DNA提取试剂盒的选择资料[1]
质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，通过提取DNA可以进一步进行PCR扩增、基因克隆等实验。
本实验旨在提取质粒DNA，质粒DNA是存在于细菌细胞质中的环状DNA分子，具有重要的研究价值。
本文将详细介绍实验的步骤、原理以及结果分析。
材料与方法：1. 细菌培养液：选择含有目标质粒的细菌进行培养，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如LB培养基。
3. 细菌培养器具：如培养皿、离心管等。
4. DNA提取试剂盒：选择适合的DNA提取试剂盒，如酚/氯仿法或硅胶柱法。
5. 离心机：用于离心细菌培养液以获取细菌沉淀。
6. 紫外可见分光光度计：用于检测DNA的纯度和浓度。
实验步骤：1. 细菌培养：将含有目标质粒的细菌接种于LB培养基中，培养过夜，使细菌充分繁殖。
2. 收集细菌：将培养液离心，以12000转/分钟离心10分钟，将细菌沉淀收集。
3. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使细菌细胞裂解，释放DNA。
4. 蛋白质沉淀：加入酚/氯仿混合液，离心分离上层的DNA溶液和下层的蛋白质。
5. DNA沉淀：将DNA溶液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，轻轻倒置离心管，使DNA沉淀出来。
6. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余的盐和杂质。
7. DNA溶解：用适量的去离子水溶解DNA沉淀，得到纯净的DNA溶液。
8. DNA浓度检测：用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
结果与分析：通过实验，成功提取了质粒DNA，并进行了浓度检测。
根据实验结果，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，这对于后续的实验设计和操作非常重要。
此外，实验中还可以通过凝胶电泳等方法对提取的DNA进行进一步的分析，如确定DNA的大小和完整性。
结论：本实验成功提取了质粒DNA，并获得了纯净的DNA溶液。
通过浓度检测和进一步的分析，我们可以进一步了解DNA的特性和应用。
dna提取试剂盒原理
dna提取试剂盒原理
DNA提取试剂盒的原理是利用化学方法和物理方法将细胞膜破坏、细胞蛋白质降解、DNA与其他细胞组分分离，从而获得纯净的DNA样品。
具体步骤如下：
1. 细胞破碎：将待提取DNA的样品加入溶解缓冲液中，通过机械破碎、超声处理或酶解等方法使细胞膜完全破裂，释放细胞内的DNA。
2. 蛋白质降解：加入蛋白酶K等蛋白酶，将细胞内的蛋白质降解为小分子物质，以便后续去除。
3. DNA与蛋白质的分离：加入乙酸酚-氯仿等有机试剂，通过离心将DNA和蛋白质、碎细胞残渣等分为两相，DNA富集于上层而蛋白质和细胞残渣富集于下层。
4. DNA析出：将上层液体转移至新离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，DNA会在其中沉淀出来。
5. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，以去除残留的盐类和杂质。
6. DNA溶解：用脱离蛋白质结构的缓冲液溶解DNA沉淀，得到所需的DNA提取物。
DNA提取试剂盒通过上述原理，能够高效、快速地提取出高
质量的DNA样品，适用于分子生物学、基因组学、遗传学、犯罪学等领域的研究和应用。
Promega试剂盒提取DNA说明
Promega全血DNA小量提取试剂盒DNA抽提SOP1、实验场所：分子生物实验室（暂定）2、实验着装：隔离衣，塑胶手套3、实验准备：耗材：高压灭菌的黄、蓝tip和1.5mL离心管架仪器：已校准移液器（100，200，1000uL）、高速离心机、振荡器试剂：Promega全血DNA小量提取试剂盒、异丙醇、70%乙醇4、实验步骤：1）从4℃冰箱中取出装有全血的抗凝管，上下颠倒3次混匀，静置待上方盖的血液流下。
2）用镊子取N个1.5mL EP管（N=预抽提DNA血样数）垂直放于EP管架上，用防水marker笔按DNA编号在管壁和管盖上做好标记，并在DNA抽提实验记录本上对应记录血样编号、姓名及DNA编号。
保持EP管盖打开。
3）用1mL移液器取900uL cell lysis solution加入已备好1.5mL EP管中。
4）打开抗凝管盖，取300uL全血（注意勿沾血于移液器上），转移到上述1.5mL EP 管中。
每取一个血样，换一个tip头。
5）盖上EP管，室温下孵育10min。
6）室温下13000转/min离心20秒（不可延时）。
7）取出后，观察下方白色小斑块沉淀，如有则继续下一步，没有则再离心20秒。
8）打开EP管盖，手捏EP管底部，倾斜EP管口弃去部分红色上清，因表面张力无法弃去所有红色上清，抬高EP管，注视白色斑块，用100 uL移液器在不碰到白色斑块的前提下，尽量将红色上清吸尽。
9）盖上EP管，用手指弹EP管底物，将白色斑块重悬。
10）加300uL Nuclei Lysis Solution入上述EP管中，盖上EP管，上下颠倒10次混匀。
11）打开EP管，加100uL Protein Precipitation Solution入上述EP管中，盖上EP管，振荡器上振荡20秒。
12）室温下13000转/min离心3min。
13）在离心时，准备N个新的已消毒1.5EP管于管架上，标记DNA编号于管壁和管盖上。
DNA的提取与保存方法
1．-20度冻存1年是没有问题的，当然越低越好。
但是冻存后，用蛋白酶K法，红细胞不易裂解，必须采用特殊方法裂解。
2．建议裂解红细胞后再冻存于－80度。
