B16细胞培养
细胞培养的方法与步骤
细胞培养的方法与步骤1．开紫外灯前先擦超净台，台内紫外30分钟，室内紫外10分钟。
同时将放在4℃内的培养液提前放置到室温。
（可放在抽屉中，防止紫外照射）换液2．先将培养液打开（开一层烧一层），放置在酒精灯旁。
3．将细胞从培养箱中拿出，进超净台前先要喷酒精。
4．打开培养瓶，烧瓶口，而后弯脖朝后，倒液，注意瓶口不要残留液体，若有残液要用纱布擦净。
5．倒培养液（之前要烧瓶口），注意量（5ml）不要再瓶口有残留液体是烧瓶口，否则碳化的培养液会对细胞的生长有毒害作用。
6．倒一瓶封一瓶，迅速放平，培养瓶口拧紧后再松一下，放入培养箱中。
传代2．拿出细胞，开口，烧，倒液。
3．（5ml大枪加3ml）用PBS洗2~3遍（洗净血清，放置血清钝化胰酶）。
4．胰酶消化，37℃5分钟（时间可自控）。
消化程度是细胞不能滑落，要吹落。
500微升胰酶（4×，1%）+1.5mlPBS→工作浓度0.25%（此时要用大枪）。
5．（大枪）加入3mlDMEM完全培养液终止消化，用吸管缓慢吹打壁上的细胞（不要让吸管的嘴端接触到瓶壁）6．将混合物吸入离心管，加封口膜，离心500g 5分钟（此时洗去胰酶）在此期间PBS 洗培养瓶3遍，PBS一定要吸净，否则加入培养液后会产生沉淀（培养瓶要重复使用，至少100次）7．倒掉上清，此时动作要轻或用大枪吸，加入3mlDMEM完全培养液重悬细胞，用吸管吹掉（再洗，清除胰酶）。
8．离心完毕，加入3ml新鲜培养液，再次吹打（约50~100下，视细胞情况而定），防止起泡沫，至细胞单个，圆球状为宜。
9．在培养瓶中加入新鲜培养液4ml，将吹打起来的细胞分配至各培养瓶中（量依需要而定）。
80微升，100微升都可以。
冻存8．在冻存管中加入200微升冻存液，在离心管中加入1000微升冻存液，吹打（防止起泡），移入冻存管中，此段时间不宜过久（DMSO对细胞伤害很大）。
9．封口膜封紧冻存管，可多封几层，用胶布缠紧，只缠一层就行，然后写字。
摄入裂蹄木层孔菌子实体对B16／BL6黑素瘤生长及肺转移的抑制作用
显微 镜观察 心肌 超微结 构 的变化 。 结果 显示 ， 在各 提
取 物 中以 ＴＡ—５清 除 自由基 的 能力最 强 ， 果与 维 Ｏ 效 生 素 Ｃ 的相 当。 空 白对 照组相 比， 型组 动物血 清 与 模
分别 检测 细胞 存 活情 况 、 ＮＡＤ Ｈ 脱氢 酶 活性 ； 据 Ｐ 根
２４ ７
国 外 医 药 ・植 物药 分 册
２０ ０ ８年 第 ２ ３卷 第 ６期
水 ， 周 ６天 ， ４周 ； ２组 为 模 型 组 ， 每 共 第 ｉ ｇ生 理 盐 水， ４星期 后 单 次 ｉ Ｄｏ （ ０ｍｇ ｋ ） 第 ３ ｐ ｘ ２ ／ ｇ ； ～７组 分 别 ｉ ０ ４ 、 ． ５ １ ７ ３ ４ ６ ８ｍｇ ｋ ｇ ． ２ ０ ８ 、 ． 、 ． 、． ／ ｇ的 Ｔ Ｏ ， Ａ— ５ 每 周 ６次 ， ４周 ； ８ １ 组 的前 处理 分别 与第 ３ ７ 共 第 ～ ２ ～ 组 的相对应 ， 且分 别于第 ４周 单 次 ｉ ＴＡ一５０ ４ 、 ｇ（ ０ ． ２
胞 线粒 体肿胀 、 Ｚ带 杂乱 、 滑 内质 网扩 张并 含有 脂 平
类 ， 明 心肌 组织 受 到 广 泛损 害 ； １ ～１ 表 第 ０ ２组 大 鼠 在给予 相应 剂量 ＴＡ一５预处 理 后 ， ０ 心肌受 损 程度 显 著减轻 ， 经 ０ ４ 、 ． ５ｍｇ ｋ 但 ． ２ ０ ８ ／ ｇ的 Ｔ ０ ＋Ｄ ｘ处 Ａ一 ５ ｏ 理后 ， 表现 出更 强 的心脏 毒性 。 以上 结果 提示 ， 则 长
６则 未 显 示抑 制硝 基 酪 氨 酸 的 活性 ， 明在 吲 哚 环 表
Ｃ ３位 的二酮 哌 嗪是化 合 物对 ＳＮ一 一 Ｉ １诱导 的硝基 酪 氨 酸形成 产生抑 制作 用至关 重要 。 合物 １ 化 ～７的抗
壬二酸对人黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成功能的影响
摘 要 目的 建 立体 外 培 养 的 正 常 人 表 皮 黑 素细 胞 系 ， 测 检 壬 二 酸 对 人 表 皮 黑 素 细 胞 和 鼠黑 素 瘤 Ｂ 细 胞 黑 素 合 成 的影 响 。方 法 体 外 人 表 皮 黑 素 细 胞 和 鼠 黑 素 瘤 Ｂ 胞 培 养 ， ． 细 Ｔ Ｐ １ 色 观 察 壬 二 酸 作 用 后 ， 胞 形 态 的 变 化 ； 定 壬 二 Ｒ 一染 细 测 酸 对 人 表 皮 黑 素 细 胞 和 鼠黑 色 素 瘤 Ｂ 细 胞 酪 氨 酸 酶 活 性 及 黑 素 含 量 变 化 观 察 壬 二 酸 的脱 色 素作 用 。结 果 壬 二 酸 作
化检 测试 剂盒 （ 美生 物 工 程公 司 ） 抗 酪 氨酸 酶 相 华 ， 关蛋 白 （ｙｏｉａｅｒｌ ｅ ｒｔｉ １ Ｔ Ｐ １ 抗 体 （ ｔｒｓ ｓ ｅａ ｄｐｏ ｎ ， Ｒ － ） ｎ ｔ ｅ 美
