黄绿色) +
11H
2
O
实验报告：
1、酵母菌的形态以及增殖方式怎样判断酵母菌的死活细胞
2、海藻酸钠溶液滴进氯化钙溶液中为什么会凝固？
3、细胞固定化有何意义如何制备固定化细胞
4、固定化细胞与游离细胞比较，有什么优点？
5、固定化细胞制备过程中观察到的现象
6、酒精发酵过程中观察到的现象。