水生微生物常用的生理生化鉴定
微生物生理生化鉴定
提问：志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产 气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。应该产 生什么现象？
大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，
大多数能分解乳糖，不产生H2S。应该是什
么现象？
沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳
糖，大多数产生H2S，多数产气。
沙门氏菌的TSI试验
吲哚试验：用来检测细菌对色氨酸的利用能力。
有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色 氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚本身无色，不能 直接观察到，当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂 时，可形成红色的玫瑰吲哚。
吲哚试验
大肠杆菌：+ 产气杆菌： –
阳性 阴性
甲基红试验：用来检测细菌发酵葡萄糖的产 酸能力。当细菌代谢糖大量产酸时，就会使 加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色 （pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红 反应阳性。
1、淀粉的水解试验
菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌。 培养基：固体淀粉培养基。 溶液或试剂：卢戈氏碘液。 器材：无菌培养皿，接种环，试管架。
1、淀粉的水解试验
操作步骤：
（1）无菌操作制备淀粉固定培养基平板。
（2）将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌分别在同一平 板不同的部分划线接种，在平板的反面分别写 上菌名。
使吲哚溶于乙醚中。静置片刻，待乙醚层浮于液面后 形成明显的乙醚层，再沿管壁加入吲哚试剂8-10滴。 如有吲哚存在，则乙醚层呈现玫瑰红色，为阳性反应。
H2S试验
尿素酶（Urease）试验：
有些细菌能产生尿素酶， 将尿素分解、产生2个分子 的氨，使培养基变为碱性， 酚红呈粉红色。
1、未接种
微生物生理生化鉴定
1、淀粉的水解试验
微生物对大分子的淀粉不能直接利用，必 须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸 收利用。
水产养殖中的水生动物病原微生物研究
水产养殖中的水生动物病原微生物研究近年来，水产养殖业逐渐兴起并迅速发展，成为许多地区重要的经济支柱。
然而，水产养殖中的病害问题也日益突出，严重影响了养殖效益。
病原微生物是水产养殖中最主要的致病因素之一，因此对水生动物病原微生物的研究显得尤为重要。
一、常见水生动物病原微生物在水产养殖中，常见的水生动物病原微生物主要包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。
其中，细菌是最主要的病原体之一。
常见的细菌病原体包括弧菌、拟除虫菌、副溶血弧菌等。
病毒也是水生动物常见感染的原因，其中最常见的是水生动物疱疹病毒、水生动物流行性出血性坏死病毒等。
此外，真菌和寄生虫也经常导致水生动物疾病发生，如白点病真菌、涡虫等。
二、水生动物病原微生物的研究方法为了更好地控制和预防水生动物病害，研究水生动物病原微生物具有重要意义。
目前，常用的水生动物病原微生物研究方法主要包括病原体分离鉴定、分子生物学检测方法和病害发生机理研究等。
病原体分离鉴定是研究水生动物病原微生物最基本的方法之一。
通过采集病死或患病的水生动物标本，经过一系列的分离和培养步骤，可以将病原微生物从样本中分离出来，并通过形态学、生理生化和分子生物学等方法进行鉴定。
分子生物学检测方法在水生动物病原微生物研究中得到广泛应用。
基于PCR技术的分子生物学方法可以快速而准确地检测出水生动物病原微生物的存在和数量，具有高度敏感性和特异性。
同时，这些方法也可以用于研究病原微生物的变异和流行病学特征。
病害发生机理研究是水生动物病原微生物研究的重要内容之一。
通过深入研究病原微生物与宿主之间的相互作用，可以揭示病害发生的机制，为控制和防治水生动物病害提供科学依据。
此外，病原微生物的抗药性和免疫逃逸机制等也是病害发生机理研究的重要内容。
三、水产养殖中水生动物病原微生物的防控措施针对水产养殖中存在的水生动物病原微生物，采取科学的防控措施是确保养殖业持续发展的关键。
下面介绍几项常见的防控措施：1. 加强养殖水体管理：定期检测养殖水体的水质，维持适宜的水质参数。
微生物的生理生化试验
一、糖类代谢试验
5、β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
二、蛋白质代谢试验
不同细菌分解蛋白质能力不同，可利用不 同氮源来合成菌体蛋白质，可通过检测加 入蛋白质分解后的产物或PH变化来鉴定细 菌。