国细胞 生物研 究 所 Ｈ ａ ｎ 教 授 惠 赠 ） ｅｔ ｇ ｉ 。壬 二酸 （ 产 地 上海 ， 分析 纯 ／９ ％ ） ＞９ 。
壬二酸 又名 杜 鹃花 酸 ， 含有 ９个 碳 原 子 的 直 是
链 饱 和二元 羧 酸 ， 验 室 和 临 床试 验 表 明壬 二 酸对 实 功能亢 进 的黑 素 细 胞 （ ｌｎｃｔ， ｍｅ ｏｙ ＭＣ） 酪 氨 酸 酶 ａ ｅ 的 活性 、 粒体 酶 和 （ ） Ｎ 的 合成 均 有 抑 制作 用 ， 线 或 ＤＡ 对 很 多 色 素 增 多 性 疾 病 有 治 疗 作 用 … 。２ ％ 的 壬 ０
１ ２ 方 法 ．
成减少 ， 而且具有浓度依赖性 。结论
壬二酸对体外培 养的
人 表 皮 黑 素 细 胞 和 鼠 黑 素瘤 Ｂ 胞 的 酪 氨 酸 酶 活性 及 黑 素 细
灵芝多糖对小鼠黑素瘤B16F10细胞分泌VEGF的抑制作用
灵芝多糖对小鼠黑素瘤B16F10细胞分泌VEGF的抑制作用李红;陆洁;段昕所;齐海花;孙立新【期刊名称】《承德医学院学报》【年(卷),期】2017(034)004【摘要】目的:探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:用不同浓度的灵芝多糖处理B16F10黑素瘤细胞,以正常培养基代替灵芝多糖培养B16T10黑素瘤细胞为对照.分别采用Westem blot法和RT-PCR法检测灵芝多糖作用48h后B16F10黑素瘤细胞VEGF蛋白和mRNA表达的变化.结果:浓度为0.8μg/ml、3.2μ g/ml、12.8μg/ml的灵芝多糖处理B16F10细胞后,B16F10细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平均明显降低(P＜0.05).结论:灵芝多糖可能通过抑制B16F10黑素瘤细胞分泌EGF起到抑制肿瘤的作用.【总页数】3页(P276-278)【作者】李红;陆洁;段昕所;齐海花;孙立新【作者单位】承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000【正文语种】中文【中图分类】R33【相关文献】1.B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和一氧化氮的影响 [J], 齐海花;胡云才;兰天飞;孙立新;段昕所;陆洁;宋有鑫;杨晓峰;杨新宏2.AG490下调STAT3活化增强葫芦素B对B16F10黑素瘤细胞的抑制作用 [J], 李晶晶;张延亭;徐丽慧;莫宏波;欧阳东云;何贤辉3.B16F10黑素瘤细胞培养上清对同基因小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用 [J], 贾靖;孙立新;葛志华4.灵芝多糖对小鼠黑素瘤细胞的体外抑制作用 [J], 齐曼;邵雪斋;宋有鑫;孙立新;宋冀;邢恩鸿5.灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞产生白介素10的影响 [J], 孙博;孙宇;车姣子;李雪飞;陆洁;段昕所因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《2024年灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌免疫抑制分子的影响》范文
《灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌免疫抑制分子的影响》篇一一、引言黑素瘤是一种常见的皮肤恶性肿瘤，其治疗和预防一直是医学研究的热点。
近年来，灵芝多糖因其独特的生物活性和免疫调节功能在肿瘤治疗中受到广泛关注。
本篇论文将深入探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌免疫抑制分子的影响，旨在揭示其在肿瘤免疫治疗中的潜在应用价值。
二、灵芝多糖的概述灵芝多糖是灵芝中的一种重要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
其通过调节机体免疫功能，增强机体的抗病能力，从而达到抗肿瘤的效果。
三、B16F10黑素瘤细胞与免疫抑制分子B16F10黑素瘤细胞是一种常见的肿瘤细胞模型，其能够分泌多种免疫抑制分子，如转化生长因子-β（TGF-β）、前列腺素E2（PGE2）等。
这些免疫抑制分子能够抑制机体的免疫功能，促进肿瘤的生长和扩散。
四、灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌免疫抑制分子的影响研究表明，灵芝多糖能够显著抑制B16F10黑素瘤细胞分泌免疫抑制分子。