因为冻融后红细胞会裂解，而且红细胞会增加蛋白污染，影响DNA抽提3．我们实验室加ACD抗凝血液，保存3年了，抽提DNA没问题（我们是先离心后分层保存，以便后续试验）！血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80?C冻存。
试验要求：血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。
氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：试验试剂：Ligsisbuffer：133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。
ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。
提取缓冲液（Extractionbuffer）：10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0 .5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌试验步骤：1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。
以4000rpm，离心5min。
弃上清液。
2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。
提取DNA需要的仪器和试剂
提取DNA需要的仪器和试剂：⑴ 1.5ml 离心管⑵移液管: 1000μl, 200μl, 40μl 各一支和移液管尖头: 100-1000μl, 1-200μl 各一盒⑶微型滤柱（备用）⑷小型旋转混合器一台⑸小型离心机: 可放入1.5ml 离心管和2ml收集管.⑹恒温水浴⑺电冰箱: -20℃, 4 ℃⑻无水乙醇(自备)⑼70% 乙醇(自备)⑽DNA提取试剂盒。
内含: ⑴裂解液1 ⑵裂解液2 ⑶消化液⑷纯化液⑸弥散液⑹蛋白酶K ⑺带钩细玻棒一盒⑻微型滤柱若干。
一．从1ml全血或体液中提取DNA的步骤：⑴裂解1：取1ml全血，血桨，血清，淋巴细胞放入到1.5ml的离心管中，加入400μl裂解液1。
上下翻转，使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，离心速率为8000rpm，1min.。
倒掉上层液，可见离心管底部有血色沉淀。
重复此裂解步骤一次，这次是加入1ml 裂解液1。
最后用移液管吸净所有上层液弃去, 以使离心管底部的血色沉淀不再残留有裂解液1。
⑵裂解2: 在上面离心管中加入1ml裂解液2。
上下翻转，务必使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，8000rpm，1 min.。
倒掉上清液，可见离心管底部有微量淡红色沉淀。
重复此裂解步骤一次，这次仍然是加入1ml裂解液2，最后用移液管吸净所有上清液弃去，以使离心管底部的灰白色沉淀不再残留有裂解液2。
⑶消化：吸取蛋白酶K 10μl ( = 0.2mg )加入到上面的离心管中，用移液管尖头反复吹打，使蛋白酶K与沉淀物均匀接触后，加入320μl消化液，上下翻转离心管，务必使沉淀物分散于消化液中。
放入58℃水浴中消化15分钟。
最后可见澄明的消化液体。
⑷纯化：在上面的消化液体中加入110μl纯化液，上下翻转离心管几下后，离心，速率为15000rpm, 1min，把上清液吸出放入到装有1000μl无水乙醇的1.5ml离心管中，轻轻上下翻转10次，可见絮状DNA析出。
酵母基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次酵母裂解液室温15 ml 30 ml 60 ml蛋白沉淀液室温 5 ml 10 ml 20 mlDNA溶解液室温 5 ml 5 ml 10 ml本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.环境温度低时酵母裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒用于快速的从酵母中提取基因组DNA。
在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下，酵母细胞被裂解释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂。
2.快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。
3.结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）1.吸取1.5ml 酵母培养物到一个1.5ml离心管；12,000rpm离心2分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。
2.高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。
3.加入300μl酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1毫升的枪头反复吹打混匀。
酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。
4.将裂解物放置在70℃水浴15-30分钟。
如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。
5.冰上至少5分钟使回复到室温。
海洋动物组织基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