二、蛋白质代谢试验
1、吲哚（indole）试验（又称靛基质试验） 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌分解蛋白胨中色氨酸生成的吲哚与试剂 中的二甲氨基苯甲醛作用生成红色的玫瑰吲哚。 方法：纯培养物接种蛋白胨水后35℃培养24-48h沿 管壁徐徐加入Kovac氏试剂或欧氏试剂0.5ml观察。 结果：两层液体交界处出现红色为阳性，无色为阴 性。
2、凝固酶试验
目的：常用于鉴别葡萄球菌。 原理：金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维 蛋白原转变为纤维蛋白附着于细菌表面产生凝固。分为 与细胞壁结合的凝固酶（玻片法）与菌体生成后释放在 培养基中的游离凝固酶（试管法）。 玻片法：在玻片上加生理盐水与血浆个一滴，观察凝集 情况 试管法：三只含1：4血浆0.5ml的试管各接种待检菌、 阳性菌株和肉汤阴性菌株，待检菌出现凝固且阴性对照 不凝固为阳性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：某些细菌将丙二酸盐作为唯一的碳源时，丙 二酸盐被分解成为碳酸钠，使培养基变碱性。 结果：培养基变蓝色为阳性，颜色无变化为阴性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验
三、碳源和氮源利用试验
3、醋酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源同时利用醋酸盐 作为唯一碳源时，分解醋酸钠产生二氧化碳和水与 钠离子结合生成碳酸钠使培养基呈碱性，指示剂由 绿变蓝。 结果：斜面上有菌落生长且培养基变蓝色为阳性。
细菌常用生理生化鉴定
细菌鉴定中常用的生理生化反应录入时间:2009-8-13 15:12:12 来源：中国生命科技论坛1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
微生物鉴定中常用的生理生化实验
球菌。
3.将接种后的试管置于20度中培养3~5天。 4.观察明胶液化情况。
穿刺接种
1)手持试管。 2)旋松棉塞。 3)右手拿接种针在火焰上将针 端灼烧灭菌接着把在穿刺中可能伸入 试管的其他部位，也灼烧灭菌； 4)用右手的小指和手掌边拔出 棉塞。接种针先在培养基部分冷却， 再用接种针的针尖沾取少量菌种。 5)将接种过的试管直立于试管 架上，放在37℃或28℃恒温箱中培 养。24h后观察结果 注意：若具有运动能力的细菌， 它能沿着接种线向外运动而弥散， 故 形成的穿刺线较粗而散、反之则 细而密。
运输至细胞内。
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，这过程可
通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。
淀粉遇碘液会产生蓝色，在细菌水 解淀粉的区域，用碘液测定时不再 产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
2.明胶液化试验：
明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质，在25℃以下可维持凝胶状
态，以固体形式存在，而在25℃以上明胶会液化。
(三)、尿素实验
1.取2支尿素培养基斜面试管，用记号笔标明各管欲接种的菌名。 2. 分别接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌。 3.将接种后的试管置于35°C中培养24~28小时。 4. 观察培养基颜色变化。
（四）、硫化氢试验
1.用接种针将大肠杆菌、产气肠杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培 养基中。 2.置于37度培养48小时后，观察有无黑色硫化铅的产生。
丙酮酸等，使pH升至大约6。因此大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
6.柠檬酸盐试验：
柠檬酸盐试验是用来检测柠檬酸是否被利用。
有些细菌利用柠檬酸盐作为碳源；而另一些细菌不能利用柠
檬酸盐，如产气肠杆菌。
细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌鉴定中常用的生理生化反应细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。
其代谢产物也不同。
例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。
酸的生成可通过指示剂来确定。
在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。
气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气泡来证明。
（3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验）许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。