具体而言，灵芝多糖能够通过调节肿瘤细胞的信号通路，降低TGF-β、PGE2等免疫抑制分子的表达水平。
此外，灵芝多糖还能够促进机体免疫细胞的增殖和活化，增强机体的抗肿瘤免疫功能。
五、实验方法与结果本实验采用B16F10黑素瘤细胞为研究对象，分别设置灵芝多糖处理组和对照组。
通过检测细胞培养上清液中TGF-β、PGE2等免疫抑制分子的含量，以及免疫细胞的增殖和活化情况，评估灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌免疫抑制分子的影响。
实验结果显示，灵芝多糖处理组B16F10黑素瘤细胞分泌的TGF-β、PGE2等免疫抑制分子明显低于对照组，同时免疫细胞的增殖和活化水平显著提高。
六、结论与展望本研究表明，灵芝多糖能够显著抑制B16F10黑素瘤细胞分泌免疫抑制分子，这为肿瘤的免疫治疗提供了新的思路。
灵芝多糖的抗肿瘤作用可能与其调节机体免疫功能、降低肿瘤细胞的免疫抑制能力有关。
b细胞培养方法
b细胞培养方法引言：b细胞是一类免疫细胞，具有产生抗体的能力，对于研究免疫相关疾病以及生物药物的开发具有重要意义。
b细胞的培养方法是研究b细胞生物学的基础，本文将介绍常用的b细胞培养方法。
一、细胞培养基的选择b细胞培养需要选择适合其生长的培养基。
常用的培养基包括RPMI 1640、DMEM等，其中RPMI 1640是最常用的培养基之一，含有适宜的营养物质和生长因子，能够提供b细胞生长所需的条件。
二、细胞的传代b细胞在培养过程中会不断增殖，因此需要定期进行细胞的传代。
传代的目的是保持细胞的生长状态和功能，并防止细胞的老化和突变。
传代前需要将细胞从培养瓶中取出，进行细胞计数，然后将细胞按照一定比例转移到新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基。
三、细胞的分离和纯化b细胞培养过程中常常需要对细胞进行分离和纯化，以获取纯度较高的b细胞。
最常用的分离方法是通过抗体标记细胞表面的B细胞特异性标志物，如CD19、CD20等，然后使用磁珠或流式细胞术对标记细胞进行分离。
此外，还可以利用密度梯度离心法或细胞排序仪等方法进行细胞的分离和纯化。
四、细胞激活和扩增在一些研究中，需要对b细胞进行激活和扩增，以增加其数量和活性。
常用的激活方法包括使用抗CD40抗体、细胞因子如IL-4、IL-21等刺激b细胞。
激活后的b细胞可以通过细胞培养和传代的方法进行扩增，以获得足够数量的细胞用于后续实验。
五、细胞的保存和冻存为了长期保存b细胞，可以使用液氮冷冻保存方法。
首先将细胞转移到含有冷冻保护剂的冻存液中，然后缓慢降温至-80℃或液氮温度，最后存放在液氮罐中。
在需要使用时，可以将细胞快速解冻并进行培养。
六、细胞培养条件的优化为了提高b细胞培养的效果，可以对培养条件进行优化。
例如，可以调整培养基中的营养物质和生长因子的浓度，优化细胞传代的时间和比例，以及控制培养环境的温度、湿度和CO2浓度等。
此外，还可以添加一些辅助因子，如细胞因子、抗生素等，以提高细胞的存活率和增殖速度。
小鼠皮下及肺转移肿瘤模型制备
小鼠皮下及肺转移肿瘤模型制备宋天姣;曹倩文;王娜;田雨;郑全辉【摘要】①目的经皮下和尾静脉注射，制备小鼠黑色素瘤细胞增殖、转移模型。
②方法体外培养黑色素瘤细胞，分别经腋部皮下和尾静脉注射接种C57BL／6小鼠，接种剂量分别为1×106／只和3×105／只，2周后观察黑色素瘤形成及肺部转移情况。
③结果黑色素瘤细胞注射2周后，经皮下接种的小鼠腋窝出现明显肿瘤，成瘤率达100％；经尾静脉注射的小鼠肺部出现大量黑色素瘤结节，肿瘤转移率达90％。
④结论经皮下和尾静脉注射方法能够成功制备小鼠的肿瘤细胞增殖和转移模型。
%Objective To prepare tumor proliferation and metastasis mouse models through sub‐cutaneous and tail vein injection of melanoma cells .Methods Melanoma cells (1 × 106/100uL )were subcutaneously injected into C57BL/6 mice from the axillary region to prepare the tumor proliferation mouse model;melanoma cells(3 × 105/100uL)were injected by tail vein to prepare the tumor metasta‐sis mouse model .Melanoma tumor formation and lung metastasis were detected 