海洋动物组织基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN37适用于快速提取各种海洋动物组织基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次（DN3701）100次（DN3702）200次（DN3703）裂解液SL 室温11 ml 20 ml 40 ml 结合液CB 室温11 ml 20 ml 40 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 50 ml 100 ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 15 ml 15ml×2蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20mg 2×20mg 4×20mg吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果储存事项:1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性、方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1ml灭菌水溶解，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，－20℃保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。
也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。
用水洗脱DNA应该保存在－20℃。
DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
法医DNA鉴定常用试剂盒
法医DNA鉴定常用试剂盒法医DNA鉴定常用试剂盒Applied Biosystems公司（美国）：1、Identifiler PCR扩增试剂盒英文名称：AmpF/STR? Identifiler? PCR Amplification Kit产品概述AmpF STR Identifiler PCR扩增试剂盒可以在单次PCR 反应中同时扩增15个STR基因座和Amelogenin性别基因。
Identifiler试剂盒中进行复合扩增的四核苷酸位点包括CODIS所必需的13个核心STR位点，即CSF1PO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX、和vWA。
获得的数据可以满足ENFSI（欧洲法医学网）与Interpol（国际刑警组织）的要求。
另外两个四核苷酸位点（D2S1338与D19S433）与先前同FSS（英国法庭科学服务机构）联合开发的SGM Plus 扩增试剂盒相一致。
相比之前所有的AmpF STR 试剂盒，包含了上述STR位点的Identifiler试剂盒是功能最强大的一个试剂盒。
6-FAM dye: CSF1PO, D7S820, D8S1179, D21S11VIC dye: D2S1338, D3S1358, D13S317, D16S539, TH01NED dye: D18S51, D19S433, TPOX, vWAPET dye: Amelogenin, D5S818, FGA特点：单管同时扩增16个位点，包括15个STR个体识别位点以及一个性别鉴定位点Amelogenin实验流程简单，一个反应管，一次进样，一个泳道分析采用与其他试剂盒完全相同的引物序列，不同试剂盒的结果具有可比性五色荧光技术，在维持扩增产物大小不变的条件下，有效提高了单个泳道分辨的片段数最大扩增产物小于350碱基，扩增容易，峰高均一提供完整的解决方案，由试剂、仪器、软件、技术支持等构成完整的体系2、Yfiler PCR扩增试剂盒英文名称：AmpF/STR? Yfiler? PCR Amplification Kit产品概述AmpF STR Yfiler PCR扩增试剂盒是一种能在单个PCR 反应中复合扩增Y染色体上的17个STR 基因座的STR分析试剂盒。
线粒体dna分离试剂盒原理
线粒体dna分离试剂盒原理
线粒体DNA（mtDNA）分离试剂盒是一种用于从细胞提取中分离纯化线粒体DNA的工具。
线粒体是细胞的能量产生中心，其DNA在许多生物学研究中具有重要作用。
分离线粒体DNA的原理基于细胞裂解、质粒DNA和细胞核DNA的去除，从而提取纯化的线粒体DNA。
该试剂盒通常包含以下主要组分：
1. 细胞裂解缓冲液：含有特殊成分，能够破坏细胞膜，释放细胞质和线粒体。
2. 离心管：用于离心样本，分离纯化的线粒体DNA。
3. 膜过滤器：对细胞裂解液进行过滤，去除细胞碎片和其他杂质。
4. 乙醇：用于沉淀线粒体DNA。
线粒体DNA分离试剂盒的操作步骤如下：
1. 将待分离线粒体DNA的细胞样本收集并进行离心，去除培养介质。
2. 加入适量的细胞裂解缓冲液，将样本溶解，并破坏细胞膜，释放线粒体。
3. 通过离心步骤进行细胞碎片和大颗粒物质的去除。
将细胞裂解液转移到膜过
滤器中，离心滤去杂质。
4. 丢弃上清液，保留细胞裂解液中的纯化线粒体。
5. 加入乙醇，使线粒体DNA沉淀。
6. 进行离心步骤以沉淀线粒体DNA。
7. 弃上清液并使用适量的缓冲液洗涤线粒体DNA的沉淀物。
8. 最后，将纯化的线粒体DNA溶于适当的溶剂中，以备后续分子生物学研究
使用。
线粒体DNA分离试剂盒利用细胞裂解和离心技术，可以高效地提取纯化的线
粒体DNA，且能够去除细胞核DNA和其他污染物质。
这种纯化的线粒体DNA可
以用于许多应用，包括线粒体功能研究、群体遗传学、线粒体疾病相关研究等。
TIANGEN产品DP315-TIANamp病毒基因组DNA RNA提取试剂盒
Carrier RNA溶液的配制如下：