此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。
因为甲基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。
如果某些细菌，如产气菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。
因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。
（4）大分子代谢的实验。
靛蓝基质（口服吸收）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌不能直接利用大分子淀粉。
它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。
微生物分类鉴定方法
微生物分类鉴定方法微生物分类鉴定是微生物学领域的重要研究内容之一，它涉及到对微生物的形态、生理生化特性、遗传特征等方面进行综合鉴定和分类。
准确地鉴定和分类微生物对于了解其生态学、分子进化等方面的特征以及应用于医学、农业等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物分类鉴定方法。
1.形态学鉴定法：形态学鉴定法是最传统和常用的微生物分类鉴定方法。
通过观察微生物在显微镜下的形态特征，如细胞形态、细胞大小、结构特征、胞壁形态等来对微生物进行鉴定和分类。
例如，革兰氏染色可以用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌；芽孢形态特征可以用于区分芽孢杆菌属和其他杆菌属等。
2.生理生化鉴定法：生理生化鉴定法是通过微生物对不同生理生化试验的反应特征来鉴定和分类微生物。
常用的试验包括碳源利用试验、氧需求性试验、双氧水试验、酸碱度试验等。
例如，氧需求性试验可以区分厌氧菌和好氧菌；双氧水试验可以区分产气乳杆菌和其他乳杆菌属。
3.免疫学鉴定法：免疫学鉴定法是通过检测微生物产生的抗原或对抗原的反应来对微生物进行鉴定和分类。
包括血清学鉴定、补体结合试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫电泳等。
例如，通过检测微生物产生的特定抗原来诊断细菌感染。
4.分子生物学鉴定法：分子生物学鉴定法是近年来发展迅速的微生物分类鉴定方法。
通过检测微生物的核酸序列来鉴定和分类微生物。
常用的方法包括PCR、序列分析、比较基因组学等。
例如，16SrRNA基因序列分析可以用于鉴定和分类细菌。
此外，还有一些综合鉴定方法，如荧光原位杂交（FISH）、质谱分析、流式细胞术等。
这些方法在微生物分类鉴定中各具特色，能够提供更准确和细致的分类信息。
总之，微生物分类鉴定方法多种多样，各种方法常常结合使用，以提高鉴定的准确性。
随着基因测序技术的发展，分子生物学鉴定方法在微生物分类鉴定中的地位越来越重要并逐渐取代了传统的鉴定方法。
微生物鉴定原理
微生物鉴定原理
微生物鉴定是通过分析微生物的形态特征、生理生化特性、遗传特性和分子生物学特性等方面的信息来确定微生物的种属或亚种的过程。
其原理主要包括以下几个方面：
1. 形态特征鉴定：通过观察微生物在培养基上的形态特征来判断其属于哪一类微生物，比如形状、大小、颜色、聚集方式等。
比如，球菌、杆菌、弧菌等各具有特定的形态特征。
2. 生理生化特性鉴定：通过检测微生物在特定条件下的生理生化反应来鉴定其种属或亚种。
常用的生理生化特性鉴定方法有氧耗量测定、产气反应、口气反应、酸碱反应等。
3. 遗传特性鉴定：通过检测微生物的遗传物质（如DNA或RNA）序列来确定其种属或亚种。
常用的遗传特性鉴定方法
有16S rRNA基因测序、多重引物扩增反应（PCR）等。
4. 分子生物学特性鉴定：通过检测微生物的分子生物学特性来确定其种属或亚种。
常用的分子生物学特性鉴定方法有核酸杂交、基因克隆、Southern blot等。
以上是微生物鉴定的原理，通过综合使用以上各种方法，可以较为准确地确定微生物的种属或亚种，为进一步的研究和应用提供依据。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
水生微生物常用的生理生化鉴定
1、需氧性的测定
2、氧化酶的测定
1%二甲基对苯撑二胺盐酸盐（或对氨基二甲基胺盐酸盐）水溶液，1%α-萘酚酒精（95%）溶液
3、过氧化氢酶的测定
牛肉膏蛋白胨斜面：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5g，可溶性淀粉5.0g，水1000mL，琼脂15g-20g，pH 7.0-7.2
5%过氧化氢
4、利用碳源的测定
5、利用酚的测定
6、利用无机氮的测定
7、有机氮源利用的试验
8、生长谱法测定氮源的利用
9、硝酸盐还原试验
硝酸盐还原培养基：蛋白胨10g，NaCl 5g，KNO3(分析纯)1-2g，水1000mL,pH 7.4
格利斯亚硝酸试剂Ⅰ：0.5g磺胺酸溶于150mL醋酸溶液（30%）中，保存于棕色瓶中。