2 weeks after melano‐ma cell injection .Results The subcutaneously injected mice showed obvious melanoma formation in the axillary region and the tumor formation rate was 100% .The lung of tail vein injected mice showed apparent melanoma nodules and the tumor metastasis rate was 98% .Conclusion Tumor proliferation and metastasis mouse models can be successfully prepared by subcutaneous and tail vein injection of melanoma cells .【期刊名称】《河北联合大学学报（医学版）》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】2页(P1-2)【关键词】肿瘤细胞;黑色素瘤;增殖;转移【作者】宋天姣;曹倩文;王娜;田雨;郑全辉【作者单位】华北理工大学河北唐山 063000;华北理工大学河北唐山 063000;华北理工大学河北唐山 063000;华北理工大学河北唐山 063000;河北省慢性疾病重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q784[ABSTRACT] Objective To prepare tumor proliferation and metastasis mouse models through subcutaneous and tail vein injection of melanoma cells.Methods Melanoma cells(1×106/100uL)were subcutaneously injected into C57BL/6 mice from the axillary region to prepare the tumor proliferation mouse model;melanoma cells(3×105/100uL)were injected by tail vein to prepare the tumor metastasis mouse model.Melanoma tumor formation and lung metastasis were detected 2 weeks after melanoma cell injection.Results The subcutaneously injected mice showed obvious melanoma formation in the axillary region and the tumor formation rate was 100%.The lung of tail vein injected mice showed apparent melanoma nodules and the tumor metastasis rate was 98%.Conclusion Tumor proliferation and metastasis mouse models can be successfully preparedby subcutaneous and tail vein injection of melanoma cells.[KEY WORDS] Tumor cell metastasis.Melanoma.Proliferation.Transfer目前恶性肿瘤已成为一类严重威胁人类健康的多发病和常见病，其发病机制仍未完全阐明，对肿瘤有效的治疗措施还处在不断探索之中。
六味地黄丸含药血清调控黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用
六味地黄丸含药血清调控黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：杜标炎，张小贺，谭宇蕙，吴映雅，易华，郭玉荣【摘要】【目的】观察六味地黄丸含药血清调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白（Cx）表达的作用。
【方法】采用SD大鼠灌胃8d制备六味地黄丸含药血清（药物剂量为32g·kg-1·d-1）和对照血清（灌胃等容积生理盐水）；选择对B16细胞生长和形态影响不大的血清浓度（体积分数为10%）作为大鼠血清的工作浓度；采用Western blot技术和间接免疫荧光法及流式荧光法检测六味地黄丸含药血清对黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白（Cx26/30/32）表达的影响。