● 向装有310 μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310 μl RNase-free ddH2O， 将Carrier RNA彻底溶解，得到终浓度为1 μg/μl的溶液，并按实验情况分装到RNase-Free 的离心管中，置于-20 ℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液，该溶液应避免反 复冻融，冻融次数不能超过3次。
● 注意Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于缓冲液GB中，必须先溶解在RNase-Free ddH2O 中，再溶解至缓冲液GB中。
● Carrier RNA工作液：根据样品的数量计算所需缓冲液GB和Carrier RNA 溶液的体积 （见表1或使用以下公式计算），将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀， 即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。 如果需要提取大量的样品，可根据以下公式计算： n×0.22 ml =y ml y ml×28 μl/ml=z μl n=同时提取的样品个数，y=需要加入缓冲液GB的体积，z=需要加入Carrier RNA溶液的 体积
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
版本号: DP130423
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
TIANamp Virus DNA/RNA Kit
病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
（离心柱型）
dp130423产品内容产品组成dp31550preps缓冲液gbbuffergb15ml缓冲液gdbuffergd13ml漂洗液pwbufferpw15mlrnasefreeddho瓶装15mlproteinasemlcarrierrna310rnasefreeddhmlrnasefree吸附柱cr2rnasefreespincolumnscr250个rnasefree收集管2mlrnasefreecollectiontubesml50个rnasefree离心管15mlrnasefreecentrifugetubes15ml50个储存条件该试剂盒置于室温1525干燥条件下可保存12个月更长时间的保存可置于2828保存条件下若溶液产生沉淀使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间必要时可在37水浴中预热10min以溶解沉淀
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DNA提取试剂盒的选择
本试剂盒使用的模板类型为人类基因组DNA，人类基因组DNA可来源于组织，也可来源于外周血。
市场上常见的人类基因组DNA提取试剂盒主要以人全血为模板提取。
市场上血液基因组DNA 提取试剂盒品牌众多，质量参差不齐，为保证下游检测的准确性与稳定性，需推荐一款质量可靠、稳定且价格合理的血液基因组试剂盒供使用者提取DNA 用于HLA-B27 的核酸检测。
总体来说进口试剂盒性能较优，但是价格昂贵，不适合在临床医院的大范围推广，而国内品牌中天根生化科技（北京）有限公司生产的核酸提取试剂盒在国内享有盛名且价格便宜，已在众多临床单位得到推广，同时其质量及提取效果被广泛认同，故我们选择天根公司的两款血液基因组提取试剂盒DP318和DP319作为HLA-B27 核酸扩增荧光检测试剂盒（PCR 染料法）的推荐DNA提取试剂盒。
DP318：过柱法一般一次提取1ml以下血液量，最好是600ul以下，产物可直接做PCR（浓度都在40ng/ul以下）。
DP319：沉淀法一般一次提取1-20ml血液使用，非新鲜血液的DNA产物可能不太好溶解，而且测了OD还要再稀释。
实验目的
1. 验证天根试剂盒提取的DNA 是否适合HLA-B27 核酸扩增荧光检测试剂盒（PCR 染料法）的检测。
2. 验证天根公司血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA的性能是否与进口试剂盒性能相一致。
实验设计
1. 使用天跟公司两款试剂盒DP318和DP319。
同样4份血液样本同时使用两种试剂盒分别进行提取，所得DNA进行HLA-B27 核酸扩增荧光检测试剂盒（PCR 染料法）检测。
2. 使用天跟公司试剂盒DP318和进口试剂盒Promega公司的A5081。
同样4份血液样本同时使用两种试剂盒分别进行提取，所得DNA进行HLA-B27 核酸扩增荧光检测试剂盒（PCR 染料法）检测。
实验结果
1. 天根公司血液基因组DNA提取试剂盒DP318和DP319提取DNA效果比较
2. 天跟公司血液基因组DNA提取试剂盒DP318和Promega公司基因组DNA 提取试剂盒A5081提取DNA效果比较。
结果分析
天跟公司两款试剂盒DP318和DP319比较结果可以看出，两种试剂盒稳定性和提取效果均较好，DP319为沉淀法提取DNA，其所提DNA 浓度较高，超出了HLA-B27核酸扩增荧光检测试剂盒的检测范围，故在使用前应先测量DNA 浓度然后经稀释后再进行检测。
DP318试剂盒相比更为符合，首先，血液用量少；其次，其提取的DNA浓度较为合适，不需要再进行浓度测定。
天根公司血液基因组DNA提取试剂盒DP318和Promega血液基因组DNA 提取试剂盒比较结果可以看出，天根公司的血液基因组DNA提取试剂盒提取效果与进口试剂盒Promega公司的血液基因组DNA提取试剂盒提取效果相一致，但天根公司的试剂盒要比Promega公司试剂盒价格便宜的多，故推荐使用天根公司的血液基因组DNA提取试剂盒。
实验结论
选择天根生化科技（北京）有限公司生产的DP318的试剂盒作为HLA-B27 核酸扩增荧光检测试剂盒（PCR 染料法）的推荐试剂盒。