Ⅱ:0.5g α-萘酚,加入50ml蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30%的醋酸溶液150mL，保存于棕色瓶中。
10、缺氧利用硝酸盐产气的测定
11、发酵糖醇类的试验
1）一般细菌常用休和利夫森二氏培养基，葡萄糖可以被1%糖醇替代
蛋白胨2g，葡萄糖10g，k2HPO4 0.2g，NaCl 5g，溴百里酚蓝1%水溶液3mL（先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液），水1000mL,pH 7.0-7.2，115℃，20min。
2）芽孢杆菌培养基：（NH4）2HPO4 1.0g，KCl0.2g，MgSO4 0.2g，酵母膏0.2g,琼脂7g，糖或醇类10g，水1000mL, 0.04%溴甲酚紫15mL，pH 7.2，112℃，30min。
3）乳酸菌培养基：蛋白胨5g，吐温80 0.5g，糖或醇类10g，水1000mL, 加入1.6%溴甲酚紫约1.4mL以上，pH 6.8-7.2，112℃，30min。
12、水解淀粉的试验
淀粉培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5g(用陈海水时不加)，可溶性淀粉5.0g，水1000mL，琼脂15g-20g，pH 7.2-7.4
卢哥氏碘液
13、水解纤维素试验
无机盐基础培养基：NH4NO3 1.0g，k2HPO4 0.5g，CaCl2 0.1g，FeCl3 0.02g，KH2PO4 0.5g，酵母膏0.05g，NaCl 1.0g，水1000mL,pH 7.0-7.2
0.8%的纤维素粉
14、甲基红试验
葡萄糖蛋白胨培养基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，k2HPO4（或NaCl）5g，水1000mL, pH 7.0-7.2
甲基红指示剂
15、V.P. 试验
葡萄糖蛋白胨培养基，40%KOH（或NaOH）,肌酸，α-萘酚溶液
16、明胶水解试验
明胶液化培养基：蛋白胨5g，明胶100-150g，水1000mL，pH 7.2-7.4 ，115℃，20min
17、石蕊牛乳试验
石蕊牛乳培养基：牛乳脱脂→调至中性→用1%-2%石蕊液调至淡紫色偏蓝→56KPa，30min
18、产生吲哚试验
蛋白胨水培养基：蛋白胨10g，NaCl5g，水1000mL，pH 7.6
吲哚试剂（对位二甲基氨基苯甲醛3g，戊醇（或丁醇）75.0mL，浓盐酸25、0mL）乙醚
19、产硫化氢试验
1）蛋白胨10g，NaCl 5g，半胱氨酸0.5g，水1000mL, pH 7.0-7.4
5%醋酸铅
2）牛肉膏7.5g，蛋白胨10 g，NaCl 5g，明胶5g，10%FeCl2(培养基灭菌后加入)5mL，水1000mL, pH 7.0，112℃，20min。
20、产氨的测定
蛋白胨氨化培养基：蛋白胨5g，k2HPO40.5g，MgSO40.5g，水1000mL,pH 7.0-7.2
纳氏试剂：甲液KI 10g，蒸馏水100mL，碘化汞20g
乙液KOH 20g，蒸馏水100mL
21、水解七叶苷试验
22、精氨酸双水解酶的测定
23、水解油脂的试验
油脂培养基：蛋白胨10.0g，牛肉膏 5.0g，香油或花生油10g，1.6%中性红水溶液1mL，琼脂15g-20g，水1000mL，pH 7.2
24、尿素的水解试验
25、苯丙氨酸脱氨酶的测定
酵母膏3g，NaCl 5g，Na2HPO41g，琼脂12g，DL-苯丙氨酸2g（或L-苯丙氨酸1g），水1000mL，pH 7.0，121℃，10min。
10%的FeCl3溶液
27、色素产生的测定
28、生长温度的测定
29、存活温度的测定
30、耐盐性的试验
31、初始生长pH值的测定
32、形成芽孢的试验
33、固氮能力的检查
补充：
1、卵磷脂酶试验
培养基：无菌条件下取卵黄加等量的生理盐水，摇匀后，取10mL悬液加入到熔化后冷却至约50℃的200mL牛肉膏蛋白胨琼脂中，混合均匀后倒平板，过夜后即可使用。
2、惟一碳源
基础培养基：（NH4）2SO4 2.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaH2PO4·H2O 0.5g，CaCl2·2H2O 0.1g，K2HPO4 0.5g, 水1000mL
底物（过滤除菌，糖醇类浓度0.5%-1%，其它为0.05%-0.1%）
3、惟一氮源
基础培养基：KH2PO41.36g，CaCl2·2H2O 0.005g，Na2HPO4 2.13g, 葡萄糖10g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O 0.0005g，, 水1000mL
铵态氮（硫酸铵）或硝态氮（硝酸钾）0.05%-0.1%
4、果胶酶
酵母膏5g，CaCl2·2H2O 0. 5g，聚果胶酸钠10g，琼脂8g，蒸馏水1000mL，NaOH(1M) 9mL，0.2%溴百里酚蓝溶液12.5mL, 121℃，小于5min。
5、柠檬酸盐试验
柠檬酸盐培养基：NH4PO4 1g，K2HPO4 1g，NaCl 5g，MgSO4 0.2g，柠檬酸钠2g，琼脂15-20g，水1000mL，1%溴香草酚蓝乙醇液10mL，PH6.8。