【结果】Western blot检测显示空白组（无鼠血清）3种Cx 几乎不表达，而对照血清和六味地黄丸各浓度含药血清均能提高Cx 蛋白的表达，但含药血清的作用更为明显且有显著的量效关系；间接免疫荧光法和流式荧光法检测显示类似的结果：对照血清组和中、高剂量含药血清组的Cx蛋白荧光强度均较空白组显著增加（P＜001），但与对照血清组比较，只有高剂量含药血清组荧光强度显著增加（P＜005），低剂量含药血清组Cx蛋白表达反而下降(P＜001)。
【结论】六味地黄丸含药血清具有调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用。
【关键词】肿瘤/中西医结合疗法；六味地黄丸/药理学；黑色素瘤；基因治疗；肿瘤细胞，培养的Abstract: Objective To investigate the regulatory effect of medicated serum of Liuwei Dihuang Bolus (LDB) on the expression of connexins (Cxs) in mice melanoma B16 cells.MethodsMedicated serum was obtained from SD rats which were treated with LDB at the dose of 32g·kg-1·d-1 and non medicated serum was obtained from rats receiving normal saline by gavage for 8 days. The rat serum at the concentration of 10% (V/V) served as the working solution. The expression of connexins (Cx26/30/32) was detected by using western blot method，indirect immunofluorescence assay and fluorescence activated cell sorter (FACS) assay.ResultsThe results of western blot assay showed that Cx26/30/32 was undetectable in the blank group(without use of rat serum)，while the amount of Cx26/30/32 in B16 cells were up regulated by rat control serum and the medicated serum，the up regulation of medicated serum being obvious and in a dose effect manner.Indirect immunofluorescence assay and FACS assay showed similar results: the fluorescence intensity in the groups treated with ratcontrol serum and medicated serums was higher than that in the blank group(P＜001)；the fluorescence intensity in the group of high dose medicated serum was higher than that in the control serum group(P＜005)，and Cx expression was decreased in the group of low dose medicated serum (P＜001).Conclusion Medicated serum of LDB exerts regulatory effect on the expression of connexins in melanoma B16 cells.Key words:TUMOR/TCM WM therapy;LIUWEI DIHUANG BOLUS /pharmacology;MELANOMA;GENE THERAPY;TUMOR CELLS，CULTURED缝隙连接(gap junction，GJ)是存在于细胞之间进行物质及信息交换的通道，对细胞增殖、分化及机体的生长发育至关重要［1］。